Chuẩn bị môi trường:
Các môi trường ISP1, ISP2, ISP3, ISP4, ISP5, ISP6, ISP7 được chuẩn bị, hấp tiệt trùng và phân vào các hộp Petri (20ml/hộp). Mỗi môi trường làm 4 ống.
Môi trường ISP9, nguồn đường được hấp tiệt trùng theo phương pháp Tyndal, các thành phần còn lại được tiệt trùng ở 120oC trong 30 phút rồi để nguội, sau khi trộn đường vào các thành phần còn lại, môi trường được đổ ra hộp Petri, mỗi đường làm 4 hộp, 4 hộp chứng âm (không có đường).
Cấy zigzag chủng xạ khuẩn lên các môi trường có thạch hoặc lấy 1 vòng que cấy và trộn lẫn vào môi trường lỏng (ISP1). Sau khi cấy, hộp Petri được giữ trong tủ ấm 28oC.
Theo dõi kết quả:
Với các môi trường ISP1-5: đọc kết quả vào các ngày 7,14,21. Đặc điểm cần theo dõi:
Màu khuẩn ty khí sinh, quan sát trên bề mặt khuẩn lạc: màu đỏ (R), màu vàng (Y), màu xanh lá cây (G), màu xanh da trời (B), màu tím (V), màu xám (Gy), màu trắng (W). Trường hợp có màu xen kẽ thì ghi các màu liền nhau.
Màu khuẩn ty cơ chất: quan sát mặt sau của khuẩn lạc. Thường khuẩn ty sẽ có màu vàng nâu, vàng nâu ánh đỏ, da cam, vàng nâu ánh xanh da trời, tím, vàng nâu lẫn xanh lá cây. Nếu xuất hiện màu trên kí hiệu là (1), nếu không có kí hiệu là (0).
Chuỗi bào tử và bề mặt bào tử được quan sát bằng kính hiển điện tử độ phóng đại cao. Dạng chuỗi bào tử: thẳng (R), uốn cong (RF), móc câu (RA), lò xo (S). Nếu chuỗi bào tử có nhiều đặc điểm thì ghi đầy đủ (ví dụ SRA). Bề mặt bào tử có thể phẳng nhẵn (sm), sần sùi mụn cơm (wa), có gai (sp), có tóc (ha).
Sắc tố hòa tan nằm trong môi trường có các màu : vàng , đỏ, tím, xanh… nếu có thì kí hiệu là (1), không có kí hiệu là (0).
Với môi trường ISP6, ISP7, theo dõi kết quả vào ngày 2 và 4. Đặc điểm cần theo dõi là sắc tố melanin (màu đen hoặc nâu đen). Nếu có kí hiệu là (1), không có kí hiệu là (0).
Với môi trường ISP9, theo dõi kết quả vào các ngày 12,14,16. Đặc điểm theo dõi là mức độ phát triển của xạ khuẩn. Chứng dương là ống chứa glucose, chứng âm là ống không chứa đường. Nếu chủng phát triển mạnh hơn hoặc bằng chứng dương kí hiệu là (+), nếu yếu hơn hoặc bằng chứng âm kí hiệu là (-), nếu yếu hơn chứng dương, mạnh hơn chứng âm kí hiệu là ().