Khảo sát ảnh hưởng của các loại dịch chiết tự nhiên đến sự tạo chồi in vitro từ hạt dâu tây fragaria ananassa l đề tài nghiên cứu khoa học

LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin phép gửi lời biết ơn đến Ban Giám hiệu Trường Đại Học Mở TP.HCM, Quý Thầy Cô khoa Công Nghệ Sinh Học tận tình giảng dạy, truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt trình học tập, giúp em có đầy đủ kiến thức để thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn cô ThS Nguyễn Trần Đơng Phương tận tình hướng dẫn, ln ân cấn bảo, tạo điều kiện giúp đỡ em để em thực việc nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài phịng thí nghiệm Cơng Nghệ Tế Bào Thực Vật trường Xin chân thành cảm ơn anh chị bạn làm việc phịng thí nghiệm hết lịng giúp đỡ tạo điều kiện cho em hồn thành việc nghiên cứu suốt thời gian thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến gia đình, nơi ln điểm tựa quan trọng Cảm ơn tình cảm mà ba mẹ em dành cho con, ủng hộ động viên gia đình giúp vững bước đường học tập đường đời Xin chân thành cảm ơn! Bình Dương, ngày tháng năm 2019 i MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 ĐẶC ĐIỂM SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CÂY DÂU TÂY .5 1.1 Sơ lược họ Hoa hồng Rosaceae 1.2 Sơ lược Dâu Tây Fragaria ananassa L 1.2.1 Vị trí phân loại [13] 1.1.2 Nguồn gốc, phân bố [18] 1.1.3 Đặc tính sinh học 1.1.4 Thành phần công dụng [1][16] 1.1.5 Giá trị kinh tế 10 1.2 Phương pháp nhân giống dâu tây [3] 11 1.2.1 Phương pháp truyền thống 11 1.2.2 Phương pháp nhân giống in vitro 11 1.3 Phát sinh hình thái [20] 11 1.3.1 Phát sinh hình thái chồi bất định 11 1.3.2 Sự phát sinh hình thái rễ bất định 12 1.3.3 Sự tạo mô sẹo 13 1.4 Nuôi cấy mô thực vật [9] 14 1.4.1 Giới thiệu nuôi cấy mô thực vật 14 1.4.2 Vai trị ni cấy mơ thực vật [10] 14 1.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ tế bào thực vật 15 1.6 Yếu tố vô trùng 15 1.6.1 Ý nghĩa việc nuôi cấy vô trùng tế bào nuôi cấy mô tế bào thực vật 15 1.6.2 Nguồn tạp nhiễm .16 1.7 Kỹ thuật vô trùng 16 1.7.1 Vô trùng thủy tinh, nắp đậy, môi trường 16 1.7.2 Khử trùng nơi thao tác cấy dụng cụ cấy 16 1.8 Vai trò chất điều hòa sinh trưởng thực vật [2] 17 1.8.1 Auxin 17 1.8.2 Cytokinin 19 1.9 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy mơ [2] 20 1.9.1 Ánh sáng 20 ii 1.9.2 Nhiệt độ .21 1.9.3 pH 21 1.9.4 Sự thống khí [4] [2] [19] 21 1.9.4 Muối khoáng 22 1.9.5 Nguồn Carbon 22 1.9.6 Vitamin 22 1.9.7 Agar [10] 22 1.9.8 Than hoạt tính [11] [10] 22 1.9.9 Oligosacharide [15] 22 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 Vật liệu .25 2.1.1 Thời gian địa điểm thực 25 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 25 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 25 2.1.4 Hóa chất 25 2.1.5 Điều kiện nuôi cấy .25 2.1.6 Môi trường nuôi cấy 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 27 2.2.1 Thí nghiệm 1: Tạo vơ trùng từ nguồn vật liệu ban đầu (hạt tách từ dâu tươi) 27 2.2.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật BA đến trình nhân nhanh chồi dâu tây in vitro 28 2.2.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết nước dừa đến trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro 29 2.2.4 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng dịch chiết đậu nành đến trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro 30 2.2.5 Xử lý số liệu 31 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Tạo vô trùng từ nguồn vật liệu ban đầu (hạt tách từ dâu tươi) 33 3.2 Sự ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật BA đến trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro 33 iii 3.3 Sự ảnh hưởng dịch chiết nước dừa đến trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro 36 3.4 Sự ảnh hưởng dịch chiết đậu nành đến trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 40 4.1 Kết luận 40 4.2 Đề nghị .40 TÀI LIỆU THAM KHẢO 41 iv DANH MỤC BẢNG Bảng I Thành phần dinh dưỡng Dâu Tây [16] Bảng II Thành phần môi trường MS (Murashige & Skoog, 1962) 26 Bảng II Thành phần vitamin Morel 27 Bảng II Tạo chồi môi trường MS + casein hydrolysate bổ sung nồng độ BA thay đổi 28 Bảng II Tạo chồi môi trường MS + casein hydrolysate bổ sung dịch chiết nước dừa với nồng độ khác 29 Bảng II Tạo chồi môi trường MS + casein hydrolysate bổ sung dịch chiết đậu nành với nồng độ khác 30 Bảng III Tạo chồi từ chồi đơn môi trường MS bổ sung BA sau tuần nuôi cấy .34 Bảng III Tạo chồi từ chồi đơn môi trường MS + casein hydrolysate bổ sung dịch chiết nước dừa với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 36 v DANH MỤC HÌNH Hình I Giống Dâu Tây New Zealand Hình