HNG DN CHO TAC GI

TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013 HƯỚNG DẪN CHO TÁC GIẢ TẠP CHÍ SINH HỌC (TCSH), số ISSN 0866-7160, Tạp chí lớn Tạp chí chuyên ngành quốc gia Thomson Reuters: Master Journal List xếp mục ZOOLOGICAL RECORD, tổng số 4.638 Tạp chí chuyên ngành lớn giới TCSH xuất định kỳ số/1 năm (không kể số chuyên san), đăng tải cơng trình nghiên cứu viết tổng quan tiếng Việt tiếng Anh lĩnh vực sinh học đại cương sinh học thực nghiệm, sinh thái học, cổ sinh vật tiến hóa, phân loại hệ thống học, đa dạng sinh học bảo tồn, sinh lý, hóa sinh, di truyền học, côn trùng học, ký sinh trùng học, nông học, ngư học, tài nguyên sinh vật môi trường TCSH ưu tiên báo đăng cơng trình có kết phát sinh học: lý thuyết sinh thái học, cơng trình có tính ứng dụng lý thuyết lĩnh vực sinh học, phát mơ tả lồi nhóm sinh vật cho khoa học TCSH từ chối đăng báo ngắn trang báo dài 10 trang; báo ghi nhận loài đơn lẻ thường gặp khơng có kết nghiên cứu hay thảo luận về: vị trí lồi phân loại học, lồi có giá trị bảo tồn đặc biệt, lồi có ý nghĩa kinh tế cao lồi có ý nghĩa nghiên cứu mơ hình lý thuyết, phát sinh chủng loại lồi hóa thạch I NHỮNG YÊU CẦU ĐỐI VỚI TÁC GIẢ TCSH xem xét tất thảo gửi đến Tòa soạn với điều kiện cơng trình chưa gửi chờ đăng đăng Tạp chí tuyển tập hội thảo khác Tác giả phải bảo đảm nội dung thảo không vi phạm quyền sở hữu trí tuệ Những tác giả bị phát vi phạm lỗi phải chịu trách nhiệm Những thảo trước chấp nhận đăng TCSH xin ý kiến nhận xét đánh giá phản biện theo yêu cầu Hội đồng biên tập Những thảo không đáp ứng yêu cầu không chấp nhận đăng, thơng báo lại khơng gửi lại cho tác giả Yêu cầu chung thảo Bản thảo viết tiếng Việt chuẩn (không phải tiếng địa phương), ưu tiên viết tiếng Anh Bản thảo cần viết tuân thủ theo trật tự khơng đánh số mục sau: tóm tắt, từ khóa, mở đầu, phương pháp nghiên cứu, kết thảo luận, kết luận, lời cảm ơn (khi cần thiết) tài liệu tham khảo Bản thảo chuẩn bị giấy khổ giấy A4, lề 3,45 cm, lề 4,1 cm, lề trái cm lề phải 2,42 cm Sử dụng mã UniKey với font chữ Times New Roman, cỡ chữ 13, cách dòng 1,5 Bố cục thảo gồm phần: Tên báo, tên tác giả/các tác giả, từ khóa, mở đầu, phương pháp nghiên cứu (vật liệu phương pháp nghiên cứu), kết thảo luận, kết luận tài liệu tham khảo TÊN BÀI BÁO viết chữ IN HOA: Tên phải ngắn gọn bao quát, đầy đủ thông tin TÊN TÁC GIẢ/các tác giả: Ghi đầy đủ họ tên Các tác giả quan khác đánh số sau tên, bên ghi địa tác giả tương ứng với số Đánh dấu (*) tác giả chịu trách nhiệm (Corresponding Author) báo, ghi đầy đủ địa E-mail, số điện thoại địa liên lạc TĨM TẮT (ABSTRACT) (từ 200-300 từ): Viết đọng kết nghiên cứu đạt được, vấn đề nghiên cứu giải ý nghĩa kết Hướng dẫn cho tác giả TỪ KHÓA (Keywords): Sử dụng từ khóa, xếp theo thứ tự A - Z Đối với liên quan đến tên khoa học nhóm taxon, từ khóa xếp từ bậc cao đến thấp (bộ, họ, giống/chi, nhóm lồi) sau đến thuật ngữ khoa học, tên địa danh xếp sau MỞ ĐẦU (INTRODUCTION): Giới thiệu vấn đề nghiên cứu, ý nghĩa khoa học thực tiễn, nêu đầy đủ thông tin cập nhật liên quan tới vấn đề nghiên cứu, mục đích cơng trình VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU (MATERIALS AND METHODS): Trình bày rõ nguồn gốc, xuất sứ vật liệu/vật mẫu sử dụng, tên khoa học sinh vật nghiên cứu Đối với phương pháp chuẩn, cần nêu tên phương pháp, tên tác giả, năm cơng bố Nếu có cải tiến trình bày rõ cải tiến Đối với phương pháp cần trình bày đầy đủ để người khác tiến hành lại KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN (RESULTS AND DISCUSSION): Có thể kết hợp tách riêng Các kết phải minh chứng số liệu hình ảnh Các bảng số liệu hình ảnh phải dẫn phần trình bày viết KẾT LUẬN (CONCLUSION): Trình bày dạng đoạn văn, ngắn gọn, thể vấn đề rút từ kết nghiên cứu (khơng viết lại tóm tắt), khơng đánh số gạch đầu dòng LỜI CẢM ƠN (ACKNOWLEDGEMENTS): Viết ngắn gọn lời cảm ơn cho tổ chức/đề tài/cá nhân tài trợ cho cơng trình nghiên cứu, chức danh quan người đọc hiệu đính tiếng Anh (đối với viết nguyên văn tiếng Anh) TÀI LIỆU THAM KHẢO (REFERENCES): Viết đầy đủ tên tác giả, năm cơng bố, tên báo, tên tạp chí, tập (số) số trang Tên tạp chí quốc tế viết tắt theo qui định quốc tế Đối với sách, ghi tên tác giả, năm xuất bản, tên sách, nhà xuất bản, nơi xuất bản, số trang (xem hướng dẫn) SUMMARY: Những viết tiếng Việt có Summary tiếng Anh, viết tiếng Anh có phần tóm tắt tiếng Việt với đầy đủ tên báo, tên tác giả/các tác giả đưa đủ kết báo Tất phần phải viết thành đoạn văn, đầu dịng khơng sử dụng dấu gạch (-) dấu (+) trừ việc đánh số TT “TÀI LIỆU THAM KHẢO” Gửi thảo Bản thảo gồm in (hard copy) qua đường bưu điện file điện tử, in gửi đến qua đường bưu điện theo địa chỉ: Tịa soạn Tạp chí Sinh học, nhà A16, 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội File điện tử gửi theo địa sau: khuatdanglong@gmail.com, khuatdanglong@iebr.ac.vn nguyenducthanh_pcg@ibt.ac.vn, tuananhnguyen148@gmail.com, vjbio@vjs.ac.vn Bản quyền tác giả Sau báo đăng, quyền thuộc Viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Lệ phí đăng Khơng thu lệ phí 10 trang, thu lệ phí sau: từ 10 trang trở lên, có yêu cầu in ảnh màu, đăng tập Chuyên san hàng năm TCSH (Special Issue), tác giả có yêu cầu ưu tiên đăng nhanh sau công bố, cơng trình đưa lên mạng thơng tin Ấn báo Tác giả báo nhận miễn phí 01 Tạp chí có báo tác giả/nhóm tác giả với 10 tách tác giả/nhóm tác giả TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013 II HƯỚNG DẪN CHO TÁC GIẢ Định dạng thảo Bản thảo sử dụng font Times New Roman, cỡ chữ 13, cách dòng 1,5 Sử dụng chức lập bảng để lập bảng, không dùng bảng Excel để lập bảng Không đánh số mục tiểu mục Không sử dụng tiểu mục Các chữ viết tắt sử dụng lần đầu cần thích rõ ràng, sau dùng thống tồn thảo Tên chi (chỉ thực vật) giống (chỉ động vật) tên loài viết nghiêng Sau taxon cho khoa học viết gen n (với giống/chi mới), sp n (với loài mới), com n (tu chỉnh) nom n (đồng danh mới) Bài báo có mơ tả taxon mới, khóa định loại trật tự mơ tả taxon giữ theo đặc thù nhóm sinh vật, phần từ nguyên học (Etymology) cần rõ từ gốc (theo qui định quốc tế) giải thích nghĩa từ đặt cho taxon Tác giả chịu trách nhiệm với tất tên khoa học loài công bố danh sách Các thuật ngữ khoa học chưa Việt hóa dùng ngun tiếng Anh (ví dụ: Type, holotype, paratype, v.v enzyme, nucleotide, formandehyde, lipid, peptide, kanamycin, biotype ) phải dùng thống toàn thảo Tên quốc gia, vùng địa lý quốc tế có phiêm âm, sử dụng theo báo Nhân Dân nay; trường hợp chưa có viết nguyên văn Tài liệu tham khảo + Trích dẫn tài liệu tham khảo Tài liệu trích dẫn phải ghi tên tác giả, năm cơng bố ngoặc đơn trích dẫn số thứ tự tài liệu tham khảo đó, tài liệu