Đánh giá tính khả dụng của vắc xin bạch hầu đông khô RD6 dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐỖ KHÁNH LINH ĐÁNH GIÁ TÍNH KHẢ DỤNG CỦA VẮC XIN BẠCH HẦU ĐÔNG KHÔ RD6 DỰ TUYỂN MẪU CHUẨN QUỐC GIA LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - ĐỖ KHÁNH LINH ĐÁNH GIÁ TÍNH KHẢ DỤNG CỦA VẮC XIN BẠCH HẦU ĐÔNG KHÔ RD6 DỰ TUYỂN MẪU CHUẨN QUỐC GIA Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM VĂN HÙNG TS TRẦN THỊ THANH HUYỀN Hà Nội – 2016 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nhận giúp đỡ nhiệt tình nhiều người Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Phạm Văn Hùng, Phó Viện trưởng Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế, TS Trần Thị Thanh Huyền, Bộ môn Vi sinh vật học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên ĐHQG Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, cán môn Vi sinh vật học khoa Sinh học trường Đại học Khoa học Tự nhiên Đại học Quốc gia Hà Nội có nhiều dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình học tập Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế tài trợ kinh phí để tơi thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn TS.Trần Văn Bé, Viện trưởng Viện vắc xin Sinh phẩm Y tế tạo điều kiện vềphịng thí nghiệm cung cấp lượng lớn động vật thí nghiệm giúp tơi hồn thành luận văn Để hồn thành luận văn, tơi nhận giúp đỡ quý báu bạn đồng nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn TS Trần Lan Phương, CN.Nguyễn Lan Anh, anh chị đồng nghiệp phòng QC,Viện vắc xin Sinh phẩm Y tếvà Ths Lê Thị Hoàng Yến, CN Nguyễn Phương Liên anh chị đồng nghiệp Khoa Vi khuẩn – Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, vô biết ơn gia đình, bạn bè giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày tháng 2016 Học Viên Đỗ Khánh Linh năm MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1.VI KHUẨN BẠCH HẦU VÀ BỆNH BẠCH HẦU 1.1.1 Những nét chung vi khuẩn bạch hầu 1.1.2Độc tố bạch hầu 1.1.3 Bệnh sinh 1.1.4 Dịch tễ học 1.2 VẮC XIN BẠCH HẦU 1.3 MẪU CHUẨN 1.3.1 Về thuật ngữ 1.3.2 Về phƣơng pháp điều chế 1.3.3 Tiêu chuẩn chất lƣợng 11 1.3.4 Vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn quốc tế .13 1.3.5 Vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn Quốc gia 14 1.4 YÊU CẦU ĐỐI VỚI VIỆC CHUẨN ĐỊNH MẪU CHUẨN QUỐC GIA 16 1.5 ĐỘNG VẬT DÙNG TRONG KIỂM ĐỊNH VẮC XIN BẠCH HẦU 17 1.6 PHƢƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU BẠCH HẦU 19 1.6.1 Phƣơng pháp thử thách chuột lang 20 1.6.2 Phƣơng pháp chuẩn độ kháng thể chuột nhắt .21 1.7 ĐỘ ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN 23 1.7.1 Đánh giá độ ổn định dài hạn (Long- term Stability Studies) 23 1.7.2 Đánh giá độ ổn định cấp tốc (Accelerated Stability Testing) 23 1.7.2.1 Điều kiện tiến hành phƣơng pháp cấp tốc 23 1.7.3 Dự đoán tuổi thọ sản phẩm theo nguyên lý Vant-Hoff [1, 16] 23 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG,VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 25 2.2.Vật