Cân 3g bột dược liệu rồi cho vào ống nghiệm lớn. Thêm 5ml ethanol 90%. Đun cách thủy sôi trong vài phút. Lọc nóng. Dịch lọc được tiến hành các phản ứng định tính.
a. Phản ứng mở đóng vòng lacton :
- Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1ml dịch chiết Ống 1 thêm 0,5ml dung dịch NaOH 10% Ống 2 để nguyên.
- Đun cả 2 ống nghiệm đến sôi. Để nguội rồi quan sát Ống 1: Có màu vàng hoặc tủa đục màu vàng
Ống 2: Trong
- Thêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất. Lắc đều rồi quan sát Ống 1: Trong suốt
Ống 2: Có tủa đục
Acid hóa ống 1 bằng vài giọt HCl đặc, ống 1 sẽ trở lại tủa đục như ống 2.
Kết quả: Phản ứng dương tính.
b. Phản ứng diazo hóa
Cho 1ml dịch chiết vào ống nghiệm, kiềm hóa bằng dung dịch kiềm (dung dịch NaOH, KOH, Na2CO3), thêm vài giọt thuốc thử diazo mới pha, lắc đều, đun nóng trên nồi cách thủy trong vài phút. Phản ứng dương tính khi xuất hiện màu đỏ.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
c. Quan sát huỳnh quang của các vết coumarin dưới ánh sáng tử ngoại khi tác dụng với dung dịch kiềm (Phản ứng chuyển từ đồng phân cis sang đồng phân trans dưới tác dụng của tia tử ngoại)
Nhỏ vài giọt dịch chiết lên giấy thấm. Nhỏ tiếp vài giọt dung dịch NaOH 5%. Sấy nhẹ. Che một phần diện tích dịch chiết trên giấy lọc bằng một đồng xu rồi chiếu tia tử ngoại trong một vài phút. Bỏ đồng xu ra, quan sát tiếp dưới đèn tử ngoại sẽ thấy: phản ứng dương tính khi phần không bị che có huỳnh quang sáng hơn phần bị che. Nếu tiếp tục chiếu tia tử ngoại, phần bị che sẽ sáng dần lên, sau vài phút cả hai phần đều phát quang như nhau.
Kết quả: Phản ứng âm tính.
Sơ bộ kết luận:Dược liệu Ngấy hương không chứa coumarin.