có tác giả viết đầy đủ, trường hợp có từ tác giả trở lên viết tác giả đầu sau viết nnk (đối với tài liệu tiếng Việt) et al (đối với tài liệu tiếng Anh), ví dụ: • Phương pháp tách DNA tiến hành theo Shaghai Maroof (1984) [3] mô tả; • Chuyển gien lục lạp Potrykus (1973), Boynton et al (1988), Svab & Maliga (1993) [1, 3, 7] đề cập đến; • Bostein et al (1980) [10] xây dựng đồ liên kết di truyền người thị đa hình đoạn cắt giới hạn • Đặng Ngọc Thanh nnk (1983) [12] thống kê thành phần loài cho khu hệ Việt Nam Đánh số thứ tự 1, 2, tài liệu tham khảo, ghi tài liệu trích dẫn tài liệu xuất Xếp thứ tự A - Z theo họ tác giả đầu (đối với tài liệu nước ngoài), theo tên tác giả đầu (đối với tài liệu tiếng Việt) Trong bào viết nguyên văn tiếng Anh, tài liệu tham khảo tiếng Việt chuyển sang tiếng Anh, tên tác giả cần viết nguyên gốc, không đảo lộn thứ tự họ, chữ đệm tên Nếu tài liệu có tóm tắt tiếng Anh, cuối tài liệu viết dấu ngoặc đơn (Vietmamese, summary in English) + Viết tài liệu tham khảo - Bài đăng tạp chí khoa học Lohot V D., Sharma-Natu P., Pandey R., Ghildiyal M C., 2010 ADP-glucose pyrophosphorylase activity in relation to starch accumulation and grain growth in wheat cultivars Curr Sci., 98(3): 427-430 TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 125-132 PHÂN TÍCH CÁC GLYCOPROTEIN TRONG HUYẾT THANH BỆNH NHÂN HỘI CHỨNG MẠCH VÀNH CẤP Đỗ Hữu Chí1, Nguyễn Tiến Dũng1, Phạm Đức Đan1, Đặng Minh Hải2, Đỗ Dỗn Lợi2, Nguyễn Bích Nhi1, Phan Văn Chi1* Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam, *chi@ibt.ac.vn Viện tim mạch, Bệnh viện Bạch Mai TÓM TẮT: Hội chứng mạch vành cấp (Acute Coronary Syndrome, ACS) vấn đề sức khỏe quan tâm giới bệnh thường uy hiếp tính mạng người cách đột ngột, tỷ lệ tử vong di chứng bệnh hội chứng mạch vành cấp chiếm hàng đầu có xu hướng gia tăng nhanh chóng nhiều nước phát triển Vì vậy, nghiên cứu tìm kiếm biomarker để chuẩn đoán sớm bệnh hội chứng mạch vành cấp yêu cầu mang tính cấp thiết Glycosyl hóa biến đổi sau dịch mã phổ biến, đóng vai trị quan trọng nhiều q trình sinh lý như: đáp ứng miễn dịch, điều hịa chu trình tế bào, nhân tố thị mơi trường ảnh hưởng lên q trình nội bào liên quan đến nhiều đường chuyển dạng từ tế bào bình thường thành tế bào ung thư Những nghiên cứu gần rằng, protein bị glycosyl hóa thường liên quan đến q trình bệnh lý khác như: tiểu đường, sơ nang, Alzheimer, viêm khớp, bệnh tự miễn, bệnh tim, bệnh liên quan đến tress, ảnh hưởng đến chức thận đặc biệt ung thư Hiện nay, kỹ thuật proteomics, có nhiều glycoprotein xác định thị phân tử đặc trưng cho nhiều bệnh lý có hội chứng mạch vành cấp Trong nghiên cứu này, sử dụng kỹ thuật điện di hai chiều kết hợp với sắc ký lỏng nano chiều kết nối khối phổ liên tiếp (1D nanoLC-ESI MS/MS) để phân tích thành phần glycoprotein huyết mẫu người bình thường bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định, nhồi máu tim cấp Kết cho thấy, glycoprotein có mức độ biểu tăng (ceruloplasmin, haptoglobin fibrinogen), protein có mức độ biểu giảm (Alpha-2-HS-glycoprotein) mẫu bệnh so với mẫu đối chứng Từ khóa: Đau thắt ngực khơng ổn định, glycoprotein, hội chứng mạch vành cấp, huyết thanh, khối phổ, nhồi máu tim cấp, proteomics MỞ ĐẦU Theo tổ chức Y tế giới (WHO), tim mạch bệnh có tỷ lệ tử vong cao giới Các số liệu thống kê gần Hoa Kỳ cho thấy, bệnh tim mạch ảnh hưởng đến 60 triệu người Hoa Kỳ Tại Việt Nam, theo thống kê Hội Tim mạch học Việt Nam (6/2010), người Việt Nam trưởng thành có người có nguy mắc bệnh tim mạch, chủ yếu hội chứng mạch vành cấp Hội chứng mạch vành cấp có sở sinh lý bệnh học nứt vỡ mảng vữa xơ thành động mạch vành, gây hẹp tắc lòng mạch dẫn đến máu không lưu thông thể Thuật ngữ hội chứng mạch vành cấp sử dụng để tồn bệnh lý cấp tính động mạch vành mà theo truyền thống chia thành đau thắt ngực (angina), đau thắt ngực không ổn định (unstable angina) nhồi máu tim cấp (myocardial infarction) Nếu người bệnh phát giai đoạn cấp tính, q trình điều trị bệnh khó khăn Xem xét xuất protein thị bệnh cần thiết trình chuẩn đốn, đặc biệt chuẩn đốn có mặt bệnh giai đoạn sớm theo dõi tiến triển bệnh để áp dụng hướng điều trị hợp lý, tăng cường hiệu điều trị bệnh, nhờ bệnh nhân sớm hồi phục trở lại kéo dài sống Ngày nay, có nhiều protein thị bệnh phát hiện, trở thành tiêu xét nghiệm sinh hóa quan trọng khơng thể thiếu chuẩn đoán lâm sàng hội chứng mạch vành cấp như: Hs-CRP (High-sensitivity C-reactive protein), BNP (Brain natriuretic peptide, B-type natriuretic peptide), NT-proBNP (N-terminal pro-BNP), CK-MB (Creatine kinasemyocardial bland), troponin… Tuy nhiên, hệ protein huyết người đa dạng phức tạp, 125 Do Huu Chi et al tính riêng 22 loại protein có hàm lượng cao chiếm đến 99% lượng protein tổng số [14] Các protein gây nhiều khó khăn cho q trình nghiên cứu protein có hàm lượng thấp protein có hàm lượng thấp thực có nhiều ý nghĩa nghiên cứu sinh học y học [1] Vì vậy, việc phân đoạn protein huyết trước nghiên cứu cần thiết Hiện nay, có nhiều phương pháp để phân đoạn protein phương pháp sắc ký, cut-off (sử dụng màng lọc với kích thước khác nhau), biến tính nhiệt… Trong đó, phương pháp sắc ký cột với chất giá Lectin Concanavalin A (conA) phương pháp phân đoạn huyết hay sử dụng hiệu cao Do đó, phân đoạn protein phương pháp sắc ký lực sử dụng để làm giảm bớt mức độ phức tạp mẫu huyết đồng thời giúp thu nhận thêm glycoprotein phục vụ cho nghiên cứu Q trình glycosyl hóa chiếm 50% biến đổi sau dịch mã nhiều nghiên cứu liên quan glycoprotein đến nhiều bệnh lý khác [9], đó, có hội chứng mạch vành cấp Những glycoprotein bình thường loại glycoprotein bị biến đối bất thường từ quan, mô tế bào vào hệ thống tuần hoàn trở thành chất lưu chuyển huyết Vì lý này, glycoprotein huyết trở thành đối tượng lý thú sử dụng nghiên cứu chẩn đoán bệnh Gần giới, kỹ thuật proteomics phát triển mạnh mẽ lĩnh vực nghiên cứu hội chứng mạch vành cấp, nhiên tiềm ứng dụng rộng mở, đặc biệt việc phát biomarker Hiện tại, Việt Nam chưa có cơng bố liên quan đến việc áp dụng kỹ thuật proteomics để nghiên cứu hệ glycoprotein bệnh nhân mắc hội chứng mạch vành cấp Trong nghiên cứu này, phương pháp sắc ký lực với chất giá ConA sử dụng để thu giữ glycoprotein huyết bệnh nhân Sau đó, hỗn hợp glycoprotein thủy phân trypsin, phân tích nhận dạng hệ thống sắc ký lỏng nano chiều kết nối khối phổ liên tiếp (1D-LC ESI MS/MS) Kết xác định, nhận dạng số 126 glycoprotein có liên quan đến phát sinh phát triển bệnh, mở triển vọng cho việc tìm kiếm thị có khả sử dụng chuẩn đoán lâm sàng với hội chứng mạch vành cấp VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu Vật liệu mẫu huyết người bình thường người mắc bệnh