Ngày tải lên :
16/11/2012, 16:13
... TE
3.1.3. Địa điểm nghiên cứu:tại phòng công nghệ sinh học
ứng dụng và khu thí nghiệm đồng ruộng khoa nông học –
Trường Đại Học Nông Nghiệp Hà Nội .
3.1.4. Thời gian nghiên cứu :
Đề tài được thực hiện từ tháng 1/2010 đến tháng 5/2010.
Bằng việc sử dụng ADN marker(chỉ thị phân
tử) thời gian chọn tạo ra các dòng mới được rút
ngắn.Các chỉ thị liên kết chặt với các tính trạng
kiểu hình.Do đó,chúng ta có thể xác định được
các tính trạng dựa trên sự có mặt của các gen
mong muốn.Kỹ thuật này không chỉ có độ chính
xác cao mà còn xác định được trên một lượng lớn
vật liệu nghiên cứu.
Để đáp ứng được mục tiêu chọn giống chúng tôi
tiến hành đề tài: “Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị
phân tử DNA chọn lọc gen tms2 để tạo ra các
dòng TGMS mới”.
PHầN ... ĐầU
1.1.Đặt vấn đề:
Cây lúa (Oryza sativa L.) là một trong ba cây
lương thực chủ yếu trên thế giới(lúa mì,lúa
gạo,ngô),có tầm quan trọng sống còn với hơn nửa
dân số thế giới.Hiện nay với sự gia tăng dân số
nhanh và sự giảm dần diện tích đất nông nghiệp
đặc biệt là đất canh tác lúa mỗi năm thì vấn đề
đảm bảo an ninh lương thực là yêu cầu cấp thiết
cần quan tâm trước mắt cũng như lâu dài.Do
đó,để tăng năng suất lúa gạo,một trong những
hướng đặt ra có hiệu quả cao đó là sử dụng ưu
thế lai.
*Nghiên cứu ưu thế lai của các tổ hợp lai F
1
so với bố
+Bố trí thí nghiệm:
Thí nghiệm được bố trí theo phương pháp khảo sát tập đoàn,các con lai F
1
trồng cạnh bố tương ứng.Các tổ hợp lai được bố trí tuần tự không nhắc lại.
Ô thí nghiệm được bố trí theo hình chữ nhật,mỗi ô là 5m
2
.
+Các biện pháp kỹ thuật:
Làm đất cày bừa
Thời vụ: Vụ chiêm xuân 2010
Ngày gieo mạ :01/2010
Ngày cấy: 02/2010
Cấy 1 dảnh/khóm,cây x cây 11cm,hàng x hàng 20cm.
Mật đọ cấy 45 khóm/m
2
.
Lượng phân bón cho 1 ha:
Phân đạm 120 kg
Phân lân 90kg
Phân kali 60kg
+Kỹ thuật bón phân:
Bón lót:100%lân + 30%đạm,bón sau khi bừa.
Bón thúc lần 1:50% phân đạm +40% phân kali,bón vào thời kì bắt đầu đẻ
nhánh.
Bón thúc lần 2:bón hết số đạm,kali còn lại,bón khi lúa làm đòng.
Ưu thế lai của các tổ hợp lai so với bố mẹ :
Ưu thế lai trung bình H
(MP%)
=
MP (mit parent) là giá trị trung bình của hai bố mẹ .
ƯTL trung bình là sự biểu hiện hơn hẳn ở một tính trạng nào đó
ở con lai F1 so với giá trị trung bình dó ở hai bố mẹ.
Ưu thế lai thực H
(BP%)
=
BP(best parent) là bố hoặc mẹ tốt nhất .
Ưu thế lại thực là biểu hiện sự hơn hẳnn ở một tính trạng nào đó
của con lai F
1
so với giá trị đó của bố hoặc mẹ tốt nhất.
Nghiên cứu chỉ thị phân tử nhằm xác định được gen tms2 có
trong các dòng TGMS , các tổ hợp F
2
.
