LỜI CẢM ƠN
DANH MUC
DANH MỤC BẢNG
MỞ ĐẦU
CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Giới thiệu chung về ty thể
Hình 1.1. Hình dạng bình thƣờng (trái) và dạng biến đổi (phải) của ty thể [15].
Hình 1.2. Cấu trúc ty thể [16].
Hình 1.3. Cấu trúc màng trong ty thể [13].
Hình 1.4. Ty thể và quá trình trao đổi năng lƣợng trong tế bào [19].
Hình 1.5. Hệ gen ty thể [32]
Hình 1.6. Thuyết cổ chai di truyền [51].
1.2. Đột biến gen ty thể và các bệnh hoặc hội chứng liên quan
Bảng 1.1. Triệu chứng lâm sàng trên các cơ quan của bệnh ty thể [14].
1.3. Các phƣơng pháp phát hiện đột biến gen ty thể
CHƢƠNG 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
2.1. Nguyên liệu
2.2. Phƣơng pháp
2.2.1. Biến nạp và nuôi cấy tế bào E. coli chứa plasmid mang đoạn gen có và không có đột biến gen ty thể.
2.2.2. Tách chiết và định lượng DNA
2.2.3. Kỹ thuật đa hình phân cắt các đoạn giới hạn kết hợp với PCR (PCR-RFLP)
Bảng 2.1. Trình tự mồi chu trình nhiệt và kích thƣớc sản phẩm PCR
2.2.4. Điện di trên gel agarose và gel polyacylamide
2.2.5. Kỹ thuật real-time PCR sử dụng mẫu dò huỳnh quang dạng khóa cầu acid nucleic (LNA)
2.2.6. Phương pháp thống kê.
Bảng 2.2. Trình tự mồi và mẫu dò cho real-time PCR
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Tạo các mẫu đối chứng cho real-time PCR phát hiện và định lƣợng 6 đột biến gen ty thể phổ biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A.
Bảng 3.1. Kết quả định lƣợng plasmid tinh sạch bằng máy đo quang phổ
Hình 3.1. Kết quả điện di plasmid tinh sạch
Hình 3.2. Kiểm tra sản phẩm PCR các đoạn gen ty thể bằng điện di trên agarose 2%
Bảng 3.2. Thành phần cắt enzyme giới hạn
3.2. Tạo hỗn hơp
Hình 3.4. Biểu đồ tƣơng quan tuyến tính giữa chu kì ngƣỡng và số bản sao ban đầu của các đột biến
Bảng 3.3. Hiệu suất PCR và giá trị tƣơng quan tuyến tính của đƣờng chuẩn các đột biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A
Hình 3.5. Biểu đồ tƣơng quan tuyến tính giữa chu kì ngƣỡng và số bản sao ban đầu của các đột biến sau khi đƣợc xác định điều kiện thích hợp.
Bảng 3.4. Hiệu suất real-time PCR và giá trị tƣơng quan tuyến tính của đƣờng chuẩn các đột biến A3243G, G3380A, A8344G, T8993C, T8993G, G11778A sau khi đƣợc xác định điều kiện thích hợp
Hình 3.6. Đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR các mẫu bệnh phẩm không mang các đột biến
Hình 3.7. Đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR một trƣờng hợp dƣơng tính với A3243G và các đoạn gen khác nhau trên hệ gen ty thể
Hình 3.8. Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng realtime PCR khi sử dụng khuôn là 1% tỷ lệ đột biến
Hình 3.9. Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR của các đột biến quan tâm sử dụng master mix đƣợc bảo quản ở 25oC sau 7 ngày.
Hình 3.10. Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại phản ứng real time PCR của các đột biến quan tâm sử dụng master mix đƣợc bảo quản ở 4oC sau 20 ngày.
3.3.1. Điều tra sự có mặt của đột biến A3243G, G3380A, A8344G, G11778A, T8993G, T8993C ở các bệnh nhân nghi bị bệnh ty thể
Hình 3.11. Đƣờng cong khuếch đại đột biến A3243G ở các bệnh nhân BN3, BN4, BN5, BN10, BN11, BN12
Hình 3.12. Biểu đồ đƣờng cong khuếch đại và biểu đồ thể hiện sự tƣơng quan giữa chu kì ngƣỡng và số bản sao ban đầu của các thành viên trong gia đình bệnh nhân MELAS
Bảng 3.5. Triệu chứng lâm sàng và tỷ lệ đột biến A3243G của bệnh nhân và các thành viên trong các gia đình bệnh nhân
KẾT LUẬN
KIẾN NGHỊ
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tham khảo trang web.