liệu nghiên cứu – trang thiết bị sinh phẩm vật tƣ tiêu hao 25 2.2.1 Động vật thí nghiệm 25 2.2.2 Sinh phẩm –hóa chất 25 2.2.3 Vật tƣ trang thiết bị 25 2.3 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 26 2.4 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 26 2.5 CỠ MẪU NGHIÊN CỨU 26 2.6 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.6.1 Đánh giá cảm quan 27 2.6.2 Đánh giá vô trùng 27 2.6.3 Đánh giá độ ẩm tồn dƣ 27 2.6.4 Đánh giá độ ch n hông 28 2.6.5 Đánh giá nhận dạng 28 2.6.6 Đánh giá tính đồng khối lƣợng 30 2.6.7 Đánh giá công hiệu tính đồng cơng hiệu 30 2.6.8 Dự đoán hạn dùng vắc xin mẫu chuẩn 32 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 ĐÁNH GIÁ CÁC CHỈ TIÊU SAU XUẤT XƢỞNG 34 3.1.1 Đánh giá cảm quan 34 3.1.2 Đánh giá tiêu vô trùng .35 3.1.3 Đánh giá độ chân không 36 3.1.4 Đánh giá độ ẩm tồn dƣ 36 3.1.5 Đánh giá nhận dạng 38 3.2 ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐỒNG NHẤT 39 3.2.1 Đánh giá tính đồng trọng lƣợng khô 39 3.2.2 Đánh giá tính đồng cơng hiệu 40 3.3 DỰ ĐOÁN TUỔI THỌ CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN 43 KẾT LUẬN 46 KIẾN NGHỊ 47 Tài Liệu Tham Khảo 48 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 1.1 Hình ảnh vi khuẩn bạch hầu 1.2 Cấu trúc độc tố bạch hầu 1.3 Màng giả hầu họng độc tố bạch hầu 1.4 Nhãn vắc xin Bạch hầu mẫu chuẩn Quốc tế lần thứ tƣ 11 2.1 Sơ đồ nhỏ mẫu phƣơng pháp nhận dạng bạch hầu 29 3.1 Sự nguyên vẹn ống mẫu RD6 34 3.2 3.3 Đồ thị biểu diễn độ chụm ết độ ẩm tồn dƣ mẫu RD6 Kết nhận dạng thành phần bạch hầu mẫu RD6 37 38 Biểu đồ biểu thị trọng lƣợng hô mẫu RD6 thực NICVB 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 IVAC Đồ thị biểu diễn độ chụm ết trọng lƣợng hô mẫu RD6 Biểu đồ biểu thị ết công hiệu RD6 thực NICVB IVAC Đồ thị biểu diễn độ chụm ết công hiệu mẫu RD6 Đồ thị biểu diễn Sự phụ thuộc công hiệu bạch hầu RD6 bảo quản nhiệt độ 500C theo tháng 39 40 41 42 44 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên Bảng Trang 2.1 Công thức pha lỗng vắc xin 31 2.2 Cơng thức pha mẫu RD6 pha loãng 34 3.1 Kết kiểm tra cảm quan mẫu chuẩn RD6 NICVB IVAC 35 3.2 Kết kiểm tra vô trùng NICVB IVAC 36 3.3 Kết kiểm tra chân không mẫu chuẩn RD6 36 3.4 Kết độ ẩm tồn dư thực NICVB IVAC 37 3.5 Kết công hiệu RD6 (trên chuột lang) thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 500C/ độ ẩm 75% 43 DANH MỤC CH VIẾT TẮT STT C vi t tắt C iải ATCC American Type Culture Collection (Ngân hàng chủng chuẩn Hoa Kỳ) ĐTBH Độc tố bạch hầu DTP Diphtheria- Tetanus- Pertussis (Bạch hầu –Uốn ván – Ho gà ) ED50 Effective dose (Liều bảo vệ 50% động vật thí nghiệm) IU International Unit (Đơn vị quốc tế) KĐTBH Kháng độc tố bạch hầu LD50 Lethal dose 50 (Liều gây chết 50 % động vật thí nghiệm sau 96 giờ) Lf Limes flocculation: Đơn vị lên quốc tế MCQG Mẫu chuẩn quốc gia 10 MCQT Mẫu chuẩn quốc tế 11 NIBSC National Institute for Biological Standards and Control (Viện Quốc gia Sinh phẩm chuẩn chuẩn sinh học) 12 NICVB National