2. TỔNG QUAN TĂI LIỆU
2.5. Ứng dụng chỉ thị phđn tử trong chọn tạo giống lúa thơm
để cải tiến những giống lúa thơm, kỹ thuật sinh học phđn tử ựược coi lă một giải phâp hiệu quả. Ahn vă cs. (1992)[22] ựê xâc ựịnh bằng kỹ thuật RFLP marker RG28 nằm trắn NST số 8 liắn kết với tắnh trạng biểu hiện mùi thơm ở khoảng câch 4,5 cM. Tuy nhiắn, phương phâp năy khâ ựắt tiền vă phức tạp nắn nhiều tâc giả ựê nghiắn cứu ựơn giản hóa phương phâp xâc ựịnh gen thơm. Tại Hội nghị Quốc gia chọn tạo giống lúa năm 2004, Nguyễn Thị Lang vă cs. (2004)[11] bâo câo hai mồi RG28F-R vă RM223 có thể sử dụng trong chương trình chọn giống lúa thơm. đồng thời, Nguyễn Thị Lang vă cs. (2008) ựê sử dụng 2 mồi trắn ựể xâc ựịnh tắnh thơm trắn OM4600 (cặp lai C53/Jasmine 85) vă trắn OM6161 (cặp lai C47/Jasmine 85) vă cho rằng hai chỉ thị phđn tử năy sẽ giúp phât hiện ở quần thể phđn ly F2 có chứa gen fgr trong câc câ thể. Cũng ứng dụng câc mồi năy,xâc ựịnh 16 giống lúa ựịa phương vă 46
Trường đại học Nông nghiệp Hă Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 24 giống lúa cải tiến ựều chứa gen thơm vă có mùi thơm. Yi vă cs. (2009) ựê lai giống lúa thơm Basmati 361 với giống Manawthukha (giống ựịa phương của Myanmar) ựể chuyển cặp alen badh 2.1 văo giống mới. Sau ựó sử dụng PCR với mồi aromarker ựể xâc ựịnh tắnh thơm.
Nghiắn cứu về betaine aldehyde dehydrogenase 2 (BADH2) bị mất chức năng thông qua tiến trình chọn lọc tự nhiắn biến thănh gen kiểm soât mùi thơm (Bradbury vă cs., 2005)[27], Chen vă cs. (2008)[30] ựê cho biết hoạt ựộng của cặp alen badh 2.1 mang về chất ban ựầu cần thiết cho sinh tổng hợp 2-AP. Một số tâc giả ựê chứng minh sự mất ựoạn 8 bp vă 3 ựiểm ựa hình ựơn trong exon thứ 7 của gen thơm (fgr) mê hóa betain aldehyde dehydrogenase 2 lăm enzyme năy không hoạt ựộng, kết quả lă tắch lũy 2-AP (Lorieux vă cs., 1996; Bradbury vă cs., 2005; Srivong vă cs., 2008; Chen vă cs., 2006; Vanavichit vă cs., (2008). Trắn sơ sở ựó, Bradbury vă cs. (2005) ựê sử dụng ASA với phản ứng PCR ựể phđn biệt gen thơm ựồng hợp tử lặn, dị hợp tử vă ựồng hợp tử trội. Hai mồi ngoăi (EAP vă ESP) khuếch ựại một ựoạn khoảng 500 bp (497 bp ở lúa thơm vă 505 bp ở lúa không thơm). Hai mồi IFAP vă ESP hoạt ựộng tạo ra sản phẩm có kắch thước 249 bp cho lúa thơm. Hai mồi INSP vă EAP hoạt ựộng tạo ra sản phẩm có kắch thước 348 bp cho lúa không thơm
Hai cặp mồi ựược sử dụng trong phđn tắch PCR
Tắn mồi 5Ỗ Trình tự mồi 3Ỗ
Mồi ngoăi 1 (ESP) Mồi ngoăi 1 (EAP)
Mồi trong cho lúa thơm (IFAP) Mồi trong cho lúa không thơm (INSP)
