Quá trình thu sinh khối của chủng vi khuẩn probiotic có ý nghĩa rất lớn trong sản xuất các chế phẩm probiotic. Sinh khối của vi khuẩn thay đổi theo thời gian, gồm 4 pha là pha thích ứng, pha logarit, pha ổn định và pha suy tàn [5]. Việc nắm được thời gian của các pha có ý nghĩa lớn trong sản xuất, nhờ đó xác định được thời điểm thu sinh khối cao nhất và tiết kiệm được thời gian nuôi cấy và giảm chi phí sản xuất. Sinh khối của chủng làm probiotic thường được thu vào cuối pha logarit, do lượng sinh khối cao và tế bào ở pha này sẽ nhanh chóng thích nghi và tăng trưởng khi đưa vào môi trường mới.
Để tiến hành khảo sát đường cong tăng trưởng của chủng MC9 và xác định thời điểm thu sinh khối tối ưu, chúng tôi tiến hành cấy mẫu vào môi trường MRS lỏng, với mức pha loãng nhằm đạt được OD khởi điểm vào khoảng 0,05. Mẫu được ủ ở 37oC trong eppendorf 1ml (không lắc). Tiến hành lấy mẫu mỗi giờ 1 lần trong 8 giờ đầu, 2 giờ một lần trong 32 giờ tiếp theo và 8 giờ một lần trong 48 giờ cuối. Xác định sinh khối mẫu bằng cách đo OD ở bước sóng 600nm.
Kết quả cho thấy trong 14 giờ đầu sinh khối tăng nhanh một cách đáng kể đặc biệt là từ 4 giờ đến 14 giờ. Ở các mốc giờ còn lại thì mật độ tế bào tiếp tục tăng chậm cho đến 96 giờ. Như vậy trong khoảng thời gian từ 0 - 4 giờ là giai đoạn tiềm phát của quá trình sinh trưởng và phát triển tế bào trong điều kiện nuôi cấy tĩnh vì vậy trong khoảng thời gian này mật độ tế bào có tăng nhưng chưa rõ rệt. Chỉ khi quá trình đi vào pha logarit (4 giờ -14 giờ) thì vi khuẩn phát triển và sinh trưởng theo lũy thừa dẫn đến tốc độ tích lũy sinh khối tăng nhanh một cách rõ rệt. Từ 14 giờ đến 96 giờ sinh khối có tăng nhưng rất chậm, đây là pha ổn định của chủng MC9 (Hình 4.8).
Kết quả trên khá đồng nhất với một số nghiên cứu có khảo sát đường cong tăng trưởng của Lactobacillus spp., Dumbrepatil (2008) và cộng sự [13] cũng đã khảo sát khả năng sinh trưởng của Lactobacillus delbrueckii trong 40 giờ. Nhóm tác giả cũng nhận thấy rằng chủng Lactobacillus delbrueckii tốc độ sinh trưởng tăng nhanh trong 12 giờ đầu, đến 14 giờ đã đi vào pha ổn định .
Pha ổn định trong đường cong tăng trưởng của vi sinh vật thực chất là một sự cân bằng động khi lượng vi khuẩn chết đi bằng với lượng sinh ra, nên cân bằng này không đứng yên mà có sự thay đổi nhẹ, có thể tăng nhẹ hay giảm nhẹ hoặc lúc giảm lúc tăng tùy đặc điểm của chủng.
Dựa vào kết quả trên, chúng tôi xác định thời điểm thu sinh khối tốt nhất của chủng MC9 trong môi trường MRS lỏng, nuôi kỵ khí là 14 giờ.