%100
1
×
−
MP
MPF
%100
1
×
−
BP
BPF
3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
* Nội dung nghiên cứu
+) Theo dõi đặc điểm nông sinh học :
Các chỉ tiêu nông sinh học :
+ Thời gian từ cấy đến bắt đầu trổ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng).
+ Thời gian trổ từ khi bắt đầu trỗ(10% số bông thoát khỏi lá
đòng) đến khi kết thúc trổ (85% thoát khỏi lá đòng) .
+ Thời gian tự cấy đến chín(85% số hạt chắc màu vàng)
+ Tổng thời gian sinh trưởng từ gieo đến khi thu hoạch .
+ Chiều cao cây (cm) cuối cùng : đo từ mặt đất đến mút đầu bông
dài nhất không kể râu .
+ Chiều dài lá đòng : đo từ gối lá đến đầu mút lá , đo vào giai
đoạn chín sáp.
+ Chiều rộng lá đòng.
+ Góc độ lá đòng .
+ Chiều dài bông : đo từ cổ bông đến hết bông vào thời kì chín
chắc .
Chỉ tiêu các yếu tổ cấu thành năng suất:
+ Tổng số nhánh(số nhánh max)
+ Số nhánh hữu hiệu /khóm : đến toàn bộ số nhánh trổ
thành bông .
+ Tổng số hạt/bông.
+ Số hạt chắc/bông
+ Khối lượng 1000 hạt .
+ Số bông hữu hiệu/khóm: đến toàn bộ số bông có từ 10 hạt
chắc trở lên
+ Năng suất lý thuyết được tính theo công thức :
NSLT = A x B x C x mật độ/đơn vị diện tích(g)
Trong đó: A: số bông hữu hiệu/khóm
B: số hạt chắc/bông
C: khối lượng 1000 hạt
PHầN ...
ĐƯợC
4.1.Kế hoạch:
01/2010,viết đề cương và bảo vệ đề cương
Gieo mạ:06/01/2010
Cấy: 10/02/2010
Từ 21/02/2010 khảo sát các đặc điểm nông sinh
học,tiến hành phản ứng PCR và viết báo cáo tốt nghiệp.
4.2.Kết quả:
Phát hiện được tổ hợp chứa gen tms2
Tìm được markerPCR liên quan đến tính trạng nghiên cứu
Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS
phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho
ưu thế lai cao.Hiện nay các dòng TGMS đang được sử
dụng như:103S,T1S96,64S,287S,36S
2
,Kim 76S,Pair 64S
và 25S.
Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2,
tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển
hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có
ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống
đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các
dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả
năng phối hợp cao,tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế
lai cao như TH33,Việt Lai 20,TH34,…
Đề cương thực tập tốt nghiệp
Đề tài:
“ Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phân tử
DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dòng
TGMS mới”
Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tôn
2.KS.Tống Văn Hải
Bộ môn : Công nghệ sinh học ứng dụng
Khoa CNSHTrường ĐHNNHà Nội
Người thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng Hạnh
Lớp :0602 CNSH
3.2.2. Phương pháp nghiên cứu
* Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với
nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR :
+) Chiết tách ADN tổng số của dòng mẹ TGMS,các tổ hợp phân ly
F
2
theo quy trình cải tiến của Bộ môn Công nghệ sinh học.
Bước 1:Thu ngắt mẫu lá khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống
eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá
lạnh.
Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử
trùng và đặt trong đá lạnh.Các mẫu lá được cắt nhỏ khoảng
0,5cm rồi bỏ vào cối.
Bước 3:Nhỏ 400 µl dung dịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi
nghiền nhỏ mẫu lá cho đến khi dung dịch chuyển sang màu
xanh đen.
Bước 4:Bổ sung thêm 400 µl dung dịch chiết suất AND vào pha
trộn lẫn sau đó hút 400 µl vào ống eppendorf đã được đánh dấu.
Bước 5: Cho 700 µl hỗn hợp Phenol : Chlorofom :
Isoamylalcohol ( 25:24:1 )
STT...