Đánh giá hoạt tính kháng sinh của xạ khuẩn bằng phương pháp khuyếch tán
Nguyên tắc: Chất kháng sinh khuyếch tán vào môi trường dinh dưỡng đặc đã cấy VSV kiểm định, tạo ra các vùng ức chế VSV gọi là vòng vô khuẩn.
Cách thực hiện:
Chuẩn bị đĩa Petri chứa VSV kiểm định:
Tạo hỗn dịch VSV: lấy 1 vòng que cấy VSV kiểm định cấy vào 2,5 ml môi trường canh thang, hỗn dịch sau khi cấy để trong tủ ấm 37oC trong 18- 24h để VSV phát triển thành hỗn dịch chứa 106-108 tế bào/ml.
Sau 24h, hỗn dịch VSV đã cấy được trộn đều vào môi trường thạch thường đã tiệt trùng và để nguội đến 50oC, lắc đều rồi phân ra các đĩa Petri (20ml/đĩa). Tỉ lệ trộn hỗn dịch vào môi trường là 2,5 : 100.
Đưa mẫu cần thử hoạt tính vào môi trường chứa VSV kiểm định:
Phương pháp khối thạch: đục các khối thạch có đường kính khoảng 6mm trên đĩa Petri chứa mẫu cần thử hoạt tính, sau đó đặt các khối thạch lên bề mặt của đĩa Petri chứa VSV kiểm định. (hình P4.1)
Phương pháp giếng thạch: đục các giếng thạch có đường kính khoảng 6mm trên đĩa Petri chứa VSV kiểm định, nhỏ vào các giếng thạch đã đục khoảng 0,05 ml mẫu thử.
Phương pháp khoanh giấy lọc: tẩm các dịch mẫu thử vào khoanh giấy có đường kính khoảng 6mm, mỗi khoanh giấy sau khi tẩm được sấy khô ở
nhiệt độ thích hợp với mẫu thử (lặp lại 3 lần). Đặt các khoanh giấy đã tẩm mẫu lên đĩa Petri chứa VSV kiểm định. (hình P4.2)
Các đĩa Petri đã có mẫu thử được đặt trong tủ ấm 37oC trong 24h, sau 24h được đem ra đo kết quả, hoạt tính của kháng sinh được đánh giá thông qua đường kính vòng vô khuẩn tạo ra trên đĩa.
Đánh giá kết quả: đo đường kính vòng vô khuẩn bằng thước kẹp Palmer (Độ chính xác 0,02mm). Kết quả trung bình được tính theo công thức:
D = ∑ s = ∑ ( ) Trong đó:
D (mm): đường kính trung bình vòng vô khuẩn
D (mm): đường kính vòng vô khuẩn thứ i s : độ lệch thực nghiệm chuẩn có hiệu chỉnh
n: số thực nghiệm tiến hành song song ( thông thường n = 3)