hội chứng mạch vành cấp (40 mẫu lựa chọn từ 120 mẫu) giai đoạn bệnh, lứa tuổi khác tuyển chọn cung cấp Viện Tim mạch, Bệnh viện Bạch Mai, Hà Nội Các hóa chất enzyme sử dụng có độ tinh cần thiết cho sinh học phân tử Hệ thống máy sử dụng có độ tin cậy cao như: hệ thống máy khối phổ QSTAR@ XL MS/MS (Applied Biosystem/MDS Sciex, Toronto, Canada), sắc ký lỏng nano đa chiều (bao gồm cột SCX, cột Reversed Phase trap, cột C18) cung cấp LC Packings/Dionex (Amsterdam, Hà Lan) Các thiết bị điện di chiều SDS-PAGE, điện di 2-DE mua từ BioRad (Hercules, CA, Hoa Kỳ) với trang thiết bị khác Phịng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ gen, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phương pháp Thu nhận glycoprotein sắc ký lực ConA hòa vào đệm cân (Tris-HCl 20 mM NaCl 0,5 M; pH 7,4) nhồi lên cột có đường kính cm, thể tích gel nhồi cột tính tốn phù hợp theo hướng dẫn nhà sản xuất 300 µl huyết nguyên (tương đương khoảng 20 mg protein) hịa 10 lần thể tích đệm cân đưa lên cột sắc ký với tốc độ dịng 0,1 ml/phút Sau đó, cột rửa với 10 ml đệm cân để loại protein không bám cột Các glycoprotein ml đệm thơi (0,25 mM methyl-α-D-glucopyranoside) tốc độ dịng 0,1 ml/phút Nồng độ glycoprotein xác định phương pháp Bradford Phân tách protein kỹ thuật điện di hai chiều (2DE) Hỗn hợp glycoprotein làm TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 125-132 phương pháp tủa với acetone lạnh theo tỷ lệ thể tích protein/acetone 1/4, giữ qua đêm -20oC Sau đó, hỗn hợp glycoprotein tinh thu nhận ly tâm 12000 vòng/phút 4oC 20 phút Hỗn hợp glycoprotein (chứa khoảng 170 µg protein) sau hịa 125 µl dung dịch rehydration đưa lên gel kích thước cm, pH 4-7 (Bio-Rad, Hoa Kỳ) Quá trình điện di chiều (điện di đẳng điện) chiều (SDS-PAGE, 12,6%) thực hệ thống thiết bị hãng Bio-Rad (Hercules, Hoa Kỳ) theo khuyến cáo Các gel sau nhuộm Commassie Brilliant Blue R-250 trước xử lý với phần mềm PD Quest v8.1 Thủy phân protein gel trypsin Các điểm glycoprotein huyết khác biệt người bình thường bệnh nhân có hội chứng mạch vành cấp điện di 2-DE cắt, rửa loại thuốc nhuộm dung dịch rửa (50 mM (NH4)2CO3; pH 8,0; 50% ACN) Sau đó, mảnh gel làm khơ 100% ACN (Acetone nitrile) khử DTT (Dithiothreitol) với dung dịch khử chứa mM DTT 56oC 30 phút Sau khử, gel alkyl hóa IAA (Iodoacetamide) với dịch alkylation chứa mM IAA tối, giờ, nhiệt độ phòng Enzyme trypsin (loại sử dụng cho đọc trình tự, Sigma-Aldrich) thêm vào với tỷ lệ enzyme/cơ chất 1/30, 37oC qua đêm Hỗn hợp peptide sau chiết khỏi gel dung dịch chiết chứa 50% ACN; 1% TFA Nhận diện protein sắc ký lỏng nano chiều kết nối khối phổ Hỗn hợp peptide sau thủy phân phân tách hệ thống sắc ký lỏng nano chiều kết nối khối phổ Peptide loại muối cô đặc cột TRAP C18 (LC Packing, Dionex, Hà Lan) trước phân tách cột sắc ký ngược pha C18 (GraceVydac, Hesperia, CA, Hoa Kỳ) Mẫu hòa dung dịch đệm A (FA 0,1%) đưa lên cột với tốc độ dòng 0,2 µl/phút Các peptide khỏi cột C18 gradient dung dịch đệm B (85% ACN 0,1% FA) 60 phút Từ phổ khối peptide thu được, trình nhận diện protein tiến hành với phần mềm Mascot v1.8 (Matrix Science Ltd., London, Anh) sở liệu Swiss-Prot KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Phân tách protein điện di 2DE Nồng độ glycoprotein huyết sử dụng phân tích mẫu bệnh hội chứng mạch vành cấp mẫu đối chứng tính toán tương đương phương pháp Bradford Mức độ biểu glycoprotein huyết mẫu bệnh đối chứng so sánh điện di hai chiều Kết phân tách 2DE glycoprotein huyết thể hình Dưới hỗ trợ phần mềm PD Quest v8.1, vùng điểm có mức độ biểu thay đổi giữ mẫu bệnh đối chứng (được đánh dấu mũi tên) phát đó: vùng điểm có mức độ biểu tăng (vùng điểm 1, 3, 4) vùng điểm có mức độ biểu giảm (vùng điểm 2) mẫu bệnh so với mẫu đối chứng Hình So sánh mức độ biểu protein huyết bệnh nhân mắc hội chứng đau thắt ngực không ổn định (mẫu ĐT27) mẫu đối chứng (mẫu BT02) hình ảnh điện di chiều, protein có mức biểu thay đổi đánh dấu từ 1→4 127 Do Huu Chi et al Hình So sánh mức độ biểu protein huyết bệnh nhân mắc hội chứng nhồi máu tim cấp (mẫu NM24) mẫu đối chứng (mẫu BT02) hình ảnh điện di chiều, protein có mức biểu thay đổi đánh dấu từ 1→4 Kết phân tách điện di 2DE hình cho thấy, có khác biệt mức độ biểu nhiều điểm/vùng điểm protein Tuy nhiên, rõ nét vùng điểm đánh dấu ảnh, vùng có biểu tăng bệnh nhân, vùng có mức độ biểu giảm, vùng xuất huyết bệnh nhân mà không thấy mẫu đối chứng, thay đổi có lặp lại mẫu nghiên cứu So sánh mức độ biểu mẫu NM24 ĐT27, nhận thấy, bệnh nhân nhồi máu tim cấp có mức biểu thay đổi rõ bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định Nhận diện protein hệ nanoLC-ESIMS/MS Các điểm/vùng điểm glycoprotein có mức biểu thay đổi cắt, thủy phân với trypsin phân tích hệ thống 1DnanoLCMS/MS, nhận diện phần mềm Mascot v1.8 sở liệu NCBI cập nhật với 8,3 triệu trình tự khác Tổng hợp kết nhận diện phần mềm Mascot v1.8 đối chiếu với sở liệu điện di 2-DE từ EXPASY, glycoprotein có mức độ biểu thay đổi mẫu bệnh so với mẫu đối chứng xác định (bảng 1) Bảng Kết nhận diện glycoprotein biểu thay đổi mẫu ĐT27, NM24 BT02 (Đau thắt: đau thắt ngực không ổn định, nhồi máu: nhồi máu tim cấp) Thứ tự Spot Số đăng ký gi|1620909 gi|178284 gi|7924018 gi|4826762 Tên protein Ceruloplasmin (CP) Alpha-2-HS-glycoprotein (AHSG) Fibrinogen (FGB) Haptoglobin (HP) Thảo luận Phương pháp sắc ký lực với ConA phân tách glycoprotein khỏi hỗn hợp protein khơng bị glycosyl hóa, đồng thời loại protein có hàm lượng lớn (như albumin) cản trở trình phân tích [9] Như vậy, phương pháp giảm độ phức tạp mẫu phân tích, tạo điều kiện thuận lợi cho trình phân tách protein điện di chiều 128 Mức độ biểu Đau thắt Nhồi máu Tăng Tăng Giảm Giảm Tăng Tăng Tăng Tăng nhận dạng khối phổ Nhờ phân tích hình ảnh gel phần mềm chuyên dụng, có mặt mức độ biểu hệ glycoprotein huyết bệnh nhân phát Các glycoprotein nhận dạng nằm nhóm: kháng thể, bổ thể, protein vận chuyển, chất ức chế protease, thụ thể truyền tin protein đa chức Trong nghiên cứu này, xác định thay đổi rõ rệt loại glycoprotein liên quan đến bệnh TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 125-132 protein có mức độ biểu tăng (ceruloplasmin, haptoglobin, fibrinogen), protein có mức độ biểu giảm (Alpha-2-HSglycoprotein) Ceruloplasmin (ferroxidase) αglycoprotein, hình thành chuỗi polypeptide đơn gồm 1046 amino acid có trọng lượng phân tử khoảng 132 kDa Ceruloplasmin loại protein đa chức năng, vận chuyển Cu, oxi hóa amin hữu cơ, oxi hóa Fe2+ thành Fe3+, điều tiết nồng độ sắt tế bào đặc biệt có tính oxy hóa chống oxy hóa hai vùng hoạt tính khác [8] Chính vai trị quan trọng q trình trao đổi chất có hàm lượng cao huyết nên ceruloplasmin có liên