Instistute for Control of Vaccines and Biologicals (Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm y tế) 13 NMSL Nƣớc muối sinh lý 14 SSI Staten Serum institiute (Viện huyết quốc gia Đan Mạch) 15 IVAC Institute of vaccine and biological (Viện vắc xin chế phẩm sinh học) MỞ ĐẦU Bạch hầu bệnh nhiễm huẩn nhiễm độc vi huẩn Gram ( Corynebacterium diphtheriae g y Bệnh bạch hầu g y nhiều vụ dịch lớn nguy hiểm nhiều quốc gia giới Và sử dụng vắc xin biện pháp quan trọng để ph ng bệnh bạch hầu Chất lƣợng vắc xin bạch hầu đƣợc đánh giá qua tiêu chí: an tồn hiệu Thử nghiệm iểm tra cơng hiệu thử nghiệm cần thiết để đánh giá hiệu vắc xin Thử nghiệm cần c mẫu chuẩn công hiệu vắc xin mẫu thử đƣợc xác định qua so sánh tƣơng quan với vắc xin mẫu chuẩn biết trƣớc giá trị công hiệu Để thống kết kiểm định vắc xin bạch hầu toàn giới, Tổ chức y tế giới (WHO) thiết lập mẫu chuẩn bạch hầu quốc tế, NIBSC sản xuất sử dụng mẫu chuẩn lần thứ tƣ với hàm lƣợng 213 IU ống Do số lƣợng mẫu chuẩn Quốc tế có hạn nên WHO khuyến cáo quốc gia nên c mẫu chuẩn địa phƣơng cho iểm định t ng lô vắc xin[40] Ở Việt Nam vắc xin DTP sản xuất nƣớc ch ng ta c n nhập vắc xin DTP nhiều nƣớc để phục vụ nhu cầu phòng bệnh nh n d n đ việc iểm tra công hiệu thành phần bạch hầu c tần suất há lớn Nhà sản xuất cần vắc xin mẫu chuẩn quốc gia để kiểm định công hiệu vắc xin trình sản xuất c n Viện iểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm y tế cần mẫu chuẩn Quốc gia để iểm định vắc xin xuất xƣởng đ ng Hiện nay, ch ng ta chƣa c vắc xin mẫu chuẩn quốc gia bạch hầu thêm vào đ mẫu chuẩn Quốc tế c đơn vị chuột lang Vì vậy, mẫu chuẩn Quốc gia đƣợc thiết lập nối chuẩn với MCQT theo đơn vị miễn dịch chuột lang Phƣơng pháp c chi phí tốn khả n ng c đƣợc lƣợng chuột lang lớn để làm thƣờng quy khơng khả thi với nhiều phịng thí nghiệm Do vậy, việc chuyển đổi sang phƣơng pháp dùng chuột nhắt sử dụng đơn vị chuột nhắt cần thiết Việc chuyển đổi đƣợc thực t ng Quốc gia Song chƣa c phòng thí nghiệm cơng bố T l đ Viện iểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm y tế phối hợp với Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế (IVAC) sản xuất vắc xin bạch hầu dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia tiến hành: “Xác định tính khả dụng Vắc xin c đ RD6 dự tuyểnmẫu chuẩn Quốc ia” với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình chuẩn định chất lượng Vắc xin mẫu chuẩn Quốc gia Bạch hầu đông khô để làm thước đo đánh giá, kiểm định vắc xin xuất xưởng phục vụ cho sức khỏe cộng đồng Mục tiêu cụ thể: Đánh giá tiêu sau xuất xƣởng Xác định giá trị công hiệu bạch hầu chuột lang Vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển Dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn Đánh giá tính đồng vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển thể sử dụng hai ết để đƣa vào tính giá trị trung bình độ ẩm tồn dƣ mẫu chuẩn RD6 Độ ẩm tồn dư % 1.8 1.75 ĐÂTD (%) GM+2*S D GM-2*SD 1.7 1.65 GM Linear (GM) 1.6 1.55 Lần làm 