Hợp chất FM8.4 được phân lập dưới dạng chất dầu màu vàng; Độ quay cực [α]D25 -97,5o (c 0,52; MeOH). Phổ khối phun mù điện tử ESI-MS cho pic ion phân tử proton hóa ở m/z 212 [M+H]+. Phổ IR có dải hấp thụ ở νmax 3461 (cm-1) đặc trưng cho dao động hóa trị nhóm NH, dải hấp thụ νmax 1645 và 1586 (cm-1) đặc trưng cho dao động hóa trị của nhóm cacbonyl (C=O).
38
Hình 4.2. Phổ khối của FM8.4
Trên phổ 1H-NMR xuất hiện tín hiệu của 2 nhóm metin có độ chuyển dịch hóa học ở trường thấp tại δH 4,47 (1H, dd, J= 2,5; 9,0 Hz; H-2’); 5,12 (1H, dd, J= 3,0; 8,5 Hz; H-2). Điều này cho phép xác định 2 nhóm metin này gắn với dị nguyên tử. Đồng thời, tín hiệu của 12 proton trong vùng δH 2,05-4,43 cũng được quan sát thấy trên phổ 1H-NMR.
Phổ 13C-NMR với sự trợ giúp của HSQC cho phép xác định có 10 nguyên tử cacbon trong phân tử tương ứng với 2 nhóm metin lai hóa sp3 ở δC 61,7 (C-2’); 65,7 (C-2); 6 nhóm metylen trong đó có 2 nhóm metylen liên kết với nitơ ở δC 47,1 (C- 5); 51,6 (C-5’) và 4 nhóm metylen ở δC 22,2 (C-4); 24,0 (C-4’); 29,3 (C-3’); 30,3 (C-3) và 2 cacbon nhóm cacbonyl ở δC 175,0 (C-6’); 177,1 (C-6).
39
Bảng 4.1. Dữ kiện phổ 1H-NMR (CD3OD; 500 MHz) và 13C-NMR (CD3OD; 125 MHz) của FM8.4 Vị trí C H m (J, Hz) Vị trí C H m (J, Hz) 1 - - 1’ - - 2 65,7; CH 5,12 (1H, dd, J= 3,0; 8,5 Hz) 2’ 61,7; CH 4,47 (1H, dd, J= 2,5; 9,0 Hz) 3 30,3; CH2 2,39 (2H, m) 3’ 29,3; CH2 2,05 (1H, m) 2,37 (1H, m) 4 22,2; CH2 2,05 (2H, m) 4’ 24,0; CH2 2,05 (4H, m) 2,20 (1H, m) 5 47,1; CH2 3,68 (2H, m) 5’ 51,6; CH2 4,35 (1H, m) 4,43 (1H, m) 6 177,1; C=O - 6’ 175,0; C=O - 7 - - Hình 4.3. Phổ 1H-NMR giãn rộng của FM8.4 H-2 CH2-5 H-2’
40 Hình 4.4. Phổ 13C-NMR giãn rộng của chất FM8.4 Hình 4.5. Phổ COSY của chất FM8.4 C-4 C-4’ C-3’ C-3 C-5 C-5’ C-2’ C-2
41
Hình 4.6. Phổ HMBC của chất FM8.4
Phổ COSY cho phép xác định 2 chuỗi tương tác spin-spin: H-2’/CH2- 3’/CH2-4’/CH2-5’ và chuỗi tương tác của các proton từ H-2/CH2-3/CH2-4/CH2-5 (được biểu diễn bằng các liên kết đậm trên) (hình 4.7).
Trên phổ HMBC cho tương tác giữa H-2’ với C-3’, C-4’ và C-6’ cho phép xác định nhóm cacbonyl C-6’ liên kết với vòng pyrrolidin tại vị trí C-2’ và tương tác giữa H-2 với C-3, C-4, C-6 cho phép xác định cacbonyl C-6 gắn với vòng pyrrolidin thứ 2 tại C-2. Phân tích chi tiết dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, COSY, HSQC, HMBC, độ quay cực [α]D25 -97,5o (c 0,52; MeOH) và so sánh với tài liệu tham khảo cho phép xác định chất FM8.4 là 1-(pyrrolidine-2’-carbonyl) pyrrolidine-2-carboxamide, cấu hình tuyệt đối được xác định là 2S, 2’S [15]. Hợp chất này đã được tổng hợp toàn phần năm 2012 và đây là lần đầu tiên hợp chất này được phân lập từ thiên nhiên [15].
42