TTGTTTGGAGCTTGCTGATG AGTGCTTTACAAAGTCCCGC CATAGGAGCAGCTGAAATATATACC
CTGGTAAAAAGATTATGGCTTCA Hai cặp mồi năy do Bradbury vă cs. (2005)[27] dựa trắn trình tự của BAC AP004455, gen thơm ước ựoân J023088C02, chỉ thị phđn tử vi vệ tinh SSR-J02 vă chỉ thị phđn tử SNP RSP04 ựể thiết kế. Dương Xuđn Tú,
Trường đại học Nông nghiệp Hă Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 25 (2010)[17] cho biết, câc chỉ thị phđn tử RG28, RM342 không phđn biệt ựược câc giống lúa mang gen thơm vă không mang gen thơm; chỉ thị phđn tử L05 có thể phđn biệt ựược giữa câc giống lúa thơm vă không thơm, nhưng ựộ chắnh xâc không cao; badh2.1 ựê phđn biệt chắnh xâc 100%. Ứng dụng câc mồi do Bradbury vă cs. (2005)[27] công bố, Trần Thị Xuđn Mai vă cs. (2008)[15] vă đỗ Thị Thu Hương vă cs. (2008)[10] ựê cho biết việc sử dụng chung hai cặp mồi trong cùng một phản ứng PCR ựê cho phĩp nhận diện câc câ thể thơm ựồng hợp tử, không thơm ựồng hợp tử vă dị hợp tử trong một quần thể còn phđn ly của lúa thơm, phương phâp năy có thể âp dụng trong công tâc chọn tạo giống lúa thơm phục vụ nhu cầu trong nước vă xuất khẩu hiện nay. Sử dụng 2 cặp mồi năy, Zang (2007) ựê nhanh chóng chọn chắnh xâc ựược câc câ thể thơm trong quần thể.. Tâc giả Nguyễn Phúc Hảo vă cs. (2009)[8] ựê sử dụng 2 cặp mồi năy ựể xâc ựịnh alen thơm của bốn dòng lúa thơm TP5 vă cho rằng tất cả ựều mang alen thơm từ lúa Jasmine 85. đồng thời, Nguyễn Thị Mai Hạnh vă cs. (2010)[7] ựê dùng 2 cặp mồi vừa nắu kết hợp kỹ thuật ựiện di protein tổng số ựê chọn ựược bốn dòng lúa thơm thuần. Dương Xuđn Tú (2010)[17] cũng chọn ựược 2 dòng lúa thơm HDT2 vă HDT8 từ tổ hợp lai AC5/Q5//C61 vă Peai/BT. Phan Hữu Tôn vă cs. (2010)[16] dùng mồi ESP vă IFAP ựể săng lọc câc giống lúa thơm ựê chọn ựược 2 dòng lúa T33 vă T12. Quan Thị Âi Liắn vă cs. (2010)[14] lai tạo ựược 3 dòng nếp mang cặp alen badh2.1. Boonsirichai el al. (2007)[25] xâc ựịnh 3 dòng lúa của Khao Dawk Mali 105 ựột biến ựều mang cặp alen badh 2.1. Alen thơm còn ựược sử dụng ựể chuyển văo lúa lai 3 dòng. đânh giâ mùi thơm trắn câc giống thuộc nhóm Basmati vă giống cải tiến ở Sri Lanka, Kottearachchi vă cs. (2010)[43] cho biết 2 giống lúa thơm cải tiến Lanka Samurdi vă AT306 ựều mang cặp alen badh2.1 vă một giống Basmati trồng ở SriLanka (Acc No. 4540) có alen khâc với badh2.1. Jin vă cs. (2010)[40] ựê thiết kế mồi cho alen thơm badh2.7 ựể chuyển văo dòng duy trì bất dục II 32B.
Trường đại học Nông nghiệp Hă Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 26
