Cân khoảng 3g dược liệu cho vào ống nghiệm to, thêm 1ml nước cất, đun sôi. Đối với cao sử dụng 1g và hòa tan bằng nước nóng. Lọc qua giấy lọc vào 1 ống nghiệm khác. Thêm 1ml dung dịch thuốc thử Felling A và 1ml dung dịch Felling B. Đun cách thủy sôi vài phút. Phản ứng dương tính khi xuất hiệu tủa đỏ gạch.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Sơ bộ kết luận: Dược liệu Ngấy hương chứa đường khử.
3.2.10. Định tính acid amin
Cân khoảng 3g dược liệu cho vào cốc có mỏ, thêm 20ml nước cất, đun sôi vài phút. Đối với cao sử dụng 1g và hòa tan bằng nước nóng. Lọc qua giấy lọc vào 1 ống nghiệm khác. Thêm vài giọt thuốc thử Ninhydrin 3%. Đun cách thủy sôi vài phút. Phản ứng dương tính khi xuất hiệu màu xanh đến tím.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Sơ bộ kết luận: Dược liệu Ngấy hương không chứa acid amin.
3.2.11. Định tính polysaccharid
Chuẩn bị dịch chiết như đối với phản ứng định tính acid amin. Chia dịch chiết vào 3 ống nghiệm:
Ống 1: 4ml dịch chiết + 5 giọt thuốc thử Lugol Ống 2: 4ml nước cất + 5 giọt thuốc thử Lugol Ống 3: 4ml dịch chiết.
Phản ứng dương tính nếu màu ở ống 1 đậm hơn ống 2 và ống 3.
Kết luận: Phản ứng dương tính yếu.
3.2.12. Định tính chất béo
Cân khoảng 3g bột dược liệu vào cốc cỏ mỏ 100ml, thêm 10ml ether dầu hỏa, bọc kín, ngâm 1 giờ. Lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc. Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên mảnh giấy trắng, sấy nhẹ cho bay hết hơi dung môi, phản ứng dương tính khi để lại vết mờ trên giấy.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Sơ bộ kết luận: Dược liệu Ngấy hương chứa chất béo
3.2.13. Định tính caroten
Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch chiết ether dầu hỏa của dược liệu, cô cách thủy đến cắn, nhỏ vài giọt H2SO4 đặc vào cắn. Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu xanh lá.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Sơ bộ kết luận: Dược liệu Ngấy hương không chứa caroten.
3.2.14. Định tính sterol
Cho vào ống nghiệm nhỏ khoảng 2ml dịch chiết ether dầu hỏa của dược liệu, cô cách thủy đến cắn. Thêm vào ống nghiệm khoảng 1ml anhydride acetic, lắc kỹ cho tan hết cắn. Để nghiêm ống nghiệm 450
, thêm từ từ H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm. Phản ứng dương tính nếu mặc phân cách có vòng tím đỏ, lớp chất lỏng phía trên có màu xanh lá.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Sơ bộ kết luận: Dược liệu Ngấy hương không chứa sterol.
3.2.15. Định tính iridoid
Cân khoảng 3g bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 10 dung dịch HCl 1% ngâm trong 5 giờ. Lọc qua giấy lọc gấp nếp lấy dịch lọc. Cho vào ống nghiệm nhỏ 1ml dịch lọc trên, thêm 1ml thuốc thử Trim-Hill (10ml acid acetic + 1ml CuSO4
0,2% + 0,5ml HCl đặc). Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu xanh.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
Sơ bộ kết luận:Dược liệu Ngấy hương chứa iridoid. Kết quả phản ứng định tính được tổng kết ở bảng sau đây:
Bảng 2: Kết quả định tính các nhóm chất hóa học có trong dược liệu
STT Nhóm chất
Phản ứng với thuốc thử Kết quả Kết luận
1 Glycosid + P/ư Liebermann - Không có + P/ư Legal - + P/ư Baljet - + P/ư Keller-Kiliani +++
2 Saponin Hiện tượng tạo bọt +++ Có
Hiện tượng phá huyết ++ Có
3 Anthranoid + P/ư vi thăng hoa -
Không có + P/ư Borntraeger - 4 Flavonoid + P/ư Cyanidin - Không có + dd NaOH + + Hơi NH3 +++ + dd FeCl3 5% +++ 5 Coumarin + P/ư mở, đóng vòng lacton + Không có
+ P/ư diazo hóa -
+ P/ư di chuyển dạng đồng phân cis-trans - 6 Tanin + Chì acetat +++ Không có + FeCl3 +++ + dd gelatin 1% - 7 Alcaloid + TT Mayer - Không có + TT Bouchardat - + TT Dragendoff -
8 Acid hữu cơ + P/ư với bột Na2CO3 - Không có
Ghi chú: +++ Phản ứng dương tính rất rõ ++ Phản ứng dương tính rõ + Phản ứng dương tính + Phản ứng không rõ - Phản ứng âm tính
• Nhận xét: Từ bảng kết quả ta nhận thấy:
- Thành phần hóa học chính của nguyên liệu Ngấy hương là saponin. Trên cơ sở đó sẽ đưa ra các phương pháp kiểm nghiệm, đánh giá khác, góp phần xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm nguyên liệu Ngấy hương