2. Đề tài: “Đánh giá một số thông số kiểm soát quy trình tách chiết dƣợc
3.1 PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
3.1.1 Địa điểm, thời gian thực hiện
Địa điểm: Công ty cổ phần xuất nhập khẩu y tế Domesco, huyện Cao Lãnh, tỉnh Đồng Tháp.
Thời gian thực hiện: 08/2013 – 12/2013.
3.1.2 Nguyên liệu và dụng cụ 3.1.2.1 Nguyên liệu 3.1.2.1 Nguyên liệu
Bột mịn Malva, nguyên liệu Ích Mẫu, Diệp hạ châu.
Dịch chiết của mẫu cây Hà thủ ô, Diệp hạ châu và Morinda.
Cao của mẫu cây Ích mẫu, Tỏi, Hà thủ ô, Diệp hạ châu, Morinda, Thục địa, Dứa gai, Bứa, Râu mèo, Ngãi cứu, Do-Adam, Hƣơng phụ, Lạc tiên, Chuối hột. 3.1.2.2 Dụng cụ - Cốc thủy tinh 50 mL, 600 mL, 1000 mL. - Pipet nhỏ giọt. - Cân điện tử. - Tủ sấy. - Bếp điện từ. - Thao inox. - Bồn inox 1000 L. - Máy chiết xuất. - Máy rửa.
- Tủ sấy. - Nồi cô đặc.
- Máy đo độ brix refractometer 30px. - Máy đo độ nhớt viscometer DV-II+ pro. - Máy cắt dƣợc liệu.
25
Hình 3.1 Máy chiết xuất Hình 3.2 Máy rửa
Hình 3.3 Tủ sấy Hình 3.4 Nồi cô đặc
26
Hình 3.7 Máy cắt dƣợc liệu Hình 3.8 Máy xay
3.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu
Bột mịn Malva, nguyên liệu Ích Mẫu, Diệp hạ châu.
Dịch chiết của mẫu cây Hà thủ ô, Diệp hạ châu và Morinda.
Cao của mẫu cây Ích mẫu, Tỏi, Hà thủ ô, Diệp hạ châu, Morinda, Thục địa, Dứa gai, Bứa, Râu mèo, Ngãi cứu, Do-Adam, Hƣơng phụ, Lạc tiên, Chuối hột.
3.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu
- Dựa trên dƣợc điển Việt Nam IV tiến hành đƣa ra các chỉ tiêu kiểm định quan trọng.
- Xây dựng cơ sở lý thuyết cho các chỉ tiêu.
- Xác định phần trăm ẩm độ Malva bằng phƣơng pháp sấy.
- Xác định chỉ số về độ brix dựa vào máy đo chỉ số khúc xạ 30px. - Xác định chỉ số về độ nhớt dựa vào máy đo độ nhớt DV-II+ pro. - Xác định phần trăm cắn bằng phƣơng pháp khối lƣợng.
3.3 THỰC NGHIỆM
3.3.1 Xác định phần trăm độ ẩm a) Nguyên tắc a) Nguyên tắc
Phƣơng pháp này chủ yếu dựa vào sự bốc hơi của nƣớc từ trong dƣợc liệu khi cân bằng về áp suất bên trong dƣợc liệu và không khí bị phá vỡ. Sấy sẽ làm cho không khí bên ngoài trở nên khô nóng, lúc đó áp suất riêng phần bên ngoài không khí giảm đi, nƣớc sẽ bốc hơi đi và cân bằng chuyển dịch về phía làm giảm độ ẩm dƣợc liệu để tạo ra cân bằng mới[5,9].
b) Cách thực hiện[6,8]
- Lấy cốc khô thủy tinh 50 mL sấy trong vòng 1 giờ ở 60 oC để làm khô cốc.
27
- Cho vào cốc 3 g hạt malva xay mịn qua lƣới 2 mm.
- Sấy trong tủ sấy trong vòng 6 giờ ở nhiệt độ 105 oC và thƣờng xuyên đảo trộn bột malva.