quan đến nhiều bệnh lý khác như: bệnh Wilson [18], ung thư vú [22], ung thư phổi [17] bệnh Alzheimer [15] Đối với bệnh tim mạch, ceruloplasmin coi có vai trị oxidative stress biểu bệnh nhân mang bệnh tim mạch [3] Lượng ceruloplasmin tăng đáng kể máu bệnh nhân có mang bệnh động mạch vành [12] marker độc lập cho chứng xơ vữa động mạch vành [20] Ceruloplasmin biểu nhân tố tiên đoán kết lâu dài bệnh đau thắt ngực không ổn định tốt fibrinogen, CRP IL-6 [24] Do ceruloplasmin có tính oxy hóa chống oxy hóa, cộng đồng khoa học cịn tranh luận tăng nồng độ ceruloplasmin phản ứng thể nhằm kiềm chế mức độ oxy hóa [23], tác nhân góp phần sinh bệnh [5] Kết nghiên cứu nhận thấy gia tăng đáng kể nồng độ ceruloplasmin huyết bệnh nhân có triệu chứng đau thắt ngực không ổn định bệnh nhân bị nhồi máu tim cấp Alpha-2-HS-glycoprotein (AHSG) glycoprotein hàm lượng cao huyết với nồng độ từ 300 đến 600 mg/l, tổng hợp gan tiết vào máu, protein có nồng độ biến đổi giai đoạn cấp tính, AHSG cấu tạo hai chuỗi liên kết với cầu disulfua Nồng độ AHSG huyết thường giảm xuất triệu chứng viêm nhiễm hay khối u ác tính [2] Các nghiên cứu sử dụng phương pháp phân tích hóa sinh truyền thống cho thấy, giảm nồng độ protein bệnh nhân động mạch vành [10] Nghiên cứu chúng tôi, với hướng tiếp cận proteomic nhận thấy, giảm nồng độ protein huyết thanh, kết có tương đồng với nghiên cứu trước Để phát chứng viêm mảng bám động mạch vành cách tốt xác định qua protein C phản ứng (C-reactive protein, CRP) fibrinogen, hình thành cục máu đơng đánh giá qua test hình thành sợi huyết (fibrin) kích hoạt tiểu cầu [6] Fibrinogen glycoprotein hòa tan, trọng lượng phân tử 340 kDa, bao gồm ba chuỗi polipeptit liên kết với cầu disulphit Fibrinogen chủ yếu tổng hợp gan định độ nhớt huyết tương gây tập kết thuận nghịch tế bào hồng cầu Bước cuối thông thường hệ thống làm đông máu bên ngồi nội liên quan đến việc kích hoạt yếu tố X thành Xa sau kích hoạt prothrombin thành thrombin Thrombin thúc đẩy phân cắt fibrinogen thành fibrin monome liên kết với nhau, với hỗ trợ yếu tố XIII, để tạo thành cục máu đông [7] Nồng độ fibrinogen huyết thông thường từ 1,5-2,77 g/l, tùy thuộc vào phương pháp đo sử dụng Các nghiên cứu trước cho thấy gia tăng nồng độ protein huyết bệnh nhân tim mạch [11] Mặc dù có nhiều nghiên cứu công bố liên quan đến vai trò tiềm fibrinogen ‘dấu hiệu sinh học’ bênh tim mạch, nhiên, vai trò nồng độ fibrinogen huyết tương yếu tố nguy bệnh vấn đề tranh luận Các nghiên cứu quan sát tiên lượng với nghiên cứu dịch tễ học chứng minh rằng, nồng độ fibrinogen tiên đốn nguy bệnh động mạch vành [16] Tuy nhiên, chứng xơ vữa động mạch tồn làm tăng nồng độ fibrinogen làm thay đổi quan hệ nhân-quả fibrinogen tiên đoán bệnh động mạch vành [19] Đặc biệt, chất đặc hiệu thuộc nhóm fibrate (một dẫn chất acid fibric) clofibrate bezafibrate làm giảm nồng độ fibrinogen không cho thấy tác động tích cực nghiên cứu theo dõi cách 129 Do Huu Chi et al ngẫu nhiên [11] Vì vậy, đến chưa rõ ràng fibrinogen yếu tố có quan hệ nhân với bệnh động mạch vành hay đơn dấu hiệu hai tình trạng bệnh tồn từ trước yếu tố nguyên nhân khác [21] Haptoglobin (HP) glycoprotein sinh chủ yếu tế bào gan số mô khác thể da, phổi, thận HP có cấu trúc tetramer gồm hai chuỗi alpha hai chuỗi beta, liên kết với cầu disulfide HP coi chất phản ứng giai đoạn cấp tính Chúng liên kết với phân tử hemoglobin tự do, làm giảm lưu thông phân tử qua giúp thể ngăn chặn tổn thương thận mát chất sắt sau trình hemolysis Mức độ glycosyl hóa haptoglobin bất thường liên quan đến trạng thái bệnh lý thể như: trình phá hủy mô, phản ứng viêm nhiễm hoại tử (necrosis) ung thư Đã có nhiều nghiên cứu biến đổi bất thường nồng độ HP huyết đối tượng bệnh khác Nghiên cứu Ghadam P [4] cho thấy liên quan kiểu hình gen HP đến bệnh nhân tiểu đường type có biến chứng tim mạch Một nghiên cứu khác Lavie et al (2003) [13] cho thấy, gia tăng đáng kể nồng độ HP huyết bệnh nhân động mạch vành KẾT LUẬN Bằng kỹ thuật điện di hai chiều kết hợp sắc ký lỏng nano chiều kết nối khối phổ liên tiếp (1D-NanoLC-ESI MS/MS) xác định glycoprotein huyết bệnh nhân hội chứng mạch vành cấp có mức độ biểu thay đổi so với mẫu đối chứng, có protein (ceruloplasmin, fibrinogen, haptoglobin) có mức độ biểu tăng protein (alpha-2HS-Glycoprotein) có mức độ biểu giảm Kết có tính lặp lại mẫu bệnh so với mẫu đối chứng Lời cảm ơn: Cơng trình hỗ trợ kinh phí đề tài độc lập thuộc Phịng thí nghiệm Trọng điểm Quốc gia, Bộ Khoa học Công nghệ (2011-2013), mã số: 03/2011/PTNTĐ/HĐ-ĐTĐL 130 TÀI LIỆU THAM KHẢO Anderson N L., Anderson N G., 2002 The human plasma proteome, history, character and diagnostic prospects Molecular Cellular Proteomics., 1: 845-867 Daveau M., Davrinche C., Djelassi N., Lemetayer J., Julen N., 1990 Partial hepatectomy and mediators of inflammation decrease the expression of liver alpha 2-HS glycoprotein gene in rats FEBS Lett., 273: 79-81 Fox P L., Mazumder B., Ehrenwald E., Mukhopadhyay C K., 2000 Ceruloplasmin and cardiovascular disease Free Radic Biol Med., 28: 1735-1744 Ghadam P., Abadi A., Asadzadeh A., Safari N., Shabani A., Sharifian M., 2008 The Relationship of Haptoglobin Polymorphism and Cardiovascular Diseases in Some of Iranian Diabetic Patients Journal of Biological Sciences., 8(6): 1100-1103 Gocmen A Y., Sahin E., Semiz E., Gumuslu S., 2008 Is elevated serum ceruloplasmin level associated with increased risk of coronary artery disease? Can J Cardiol., 24(3): 209-212 Gil M., Zarebinski M., Adamus J., 2002 Plasma fibrinogen and troponin I in acute coronary syndrome and stable angina Int J Cardiol., 83: 43-46 Herrick S., Blanc-Brude O., Gray A., Laurent G., 1993 Fibrinogen Int J Biochem Cell Biol., 31: 741-746 Healy J., Tipton K., 2007 Ceruloplasmin and what it might J Neural Transm Netherlands., 114: 777-781 Jakob B B., Alexandre J P., Jacok R V., Wisniewski P., 2004 Screening for Nglycosylate proteins by liquichromatography mass spectrometry Proteomics, 4: 454-465 10 Joachim H., Barrett-Connor E., Wassel C L., Cummins K., Bergstrom J., Daniels L B., Laughlin G A., 2011 The Associations of Fetuin-A With Subclinical Cardiovascular Disease in Community- TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 125-132 Dwelling Persons J Am Coll Cardiol., 58: 2372-2379 11 Kaptoge S., White I R., Thompson S G., Wood A M., Lewington S., Lowe G D., Danesh J., 2007 Associations of plasma fibrinogen levels with established cardiovascular disease risk factors, inflammatory markers, and other characteristics: Individual participant metaanalysis of 154,211 adults in 31 prospective studies: The Fibrinogen Studies Collaboration Am J