e. định danh vi tảo
3.3.3.Phân tách các thành phần dịch chiết bằng sắc ký lớp mỏng
Sắc ký lớp mỏng (Thin layer chromatography) là một kỹ thuật sắc ký ựược dùng ựể phân tách các chất dựa vào tắnh phân cực của các nhóm chất khác nhau trong hỗn hợp. Phương pháp sắc ký lớp mỏng bao gồm pha tĩnh là một lớp mỏng các chất hấp phụ, thường là silica gel, aluminium oxide, hoặc cellulose ựược phủ lên một mặt phẳng trơ. Pha ựộng bao gồm dung dịch cần phân tắch ựược hòa tan trong dung môi thắch hợp và ựược hút lên bản sắc ký bởi mao dẫn. Khi pha ựộng di chuyển qua pha tĩnh trên ựó chứa các hợp chất cần phân tách ta sẽ thu ựược một sắc ký ựồ trên lớp mỏng, dưới tác ựộng của lực mao quản các nhóm chất sẽ ựược phân tách riêng biệt thành từng vệt băng do khả năng hòa tan khác nhau của chúng trong hệ dung môi. đại lượng ựặc trưng cho mức ựộ di chuyển của chất phân tắch là hệ số di chuyển Rf ựược tắnh bằng tỷ lệ giữa khoảng dịch chuyển của chất thử và khoảng dịch chuyển của dung môi.
Công thức tắnh Rf: như sau:
Trong ựó:
a là khoảng cách từ ựiểm xuất phát ựến tâm của vết mẫu thử, tắnh bằng cm b là khoảng cách từ ựiểm xuất phát ựến mức dung môi ựo trên cùng ựường di của vết, tắnh bằng cm
Dụng cụ, hóa chất:
- Ống mao quản: Sử dụng pipette Pasteur
- Ống nghiệm nhỏ: chứa cồn 96o ựể rửa mao quản
- Bình triển khai: bình triển khai chứa hệ dung môi sắc ký
- Bản mỏng: Tấm silica gel TLC Alu foils 01835- 50EA có gắn huỳnh quang của hãng Flukar
Tiến hành phân tách:
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 25
chloroform, ethyl acetate và methanol. Dùng mao quản hút và chấm dịch chiết tảo vào bản mỏng, ựảm bảo kắch thước ựường kắnh vết chấm từ 2-3 mm và không làm tách bản mỏng. Vết chấm ở vị trắ cách ựáy bản mỏng 2 cm, vết này cách vết kia 0,5 cm và cách bờ cạnh 0,5cm. Chấm xong ựể khô ở nhiệt ựộ phòng trong khoảng 5 phút, rồi nhúng bản mỏng vào bình triển khai, ựặt thẳng 90o. Theo dõi vạch dung môi chạy ựến cách bản mỏng 0,5 cm thì lấy ra, ựể khô trong nhiệt ựộ phòng. Các vạch băng ựược phát hiện bằng việc quan sát trên tia UV sau ựó nhuộm hơi KI.