10 15 Hình 3.2: Đồ t ị biểu diễn độ c ụm t độ ẩm tồn dƣ mẫu RD6 Nhìn vào đồ thị ta thấy ết nằm hoảng trung bình ±2*SD tức đạt độ chụm Do đ độ ẩm tồn dƣ mẫu RD6 đƣợc tính = trung bình nh n ết NICVB IVAC = 69 (% , CV= 3,1 (%) Độ ẩm tồn dƣ số quan trọng vắc xin mẫu chuẩn ảnh hƣởng tới độ ổn định vắc xin mẫu chuẩn Độ ẩm tồn dƣ thực chất lƣợng nƣớc c n lại sản phẩm đông hô lƣợng nƣớc hiến phản ứng giáng h a protein bạch hầu tiếp tục diễn ảnh hƣởng đến hàm lƣợng háng nguyên bạch hầu ống mẫu Do vậy, độ ẩm tồn dƣ thấp độ ổn định cao ngƣợc lại Ngoài độ ẩm tồn dƣ gi p đánh giá trình đông hô tốt hay chƣa tốt Sau đông hô sản phẩm đƣợc hàn điều iện hác đ độ ẩm tồn dƣ hác nhau.Kết độ ẩm tồn dƣ mẫu RD6 69 (% , mẫu chuẩn Quốc tế 68 % Nhƣ độ ẩm tồn dƣ RD6 cao mẫu chuẩn Quốc tế Tuy nhiên ết nhỏ 3% (tiêu chuẩn Điều cho thấy q trình đơng hơ đ ng ống mẫu chuẩn phƣơng pháp ch n hông tốt Mẫu chuẩn RD6 c độ ổn định cao Kết luận: Độ ẩm tồn dƣ mẫu chuẩn RD6 đạt yêu cầu đƣợc xác định 69 (% 3.1.5 Đán iá n ận dạn Quy trình nhận dạng đƣợc thực NICVB IVAC phƣơng pháp huếch tán miễn dịch ép đƣờng ết tủa háng nguyên bạch hầu háng thể bạch hầu đƣợc biểu diễn theo ết nhƣ hình dƣới đ y: Cung kết tủa kháng nguyên kháng thể bạch hầu Hình 3.3: K t n ận dạn t àn p ần bạc ầu tron mẫu RD6 Nhìn vào hình ta thấy c cung kết tủa màu xanh kháng huyết bạch hầu chuẩn với giải độc tố bạch hầu vắc xin (giữa giếng 1và với giếng 5, khoảng giếng 10 với giếng 6, khoảng giếng 11với giếng 7) Vậy mẫu RD6 đạt nhận dạng Thử nghiệm nhận dạng thử nghiệm nhằm xác định kháng nguyên vắc xin đ ng loại kháng nguyên cần phản ứng đặc hiệu kháng nguyên kháng thể Mẫu chuẩn quốc tế mẫu chuẩn RD4 sản xuất trƣớc đ hông đƣợc kiểm tra thử nghiệm nhƣng với mẫu chuẩn bạch hầu đ y thử nghiệm xác định tính đặc hiệu mẫu chuẩn nên nhóm nghiên cứu tiến hành kiểm tra tiêu 3.2 ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐỒNG NHẤT 3.2.1 Đán iá tín đồng trọn lƣợng khô Thực kiểm tra trọng lƣợng khô mẫu RD6 NICVB IVAC phƣơng pháp c n trọng lƣợng mẫu trƣớc sau sấy khô 120 °C Kết thu đƣợc nhƣ sau: 50 Khối lượng khô (mg) 46.78 45 40 42.43 43.68 42.69 42.26 44.78 41.67 39.5639.9939.34 38.26 38.12 36.22 48.75 45.9545.76 47.5446.94 38.56 37.15 35 30 25 20 15 10 5 10 Hình 3.4: Biểu đồ biểu t ị trọn lƣợn ô mẫu RD6 NICVB IVAC Sử dụng phần mềm SPSS tính tốn giá trị P t-test Sig (2 tailed) = 0,064> 05: chứng tỏ hông c hác biệt c nghĩa thống ê giá trị trung bình ết NICVB IVAC Chứng tỏ ết hai nơi hông c hác biệt C thể sử dụng hai ết để đƣa vào tính giá trị trung bình trọng lƣợng khơ mẫu chuẩn RD6 55 mg 50 Khối lượng khô (mg) TB+ 2*SD 45 TB-2*SD TB 40 35 30 Lần làm 10 15 20 25 Hình 3.5: Đồ t ị biểu diễn độ c ụm t ối lƣợn ô mẫu RD6 Nhìn vào đồ thị ta thấy ết nằm hoảng Trung bình ±2*SD tức đạt độ chụm Do đ hối lƣợng hô mẫu RD6 đƣợc tính = trung bình cộng ết NICVB IVAC = 04105 (g CV= 08528 (% Tính đồng hối lƣợng hơ số phản ánh đồng vắc xin mẫu chuẩn ph n liều đ ng ống đông hô Khối lƣợng hô ống đồng