Epidemiol., 166: 867879 Serum copper, zinc and ceruloplasmin concentrations in patients with lung cancer Respiration international review of thoracic diseases., 51(4): 272-276 18 Scheinberg I H., Gitlin D., 1952 Deficiency of ceruloplasmin in patients with hepatolenticular degeneration (Wilson’s disease) Science., 116(3018): 484-485 19 Stefanadi E., Tousoulis D., Papageorgiou N., Briasoulis A., Stefanadis C., 2010 Inflammatory biomarkers predicting events in atherosclerosis Curr Med Chem., 17: 1690-1707 12 Kaur K., Bedi G., Kaur M., Vij A., Kaur I., 2008 Lipid peroxidation and the levels of antioxidant enzymes in coronary artery disease Indian Journal of Clinical Biochemistry India., 23(1): 33-37 20 Mori T., Sasaki J., Kawaguchi H., Handa K., Takada Y., Matsunaga A., Kono S., Arakawa K., 1995 Serum glycoproteins and severity of atherosclerosis Am Heart J., 129(2): 234-238 13 Lavie L., Lotan R., Hochberg I., Herer P., Lavie P., Levy A P., 2003 Haptoglobin polymorphism is a risk factor for cardiovascular disease in patients with obstructive sleep apnea syndrome Sleep (Rochester)., 26(5): 592-595 21 Tousoulis D., Papageorgiou N., Androulakis E., Briasoulis A., Antoniades C., Stefanadis C., 2011 Fibrinogen and cardiovascular disease: Genetics and biomarkers Blood Rev., 239-245 14 Li J., Kelly J F., Chernushevich I., Harrison D J., Thibault P., 2000 Separation and Identification of Peptides from Gel-Isolated Membrane Proteins Using a Microfabricated Device for Combined Capillary Electrophoresis/Nanoelectrospray Mass Spectrometry Anal Chem., 72: 599-609 15 Lutsenko S., Gupta A., Burkhead J L., Zuzel V., 2008 Cellular multitasking: The dual role of human Cu-ATPases in cofactor delivery and intracellular copper balance Arch Biochem Biophys., 476(1): 22-32 16 Maresca G., Di Blasio A., Marchioli R., Di Minno G., 1999 Measuring plasma fibrinogen to predict stroke and myocardial infarction Arterioscler Thromb Vasc Biol., 19: 1368-1377 17 Poukkula A., Hakala M., Huhti E., 1987 22 Vaidya S M., Kamalakar P L., 1998 Copper and ceruloplasmin levels in serum of women with breast cancer Indian Journal of Medical Sciences., 52(5): 184-187 23 Verma V K., Ramesh V., Tewari S., Gupta R K., Sinha N., Pandey C M., 2005 Role of bilirubin, vitamin C and ceruloplasmin as antioxidants in coronary artery disease (CAD) Indian J Clin Biochem., 20(2): 6874 24 Ziakas A., Gavrilidis S., Souliou E., Giannoglou G., Stiliadis I., Karvounis H., Efthimiadis G., Mochlas S., Vayona M A., Hatzitolios A., Savopoulos C., Pidonia I., Parharidis G., 2009 Ceruloplasmin is a better predictor of the long -Term prognosis compared with fibrinogen, CRP and IL-6 in patients with severe unstable angina Angiology., 60(1): 50-59 131 Do Huu Chi et al ANALYSIS OF HUMAN SERUM GLYCOPROTEINS IN PATIENTS WITH ACUTE CORONARY SYNDROME Do Huu Chi1, Nguyen Tien Dung1, Pham Duc Dan1, Dang Minh Hai2, Do Doan Loi2, Nguyen Bich Nhi1, Phan Van Chi1 Institute of Biotechnology, VAST Vietnam heart institute, Bach Mai hospital SUMMARY Acute coronary syndrome (ACS) is a health issue of great concern worldwide due to its sudden attack, high mortality rate and serious sequelae, with the number of patients increasing rapidly in both developing and developed countries For this reason, research on diagnostic biomarkers for early diagnosis ACS is very important Nowadays, glycoprotein has became a main research trend of proteomics Glycosylation is a common post-translational modification, playing an important role in many processes of the body At the same time, recent studies have shown that the glycosylated proteins are often related to pathologies of diseases: Arthritis, Alzheimer's, diabetes, leukemia, cardiovascular Many glycoproteins identified by proteomics techniques have been currently applied as molecularly characteristic biomarkers for various diseases including acute coronary syndrome In this study, we use two-dimensional electrophoresis technique combined with one-dimensional nano liquid chromatography connected to mass spectrometry (1D nanoLCESI MS / MS) Our results show that expression levels of proteins, namely ceruloplasmin, haptoglobin and fibrinogen increased, and alpha-2-HS-glycoprotein had a decreased level in patient samples Keywords: Glycoprotein, acute coronary syndrome, mass spectrometry, nano LC-MS/MS, proteomics Ngày nhận bài: 30-7-2012 132 Hướng dẫn cho tác giả - Bài tìm kiến hệ thống kỹ thuật số (DOI - Digital Object Identifier) Hoshino T., Kawashita N., Takagi Y., Anai Y., 2011 Molecular characterization and marker development of mid-oleic-acid mutant M23 for the development of high-oleic cultivars of soybean, Plant Breed., DOI: 10.1111/j.1439-0523.2011.01871.x - Sách Weissbach A., Weissbach H., 1988 Methods for Plant Molecular Biology Academic Press Inc, California, USA, số trang Đỗ Năng Vịnh, 2005 Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, số trang - Chương sách Smith S and Helentjaris T., 1996 DNA Fingerprinting and Plant Variety Protection In: Paterson AH (ed) Genome Mapping in Plant, Academic Press Inc, California, USA pp 95-110 - Hội thảo, Hội nghị Nguyễn Anh Tuấn, Nguyễn Nghĩa Thìn, 2007 Bước đầu đánh giá tính đa dạng thực vật có mạch Thung Tre - Trộ Mợng vườn quốc gia Phong Nha - Kẻ Bàng, tỉnh Quảng Bình Báo cáo khoa học Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Hội nghị khoa học toàn quốc lần thứ hai Nxb Nông nghiệp, Hà Nội: xx-xxx - Tài liệu mạng Wikipedia, 2011 Thơng nước Bách khoa tồn http://vi.wikipedia.org/wiki/Th%C3%B4ng_n%C6%B0%E1%BB%9Bc 28/11/2011 thư Tra mở cứu - Luận văn Bùi Thị Kim Anh, 2011 Nghiên cứu sử dụng thực vật (Dương xỉ) để xử lý ô nhiễm Asen đất vùng khai thác khoáng sản Luận án Tiến sĩ, Trường đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG Hà Nội, số trang - Bằng phát minh, sáng chế Maliga P., 1996 Method for Producing Male Sterility in Plant and Use thereof in Production Hybrid Seed Patent Number 5,530,191 Viết tên tạp chí Trong phần tài liệu tham khảo, sau tên báo, viết nguyên văn tên tạp chí trang bìa, thí dụ: TẠP CHÍ SINH HỌC T.32(4): 69-79; Science Vol.290 No.5491: 461-462 Với tạp chí viết tắt, sử dụng qui ước chữ viết tắt ISI Journal Title Abbreviations, tham khảo tại: www.efm.leeds.ac.uk/~mark/ISIabbr/P_abrvjt.html Thí dụ Journal of Natural History viết sau: J Nat Hist Bảng Bảng đánh số Ả-Rập phải dẫn Tên bảng để phía Phải có thích cho thành phần bảng Hình (bao gồm hình vẽ, sơ đồ, biểu đồ, đồ thị, ảnh ) Hình đánh số Ả-Rập phải dẫn Tên hình để phía Các phần TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013 hình thích chữ in thường