Nghiên cứu đã bước đầu xác định thành phần và hàm lượng flavonoid có trong 3 loài thuộc chi Passiflora được trồng 4 tháng, từ đó làm cơ sở so sánh, đánh giá hàm lượng dược chất với những lần thu trồng tiếp theo để tối ưu hóa quy trình sản xuất dược liệu.
SO SÁNH THÀNH PHẦN FLAVONOID CỦA BA LOÀI THUỘC CHI PASSIFLORA Phạm Vi Minh Ngọc, Nguyễn Trọng Nhân, Nguyễn Quang Nhật, Võ Ngọc Minh Thy, Lê Thị Yến Nhi, Thái Hồng Đăng Khoa Dược, trường Đại học Công nghệ TP Hồ Chí Minh (HUTECH) TĨM TẮT Mục tiêu: So sánh thành phần flavonoid có lồi thuộc chi Passiflora thu hoạch lúc tháng – Định tính phương pháp sắc kí lớp mỏng – Định lượng quang phổ UV-Vis Kết quả: Dựa kết sắc kí lớp mỏng cho thấy thành phần flavonoid có Lạc tiên tây, lạc tiên ta chanh dây gồm có flavon acid phenolic Giữa ba dược liệu có vết tương đồng màu sắc Rf 0.15; 0.23; 0.48, lạc tiên tây lạc tiên ta có thêm vết tương đồng Rf 0.69 Hàm lượng flavonoid tồn phần tính theo vitexin cao có Lạc tiên tây (2,82%), với thân có hàm lượng flavonoid cao Kết luận: Nghiên cứu bước đầu xác định thành phần hàm lượng flavonoid có lồi thuộc chi Passiflora trồng tháng, từ làm sở so sánh, đánh giá hàm lượng dược chất với lần thu trồng để tối ưu hóa quy trình sản xuất dược liệu ĐẶT VẤN ĐỀ Thuộc họ Passifloraceae, chi Passiflora bao gồm gần 600 loài (Ulmer MacDougal, 2004) Đây loài dây leo, thân mềm, thân có nhiều lơng, đầu tua thành lị xo, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới Đông Nam Á Hawai Một số loài sử dụng rộng rãi loại thuốc dân gian, điển hình thuốc an thần Mặc dù lồi sử dụng cho mục đích, nhiên, nghiên cứu với loài Passiflora khác thành phần hóa học khơng đồng chúng Do thành phần hóa học khác dẫn đến mức độ hiệu điều trị khác nhau, nên việc kiểm soát chất lượng dựa thành phần hóa học lồi cần thiết Chính thế, cơng ty TNHH TM-SX Hồng Đài Việt đặt hàng thực nghiên cứu đề tài: “SO SÁNH THÀNH PHẦN FLAVONOID CỦA BA LOÀI THUỘC CHI PASSIFLORA” Nghiên cứu thực nhằm mục đích xác định hàm lượng flavonoid có Lạc Tiên Tây thu hoạch sau tháng trồng trọt PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu Lạc tiên tây Passiflora incarnata, lạc tiên ta Passiflora foetida chanh dây Passiflora edulis thu mẫu thân tỉnh Phú Yên vào tháng 04 năm 2019, định danh dựa tài liệu tham khảo [5] [6], sấy o nhiệt độ 60 C xay đến kích thước khoảng 3mm 2.3 Sắc kí lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel GF254 Dung khai triển: Ethyl acetat- acid formic - acid acetic băng- nước (100:11:11:35) Cho hỗn hợp dung mơi vào bình gạn lắc đều, thu lấy lớp 533 Dung dịch thử: Lấy 1g bột dược liệu, thêm 10ml methanol Chiết siêu âm 10 phút, lọc Cách tiến hành: Chấm dải dài mm mỏng µl dung dịch thử loài Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng sấy khô 120 °C 2-3 phút Phun lên mỏng dung dịch 2aminoethyl diphenyl borat 1% methanol, sau phun dung dịch polyethylenglycol (PEG) 400 5% methanol Để khơ mỏng ngồi khơng khí 30 phút Quan sát ánh sáng từ ngoại bước sóng 365nm 2.4 Định lƣợng flavonoid tồn phần tính theo vitexin Mẫu thử: Cân xác khoảng 0,25 g bột dược liệu (qua rây sô 250) cho vào bình nón 250 ml, thêm 40 ml ethanol 60 % đun hồi lưu cách thủy 30 phút Để nguội, lọc dịch chiết qua giấy lọc gấp nếp vào bình định mức 100 ml Chuyển tồn giấy lọc bã dược liệu vào bình nón tiếp tục chiết thêm lần nữa, lần 30 ml ethanol 60 % Lọc, gộp dịch lọc vào bình định mức trên, thêm ethanol 60 % tới vạch, lắc đều, thu dung dịch A Lấy xác 5ml dung dịch A cho vào cốc cỏ mỏ, cô cách thuỷ đến cắn khô Dùng 10 ml hỗn hợp methanol - acid acetic băng (10: 100) để hoà tan chuyển tồn cắn vào bình định mức 25ml, thêm 10ml hỗn hợp chứa acid boric 2,5 % acid oxalic 2% acid formic khan Bổ sung acid acetic khan tới vạch, lắc Mẫu trắng: Lấy xác ml dung dịch A cho vào cốc có mỏ, cô cách thủy tới cắn khô Dùng 10 ml hỗn hợp methanol – acid acetic băng (10:100) để hòa tan chuyển tồn cắn vàobình định mức 25 ml, thêm 10 ml acid formic khan Bổ sung acid acetic khan tới vạch, lắc Sau 30 min, đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 