I Auxin (Indole-3-acetic acid) 18 Hình I Một số chất điều hịa sinh trưởng thuộc cytokinin 19 Hình II Quả Dâu tây (Nguồn: Internet) 27 Hình II Hạt Dâu tây tách 27 Hình III Hạt Dâu tây nảy mầm tạo vô trùng 33 Hình III Cây Dâu tây in vitro sau tuần nuôi cấy 33 Hình III Tạo chồi từ chồi đơn mơi trường MS + casein hydrolysate bổ sung BA sau tuần nuôi cấy 35 Hình III Tạo chồi từ chồi đơn môi trường MS + casein hydrolysate bổ sung dịch chiết nước dừa sau tuần nuôi cấy .37 Hình III Tạo chồi từ chồi đơn môi trường MS bổ sung dịch chiết đậu nành với nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 38 vi DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT BA Benzyladenine MS Murashige & Skoog, 1962 ĐC Đối chứng cs Cộng vii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: Khảo sát ảnh hưởng loại dịch chiết tự nhiên đến tạo chồi in vitro từ hạt dâu tây Fragaria ananassa L - Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Phương Thảo - Lớp: DH16NN01 Khoa: Công nghệ Sinh học Năm thứ: Số năm đào tạo: - Người hướng dẫn: ThS Nguyễn Trần Đông Phương Mục tiêu đề tài: Tìm loại dịch chiết từ thiên nhiên phù hợp để thay cho chất điều hòa tổng hợp việc nhân nhanh số lượng chồi giúp giảm chi phí an tồn cho người sử dụng Tính sáng tạo: Ứng dụng dâu tây, tạo nguồn giống chất lượng cao phục vụ cho sản xuất nghiên cứu Kết nghiên cứu: Tìm loại dịch chiết từ thiên nhiên phù hợp có tiềm việc nhân nhanh số lượng chồi nhằm thay chất điều hòa tăng trưởng thực vật từ giảm chi phí thực đề tài Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Đáp ứng nhu cầu số lượng giống chất lượng cao, đồng mặt di truyền bệnh, ổn định cho sản xuất, mang ý nghĩa nghiên cứu góp phần cải tạo vườn Dâu Tây thối hóa, sử dụng chất có nguồn gốc từ thực vật thân thiện với môi trường hướng tới nông nghiệp chuyển giao phương pháp nhân giống tối ưu Công bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): viii Ngày tháng năm Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Nguyễn Thị Phương Thảo Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi):……………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Ngày tháng năm Người hướng dẫn (ký, họ tên) ix BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ Độc lập - Tự - Hạnh phúc THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THƠNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN : Ảnh 4x6 Họ tên: Nguyễn Thị Phương Thảo Sinh ngày: 16 tháng: 11 năm: 1998 Nơi sinh: Lâm Đồng Lớp: DH16NN01 Khóa: 2016 Khoa: Cơng nghệ Sinh học Địa liên hệ: 2/3 Trung Hiệp, Hiệp An, Đức Trọng, Lâm Đồng Điện thoại: 0823956089 Email: 1653010281thao@ou.edu.vn II QUÁ TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích sinh viên từ năm thứ đến năm học) : * Năm thứ 1: Ngành học: Công nghệ Sinh học Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Đạt giải tham gia hoạt động ngoại khóa * Năm thứ 2: Ngành học: Công nghệ Sinh học Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Đạt giải tham gia hoạt động ngoại khóa Giải nhì thi cắm hoa ngày nhà giáo Việt Nam 20/11 * Năm thứ 3: Ngành học: Nông nghiệp – Môi trường Khoa: Công nghệ Sinh học Kết xếp loại học tập: Trung bình - Khá Sơ lược thành tích: Đạt giải tham gia hoạt động ngoại khóa x KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo vô trùng từ nguồn vật liệu ban đầu (hạt tách từ dâu tươi) Hình III Hạt Dâu tây nảy mầm tạo vô trùng Sau tuần nuôi cấy môi trường MS tạo vô trùng có đủ điều kiện để tiến hành khảo sát Hình III Cây Dâu tây in vitro sau tuần ni cấy 3.2 Sự ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thực vật BA đến q trình nhân nhanh chồi Dâu tây in vitro Sau thời gian nuôi cấy tuần, chồi đơn Dâu tây in vitro nghiệm thức môi trường MS + casein hydrolysate kết hợp với nồng độ BA thay đổi khác cho thấy tác động kích thích lên thay đổi hình thái số chồi chiều cao chồi nghiệm thức (Hình 3.2) (Bảng 3.2) Giữa nghiệm thức có 33 khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức BA5 (MS + casein hydrolysate + 5,00 ml/L) cho thấy lượng chồi hình thành, chiều cao chồi cao (13.00 chồi 9,57 cm) so với nồng độ BA khác khảo sát có khác biệt có ý nghĩa so với nghiệm thức lại điều kiện thời gian tuần nuôi cấy Bảng III Tạo chồi từ chồi đơn môi trường MS bổ sung BA sau tuần nuôi cấy Nghiệm thức Số chồi Chiều cao (cm) Trạng thái chồi Đối chứng 4,67d 5,50d Chồi thấp BA1 7,00c 6,60c Chồi trung bình BA2 8,00bc 8,50b Chồi cao BA3 9,00b 6,20cd Chồi cao BA4 9,00b 8,17b Chồi cao BA5 13,00a 9,57a Chồi cao BA6 9,33b 6,63c Chồi trung bình BA7 7,33c 3,17e Chồi thấp cv (%) 10,29 19,27 Trong cột, số có mẫu tự có kí tự khơng có khác biệt mức ý nghĩa 0,05 (P