a, b, c, d , phơng chữ Times New Roman, cỡ 12, đặt góc bên trái hình Hình có kích thước: chiều rộng 39 mm đến 129 mm; chiều cao khơng q 174 mm Hình vẽ đen trắng scan với độ phân giải tối thiểu 300 dpi lưu tệp có TIF/TIFF Ảnh màu chụp với độ phân giải tối thiểu 1200 dpi lưu tệp có GIF JPEG Bảng hình đặt trang riêng biệt kèm theo số thứ tự bảng/hình, tên bảng/hình phần thích cho bảng hình (khơng đặt bảng hình trang văn word) Nếu sử dụng bảng hình cơng bố tài liệu nào, cần cho phép tác giả mang quyền Tạp chí Sinh học khơng chịu trách nhiệm vấn đề liên quan đến quyền TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 37-42 EFFECT OF TEMPERATURE ON THE LIFE CYCLE AND PREDATORY CAPACITY OF LADYBIRD BEETLE MICRASPIS DISCOLOR FABRICIUS (COLEOPTERA: COCCINELLIDAE) Bui Minh Hong*, Tran Thi Thanh Binh, Vu Thi Thu Hang Hanoi National University of Education, *bui_minhhong@yahoo.com ABSTRACT: The effects of temperature on the development and the predatory capacity of Micraspis discolor larvae were studied in laboratory Two temperature levels 23.50°C and 30.71oC on average, were used to assess the life cycle and developmental stages of the ladybird beetle M discolor The life cycle of M discolor was 27.38 days at 23.50°C and reduced to 19.77 days at 30.71°C, the total larval period was 13.42 and 9.9 days, respectively The pre-oviposition period of the ladybird beetle M discolor was 4.95 days at 23.50°C and 5.23 days at 30.71°C The female beetles laid 282 eggs and the hatching percentage of egg was 81.03 at 30.71°C and 179 eggs and the hatching percentage of egg was 88.73 at 23.50°C At temperature 30.71°C and 23.50°C, the pupal periods were 4.91 and 2.92 days, respectively The longevity of adult ladybird beetles was slightly prolonged when they were reared at 30.71°C compared with that when they were reared at 23.50°C Feeding on the second insturs of B brassicae the predatory capacity of M discolor larvae consumed an average 206.28 prey per day at 30.71°C and 161.84 prey per day at 23.50°C Keywords: Micraspis discolor, life cycle, longevity, predatory beetle INTRODUCTION The ladybird beetle have been known worldwide as a predator of a number of insects They are distributed in many countries of Asia [6] This beetle, often called ladybug or coccinellid, is the most commonly known of all beneficial insects In Europe these beetles are called ladybirds [16] They are of great economic important as predaceous both in their larval and adult stages on various important crop pests such as aphids, coccids and other soft bodied insects including aphids [5, 7], while the species M discolor feed on many inscet pests such as aphids, brown plant hopper, corn borer, Lepidopteron insects, mealybug, white flies [13] This predaceous coccinellids is also found in association with those insects infesting cruciferous vegetables, cabbage, bean, chilli, tobacco, cotton, maize, potato, soyabean and sweet potato [4] In Vietnam, the aphid is one of the most destructive pests and its distribution is field wide The aphids that attack cruciferae plants and other crops in the surrounding of Hanoi city At the time of infestation plants fail to give planting resulting in 20- 40% yield loss [12] In balanced ecosystems, insect pests are kept in check by their natural enemies (predators and parasitoids) They are considered as beneficial agents in agricultural systems Coccinellid predators play an important role in keeping aphid densities low in cruciferous vegetables and other field crops The study of the biology of M discolor would help to use this insect of proper biological control So, the present study was undertaken to observe the biology and the effect of temperature to the life cycle and predatory capacity of M discolor MATERIALS AND METHODS Collection and mass culture All experiments were done in the Faculty of Biology, Hanoi National University of Education, Vietnam, at room temperature to observe the biology of ladybird beetle The temperature was measured in the morning and afternoon of the day by electronic thermometers humidity M discolor were collected from various cruciferous crops, such as Brassica oleracea var capitata, Brassica chinensis L, Brassica oleracea var botrytis L, Brassica oleracea var gongylodes in Gia Lam, Thanh Tri and Dong Anh districts, Vietnam 37 Bui Minh Hong, Tran Thi Thanh Binh, Vu Thi Thu Hang Several males and females of the Micrapis discolor were collected by sweep net from the crucifer field and were confined in cages These beetles were paired and capulated in cages (18 × 13.5 × 6.5 cm) The bottom of the cages was covered with blotting paper Brevicoryne brassicae collected from cruciferous plants in the fields After that they have reared in cruciferous plants place in rearing sheft boxes until the second instars emerged Effects of temperatures on the developmental stages of M discolor The larvae and predator adults of Micrapis discolor were reared in the laboratory in order to supply necessary insects for the experiments, Several males and females of the Micrapis discolor were collected by sweep net from the crucifer field and were confined in cages These beetles were paired and copulated in cages (18 × 13.5 × 6.5 cm) The bottom of the cages was covered with blotting paper Immediately after hatching, larvae were transfered to the rearing cages (18 × 13.5 × 6.5 cm) and the second instars of Brevicoryne brassicae were provided as food on leaf cuttings of cruciferous crops with rearing method Brevicoryne brassicae collected from cruciferous plants in the fields After that they were reared in cruciferous plants placed in rearing sheft boxes until the second instars emerged The number of aphids was counted everyday in order to additional food for larvae and predator adult of Micrapis discolor until pupation Temperatures for rearing were room temperature, with 80% relative humidity Eggs were observed daily for eclosion, larvae were observed in Petri dishes, the feeding process of 30 larvae and fresh cruciferous leaves provided daily until pupation Pupae were observed daily for adult emergence and sex ratio was determined Eggs, larvae, pupae were also collected daily and preserved in 70% ethanol solution Effects of temperatures on the longevity of adult After emerged from pupae adults were 38 transfered to the rearing cages Two experiments were carried out and randomly triplicate: Experiment 1: at 30.71ºC (room temperature), experiment 2: 23.50ºC (room temperature) Each experiment was tracking 30 individual adults, food was provided daily and testing laboratory until adults died