e. định danh vi tảo
3.3.2.Chiết dịch tảo bằng các dung môi khác nhau
Có rất nhiều phương pháp chiết như: chiết xuất liên tục, chiết xuất gián ựoạn, chiết xuất bán liên tục. Trong khóa luận tốt nghiệp này, tôi sử dụng phương pháp chiết xuất liên tục bằng hệ thống chiết Soxhlet vì phương pháp này có những ưu ựiểm sau: hiệu quả cao, tự ựộng, dịch chiết thu ựược ựậm ựặc, nguyên liệu ựược chiết kiệt, tiết kiệm dung môi.
Nguyên lý của chiết Soxhlet: Máy Soxhlet gồm 3 phần: ống sinh hàn, tháp trắch ly và bình cầu cổ nhám (hình 3.4). Dung môi ựược cho vào bình cầu cỏ nhám. Nguyên liệu ựược cho vào tháp trắch ly. Toàn bộ máy ựược ựặt trên bếp cách thủy. Khi ựược ựun nóng, dung môi sẽ bốc hơi gặp ống sinh hàn ngưng tụ và chảy xuống tháp trắch ly và hòa tan dần trong nguyên liệu sau ựó dung dịch này sẽ chảy xuống bình cầu. Tiếp theo, do ựộ sôi của dung môi thấp hơn dịch chiết nên chúng lại bốc hơi lên và ngưng tụ tại ống sinh hàn, chảy xuống tháp trắch ly. Quá trình ựược lặp lại cho ựến dịch chiết trong nguyên liệu bị tách kiệt.
Hình 3.2: Cấu tạo của máy chiết Soxhlet
Các hợp chất tự nhiên trong sinh khối tảo khô ựược chiết rút kiệt trong Methanol 99,9% bằng hệ thống Soxhlet. Bột tảo khô (5,0 g) ựược ngâm trong Methanol sau ựó chiết rút liên tục bằng hệ thống Soxhlet cho ựến khi kiệt hoàn toàn. Sau khi chiết rút kiệt, tổng thể tắch ựược dẫn ựến chắnh xác 300 ml bằng methanol,
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 23
dịch chiết này ựược gọi là dịch chiết thô.
để tách các thành phần trong dịch chiết thô trong các dung môi khác nhau, 100 ml dịch chiết thô ựược cho vào phễu chiết sau ựó bổ sung thêm 50 ml n- hexan. Hỗn hợp ựược trộn ựều và lắc liên tục trong 3 giờ ở nhiệt ựộ phòng sử dụng máy lắc (150 vòng/phút). Sau khi tách pha do sự chênh lệch về trọng lượng riêng và 2 dung môi không tan vào nhau, pha n-hexan ựược giữ lại. Tiếp tục bổ sung n-hexan và lặp lại quá trình 2 lần. Toàn bộ dịch chiết trong n-hexan ựược gom lại và bay hơi trong máy cô quay (EYELA N1001S-W230) cho ựến khi còn lại khoảng 3 ml và ựược chuyển sang cốc thủy tinh nhỏ. Sau ựó dung môi ựược bay hơi hoàn toàn ở nhiệt ựộ phòng ựể thu cặn, khối lượng cặn ựược xác ựịnh bằng phương pháp cân. Cuối cùng, cặn ựược hòa tan trong một thể tắch n-hexan ựể ựạt các nồng ựộ 0,1; 0,2 và 0,3 mg/ml. Tương tự, dung môi ethyl ether cũng ựược sử dụng ựể phân tách riêng các thành phần ra khỏi dịch chiết thô. Quy trình ựược thực hiện tương tự như chiết rút bằng n-hexan. Quá trình chiết phân ựoạn bằng n-hexan và ethyl ether ựược minh họa ở (hình 3.5). 100 ml dịch chiết thô cũng ựược bay hơi trong máy cô quay cho ựến khi còn 3 ml rồi chuyển sang bay hơi hoàn toàn ở cốc thủy tinh thu cặn. Sau ựó cặn ựược hòa tan lại trong methanol ựể ựạt các nồng ựộ 0,1; 0,2 và 0,3 mg/ml.
.
Hình 3.3: Chiết rút phân ựoạn bằng n- hexan và ethyl ether
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 24