Limousine sau khi rã đông 2 phút
Thí nghiệm 2: Các chỉ tiêu nồng độ tinh trùng, hoạt lực tinh trùng, tỷ lệ tinh
trùng sống và kỳ hình của 2 giống bò Brahman lai và Limousine được xác định ở thời điểm rã đông tối ưu được tiến hành như sau:
Sử dụng buồng đếm Neubauer để kiểm tra nồng độ tinh dịch sau rã đông.
Tiến hành: Sau khi rã đông tinh cọng rạ ở thời gian rã đông 2 phút, dùng micropipette hút 50µl tinh dịch cho vào ống nghiệm đã chuẩn bị trước có chứa 5ml dung dịch NaCl 3%, lúc này độ pha loãng của tinh dịch là 100 lần. Dùng micropipette khuấy đều, sau đó rút tinh dịch đã được pha loãng đặt lên cạnh lamelle của buồng đếm và bơm nhẹ, nhờ hiện tượng mao dẫn, tinh dịch đã được pha loãng được hút vào trong buồng đếm. Chú ý: không được để dung dịch tràn ra ngoài những cạnh của buồng đếm. Đặt buồng đếm lên kính hiển vi quang học và đếm số lượng tinh trùng ở cả 2 buồng đếm. Có thể đếm tinh trùng ở vật kính 20x hoặc 40x.
Công thức tính tinh trùng sau khi đếm:
C/mm3 = số TT trung bình đếm được x độ pha loãng x V buồng đếm C/mm3 = số TT trung bình đếm được x 100 x 50
C/ml = số TT trung bình đếm được x 100 x 50 x 103
C/0,25ml = số TT trung bình đếm được x 100 x 50 x 103 x 0,25 Trong đó: C: số tinh trùng trên một đơn vị thể tích
TT: tinh trùng V: thể tích
Để tránh sai sót không cần thiết, ta đếm cả 2 buồng sau đó lấy số trung bình. Tuy nhiên kết quả 2 lần có thể sai khác 10% và có thể lên đến 20% là đạt yêu cầu.
3.2.2.2 Kiểm tra hoạt lực tinh trùng
Hoạt lực tinh trùng của 2 giống bò Brahman lai và Limousine được tiến hành tương tự như ở Thí nghiệm 1. Tuy nhiên, đối với Thí nghiệm 2, chỉ kiểm tra hoạt lực 1 lần ở thời điểm rã đông tối ưu đã biết trước từ Thí nghiệm 1.
3.2.2.3 Kiểm tra tỷ lệ tinh trùng sống
Phương pháp tiến hành kiểm tra tỷ lệ tinh trùng sống của 2 giống bò Brahman lai và Limousine được thực hiện tương tự như ở Thí nghiệm 1.
3.2.2.4 Kiểm tra tinh trùng kỳ hình
Chỉ tiêu kỳ hình là chỉ tiêu rất quan trọng đóng góp vào việc đánh giá chất lượng tinh cọng rạ. Một cọng rạ đạt chuẩn phải có tỷ lệ kỳ hình thấp. Nếu tỷ lệ kỳ hình lớn hơn 20% và tỷ lệ kỳ hình ở đầu cao hơn 5% thì liều tinh đó không đạt yêu cầu.
Tiến hành: dùng micropipette hút 30µl tinh dịch từ ống nghiệm lên lame và dùng lamelle đàn mỏng mẫu dọc theo chiều dài lame. Làm khô tiêu bản vừa được đàn mỏng dưới ngọn lửa đèn cồn.
Nhuộm tiêu bản: sau khi tiêu bản đã khô, nhỏ 3 giọt Blue de methylen
1% lên tiêu bản, trãi đều thuốc nhuộm khắp lame đã được đàn mỏng một lớp tinh dịch, để khô trong khoảng 5 phút để đảm bảo tiêu bản bắt màu hoàn toàn. Dùng nước cất rửa nhẹ tiêu bản, làm khô tiêu bản một lần nữa trên ngọn lửa đèn cồn. Tiến hành quan sát dưới kính hiển vi ở vật kính 10x hoặc 40x. Kiểm tra tổng số 300 tinh trùng, xác định tỷ lệ kỳ hình bằng cách đếm tinh trùng kỳ hình có trong 1 – 2 vi trường (300 tinh trùng). Trong GTNT, tổng số tinh trùng kỳ hình có thể chiếm 18% trên tổng số tinh trùng trong một liều gieo vẫn được chấp nhận. Tuy nhiên, kỳ hình đầu chiếm không quá 5%.
Công thức xác định tỷ lệ tinh trùng kỳ hình
Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình = Số tinh trùng trùng kỳ hình/300