- Sau 6 giờ lấy cốc ra, cân nhanh khối lƣợng cốc có chứa dƣợc liệu. - Tiếp tục sấy cốc thêm 1 giờ nữa và cân nhanh khối lƣợng cốc. Nếu
khối lƣợng không đổi thì ghi nhận khối lƣợng, ngƣợc lại nếu khối lƣợng bị giảm sau 1 giờ sấy thì tiếp tục sấy tiếp trong vòng 1 giờ nữa và thực hiện tƣơng tự nhƣ trên.
- Tính toàn phần trăm khối lƣợng hao hụt do sấy ta sẽ có đƣợc phần trăm độ ẩm.
X =
Trong đó:
+ X: phần trăm độ ẩm.
+ a: khối lƣợng bột malva ban đầu + b: khối lƣợng bột malva sau sấy
3.3.2 Đo độ brix dịch chiết 3.3.2.1 Nguyên tắc 3.3.2.1 Nguyên tắc
Theo dõi quá trình biến đổi độ brix bằng máy đo chỉ số khúc xạ ở những thời điểm khác nhau. Nhằm nhận biết thời điểm cân bằng động trong dịch chiết để kết thúc quá trình chiết.
3.3.2.2 Cách thực hiện a) Mẫu Morinda
* Mẫu 1
- Cân 200 kg Nhàu cho vào máy chiết nóng với 800 L nƣớc Reverse Osmosis (RO) ở nhiệt độ 95 oC trong vòng 60 phút kể từ sau khi gia nhiệt.
- Dịch chiết đƣợc lấy ra theo thang thời gian quy định nhƣ Bảng trong tiểu mục 4.1.1.1 bên dƣới sao cho lần cuối cùng lấy dịch là thời điểm quá trình chiết hoàn tất.
- Sau khi dịch chiết đƣợc lấy ra tiến hành lọc qua giấy lọc để loại hoàn toàn tủa các tạp chất nhƣ bọt saponin, tủa protein, pectin, chất nguyên sinh, chất nhầy, tinh bột, enzyme. Tạo đƣợc độ đồng nhất giữa các dung dịch và độ brix hiển thị là độ brix của hoạt chất và một số ion, tạp phân tử, nguyên tử nhỏ tan trong dung dịch vì thế hạn chế đƣợc sai số đến mức thấp nhất khi quá trình lọc bằng lƣới không giải quyết đƣợc. - Lấy khoảng 10 mL dịch sau khi lọc và tiến hành đo độ brix → thu
đƣợc độ brix tại từng thời điểm.
- Dịch chiết sau khi lọc qua vải lọc đƣợc lấy thêm lần nữa, lọc và đo độ brix tƣơng tự nhƣ trên. Điều này sẽ giúp ta phản ánh đƣợc độ khách quan của quá trình lấy mẫu ở những thời điểm trƣớc và một phần nào
28
biết đƣợc quá trình chiết đã thu đƣợc tối ƣu nồng độ hoạt chất hay chƣa → thu đƣợc độ brix của dịch chiết.
- Dịch chiết đƣợc cho vào nồi cô đến khi khối lƣợng cao đạt đƣợc là 72 kg.
- Pha loãng cao thu đƣợc theo tỷ lệ 5:1 (nƣớc RO: cao). Thu dịch lọc qua giấy lọc và đo độ brix của cao pha loãng → suy ra độ brix của cao. - Thiết lập đồ thị biểu diễn giá trị thu đƣợc dƣới dạng hàm logarit. Tính
trung bình và độ lệch chuẩn cho các cao pha loãng thu đƣợc để đƣa ra chuẩn cho cao pha loãng Morinda.
* Mẫu 2, 3, 4đƣợc thực hiện theo quy trình tƣơng tự với 195 kg Nhàu.
* Các bƣớc sử dụng máy đo độ brix
- Lấy máy đo độ brix ra khỏi hộp đựng. Ấn và giữ phím Power để mở nguồn máy.
- Dùng nƣớc RO đổ vừa ngập mặt giếng máy để rửa giếng. Lau khô giếng bằng giấy lụa. Lƣu ý là không làm chày mặt lăng kính bên trong giếng.