lƣợng háng nguyên bạch hầu ống mẫu chuẩn gần Điều đ phản ánh tính đồng mẫu chuẩn cao Độ lệch chuẩn ết 00359; CV 08528% ( 05: chứng tỏ hông c hác biệt c nghĩa thống ê giá trị trung bình ết NICVB IVAC Nhƣ ết hai nơi hông c hác biệt C thể sử dụng hai ết để đƣa vào tính giá trị trung bình cơng hiệu mẫu chuẩn RD6 1300 IU/ống 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 Công hiệu (IU/ống) TB+2*SD TB -2*SD TB Linear (TB -2*SD) Lần làm 051015 Hình 3.7: Đồ t ị biểu diễn độ c ụm t iệu mẫu RD6 Nhìn vào đồ thị ta thấy ết công hiệu nằm hoảng Trung bình ±2*SD tức đạt độ chụm Do đ công hiệu mẫu RD6 đƣợc tính = trung bình ết NICVB IVAC = 921 05 IU ống CV= 20 (% Công hiệu giá trị quan trọng giá trị cần xác định đ ng để sử dụng vắc xin mẫu chuẩn Quốc gia Kết vắc xin bạch hầu dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia RD6 đƣợc xác định 921 05 IU ống So sánh với nghiên cứu trƣớc đ y Việt Nam nhƣ công hiệu bạch hầu mẫu chuẩn RD4 GS.Nguyễn Thị Kê cộng nghiên cứu sản xuất 312 IU ống hay công hiệu mẫu chuẩn Quốc tế lần thứ 132 IU ống lần thứ ba thứ tƣ lần lƣợt 160IU ống 213 IU ống mẫu chuẩn RD6 c cơng hiệu 921 05 IU ống cao nhiều[4][43] Với giá trị công hiệu mẫu chuẩn RD6 hắc phục đƣợc nhƣợc điểm mẫu chuẩn trƣớc thay phải dùng nhiều (2-4 ống cho lần thử nghiệm mẫu RD6 với cơng hiệu 921 05 IU ống cần dùng ống cho lần thử nghiệm Điều đáp ứng tiêu chí quan trọng sản xuất sử dụng mẫu chuẩn nên sử dụng ống cho lần iểm định Tính đồng cơng hiệu số phản ánh đồng vắc xin mẫu chuẩn ph n liều đ ng ống đông hơ Cơng hiệu ống đồng đều, tính đồng mẫu chuẩn cao Độ lệch chuẩn ết 161,75; CV 0,20% há thấp ết nằm hoảng Trung bình ±2SD chứng tỏ tính đồng trọng lƣợng hô RD6 đạt yêu cầu.Nhƣ công hiệu mẫu chuẩn RD6 đạt yêu cầu đƣợc xác định 921,05 IU ống 3.3 DỰ ĐOÁN TUỔI THỌ CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN Tiến hành xác định công hiệu mẫu RD6 bảo quản 50 °C độ ẩm 75% khoảng thời gian tháng, tháng, tháng phƣơng pháp thử thách chuột lang Kết mẫu kiểm tra NICVB IVAC thu đƣợc nhƣ sau: Bảng 3.5: K t công hiệu RD6 (trên chuột lang) thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 500C/ độ ẩm 75% STT Thời gian Cơng hiệu * ủ mẫu Trung bình k t NICVB IVAC (tháng) 921,05 856,21 905,05 2 760,48 799,37 779,04 3 755,8 740,56 748,12 651,44 628,56 639,06 *: trung bình nhân cơng hiệu tính chương trình Weighted Geometric Mean Sử dụng phần mềm SPSS tính tốn giá trị P t-test Sig (2 tailed) = 0,789> 0,05: chứng tỏ hông c hác biệt c nghĩa thống ê giá trị trung bình ết NICVB IVAC Chứng tỏ ết hai nơi hông c hác biệt T kết ta thiết lập đƣợc phƣơng trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tƣơng quan thời gian bảo quản công hiệu nhƣ sau: công hiệu (IU/ống) 1000 y = -45.514x + 896.93 R² = 0.9583 công hiệu (IU/ống) 500 0 Tháng Hình 3.8: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc cơng hiệu bạch hầu RD6 bảo quản nhiệt độ 50°C theo tháng Phƣơng trình hồi quy thu đƣợc: Y= -45,514*X +896,93 R2= 0,9583: đạt