- Mục đích:
Tạo nguồn vi khuẩn, nấm mốc cho thí nghiệm khảo sát khả năng kháng khuẩn, kháng nấm của dịch nha đam.
- Bố trí thí nghiệm:
Thí nghiệm đƣợc tiến hành từ mẫu xoài và chanh với các bƣớc xử lý, cấy mẫu, quan sát sự phát triển khuẩn lạc, cấy chuyền và bảo quản. Thí nghiệm đƣợc lặp lại nhiều lần đến khi quan sát thấy đƣợc sự đồng nhất về hình dạng và màu sắc vi khuẩn và nấm mốc.
- Tiến hành thí nghiệm:
Pha môi trƣờng PCA, môi trƣờng Sabouraud, chuẩn bị đĩa petri, cây gắp, que cấy,... đem tất cả tiệt trùng ở 121 0C trong 20 phút. Sau khi tiệt trùng tiến hành rót đĩa (15 ml môi trƣờng/ 1 đĩa), để môi trƣờng đông đặc tự nhiên.
Xử lý mẫu xoài: Xoài chín rửa sạch, gọt vỏ, cắt thành miếng (các thao tác đƣợc thực hiện trong điều kiện sạch).
Xử lý mẫu chanh: Chanh sau thời bảo quản ở điều kiện thƣờng (khoảng 2 tuần) xuất hiện nấm mốc.
Chuyên ngành Công nghệ thực phẩm 21
Đối với mẫu xoài, phân lập trên môi trƣờng PCA, dùng cây gắp gắp từng miếng xoài đặt lên đĩa môi trƣờng đã đông đặc. Đem ủ ở 37 0C. Sau 24 giờ đến 48 giờ, quan sát sự hình thành khuẩn lạc.
Đối với mẫu chanh, phân lập trên môi trƣờng Sabouraud, sử dụng cây gắp nhọn, gắp từng mẫu chanh đã xuất hiện nấm mốc đặt lên môi trƣờng nuôi cấy đã đông đặc. Đậy nắp đĩa, bịt kín, để ở nhiệt độ phòng (25-29 0C). Sau 24 giờ đến 48 giờ, quan sát sự phát triển của nấm mốc.
Từ các quần thể vi sinh vật mọc trên môi trƣờng dinh dƣỡng, tiến hành cấy chuyền bằng phƣơng pháp cấy ria để đƣợc các dòng thuần trên môi trƣờng PCA và Sabouraud.
Bảo quản giống: Chuẩn bị môi trƣờng thạch nghiêng, rót môi trƣờng vào ống nghiệm (1/3 thể tích ống nghiệm) dùng nắp đậy kín, đem hấp tiệt trùng ở 121 0C trong 20 phút, sau đó đặt nghiêng ống nghiệm khi còn nóng cho tới khi môi trƣờng đặc lại. Sử dụng que cấy cấy dòng vi khuẩn thuần, nấm mốc vào ống nghiệm, bịt kín miệng ống nghiệm tránh để nhiễm các vi sinh vật từ bên ngoài. Ủ ở tủ ủ vi sinh, sau 24 giờ quan sát sự phát triển khuẩn lạc, đem bảo quản ở nhiệt độ mát (4 0C).
- Chỉ tiêu theo dõi:
Quan sát sự hình thành và phát triển về hình dạng và màu sắc khuẩn lạc trên môi trƣờng PCA, nấm mốc trên môi trƣờng Sabouraud.