- Ấn cal để chuẩn máy bằng không khí.
- Dùng pipet nhỏ giọt nhỏ nƣớc RO vừa ngập vạch khắc ở mặt giếng. - Ấn cal để chuẩn máy bằng nƣớc. Nếu giá trị sai số do chuẩn máy bằng
nƣớc RO nhỏ hơn 0,005% thì tiến hành đo mẫu. Ngƣợc lại nếu sai số do chuẩn máy bằng nƣớc RO lớn hơn 0,005% thì lau mặt giếng bằng giấy lụa và chuẩn lại bằng nƣớc RO.
- Dùng pipet nhỏ giọt nhỏ một lƣợng mẫu nhất định vào giếng vừa bằng với vạch khắc và ấn OK / measure.
- Sau mỗi lần đo mẫu phải rửa giếng bằng nƣớc RO và lau khô giếng đo rồi mới tiến hành đo mẫu kế tiếp. Thực hiện theo các bƣớc tƣơng tự nhƣ trên nhƣng không cần phải chuẩn mẫu lại bằng nƣớc.
b) Mẫu Diệp hạ châu
- Cho Diệp Hạ Châu sau khi rửa vào 2 lồng với khối lƣợng nhƣ sau: + Dƣợc liệu / mẻ: 50 kg.
+ Dung môi cồn 70% / mẻ: 800 L.
- Sau đó chuyển 2 lồng của mẻ 1 vào bồn chiết xuất với nhiệt độ 80 o C trong thời gian 2 giờ. Dịch chiết thu đƣợc ở mẻ 1 đƣợc chiết với nguyên liệu mới ở mẻ 2. Sau mỗi 2 mẻ, dịch chiết đƣợc cô 1 lần để lấy cồn thu hồi và sử dụng cho mẻ tiếp theo.
- Tiến hành so sánh kết quả và tính trung bình độ brix và độ lệch chuẩn cho dịch chiết Diệp hạ châu để áp dụng làm chuẩn cho những mẻ sau.
c) Mẫu Hà thủ ô * Mẫu 1
- Lấy 200 kg thân Hà thủ ô nguyên liệu tƣơi, xay không qua lƣới.
- Nguyên liệu sau khi xay đƣợc cho vào bồn chiết inox dung tích 1000 L.
29
- Ngâm trong 17 ngày và tiến hành theo dõi độ brix theo những khoảng thời gian đƣợc ghi trong Bảng 5.7.
* Mẫu 2
- Dịch chiết lần 2: 600 L cồn 45% đƣợc pha từ cồn 96% chiết trong 15 ngày với bã dƣợc liệu của lần chiết 1. Lọc lấy dịch.
- Lấy 600 L dịch chiết lần 2 của Hà thủ ô lần chiết trƣớc ngâm với 200 kg dƣợc liệu mới trong bồn chiết inox dung tích 1000 L nhƣ trên trong thời gian 14 ngày và tiến hành theo dõi độ brix theo những khoảng thời gian đƣợc ghi trong Bảng 5.8.
- Dịch chiết thu đƣợc đƣợc cô đến khối lƣợng giảm 5 lần so với ban đầu. - Kết quả thu đƣợc ở 2 mẫu đƣợc vẽ thành dạng đồ thị logarit biểu thị
tính tăng của độ brix theo thời gian. Cao thu đƣợc đƣợc tính giá trị trung bình và độ lệch chuẩn để áp dụng cho những lô chiết sau.
3.3.3 Phần trăm cắn khô trong dịch chiết
- Dịch chiết Hà thủ ô lấy đƣợc theo thời gian của mẫu 2. - Lọc qua giấy lọc.
- Lấy 5 cốc thủy tinh có dung tích 50 mL sấy trong vòng 1 giờ và cân bì khối lƣợng.
- Cân 2,5 g dịch chiết sau lọc của 5 năm lần lấy mẫu cho vào những cốc có đánh số thứ tự tƣơng ứng với 5 thời điểm lấy mẫu.
- Đun cách thủy ở nhiệt độ 130 oC cho đến khô.