Time tracking of adult life in each experimental plot were recorded Feeding capacity of M discolor larvae on B brassicae Immediately after hatching, the larvae and predator adults of M discolor were taken and reared individualy in Petri dishes (6.0 × 1.0 cm) The predator larva of M discolor were tracking 15 individuals and candomly triplicate Each predator larva of M discolor was offered 150 second instar larvae of Brevicoryne brassicae every day The number of prey eaten daily and the development time of the predator larva of M discolor were recorded Statistical analysis The Data were analyzed by Analysis of Variance (ANOVA) and the mean values were separated by Duncan’s Multiple Range Test (DMRT) All analyses were performed using Descriptive statistics RESULTS AND DISCUSSION Effects of temperatures on the developmental stages of M discolor Effects of two temperature levels 23.50°C and 30.71°C used on the life cycle and developmental stages of the ladybird beetle M discolor were showed in table First instar The development of newly hatched larvae was 1.44 ± 0.16 days at 30.71°C and 1.89 ± 0.17 day at 23.50°C Chowdhury et al (2008) [3] found that the newly hatched larval period was from to days and on an average of 1.71 ± 0.20 days using bean aphid as food, which is similar to the results of our findings at 23.50°C Prodhan et al (1995) [11] reported that this period of M discolor was to days using bean aphid, which is higher than our findings TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 37-42 Table Effects of temperatures on the developmental stages of M discolor on B brassicae Duration (days) at two levels of temperature (°C) 30.71 23.50 2.00 ± 0.00 3.82 ± 0.06 1.44 ± 0.16 1.89 ± 0.17 2.04 ± 0.24 2.32 ± 0.18 2.52 ± 0.26 3.54 ± 0.17 3.90 ± 0.24 5.67 ± 0.24 9.9 ± 0.23 13.42 ± 0.19 2.92 ± 0.25 4.91 ± 0.12 4.95 ± 0.15 5.23 ± 0.14 19.77 ± 0.44 27 38 ± 0.15 Developmental stage Egg First instar Second instar Third instar Fourth instar Total larval period Pupa Pre-Oviposition Total life cycle Second instar nd The duration of the instar larvae was 2.04 ± 0.24 days at 30.71°C and 2.32 ± 0.18 day at 23.50°C (table 1) Nasiruddin & Islam (1979) [8] found that the duration of the 2nd instar larvae of M discolor was 2.4 to 3.1 days on different aphid Prodhan et al (1995) [11] found that the duration of 2nd instar of M discolor varied from to days using bean aphid using cabbage aphid as a host, which is comparatively similar to the results of the present findings Chowdhury et al (2008) [3] reported that the duration of the 2nd instar larvae of M discolor varied from 1.50 to days and the mean duration was 2.20 ± 0.16 days using bean aphid Third instar The result indicated that the duration of the 3rd instar larvae was 2.52 ± 0.26 days (30.71°C) and 3.54 ± 0.17 days (23.50°C) (table 1) Nasiruddin and Islam (1979) [8] reported that the duration of the 3rd instar larvae of M discolor varied from 3.1 to 3.8 days on maize, bean and chilli aphids as host Chowdhury et al (2008) [3] found that the duration of the 3rd instar larvae lasted from to days The mean duration of 3rd instar larvae was 3.10 ± 0.17 days Fourth instar Observation made on the larval duration of the 4th instar larvae on an average 3.90 ± 0.24 days with temperature 30.71 and 5.67 ± 0.24 days with temperature 23.50 (table 1) Prodhan et al (1995) [11] reported that the duration of final instar larvae of M discolor was days Nasiruddin & Islam (1979) [8] recorded that the duration of the 4th instar larvae of M discolor varied from 3.8 to 4.2 days on maize, bean and chilli aphids Duration of larval stages The total larval period (1st instar to 4th instar) was 9.9 ± 0.23 days at 30.71°C and 13.42 ± 0.19 days at 23.50°C (table 1) Nasiruddin & Islam (1979) [8] observed that the total period of M discolor was 11.8 to 12.5 days, which is simillar to the present findings Prodhan et al (1995) [11] observed that the total larval period of M discolor varied from to days on bean aphid This result was lower than the present study However, Sakurai et al (1991) [14] reported that the quality of food and environmental factors like temperature, humidity also play an important role on different aspects of the biology of coccinellid beetles So, this variation may be due to the quality of food and environmental factors like temperature and humidity Pupal period The pupal period was 2.92 ± 0.25 days at 30.71°C and 4.91 ± 0.12 days at 23.50°C (table 1) Nagammuang (1987) [9] recorded that the mean pupal duration of M discolor was 3.43 ± 0.57 days when larvae reared on A craccivora Different findings revealed that the pupal period of coccinellid beetles varied with the different of food and it was correlated with the temperature [14] Pre-Oviposition 39 Bui Minh Hong, Tran Thi Thanh Binh, Vu Thi Thu Hang The time between the date of adult emergence and the first egg deposition was considered as pre-oviposition period The preovipositon period of M discolor was 4.95 ± 0.15 days at 30.71°C and 5.23 ± 0.14 days at 23.50°C (table 1) Agarwala et al (1988) [1] observed that the pre-oviposition period was to 10.33 days on A craccivora at 16-26°C Prodhan et al (1995) [11] studied that the pre-oviposition preiod of M discolor was to7 days Adult longevity The longevity of adult ladybird beetles was counted from the emergence of the adult to its death At 30.71°C, the longevity of the ladybird beetles was 32 ± 0.15 days, and at 23.50°C the longevity of the ladybird beetles was 22 ± 0.14 days (table 2) Table Effects of temperatures on the longevity of adult Average temperature (°C) The longevity of adult (days) 30.71 32 ± 0.15 23.50 22 ± 0.14 It showed that the longevity of the ladybird beetle at 23.50°C was shorter than that at 30.71°C Samal & Misra (1985) [15] reported that the adult of M discolor fed on Nilaparvata lugens lived for 24 to 40 days in September-November Ngammuang (1987) [9] found that the longevity of male and female were 37.8 ± 15.24 and 59.53 ± 23.53 days when fed on A craccivora, in the laboratory at temperature of 28 ± 2°C with 74% RH Fecundity and hatching rate of M discolor In the laboratory, the number of eggs laid per female were 348 The mean hatching percentage were 83.03 at temperature of 30.71°C and the number of eggs laid per female were 222 The mean hatching percentage were 88.73 at temperature of 23.50°C (table 3) Table Effects of temperatures on the fecundity and hatching rate of M discolor Average temperature (°C ) No of observation 30.71 23.50 No of egg laid 348 222 No of egg hatched 282 197 % of egg hatching 