CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu
2.2.2.Phương pháp xác định một số chỉ tiêu sinh lí, hóa sinh
2.2.2.1. Khả năng giữ nước của lá
- Cách lẩy mẫu: Chọn cây có cùng độ tuổi, theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên. Cắt lá buổi sáng, cùng tầng thứ 3 từ trên xuống, mỗi giống lấy số lượng lá như nhau cho vào túi nilon, đưa nhanh về phòng thí nghiệm.
- Cách tiến hành:
+ Cân nhanh mẫu lá vừa lấy mẫu về bằng cân phân tích có độ chính xác 10"4. Để héo lá tự nhiên 4 giờ, nơi không có ánh nắng chiếu trực tiếp, ở nhiệt độ phòng, để cho chúng mất nước đến trên 40%.
+ Cân lá để xác định khối lượng sau héo và lượng nước đã mất. Sau đó sấy khô lá ở 105°c cho đến khối lượng không đổi (khoảng 3 đến 4 giờ) để tính khối lượng khô. Khả năng giữ nước của lá được tính theo công thức:
E — b
A = ^ X l ( № c
Trong đó:
A: Khả năng giữ nước của lá (%), là % lượng nước mất khi bị héo so với lượng nước tổng số.
B: Khối lượng lá tươi ban đầu (g) b: Khối lượng lá tươi sau khi gây héo (g)
V: Khối lượng khô của lá sau khi sấy (g)
2.22.2. Xác định hàm lượng diệp lục tổng sổ
- Phương pháp: Phương pháp quang phổ, tính hàm lượng diệp lục theo
phương trình của Wettstein (1957), [19].
- Cách lẩy mẫu: Mau lá được lấy ở cùng vị trí, cùng số lá, số mẫu bằng số lần lặp lại của thí nghiệm.
- Cách tiến hành:
+ Cân 40 mg lá tươi cho vào cối sứ nghiền nhỏ, thêm 1 ml axeton 100% và tiếp tục nghiền. Sau đó cho thêm 5 ml axeton và tiếp tục nghiền mẫu đến khi thành khối đồng thể.
+ Li tâm dịch chiết, đổ thêm 2 ml dung dịch axeton. Chuyển dung dịch diệp lục vào bình định mức có dung tích 10 ml, dùng axeton định mức
đến vạch. So màu ừên máy quang phổ ở bước sóng 662 nm và 644 nm. + Nồng độ diệp được tính theo công thức Wettstein như sau: ca (mg/1) = 9,784 X
E662 - 0,990 X E644 Cb (mg/1) = 21,426 X E644 - 4,650 X E662ca+b (mg/1) = 5,134 X E662 + 20,436 X E644 Hàm lượng diệp lục trong lg lá tươi được tính theo công thức:
A = (mg/g lá tươi)
r x Trong đó:
E662, E644: Kết quả so màu dung dịch diệp lục ở bước sóng 662 nm và 644 nm Ca, Cb, Ca+t,: Hàm lượng diệp lục a, b và tổng số trong 1 ml dung dịch diệp lục A: Hàm lượng diệp lục trong lg lá tươi C: Nồng độ diệp lục trong dịch chiết V: Thể tích dịch mẫu (ml)
P: Khối lượng mẫu (g)
1000: Hệ số quy đổi 1 lít = 1000 ml
2.2.2.3. Xác định hàm lượng diệp lục liên kết
- Phương pháp: Bằng phương pháp đo quang phổ, tính toán theo phương trình của Wettstein (1957), [25].
- Cách lẩy mẫu: Mau lá được lấy ở cùng vị trí, cùng số lá, số mẫu bằng số lần lặp lại của thí nghiệm.
- Cách tiến hành:
+ Cân 50 mg lá cắt nhỏ cho vào cối sứ nghiền cùng benzen cho tới khi mẫu dính vào đáy cối, loại dung dịch benzen đi, tiếp tục cho thêm benzen vào nghiền, lặp lại cho tới khi dung dịch benzen không nhuộm màu xanh.
+ Loại dung dịch benzen, cho dung dịch axeton 100% vào hòa tan khối mẫu dính ở cối chày sứ. Đưa toàn bộ dung dịch sang phễu lọc rồi ừáng lại cối chày sứ bằng axeton. Đưa dịch lọc sang bình định mức 10 ml và dùng axeton dẫn đến vạch. Đem so màu trên máy quang phổ tại bước sóng 662 nm và 644 nm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Tính hàm lượng diệp lục liên kết giống như tính hàm lượng diệp lục tổng số ở trên.
