NGHIỆM NGẤY HƯƠNG
* Chuẩn bị dịch chiết sắc ký:
Phương pháp Ngâm lạnh: Cho 5g dược liệu vào bình nón, thêm Methanol ngập dược liệu. Ngâm trong 24h gạn lấy dịch chiết, lọc qua giấy lọc. Sau đó thêm tiếp Methanol ngâm trong 24h tiếp theo rồi lại gạn lấy dịch chiết. Gộp dịch chiết 2 lần lại cô đến nồng độ thích hợp tạo dịch chấm sắc ký.
Chấm sắc ký bằng máy chấm sắc ký CAMAG LINOMAT 5.
Sử dụng máy CAMAG REPROSTAR 3 để chụp ảnh sắc ký ở bước sóng 254nm, 366nm và sau khi phun thuốc thử hiện màu. Sử dụng máy vi tính với phần mềm winCATS và VideoScan để xử lý hình ảnh.
* Hệ dung môi:
Hệ 1: Toluen – Ethylacetat - Acid formic (10:8:1) Hệ 2: Toluen - Ethylacetat (93:7)
Hệ 3: Cloroform – Methanol - Acid formic (8:1.5:0.5)
10 Acid amin + TT ninhydrin 0,1% - Không có
11 Polysaccharid + TT Lugol + Có
12 Caroten + TT H2SO4đậm đặc - Không có
13 Sterol + P/ư Liebermann - Không có
14 Chất béo + Để vết mờ trên giấy lọc ++ Có
Hệ 4: Ethylacetat - Acid formic - Nước (8:1:3) Hệ 5: Cloroform - Methanol - Nước (65:35:10)
* Thuốc thử hiện màu: Cân 0.1g Vanilin pha trong 10ml cồn tuyệt đối thêm tiếp 10ml acid sunfuric 1N + 2 giọt acid sunfuric đặc.
* Kết quả: Sau khi triển khai dịch chiết trên các hệ dung môi trên thì nhận thấy hệ 1 và hệ 4 có khả năng tách chất trong đó hệ 1 cho kết quả tách tốt nhất.
Khai triển hệ 1: Toluen – Ethylacetat - Acid formic (10:8:1) Hình ảnh sắc ký sau khi chụp bằng máy CAMAG REPROSTAR 3
a b c
Hình 7: Sắc ký đồ dịch chiết dược liệu sau khi khai triển hệ 1
Hình ảnh sắc ký sau khi sử dụng phần mềm winCATS và VideoScan Hình 8: Sắc ký đồ dưới đèn có bước sóng 254nm
Hình 8: Sắc ký đồ dưới đèn 254nm khi khai triển hệ 1
Hình 9: Sắc ký đồ dưới đèn 366 nm khi khai triển hệ 1
Hình 10: Sắc ký đồ sau khi phun thuốc thử hiện màu khi khai triển hệ 1
• Nhận xét: Sử dụng phần mềm WinCat và VideoScan là rất hữu ích.Với phần mềm này ngoài việc xác định được chính xác số lượng vết, vị trí các vết ta còn có thể sơ bộ định lượng được nồng độ các chất dựa vào diện tích pic.