401 nm Tính hàm lượng phần trăm flavonoid tồn phần (tính theo vitexin) theo A (1 %, cm) Lấy 628 giá trị cùa A (1 %, cm) vitexin bước sóng 401nm THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ: 3.1 So sánh thành phần flavonoid phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng Bản mỏng phun dung dịch 2-aminoethyl diphenyl borat 1% methanol để phát hợp chất có cấu trúc flavonoid aloin, PEG tăng độ nhạy (từ 10 - 2.5 µg) Kết phát huỳnh quang [4] mạnh thu UV 365 nm, phản ứng phát huỳnh quang phụ thuộc vào cấu trúc hóa học chất Bảng 1: Các thơng số Rf từ sắc ký đồ 534 Rf Màu sắc 0.70 Nâu vàng 0.69 Xanh 0.64 Nâu vàng 0.60 Xanh 0.53 Nâu vàng 0.48 Xanh dương 0.40 Xanh 0.32 Xanh 0.28 Xanh 0.23 Xanh 0.15 Xanh Hợp chất Flavon Acid phenolic Flavon F Rf 0,5 S Hình 1: Sắc kí đồ chanh dây (D), lạc tiên tây (TA) lạc tiên ta (CB) Nhận xét: Dựa vào sắc kí đồ tài liệu tham khảo [4], [6] ta nhận thấy: – Sắc kí đồ chanh dây có vết với Rf sau: 0.15; 0.23; 0.32; 0.48; 0.53; 0.60; 0.70 tương ứng với hợp chất acid phenolic, flavon – Sắc kí đồ lạc tiên tây có vết với Rf sau: 0.15; 0.23; 0.48; 0.53; 0.60; 0.69 tương ứng với hợp chất acid phenolic, flavon – Sắc kí đồ lạc tiên ta có vết với Rf sau: 0.15; 0.23; 0.28; 0.40; 0.48; 0.64; 0.69 tương ứng với cấu trúc hoạt chất acid phenolic flavon – Giữa ba dược liệu có vết tương đồng màu sắc Rf 0.15; 0.23; 0.48, lạc tiên tây lạc tiên ta có thêm vết tương đồng Rf 0.69 3.2 Định lƣợng flavonoid tồn phần tính theo vitexin: Bảng 2: Hàm lượng flavonoid tồn phần tính theo vitexin (%) MẪU LÁ THÂN Hàm lƣợng flavonoid tồn phần tính theo vitexin (%) Lạc tiên tây 2.8223 Lạc tiên ta 1.7110 Chanh dây 1.4289 Lạc tiên tây 0.2745 Lạc tiên ta 0.1824 Chanh dây 0.4196 535 Nhận xét: – Đối với phận dùng Lá: Hàm lượng % flavonoid toàn phần loài Lạc tiên tây cao (2,82%), Chanh dây thấp (1,43%) – Đối với phận dùng Thân: Hàm lượng % flavonoid toàn phần loài Chanh dây cao (0.42%), Lạc tiên ta thấp (0.18%) – Khi so sánh hàm lượng % flavonoid tồn phần phận dùng Lá có hàm lượng cao từ – 10 lần so với thân KẾT LUẬN VÀ HƢỚNG PHÁT TRIỂN ĐỀ TÀI 4.1 Kết luận Việc đánh giá đặc điểm hình thái giải phẫu thực vật kết hợp với phương pháp sắc kí lớp mỏng để định danh phân biệt loài Passiflora Sắc kí lớp mỏng giúp xác định nhanh hợp chất có dược liệu Từ kết định lượng cho thấy việc sử dụng chế phẩm từ cho hiệu điều trị cao hơn, mặc khác dược liệu có lẫn nhiều thân gây giảm nồng độ flavonoid định lượng, cần có tiêu chuẩn quy định lượng tạp chất thân dược liệu 4.2 Hƣớng phát triển Sử dụng chất chuẩn vitexin, isovitexin, orientin, isoorientin để xác định xác hợp chất flavonoid có mẫu dược liệu Kết nghiên cứu sử dụng làm liệu so sánh hàm lượng dược chất với lần thu hoạch lúc tháng tháng nhằm tối ưu hóa quy trình sản xuất dược liệu phục vụ nghiên cứu khoa học sản xuất thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Bộ Y Tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.768 – 769 [2] Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V, Nhà xuất Y học, Hà Nội [3] Bộ mơn Dược liệu, Giáo trình Phương pháp nghiên cứu dược liệu (2016), Trường đại học Y dược TPHCM, tr 16 – 24, tr 50 – 77 Tiếng nƣớc ngoài: [4] WAGNERANDBLADT (2001), Plant drug analysis a thin layer chromatography atlas , page 230– 231 [5] Xi fan lian shu (2007), Flora of China 13, page 141-147 [6] British Pharmacopoeia (2016) 536 ... Tính hàm lượng phần trăm flavonoid tồn phần (tính theo vitexin) theo A (1 %, cm) Lấy 628 giá trị cùa A (1 %, cm) vitexin bước sóng 401nm THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ: 3.1 So sánh thành phần flavonoid phƣơng... với phận dùng Lá: Hàm lượng % flavonoid toàn phần loài Lạc tiên tây cao (2,82%), Chanh dây thấp (1,43%) – Đối với phận dùng Thân: Hàm lượng % flavonoid toàn phần loài Chanh dây cao (0.42%), Lạc... Chanh dây cao (0.42%), Lạc tiên ta thấp (0.18%) – Khi so sánh hàm lượng % flavonoid toàn phần phận dùng Lá có hàm lượng cao từ – 10 lần so với thân KẾT LUẬN VÀ HƢỚNG PHÁT TRIỂN ĐỀ TÀI 4.1 Kết