- Sấy cắn trong vòng 3 giờ. Sau khi sấy, cân nhanh khối lƣợng cắn cốc. - Tiếp tục sấy trong 1 giờ nữa và cân khối lƣợng. Nếu khối lƣợng cắn cốc
không tăng thì ghi nhận giá trị cắn cốc thu đƣợc. Nếu khối lƣợng cắn cốc giảm xuống thì tiếp tục sấy trong 1 giờ nữa và thực hiện quy trình tƣơng tự nhƣ trên.
- Tính toán kết quả phần trăm cắn cao theo công thức:
Trong đó:
+ a: khối lƣợng cắn khô thu đƣợc trong 2,5 g dịch lọc cao pha loãng.
+ b: khối lƣợng dung dịch cao pha loãng thu đƣợc sau khi lọc.
3.3.4 Khảo sát về độ brix cao
- Lấy cao dƣợc liệu đƣợc trữ tại phòng trữ tinh dầu của mỗi loại cao. - Cân mỗi mẫu cao 5 g và tiến hành pha theo tỷ lệ đƣợc ghi trong những
Bảng ở tiểu mục 4.4 với dung môi nƣớc RO.
- Khuấy đều cho tan cao dƣợc liệu và có thể tiến hành đun cách thủy nhẹ trong thời gian ngắn.
- Cao pha loãng đƣợc tiến hành lọc chân không.
- Lấy khoảng 10 mL dịch sau khi lọc cho vào mỗi cốc sạch và tiến hành đo độ brix theo các bƣớc đƣợc trình bài ở trên.
30
3.3.5 Khảo sát về phần trăm cắn trong cao dƣợc liệu
- Lấy cao dƣợc liệu đƣợc trữ tại phòng trữ tinh dầu của mỗi loại cao. - Cân mỗi mẫu cao 5 g và tiến hành pha theo tỷ lệ đƣợc ghi trong những
Bảng ở chƣơng sau với dung môi nƣớc RO.
- Khuấy đều cho tan cao dƣợc liệu và có thể tiến hành đun cách thủy nhẹ trong thời gian ngắn.
- Cân trừ bì giấy lọc.
- Cao pha loãng đƣợc tiến hành lọc chân không qua giấy lọc đã đƣợc trừ bì.
- Giấy lọc sau khi lọc đƣợc lấy ra và đặt vào khay, sấy ở nhiệt độ 60o đến khô.
- Sấy các cốc khô có dung tích 50 mL ở nhiệt độ 60o trong vòng 1 giờ, nếu sau 1 giờ cốc chƣa khô thì tiến hành sấy tiếp.
- Cốc sau khi sấy đƣợc cân nhanh để trừ bì khối lƣợng. - Cân vào mỗi cốc 2,5 g dịch lọc của mỗi mẫu cao.
- Tiến hành đun các thủy ở nhiệt độ khoảng 130 oC cho tới khi cắn khô. - Sấy trong tủ sấy ở nhiệt độ 60 oC trong vòng 3 giờ.
- Cân nhanh khối lƣợng cắn cao và ghi nhận số liệu.
- Tiếp tục sấy cắn trong vòng 1 giờ nữa. Nếu sau 1 giờ sấy khối lƣợng cốc cân không thay đổi thì lấy số liệu cắn cao thu đƣợc. Nếu thay đổi thì tiến hành sấy tiếp trong 1 giờ nữa và thực hiện tƣơng tự nhƣ trên. - Cân khối lƣợng giấy sau khi lọc đã đƣợc sấy khô và ghi nhận lại số
liệu.
- Tính toán giá trị trung bình và khoảng độ lệch cho các mẫu cao đo đƣợc.
3.3.6 Khảo sát về độ nhớt cao dƣợc liệu
- Lấy những mẫu cao dƣợc liệu đƣợc lƣu trữ tại phòng đóng gói tinh dầu. Quan sát thể chất và phân loại.
- Với những mẫu cao có thể chất lỏng, sệt hoặc đặc thì dùng đũa thủy tinh khuấy đều, nếu quá trình khuấy làm cho cặn, tủa tan ra thì tiến hành đo độ nhớt. Với những mẫu cao quá trình khuấy không làm cho tan cặn, tủa phân loại riêng.