81.03 88.73 Ngammuang (1987) [9] reported that the number of eggs deposited by on female of M discolor was 181.07 ± 6.37 on A craccivora, and 70.15% eggs were hatched Prodhan et al (1995) [11] observed that the facundity of female varied form 200-300 eggs with mean of 270.5 and with average 70.15% eggs were hatched These results seem to be close with our findings Omkar & Pervez (2002) [10] reported that the oviposition peak tended to shift towards younger females and the oviposition rate increased with increase in temperature from 20 to 27°C The maximum fecundity and percent egg viability was 750 eggs and 95% at 27°C and minimum 385 eggs and 65% at 20°C, 40 respectively, that is higher than the present findings Feeding capacity of M discolor larvae on B brassicae The results presented in table show the predatory capacity of M discolor larvae of each stage on B brassicae was assessed at two rearing temperatures The predatory capacity of first instar larvae was lowest, eating an average 16.89 prey per day at 30.71°C and 14.54 prey per day at 23.50°C The capacity of the second instar larvae was eating an average 33.82 prey per day at 30.71°C and 27.23 prey per day at 23.50°C TẠP CHÍ SINH HỌC, 2013, 35(1): 37-42 Table Feeding capacity of M discolor larvae on B brassicae Developmental stage First instar Second instar Third instar Fourth instar Total preys eaten First instar Second instar Third instar Fourth instar Total preys eaten Average temperature (°C) 30.71 23.50 The capacity of the third instar larvae was slightly higher, eating an average 63.40 prey per day at 30.71°C and 47.90 prey per day at 23.50°C At the fourth instar stage, the larvae had the highest predatory capacity, eating an average of 92.17 prey per day at 30.71°C and 72.17 prey per day at 23.50°C In total, each lavrae can eat an average 206.28 prey per day at 30.71°C and 161.84 prey per day at 23.50°C Begum et al (2002) [2] reported that each larva of M discolor consumed an average of 47.6 third instar brown plant hopper CONCLUSION Rearing temperature affected both growth and development of M Discolor, the cycle of this species was prolonged at low temperature The feeding capacity of M discolor larvae was significantly greater at 30.71°C than at 23.50°C The data from this work also provided further evidence that temperature has affected adult longevity and fecundity and hatching rate of M discolor REFERENCES Agarwala B K., Das S., Senchowdhuri M., 1988 Biology and food relation of Micraspis discolor (F.) an aphidophagous coccinellid in India J Aphidology, 2(1-2): 7-17 Begum M A., Mahbuba J., Bari M N., Hossain M M., Afsana N., 2002 Potentiality of Micraspis discolor (F.) as a Predatory capacity of different instars of M discolor (prey/day) 16.89 ± 1.15 33.82 ± 0.78 63.40 ± 1.22 92.17 ± 1.50 206.28 ± 1.66 14.54 ± 0.19 27.23 ± 0.26 47.90 ± 0.28 72.17 ± 1.50 161.84 ± 0.62 Biological Control of Nilaparvata lugens (Stal) Online Journal of Biological Sciences, 2(9): 630-632 Chowdhury S P., Ahat M., Amin M R., Hasan S M., 2008 Biology of ladybird beetle Micraspis discolor F (Coleoptera: Coccinellidae) Int J Sustain Crop Prod., 3(3): 39-44 Gautam R D., Chander S., Sharma V K., Singh R., 1995 Aphids infesting safflower, their predatory complex and effect on oil content Ann Plant Prot Sci., 3: 27-30 Hippa H., Kepeken S D., Laine T., 1978 On the feeding biology of Coccinella hieroglyphica L (Coleoptera: Coccinellidae) Kevo-subaretitic Ras Station, 14: 18-20 Islam M A., Nasiruddin M., 1978 Life history and feeding habit of Verania discolor (F.) Bangladesh J Biol Sci., 6+7(I): 48-49 Kring T J., Gilstrap F E., Michels G J., 1985 Role of indegenous coccinellid in regulating green bugs (Homoptera: Aphididae) on Texas grain sorghum J Econ Ent., 78(1): 269-273 Nasiruddin M., Islam M A., 1979 Verania discolor F (Coleoptera: Cocinellidae) an effective predator on different species of aphid Bangladesh J., 6(1): 69-71 Ngammuang, Pa-Nan, 1987 Study on the coccinellidae, Micraspis discolor (F.) 41 Bui Minh Hong, Tran Thi Thanh Binh, Vu Thi Thu Hang (Coleoptera: Coccinellidae) and its role as biological control agent Bankok (Tailand) 10 Omkar, Pervez A., 2002 Influence of Temperature on Age-Specific Fecundity of the Ladybeetle Micraspis discolor (Fabricius) International Journal of Tropical Insect Science, 22(1): 61-65 Published online: 19 September 2011 11 Prodhan N Z H., Haque M A., Khan A B., Rahman A K M M., 1995 Biology of M discolor (F.) (Coleoptera: Coccinellidae) and its susceptibility to two insecticides Bangladesh J Ent., 5(1-2): 11-17 12 Quach Thi Ngo, 2000 Study on the aphis (Homoptera: Aphididae) on main crops at North Vietnam and control methods, Ph.D Dissertation, Hanoi Agricultural University, 152 pp 13 Rao N V., Reddy A S., Rao K T., 1989 Natural enemies of cotton white fly Bemesia tabaci Gunnandius in relation to host population and weather factors J Bio Control., 3: 10-12 14 Sakurai H., Yoshida N., Kobayashi C., Taheda S., 1991 Effect of temperature and day length on oviposition and growth of lady bird bettle, Coccinella septumpunctata Res Bull of the faculty of Agri Gifu University, 56: 45-50 15 Samal P., Misra B C., 1985 Morphology and biology of the coccinellid beetle Verania discolor Fab (Coleoptera: Coccinellidae) a predator on rice brown plant hopper Nilaparvata lugens (Stal) Oryza, 22(1): 58-60 16 William F L., 2002 Lady beetle Ohio State University Extension Fact Sheet, Horticulture and Crop Science Division of Wildlife, 2021 Coffey Rd Columbus, Ohio43210-1086 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN VÒNG ĐỜI VÀ KHẢ NĂNG ĂN MỒI CỦA BỌ RÙA ĐỎ MICRASPIS DISCOLOR FABRICIUS (COLEOPTERA: COCCINELLIDAE) Bùi Minh Hồng, Trần Thị Thanh Bình, Vũ Thị Thu Hằng Trường đại học Sư phạm Hà Nội TÓM TẮT Ảnh hưởng ngưỡng nhiệt độ 23,50°C 30,71°C đến vòng đời khả ăn sâu non bọ rùa đỏ Micraspis discolor phịng thí nghiệm nghiên cứu với mồi rệp xám Ở điều kiện nhiệt độ 23,50°C, thời gian hồn thành vịng đời bọ rùa đỏ 27,38 ngày, giai đoạn sâu non hoàn thành pha phát dục 13,42 ngày, giai đoạn nhộng 4,91 ngày; giai đoạn trước đẻ trứng bọ rùa đỏ 5,23 ngày, đẻ 179 trứng tỷ lệ trứng nở 88,73%; khả ăn rệp B brassicae 161,84 rệp/ngày Ở điều kiện nhiệt độ 30,71°C, thời gian hồn thành vịng đời bọ rùa đỏ 19,77 ngày, giai đoạn sâu non hoàn thành pha phát dục 9,9 ngày; giai đoạn nhộng 2,9 ngày; giai đoạn trước đẻ trứng 4,95 ngày; đẻ 288 trứng tỷ lệ trứng nở 81,03%; khả ăn rệp B brassicae sâu non 206,28 rệp/ngày Từ khóa: Micraspis discolors, khả ăn, nhiệt độ, vòng đời, thời gian sống Ngày nhận bài: 13-12-2012 42