2 .3.3.3 Vi khuẩn Azospirillum
4.6. Kết quả nhận diện một số dòng vi khuẩn bằng kỹ thuật PCR
Sau khi kiểm tra các đặc tính sinh hóa của 19 dòng vi khuẩn phân lập được trên môi trường PDA. Chọn 3 dòng vi khuẩn triển vọng nhất đó là dòng KR2, dòng KR3 và dòng KL2B thực hiện phương pháp PCR với đoạn mồi 16S-rDNA (Hình 18) 1500 bp 1 2 3 4 5 6 7 Hình 18: Phổđiện di các dòng vi khuẩn với cặp mồi 16S-rDNA
(*Ghi chú: Giếng 1: Thang chuẩn 100bp. Giếng 5,6,7 lần lượt là các mẫu thí nghiệm KR, KR3,
KL2B( Kích thước mẫu là 1.500bp.)
Sau khi đã khuếch đại DNA của các dòng vi khuẩn, chọn 3 dòng vi khuẩn KR2, KR3, KL2B gửi giải trình tự và định danh tại Công ty Macrogen, Korea.
Sử dụng công cụ Blast của NCBI để so sánh trình tự tương đồng với các trính tự
trên ngân hàng gen kết quảđã cho thấy trình tự của dòng KR2 có mức đồng hình 98% với 16s-rRNA của dòng vi khuẩn Enterobacter cloacae, dòng KR3 có mức đồng hình 95% với 16s-rRNA của dòng vi khuẩn Enterobacter cloacae, dòng KL2B có mức
đồng hình 95% với 16s-rRNA của dòng vi khuẩn Enterobacter kobei.
Bảng 18. Kết quả nhận diện các dòng vi khuẩn triển vọng STT Tên dòng Chiều dài DNA (bp) Kết quả giải trình tự Độ tương đồng (%) 1 KR2 1511 NR 028912.1 Enterobacter cloacae dòng 279-56 98% 2 KR3 1529 NR 117679.1 Enterobacter cloacae dòng DSM 30054 95% 3 KL2B 1451 NR_028993.1 Enterobacter kobei dòng CIP 82.92 95%
Nhìn chung, kết quả giải trình tự cho thấy rằng cả 3 dòng vi khuẩn KR2, KR3, KL2B được tuyển chọn đều có trình tự DNA tương đồng với các chủng lần lượt là
Enterobacter cloacae, Enterobacter cloacae, Enterobacter kobei với tỷ lệ đồng hình lần lượt là 98%, 95%, 95%. Trong đó, tỷ lệđồng hình của dòng KR3, KL2B lần lượt với chủng Enterobacter cloacae, Enterobacter kobei chỉ có 95%, điều này chứng tỏ
dòng KR3 có thể là một chủng mới có quan hệ gần gũi với chủng Enterobacter cloacae. Trong khi đó, dòng KL2B có thể là một chủng mới có quan hệ gần gũi với chủng Enterobacter kobei. Cả 3 dòng này đều có khả năng tổng hợp đạm, IAA và tạo vòng kháng khuẩn.
Theo Cao Ngọc Điệp và ctv (2006-2010), Enterobacter cloacae hoạt động như
những nhà máy sinh học, nó có thể phân giải các phân tử lân bị cố định trong đất hay cố định đạm từ khí trời và giải phóng những Phytohormon kích thích sự tăng trưởng của cây trồng. Vì vậy, Enterobacter cloacae là đối tượng nghiên cứu để tạo chế phẩm vi sinh có ích góp phần cải tạo đất nông nghiệp ởĐBSCL.
Theo Nathalie và ctv (2009) các dòng vi khuẩn khác nhau thuộc họ
Enteriobacteriacea (Enterobacter ludwigii, Raoultella terrigena, Klebsiella oxytoca) có khả năng cốđịnh đạm được phân lập từ các nốt rễ cây Medicago được trồng quanh nhà máy điện hạt nhân Chernobyl đã được tuyển chọn để sản xuất exopolysaccharides acid hòa tan trong nước.
Ở Nhật, các nhà nghiên cứu đã xác định được các vi khuẩn nội sinh
Herbaspirillum có khả năng cố định đạm ở các loài lúa hoang (Elbelatagy et al., 2001). Người ta cũng đã tiến hành thí nghiệm chủng vi khuẩn Herbaspirillum seropedicae và giống Burkholderia vào cây lúa, kết quả các vi khuẩn có thể cố định
đạm khoảng 19% tổng sốđạm cần thiết cho cây (Verma et al., 2001).
Từ kết quả nghiên cứu cho thấy rằng các chủng Enterobacter cloacae, Enterobacter kobei vừa có khả năng cố định đạm, tổng hợp IAA, hòa tan lân và đặc biệt là khả năng kháng khuẩn E.coli. Điều này chứng tỏ chúng là những dòng vi khuẩn sáng giá trong ngành công nghiệp dược, hứa hẹn có thể thay thế một số loại thuốc kháng sinh tổng hợp trong việc chống lại các tác nhân gây bệnh.
CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