yêu cầu tính hồi quy Dựa vào phƣơng trình hồi quy ta tính đƣợc thời điểm mà đ cơng hiệu cịn 50%: X 460,5  896,93  45,514  9,369(tháng) Tuổi thọ dự đoán điều kiện bảo quản - 20°C: C = k × X = 27× 9,369 = 1199,26 (tháng tƣơng đƣơng 99,93n m Nhƣ với phƣơng pháp theo dõi điều kiện bảo quản lão hóa cấp tốc, ta xác định đƣợc tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 99,93 n m Tuổi thọ dự đoán theo phƣơng pháp hơng phán ánh xác số tuổi thọ thực mẫu có chất sinh học nhƣng n phản ánh tƣơng đối tuổi thọ mẫu nghiên cứu Kết cho thấy tuổi thọ dự đoán mẫu chuẩn RD6 cao Vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn Quốc tế 07/216 đƣợc xác định tuổi thọ phƣơng pháp lão hóa cấp tốc, mẫu chuẩn Quốc tế có tuổi thọ 20 n m[43] Do đ t kết kết luận mẫu chuẩn RD6 có tuổi thọ phù hợp yêu cầu đƣa 10 n m Tuy nhiên, biến đổi chất có chất sinh học phụ thuộc vào biến đổi nhiệt độ thấp so với chất có chất hóa học nên phƣơng pháp th c đẩy nhiệt để dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn c độ xác không cao Do đ phải tiếp tục giám sát công hiệu vắc xin mẫu chuẩn RD6 điều kiện bảo quản thƣờng (-200C) theo thời gian Việc chọn thời điểm giám sát dựa vào phân tích xu hƣớng theo mốc thời gian định kỳ cụ thể Nghiên cứu chƣa xác định đƣợc giai đoạn mẫu chuẩn bắt đầu giảm công hiệu liên tục Đ y giai đoạn quan trọng hi bƣớc vào giai đoạn độ ổn định công hiệu mẫu chuẩn thấp, hông c n đủ tin cậy để đƣa vào thử nghiệm mẫu chuẩn phải hủy bỏ KẾT LUẬN Các tiêu sau xuất xƣởng mẫu RD6 bao gồm: cảm quan vô trùng độ ẩm tồn dƣ độ chân không, nhận dạng, công hiệu đạt yêu cầu đ : độ ẩm tồn dƣ 69(% độ chân không đạt 99,54%, công hiệu chuột lang 921,05 IU/ống Về tính đồng RD6: đạt yêu cầu với trọng lƣợng khô 0,04232 (g), CV 0,08528 %, công hiệu 921,05 IU/ống, CV (0,20%), kết nằm khoảng Trung bình ±2*SD Tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn 10 n m Đƣa đƣợc quy trình chuyển đổi đơn vị công hiệu t chuột lang sang chuột nhắt với công hiệu chuột nhắt 798,29 IU/ống KIẾN NGHỊ Tiếp tục giám sát công hiệu mẫu chuẩn RD6 theo thời gian điều kiện bảo quản thông thƣờng (-200C) Tham gia vào thiết lập mẫu chuẩn vùng (ASEAN) cho vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn chƣa c mẫu chuẩn vùng vắc xin Việc thiết lập mẫu chuẩn vùng c nghĩa lớn kiểm định cho phép tiết kiệm đƣợc nhiều chi phí so với việc Quốc gia tự xây dựng mẫu chuẩn riêng Bên cạnh đ việc thiết lập mẫu chuẩn vùng thƣờng cho kết xác c phối hợp nhiều phịng thí nghiệm Tài Liệu Tham Khảo Ti ng Việt Trần Tử An (2005), Kiểm nghiệm dƣợc phẩm, Nhà xuất Y học, Phần 7, tr81-86 Lê V n Hiệp (2006), Vắc xin học vấn đề bản, Nhà xuất Y học, phần 6, tr.123-128 Nguyễn Thị Kê cộng (1999), Nghiên cứu sản xuất vaccine mẫu chuẩn Quốc gia Bạch hầu- uốn ván - ho gà, tr 44,54,59 Dƣợc điển Việt Nam IV, (2009), Vắc xin bạch hầu hấp phụ, tr 653, 654, 334336 Lê V n Phủng cộng (2009 Vi huẩn Y học Nhà xuất giáo dục Việt Nam Phần 4, tr.106-108 Ti ng Anh Aggerbeck H, Heron I (1991), " Improvement of a Vero cell assay to determine diphtheria antitoxin content in sera.", Biologicals,pp 19,71 - 76 Aggerbeck H, Norgaaed –Pedersen, Heron I (1996), "Simultaneous quantitation of diphtheria and tetanus antibodies by single antigen, timeresolve flosurescense immunoassay", Journal of Immunological Methods 190, pp 170-183 Bryan Howard et al(2007), "The COST Manual of Laboratory Animal Care and Use, categories of animal model and their characteristis", pp 45-46 Kreeftenberg JG et al(1986), "A mouse model to estimate the potency of the diphtheria component in combined vaccines", Development of biological standardization 64, pp 21-24 10 Yenny et al (1993), "Standardizing the potency of Diphtheria in-house reference toxoid using serologycal method by neutralization test in Vero cell culture", p 10 11 Euroean Commision (2009), "Alternative testing strategies-progress report 2009, Replacing, reducing and rifining use of animal in research genomics &biotechnology for health Luxenbourg: office for official Publication of the European Communities", EUR 23886 12 Edmunds WJ, Pebody RG, Aggerback H, Baron S, Berbers G, Conynvan 4)Spaendonck MA, Hallander HO, Olander R, Maple PA, Melker HE, Olin P, Fievret-Groyne F, Rota C, Salmaso S, Tischer A, vonHunolstein C and Miller E (2000), "The sero-epidemiology of diphtheria in Western Europe ESEN Project European Sero-Epidemiology Network.", Epidemiology and Infection 125 (1), pp 113 - 125 13 RIVM National Institute of public Health and the environment, (2000), Laboratory animal Husbandry in Vaccin Quality Control, 68-70 14 Galazka, AM (1993), "The Immunological Basis for Immunization Series, Module 2: Diphtheria.", World Health Organization 15 Hardy I, Dittman S and Sutter R (1996), "Current situation and control strategies for resurgence of diphtheria in newly independent states of the former Soviet Union", The Lancet 347, pp 1739 - 1744 16 Immunization, WHO Department of (2006), "Temperature sensitivity of vaccines", Vaccines andBiologicals 17 JF Carpenter , JH Crowe, T Arakawa (1990), "Comparison of solute-induced proteinstabilisation in aqueous solution and in frozen and freeze-dried state", J DairySci 73, pp 3627-36 18 Kreeftenberg JG, van der Gun JW, Marsman FR, Sekhius VM, Bhandari SR and Maheswari SC (1985), "An investigation of a mouse model to estimate the potency of the diphtheria component in combined vaccines", Journal of Biological Standardization 13 (3), pp 229 - 234 19 Manual for quality control of Diphtheria, Tetanus and Pertussis vaccines (2013), pp 147-155 20 Maple PA, Efstratiou A, George RC, Andrews NJ and Sesardic D (1995), "Diphtheria immunity in UK blood donors", The Lancet 345, pp 963 - 965 21 Matejtschuk P, Rafiq , Johnes S, Gaines Das R (2005), "A comparison of vialswith ampoules for the storage of biological reference materials", Biologicals 33, pp 63-70 22 Pikal, MJ (1990), " Freeze drying of proteins Part II Formulation