- Những mẫu cao có thể chất đặc hoặc những mẫu có cặn, tủa không tan thì tiến hành nấu cao lại bằng chính dung môi chiết xuất chúng.
* Quy trình nấu cao lại:
- Cân số cao có đƣợc để xác định khối lƣợng.
- Pha một lƣợng dung môi nhất định, dung môi này phải trùng với dung môi đƣợc sử dụng để chiết mẫu cao trƣớc đó về độ cồn.
- Cô cao pha loãng trong thao inox đến khối lƣợng bằng với khối lƣợng cao ban đầu đem cân.
31
* Quy trình đo độ nhớt mẫu:[16]
- Cho cao vào lọ đựng có dung tích thích hợp sau cho lƣợng cao thu phải có độ cao cao hơn kim đo và đƣờng kính lọ phải lớn hơn đƣờng kính kim đo.
- Tháo các thiết bị bảo vệ bộ phận gắn kim đo ra khỏi máy.
- Mở công tắc nguồn của máy, và ấn phím bất kỳ để kim đo tự động autozero.
- Điều chỉnh số đo của kim tƣơng thích với số đƣợc ghi trên kim đo, lấp kim đo vào và điều chỉnh tốc độ quay sao cho có thể đo đƣợc độ nhớt. - Dùng nhiệt kế đo nhiệt độ của cao thuốc và ghi nhận lại giá trị nhiệt
độ. Ấn phím motor on để kim đo quay và ghi nhận lại giá trị. Phép đo đƣợc thực hiện 3 lần.
- Tính toán giá trị trung bình và độ lệch cho mỗi loại cao. Lấy giá trị chuẩn cho mỗi loại cao dựa vào kết quả của những mẫu thu đƣợc.
32
CHƢƠNG 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1 CHỈ TIÊU VỀ ĐỘ ẨM 4.1.1 Kết quả thu đƣợc 4.1.1 Kết quả thu đƣợc
Xác định độ ẩm từ nguyên liệu từ chuyên sang nguyên liệu khô và độ ẩm của nguyên liệu khô trong quá trình bảo quản
4.1.2 Ví dụ về độ ẩm Malva
Sau 2 lần cân khối lƣợng cốc chứa bột mịn malva là 36,32 g không đổi.
- Khối lƣợng cốc: 33,64 g.
- Khối lƣợng cốc dƣợc liệu sau khi sấy: 36,32 g
Phần trăm độ ẩm: = = 10,67%
Với ẩm độ này, mặc dù lớn hơn ẩm độ quy định là 10% đối với hạt nhƣng sự chênh lệch không nhiều nên có thể bảo quản hạt malva ở ẩm độ này mà không bị nấm mốc hay trƣơng nở.
4.2 PHẦN TRĂM CHẤT CHIẾT ĐƢỢC TRONG DƢỢC LIỆU
Phần trăm chất chiết đƣợc trong dƣợc liệu Diệp hạ châu là lớn hơn 10,0% phù hợp với quy định trong dƣợc điển là lớn hơn 7,0 %. Và đối với mẫu Ích mẫu là lớn hơn 20,0%.
4.3 KHẢO SÁT ĐỘ BRIX DỊCH CHIẾT 4.3.1 Kết quả thu đƣợc 4.3.1 Kết quả thu đƣợc
Độ Brix của dịch chiết thu đƣợc tăng theo thời gian chiết, quá trình này tăng mạnh ở giai đoạn đầu và tăng chậm hơn ở giai đoạn cuối. Mẫu chiết nóng đƣợc thực hiện trên 5 mẫu Morinda, Diệp hạ châu và mẫu ngâm lạnh thì đƣợc thực hiện trên mẫu Hà thủ ô. Các mẫu đƣợc thực hiện bằng phƣơng pháp chiết nóng độ Brix dƣờng nhƣ chƣa đạt đến bảo hòa trong dịch chiết, còn các mẫu đƣợc thực hiện bằng phƣơng pháp ngâm lạnh ở mẫu Hà thủ ô thì độ brix có xu