2.2.2.4. Xác định hàm lượng nước liên kết trong lá
- Phương pháp: Sử dụng phương pháp ngâm lá trong dung dịch saccaroza 70% [19].
- Cách lấy mẫu: Mau lá được lấy ở cùng vị trí, cùng số lá, số mẫu bằng số lần lặp lại của thí nghiệm.
- Cách tiến hành:
+ Cắt lá vào sáng sớm đưa ngay vào phòng thí nghiệm cân. Ngâm lá trong dung dịch saccaroza 70% trong 6h ở nhiệt độ phòng rồi đem cân lại lá. Sau đó đem sấy khô ở 105°c trong 3h để xác định khối lượng khô của lá. Sự chênh lệch giữa khối lượng tươi và khối lượng khô cho biết lượng nước tổng số của lá (X). Công thức tính hàm lượng nước tự do như sau:
z = Ai — A2
Trong đó:
Z: Hàm lượng nước tự do (g/lá) Ai: Khối lượng lá ban đầu (g/lá)
A2: Khối lượng lá sau khi ngâm trong dung dịch saccaroza 70% (g/lá) + Công thức tính lượng nước liên kết
Y = X-Z
Trong đó:
Y: Hàm lượng nước liên kết (g/lá) X: Hàm lượng nước tổng số (g/lá)
+ Quy đổi ra % hàm lượng nước liên kết trong lá theo công thức sau:
H = — X 100%
X
2.2.2.5. Xác định hàm lượng prolin
- Phương pháp: Sử dụng phương pháp của Bates (1973) theo mô tả của
Đinh Thị Phòng, có cải tiến (2001), [22].
- Cách lẩy mẫu: Cân 0,25g hạt đã nảy mầm (không lấy phần vỏ hạt) và
0,5g đối với lá cây (lấy lá tầng thứ 3 từ trên xuống) cho mỗi giống.
- Cách tiến hành:
+ Lấy mỗi mẫu 0,25g đối với hạt mầm và 0,5g đối với lá cây, nghiền kỹ vói 5 ml dung dịch axit suníosalixylic 3%, thêm 5 ml suníosalixylic trộn đều, tráng cối chày sứ bằng 5 ml suníosalixylic nữa và trộn đều toàn bộ hỗn họp. Li tâm 6000 vòng/phút trong thời gian 3 phút, thu lấy dịch trong (V).
+ Lấy 2 ml dịch chiết (Vi) cho vào bình (hoặc ống nghiệm) thêm 2 ml axit axetic và 2 ml dung dịch ninhydiin - axit (dung dịch này gồm 30 ml axit axetic + l,25g ninhydrin) đậy kín và ủ trong nước nóng 100°c trong vòng 1 giờ. Sau đó ủ trong khay đá trong vòng 5 phút và bổ sung thêm vào bình phản ứng 4 ml toluen, lắc đều, lấy dịch màu ở phía trên đem đi đo mật độ quang học ở bước sóng 520 nm trên máy quang phổ.
+ Hàm lượng axit amin được tính theo công thức sau :
Y= 1,4083X +0,014 Công thức xây dựng từ việc lập đường chuẩn prolin, hệ số tương quan R2 = 0,9991.
Trong đó:
Y: Là hàm lượng prolin được tính bằng |j,g/l
Quy đổi ra hàm lượng Ịig/g mẫu như sau:
Trong đó: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
A: Là |j,g/g prolin/gam mẫu P: Khối lượng mẫu phân tích
V: Thể tích dịch mẫu thu được sau khi chiết. 1000: Hệ số quy đổi 1 lít = 1000 ml
2.2.2. Ố. Các yểu tố cấu thành năng suất
-Phương pháp: Sử dụng cân kĩ thuật.
-Cách lẩy mẫu: Thu hoạch quả đã chín ở các giai đoạn -Các chỉ tiêu cần xác định:
+ Số lượng quả (quả/cây)
+ Khối lượng quả trên cây (kg/cây) + Khối lượng trung của bình quả (g/quả)
2.3. Phương pháp xử lí số liệu
Các kết quả nghiên cứu được xử lí và đánh giá theo phương pháp thống kê sinh học nhờ phàn mềm phần mềm SPSS, Microsoft Excel 2010, thông qua các tham số sau, so sánh 2 trung bình mẫu với mức ý nghĩa a = 0,05.
X =
(nếu n > 30);
Trong đó:
X: Giá trị trung bình sô học n: Số lần nhắc lại m: Sai số trung bình số học ơ: Phương sai n - 1 = 1 n ơ n