selection", Biopharm 3(9), pp 26-30 23 R Winsnes, D Sesardic, A Daas, M-E Behr-Gross (2006), "Collaborative study for thevalidation of serological methods for potency testing of diphtheria toxoid vaccine(part 2)", Pharmeuropa Bio 1, p 73 24 Redhead K, Gaines Das R (1991), "A collaborative assay of the proposed Third British reference preparation for Pertussis vaccine and the relative potencies of the second International Standard and the second British Reference Preparation for Pertussis Vaccine ", Biologicals 19, pp 107 - 111 25 Sesardic D, Prior C, Daas A and Buchheit KH (2003), "Collaborative study for establishment of the European Pharmacopoeia BRP Batch for Diphtheria Toxin.", Pharmeuropa Bio 1, pp - 21 26 Sesardic D, Winsnes R, Rigsby P and Gaines-Das, R (2001), "Calibration of replacement International Standard and European Pharmacopoeia Biological Reference Preparation for Diphtheria Toxoid, Adsorbed", Biologicals 29, pp 107 - 122 27 Wang, W (2000), "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals", Int J Pharm 203, pp 1-60 28 WHO (1990), "Annex 2: requirements for Diphtheria, Tetanus, Pertussis and combined vaccines" No.800, p p13 29 WHO (1995), "Manual of laboratory methods for potency testing of vaccines used in the WHO Expanded programme on Immunization", pp 198-206 30 WHO (1998), "Requirements for yellow fever vaccine (Requirments for Biological Substances No 3, revised 1995)", WHO Technical Report 872, pp 30-68 31 WHO (2003), "Recommendation for Diphtheria, Tetanus, Pertussis and Combined Vaccines annex 5", p 32 WHO (2006), "Annex 2: Recommendation for the preparation, characterzation and establishment of international and other Biological reference standards Part A" No 932 33 WHO (2013), Manual for quality control of Diphtheria, Tetanus and Pertussis vaccines 12-14 34 WHO (2013), Manual for quality control of Diphtheria, Tetanus and Pertussis vaccines 15 35 WHO (2013), Manual for the establishment of national and other secondary standards for vaccines, Vol Vii,Viii WHO/IBV/11.03 36 Xing D , Gaines Das R, Newland M, Corbel (2001), "Third International Standard for pertussis vaccine:International activity of British Standard for pertussis Biologicals 29, pp 133 – 136 Confirmation vaccine,coded Study of 66/303", ... chuẩn Quốc gia tiến hành: “Xác định tính khả dụng Vắc xin c đ RD6 dự tuyểnmẫu chuẩn Quốc ia” với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình chuẩn định chất lượng Vắc xin mẫu chuẩn Quốc gia Bạch hầu đông khô. .. tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn Đánh giá tính đồng vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 VI KHUẨN BẠCH HẦU VÀ BỆNH BẠCH HẦU 1.1.1 Nh ng nét chung vi khuẩn bạch hầu Vi khuẩn Bạch hầu ( tên... 250-350g 2.2.2 Sinh phẩm –hóa chất Vắc xin bạch hầu mẫu chuẩn Quốc tế, mã 07/216 Công hiệu 213 IU/ống ; Vắc xin bạch hầu mã RD6 dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia Độc tố bạch hầu chuẩn RIVM chứa 1000Lf/ ampoule: