trình tạo dna tái tổ hợp

... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNA tái tổ hợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNA tái tổ hợp vào hoạt ... Công nghệ DNA tái tổ hợp (DNA recombinant technology) Hệ thống phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ sinh vật để ghép nối vào DNA sinh vật khác tạo phân tử DNA tái tổ hợp Phân tử ... Một số kỹ thuật tạo dòng gen: điện di, PCR… - Tạo dòng xây dựng thư viện genomic DNA cDNA - Biểu gen tạo dòng E coli Do giáo trình xuất lần đầu tiên, lĩnh vực công nghệ DNA tái tổ hợp lại phức tạp,...

Ngày tải lên: 16/08/2013, 21:56

... cứu thực với -interferon người tái tổ hợp cho thấy vài thay đổi amino acid ảnh hưởng đến chuyển hóa biểu protein hòa tan không hòa tan E coli Công nghệ DNA tái tổ hợp 171 1.2 Phương pháp hòa tan ... này, người ta sử dụng dạng tái tổ hợp protease 3C từ rhinovirus người Protease có kích thước nhỏ (20 kDa) có tính đặc hiệu hạn chế Nó biểu protein tái tổ hợp dung hợp với glutathione-Stransferase ... protein Nguyên nhân tạo thành thể vùi chưa biết đầy đủ, tất protein biểu mức độ cao tạo thành thể vùi Tế bào vật chủ thể vai trò quan trọng Cấu trúc xác protein tái tổ hợp ảnh hưởng tạo thành thể vùi...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... chuỗi dòng DNA gối chồng lên với diện vùng liền kề genomic DNA) Cấu trúc clone contig Công nghệ DNA tái tổ hợp 121 thường tạo thành phần cần thiết việc phân tích chuỗi DNA tạo suốt trình xây dựng ... băng màu đen tín hiệu lai DNA đích mẫu dò Công nghệ DNA tái tổ hợp 115 V Sàng lọc thư viện genomic DNA DNA tạo dòng vector có nguồn gốc plasmid vector nhiễm sắc thể nhân tạo (BAC, YAC) sản xuất ... tra chặt chẽ cho nucleotide bị phá hủy sợi đơn DNA Kết hàng loạt đoạn DNA có kích thước khác tạo thành Công nghệ DNA tái tổ hợp 122 Các đoạn DNA tạo bị bẻ gãy phân ly polyacrylamide gel có đoạn...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNA tái tổ hợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNA tái tổ hợp vào hoạt ... Ampicillin (Amp) (tái tổ hợp) Công nghệ DNA tái tổ hợp đ tạo 176 BAC (bacteria artificial chromosome) Nhiễm sắc thể nhân tạo vi khuẩn, dựa sở plasmid F-factor, sử dụng làm vector tạo dòng BAC tái E coli ... chép DNA liên quan đến DNA polymerase I DNA siêu xoắn (supercoiled DNA) DNA xoắn lại thân nó, thường kết gấp khúc, mở xoắn xoắn lại chuỗi xoắn kép DNA DNA (satellite DNA) Là đoạn DNA mang trình...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... transferase ssDNAOH + ndNTP - DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 2+ Mn : DNA 3’-OH - Ứng dụng Công nghệ DNA tái tổ hợp 14 + Thêm đuôi đồng trùng hợp (homopolymer) để tạo đầu so le cho phân tử DNA dùng tạo dòng ... cho DNA polymerase I E coli có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC Công nghệ DNA tái tổ hợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình ... Khi có mặt Mn2+, DNase I cắt hai sợi DNA gần vị trí để tạo đoạn DNA đầu đầu lồi nhô hai nucleotide Mn2+ 5’ p p p Công nghệ DNA tái tổ hợp p p 18 - Ứng dụng + Tạo điểm đứt (nick) DNA sợi đôi để...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... đầu trình tổng hợp polypeptide, trình tự dẫn đầu không dịch mã thành trình tự amino acid Công nghệ DNA tái tổ hợp 199 Trình tự điều hòa (regulatory sequence) Một trình tự DNA tham gia vào trình ... patterns) Thể tái tổ hợp (recombinant) Các cá thể tế bào mang tổ hợp gen khác với cha mẹ chúng trình tái tổ hợp di truyền sinh Thông tin di truyền (genetic information) Thông tin lưu trữ phân tử DNA sinh ... Một số kỹ thuật tạo dòng gen: điện di, PCR… - Tạo dòng xây dựng thư viện genomic DNA cDNA - Biểu gen tạo dòng E coli Do giáo trình xuất lần đầu tiên, lĩnh vực công nghệ DNA tái tổ hợp lại phức tạp,...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... T4 DNA ligase Biến nạp vào E.coli xung điện Dàn mỏng môi trường có CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể tái tổ hợp Khuẩn lạc xanh-thể không tái tổ hợp Bảo quản riêng rẽ dòng tái tổ hợp Hình 4.16 Tạo ... nghệ DNA tái tổ hợp 101 Chương g Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae (physical mapping) bốn 5.1 nhiễm bp, ví dụ Mbo 5’-GATC-3’ gen Công nghệ DNA tái tổ hợp 102 Cắt genomic DNA Gắn đoạn DNA ... lạc mang thể tái tổ hợp, khuẩn lạc có màu xanh khuẩn lạc không mang thể tái tổ hợp VI YAC vector Đặc điểm YAC Nhiễm sắc thể nhân tạo nấm men (yeast artificial chromosomeYAC) vector tạo dòng mạch...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... trường hợp tế bào vật chủ thường Công nghệ DNA tái tổ hợp 82 sử dụng vi khuẩn E coli để khuếch đại lượng lớn DNA plasmid tái tổ hợp dùng cho phân tích sau Hai phương pháp dùng để biến nạp vector tái ... Do DNA phage Công nghệ DNA tái tổ hợp 85 78% c lắp gắn Trên vector phage in vitro (in vitro Bacteriophage tóm tắt sau (Hình 4.9 4.10): - in vitro - (E coli Ch Công nghệ DNA tái tổ hợp ... ứng gắn xảy tạo bacteriophage (tái tổ hợp) : đoạn stuffer thay đoạn DNA ngoại lai Những phân tử đóng gói in vitro đầu phage , chúng gây nhiễm sau thêm phần đuôi Công nghệ DNA tái tổ hợp 87 ...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi làm khuôn ... nghiên cứu khác mRNA cần đến RT-PCR để biến đổi sợi RNA thành DNA cho trình tạo dòng để phân tích trình tự gen (gene sequencing) hay tái tổ hợp (recombination) nghiên cứu biểu gen VI Real-time PCR ... hệ gen thành sợi DNA thứ phải nhờ đến enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase) giai đoạn gọi phiên mã ngược (RT), sau trình tổng hợp sợi DNA thứ hai lại nhờ enzyme khác DNA polymerase I...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c Công nghệ DNA tái tổ hợp enzyme -cDNA 132 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase ... transcriptase Tổng hợp sợi cDNA thứ khuôn mẫu mRNA 5’ AAAAAA 3’ mRNA 3’ TTTTTT 5’ sợi cDNA thứ RNase H Biến tính thể lai mRNA-cDNA 3’ TTTTTT 5’ DNA polymerase I sợi cDNA mang vòng cặp tóc Tổng hợp sợi cDNA ... hoàn Công nghệ DNA tái tổ hợp 75 133 bốn loại 200-250 + + + - hóa 2+ Mg2+ hoàn 6-10 mM 1.5 cDNA hoàn HCl H E coli (hairpin loop)1 (primer) E coli 6.4) M Công nghệ DNA tái tổ hợp 134 , cho...

Ngày tải lên: 31/07/2014, 23:20

... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNA tái tổ hợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNA tái tổ hợp vào hoạt ... đầu trình tổng hợp polypeptide, trình tự dẫn đầu không dịch mã thành trình tự amino acid Công nghệ DNA tái tổ hợp 199 Trình tự điều hòa (regulatory sequence) Một trình tự DNA tham gia vào trình ... polymerase để tổng hợp mRNA từ khuôn mẫu DNA Phiên mã ngược (reverse transcription) Quá trình tổng hợp DNA từ khuôn mẫu mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase) Công nghệ DNA tái tổ hợp 193...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... transferase ssDNAOH + ndNTP - DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 2+ Mn : DNA 3’-OH - Ứng dụng Công nghệ DNA tái tổ hợp 14 + Thêm đuôi đồng trùng hợp (homopolymer) để tạo đầu so le cho phân tử DNA dùng tạo dòng ... cho DNA polymerase I E coli có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC Công nghệ DNA tái tổ hợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình ... 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ Công nghệ DNA tái tổ hợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 3’ đơn/ nhóm 3’-OH tự 5’ DNA sợi đơn sợi...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... gel 2% Công nghệ DNA tái tổ hợp 27 A B C 2 Hình 2.3 Điện di mẫu DNA giống nồng độ agarose khác A: 1%, B: 1,5% C: 2% - - Nhìn chung, DNA plasmid mạch vòng dịch chuyển nhanh DNA plasmid loại có ... vòng đứt Dạng vòng đóng DNA mạch vòng DNA mạch thẳng Hình 2.4 Điện di plasmid có cấu hình khác Công nghệ DNA tái tổ hợp 28 4oC đến 30o Tr - - - thường dùng - - Các đoạn DNA dịch chuyển với tốc ... hồi đoạn DNA nhỏ (500-800 bp) không hiệu đoạn lớn (>15 kb) liên kết với hạt thủy tinh khác sợi DNA bị phá vỡ suốt chu kỳ rửa Công nghệ DNA tái tổ hợp 32 Cho 1% type- - 100 mL 0,5 60o : DNA (1...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi làm khuôn ... PCR trình bày hình 3.2 3.3 T DNA polymerase (gọi tắt Taq pol) bắt đ tổng hợp (synthetic oligonucleotide) có khoảng 10-20 nucleotide Nếu biết trình tự đoạn gen cần khuếch đại tổng hợp nhân tạo ... nghiên cứu khác mRNA cần đến RT-PCR để biến đổi sợi RNA thành DNA cho trình tạo dòng để phân tích trình tự gen (gene sequencing) hay tái tổ hợp (recombination) nghiên cứu biểu gen VI Real-time PCR...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... xảy tạo bacteriophage (tái tổ hợp) : đoạn stuffer thay đoạn DNA ngoại lai Những phân tử đóng gói in vitro đầu phage , chúng gây nhiễm sau thêm phần đuôi Công nghệ DNA tái tổ hợp 87 A B λ DNA DNA ... T4 DNA ligase Biến nạp vào E.coli xung điện Dàn mỏng môi trường có CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể tái tổ hợp Khuẩn lạc xanh-thể không tái tổ hợp Bảo quản riêng rẽ dòng tái tổ hợp Hình 4.16 Tạo ... trường hợp tế bào vật chủ thường Công nghệ DNA tái tổ hợp 82 sử dụng vi khuẩn E coli để khuếch đại lượng lớn DNA plasmid tái tổ hợp dùng cho phân tích sau Hai phương pháp dùng để biến nạp vector tái...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... sắc thể tạo Công nghệ DNA tái tổ hợp 106 thành không đẩy vào tế bào trình phân chia tế bào Ngoài ra, phải có gốc tái để chép DNA Các nhân tố đặt đoạn DNA đơn, dùng vector để tạo dòng DNA ngoại ... chuỗi dòng DNA gối chồng lên với diện vùng liền kề genomic DNA) Cấu trúc clone contig Công nghệ DNA tái tổ hợp 121 thường tạo thành phần cần thiết việc phân tích chuỗi DNA tạo suốt trình xây dựng ... ứng tổng hợp DNA Do đó, DNA polymerase gắn chúng vào sợi DNA trình tổng hợp bị ngừng lại Vì vậy, phương pháp gọi phương pháp dideoxy (dideoxy method) Đầu tiên sợi đôi DNA (sợi khuôn cần đọc trình...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c Công nghệ DNA tái tổ hợp enzyme -cDNA 132 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase ... Công nghệ DNA tái tổ hợp 150 trình tự vector : thân mRNA (pre-mRNA) hoàn phiên mã ngược hóa hoàn - mRNA Các bước trình xây dựng thư viện cDNA sau: bỏ 27 Công nghệ DNA tái tổ hợp 151 bacteriophage ... linker nhân tạo Cuối cùng, đoạn cDNA có hai đầu tương đồng gắn với vector biến nạp vào E coli Công nghệ DNA tái tổ hợp 142 Cấu trúc chóp 5’ mRNA Tổng hợp cDNA sợi thứ primer-adapter sợi đơn cDNA sợi...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... Kiểm tra khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong muốn cách tách chiết DNA (DNA miniprep) plasmid vector, Công nghệ DNA tái tổ hợp 159 sau cắt enzyme hạn chế thích hợp điện di kiểm tra agarose ... dung hợp với gen lacZ, có vị trí tạo dòng BamHI, SalI, PstI, XbaI, HindIII ClaI đầu 3’ gen lacZ Chèn đoạn DNA ngoại lai (cDNA) vào vị trí tạo dòng thích hợp cho phép sản xuất protein dung hợp ... lợi đoạn DNA ngoại lai quan tâm tạo dòng vị trí PstI phương pháp đuôi GC Công nghệ DNA tái tổ hợp 158 PR 5000 PR Amp cro lacI r 1000 pEX2 lacZ (5,8 kb) ori 4000 2000 Term Stop Vùng tạo dòng 3000...

Ngày tải lên: 05/08/2014, 19:22

... transferase ssDNAOH + ndNTP - DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 2+ Mn : DNA 3’-OH - Ứng dụng Công nghệ DNA tái tổ hợp 14 + Thêm đuôi đồng trùng hợp (homopolymer) để tạo đầu so le cho phân tử DNA dùng tạo dòng ... cho DNA polymerase I E coli có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC Công nghệ DNA tái tổ hợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình ... 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ Công nghệ DNA tái tổ hợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 3’ đơn/ nhóm 3’-OH tự 5’ DNA sợi đơn sợi...

Ngày tải lên: 07/12/2015, 00:47