2.2.5.1. Phương pháp định lượng glucose huyết
Xác định nồng độ glucose huyết trên máy đo đường huyết với que thử tự động One Touch Ultra.
Nguyên tắc: bộ KIT thử dựa trên phản ứng oxy hoá glucose bằng glucose oxidase (GOD) và hydrogen peroxide tạo thành tác dụng với
4- aminoantipyrin và phenol nhờ xúc tác của peroxidase (POD) tạo phức hợp quinoimin theo các phản ứng. Glucose+O2 Glucose oxidase Gluconic acid + H2O2 Peroxidase Gluconicacid+Phenol+4-aminoantipyrin Quinoimin(đỏ) + 4H2O2
Hình 2.4. Định lƣợng glucose huyết của chuột nhắt.
2.2.5.2. Định lượng một số chỉ số lipid trong huyết thanh
Các chỉ số lipid huyết thanh (cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL-C, LDL-C) được xác định trên máy xét nghiệm sinh hóa tự động (Phòng hóa sinh – Bệnh viện Hữu Nghị Việt - Xô). Nguyên tắc xác định của mỗi chỉ số như sau:
Định lượng cholesterol toàn phần
Thuỷ phân cholesterol este bằng enzyme cholesterol esterase (CHE) và oxy hoá bằng cholesterol oxydase (CHO). Đo mật độ quang của quynonimin
tạo nên từ phản ứng của hydrogen peroxide với 4-aminophenazone và phenol nhờ xúc tác của peroxydase. Các phản ứng:
cholesterol esterase
Este hóa cholesterol + H2O cholesterol + acid béo tự do cholesterol oxidase
Cholesterol + O2 3-one-cholestenon + H2O2
peroxidase (POD)
2H2O2+phenol+4-amino-Antipirin (AAP) Quinonimin Đo mật độ quang học quynonimin ở bước sóng 546nm (máy Olympus AU400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
Định lượng triglycerid
Thuỷ phân triglycerid bằng enzyme lipase, định lượng glycerol giải phóng ra bằng phương pháp đo màu của quynonimin tạo thành từ 4- aminoantipyrin và 4-chlorophenol phản ứng với peroxide hydrogen theo các phản ứng sau:
Lipase
Triglycerid Glycerol + acid béo Glycerol kinase
Glycerol + ATP Glycerol-3-P
Glycerol-phosphate oxidase
Glycerol-3-P+ADP dihydroxiaceton phosphat+ H2O2
peroxidaza
H2O2+ 4-amino-Antipirin + 4-chloro-Phenol Quinonimin Đo mật độ quang học quynonimin ở bước sóng 546nm (máy Olympus AU400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
Nguyên tắc: xét nghiệm gồm hai bước đặc hiệu. Bước thứ nhất cholesterol trong chylomicron, VLDL, LDL bị loại bỏ và phá hủy bằng các phản ứng enzyme đặc hiệu. Bước thứ hai cholesterol trong HDL được định lượng bằng phản ứng enzyme với sự có mặt của chất surfactant đặc hiệu cho HDL.
Bước 1: Chylomicron, LDL, VLDL Cholestenon + H2O 2H2O2 2 H2O + O2 Bước 2: HDL Cholestenon + H2O2 H2O2 + Chromogen Sắc tố quynon 2.2.6. Xử lý số liệu
Chỉ số glucose huyết được so sánh giữa thời điểm trước và sau nghiên cứu; so sánh giữa các lô dùng thuốc và lô đối chứng ở cùng thời điểm.
* Tỷ lệ tăng glucose huyết được tính theo công thức Tỷ lệ % tăng glucose huyết:
