- Bước 1: Cốđịnh nhiễm sắc thể
Lấy rễ vào buổi sáng, từ 7 đến 8 giờ, rửa sạch, cắt đầu chóp rễ dài 1 cm và ngâm trong dung dịch colchicine 0,05% trong 3 giờ ở nhiệt độ 40C để cố định nhiễm sắc thể soma. Mẫu chóp rễ sau xử lý được bảo quản trong dung dịch Carnoy (1axit acetic : 3 ethanol 95%) ở 4ồC trong 24 giờ.
- Bước 2: Nhuộm nhiễm sắc thể
Thủy phân chóp rễ trong dung dịch HCl 1N ở 600C trong 11 phút. Chóp rễ
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 35 - Bước 3: Quan sát và đếm nhiễm sắc thể
Cắt phần nhuộm màu tắm ở đầu chóp rễ dài 1mm và đặt trên lam kắnh. Nhỏ 1 giọt axit axetic 45% vào, đậy lamen lên. Giã nhẹ và tán đều rồi tiến hành quan sát trên kắnh hiển vi ở các vật kắnh 10, 40, 100. Đếm số lượng nhiễm sắc thể
trong mỗi tế bào.
2.4.3.Các chỉ tiêu theo dõi
2.4.3.1. Các chỉ tiêu về sinh trưởng phát triển
- Chiều cao cây (cm): đo từ phần sát mặt đất đến mút lá cao nhất. Giai
đoạn ra hoa đo từ gốc đến đỉnh của ngồng hoa. 30 ngày đo 1 lần.
- Số lá/thân: Đếm toàn bộ số lá trên thân theo dõi, 30 ngày đếm 1 lần. - Kắch thước lá (cm): dài lá (bắt đầu theo dõi khi lá mới nhú được 1 cm), rộng lá (phần rộng nhất của lá). 30 ngày đo 1 lần
- Màu sắc lá trưởng thành: Quan sát bằng mắt
2.4.3.2. Xác định số lượng NST
- Đếm số lượng NST trong tế bào chóp rễở vật kắnh 100
2.4.3.3. Các chỉ tiêu về hoa
- Chiều cao ngồng hoa (cm): Dùng thước thẳng đo từ gốc ngồng đến gốc bao hoa
- Đường kắnh ngồng hoa (cm): Dùng palme đo cách gốc 5cm, đo 2 lần vuông góc với nhau, đo khi hoa bắt đầu tàn
- Số hoa/ngồng: Đếm số hoa/ngồng
- Màu sắc hoa: Quan sát bằng mắt và so sánh bằng bảng so màu RHS - Đường kắnh hoa (cm): Đo khi hoa đã nở hoàn toàn. Dùng thước thẳng
đo khoảng cách giữa 2 đầu đối diện nhau, đo 2 lần vuông góc.
- Chiều cao hoa (cm): Đo khi hoa đã nở hoàn toàn. Đo từ gốc cánh hoa,
đến mặt phẳng cánh hoa.
- Dạng hoa: theo mô tả của Ted L. Petit and Dorothy J. Callaway (2008) - Kắch thước cánh hoa: Đo khi hoa nở hoàn toàn
+ Dài cánh hoa (cm): Đo từ gốc cánh hoa đến đầu cánh. + Rộng cánh hoa (cm): Đo tại vị trắ rộng nhất của cánh.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 36 - Chiều dài chỉ nhị (cm): Đo khi hoa đã nở hoàn toàn, đo từ gốc chỉ nhị đến đầu bao phấn, đo hết các chỉ nhị trên hoa.
- Chiều dài vòi nhụy (cm): Đo khi hoa đã nở hoàn toàn, đo từ gốc vòi nhụy đến đầu nhụy.
- Chiều dài bao phấn khi chưa nứt (cm): Dùng thước thẳng đo các bao phấn khi chưa nứt. Đo tất cả các bao phấn trên hoa.
2.4.3.4. Các chỉ tiêu nghiên cứu trong thắ nghiệm nhân giống
- Thời gian từ giâm đến bắt đầu ra rễ (ngày) - Thời gian từ giâm đến bắt đầu ra lá (ngày) - Thời gian từ giâm đến xuất hiện chồi (ngày) - Thời gian từ giâm đến khi ra ngôi (ngày) - Kắch thước lá (cm):
+ Chiều dài lá: Đo khi lá xuất hiện dài từ 1cm đến 2cm. Dùng thước thẳng tiến hành đo chiều dài lá 7 ngày/lần
+ Rộng lá: 20 ngày đo một lần
- Chiều dài bộ rễ (cm): Đo khi ra ngôi, dùng thước thẳng đo từ gốc rễđến
đầu rễ dài nhất (đơn vịđo cm)
- Số rễ/hom: Thời gian đầu sau giâm kiểm tra 5 ngày/lần. Khi tất cả các hom giâm đã xuất hiện rễ tiến hành kiểm tra 10 ngày/lần. Khi cây đã đủ tiêu chuẩn ra ngôi tiến hành kiểm tra số rễ/hom lần cuối.
- Tỷ lệ hom sống (%)= (Số hom sống/tổng số hom) ừ 100