Chuẩn bị: 1 ống nước chứa 10ml, 10 ống nước chứa 9ml, môi trường nuôi cấy thích hợp, đĩa Petri, que chang, pipet. Tất cả được tiệt trùng ở 120oC trong 30 phút.
Tiến hành:
Pha hỗn dịch bào tử có nồng độ từ 10-1 đến 10-6 như sàng lọc ngẫu nhiên. Hút 0,1ml hỗn dịch 10-6 ra đĩa Petri, dùng que chang chang đều và để vào tủ ấm làm mẫu chứng. Mỗi mẫu làm 3 đĩa song song.
Đổ 9ml còn lại trong ống nghiệm 10-1 ra đĩa Petri, đem chiếu ánh sáng UV (=245nm) trong thời gian 4 phút 15 giây. Lấy ra để chỗ tối trong 2 giờ. ( Chú ý: buồng chiếu UV được tiệt trùng bằng cồn và UV, đĩa Petri đem đi chiếu mở nắp).
Sau 2 giờ, dùng hỗn dịch đã đột biến, pha loãng ra các nồng độ 10-2 đến 10-5. Dùng pipet hút 0,1ml các hỗn dịch 10-4 và 10-5 vào đĩa Petri và dùng que chang chang đều. Để các đĩa Petri vào tủ ấm 28oC trong 6 ngày.
Sau 6 ngày, chọn lọc ngẫu nhiên các khuẩn lạc và cấy zigzag trên đĩa Petri. Tiến hành cả mẫu chứng và mẫu đột biến. Sau 6 ngày, thử HTKS tương tự như phương pháp sàng lọc ngẫu nhiên.
Kết quả:
Đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa đột biến và đĩa chứng sau 6 ngày. Tính độ sống sót sau đột biến.
Trong đó:
Nm: trung bình số khuẩn lạc trong mẫu có nồng độ bào tử 10-m
No : trung bình số khuẩn lạc trong mẫu chứng.
Đo kết quả vòng vô khuẩn của các chủng đã sàng lọc, so sánh với mẫu chứng và tính tỉ lệ biến đổi hoạt tính.
% biến đổi hoạt tính = x 100% Trong đó:
D : đường kính trung bình vòng vô khuẩn của biến chủng thứ i sau đột biến.
D : đường kính trung bình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.
Chọn các chủng đột biến có hoạt tính cao nhất.
Tiến hành đột biến lần 2 trên chủng được chọn từ lần 1. Cách tiến hành tương tự lần 1, thời gian chiếu UV là 4 phút.