Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích paraquat trong huyết tương và ứng dụng phục vụ chẩn đoán điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp paraquat

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Vũ Anh Phƣơng NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PARAQUAT TRONG HUYẾT TƢƠNG VÀ ỨNG DỤNG PHỤC VỤ CHẨN ĐOÁN ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN NGỘ ĐỘC CẤP PARAQUAT Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 62440118 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Vũ Anh Phƣơng NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PARAQUAT TRONG HUYẾT TƢƠNG VÀ ỨNG DỤNG PHỤC VỤ CHẨN ĐOÁN ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN NGỘ ĐỘC CẤP PARAQUAT Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 62440118 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS TẠ THỊ THẢO PGS.TS HÀ TRẦN HƢNG LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Vũ Anh Phƣơng LỜI CẢM ƠN Lời cho gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Tạ Thị Thảo PGS.TS Hà Trần Hưng tận tình hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực đề tài viết luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy giáo giảng dạy khoa Hoá, đặc biệt thầy mơn Hố Phân tích, cho tơi kiến thức q giá q trình học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo toàn thể nhân viên Trung tâm Chống Độc - Bệnh viện Bạch Mai tạo điều kiện thuận lợi cho học tập nghiên cứu Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Nguyễn Thị Ánh Hường, PGS.TS Mai Thanh Đức, ThS Đỗ Thị Trang, ThS BSNT Đoàn Thu Hà nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tơi xin cảm ơn cơng ty 3Sanalysis (http://www.3sanalysis.vn/) cung cấp thiết bị CE-C4D để thực nghiên cứu này, cảm ơn bạn nhóm nghiên cứu sử dụng phương pháp điện di mao quản CE-C 4D Bộ mơn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội phối hợp hỗ trợ tơi hồn thành nghiên cứu Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln động viên, chia sẻ khó khăn tơi Hà Nội, ngày 08 tháng 01 năm 2019 Học viên Vũ Anh Phƣơng MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 T ng quan paraquat 1.1.1 Cơng thức hóa học, tính chất lý hóa học paraquat 1.1.2 Thực trạng sử dụng paraquat 1.1.3 Độc tính paraquat 1.1.4 Dược động học paraquat 1.2 Tiên lượng bệnh nhân dựa vào nồng độ paraquat huyết tương 10 1.3 Các phương pháp xác định paraquat huyết tương 16 1.3.1 Phương pháp quang ph hấp thụ phân tử (UV - Vis) .16 1.3.2 Các phương pháp sắc ký 17 1.3.2.1 Phương pháp sắc ký khí 17 1.3.2.2 Phương pháp sắc ký lỏng 20 1.3.3 Phương pháp điện di mao quản (CE) .23 1.3.3.1 Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector UV (CE - UV) .25 1.3.3.2 Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) .25 1.3.3.3 Ứng dụng phương pháp điện di mao quản phân tích paraquat 27 1.4 Các phương pháp xử lý mẫu huyết tương phân tích paraquat 29 1.4.1 Phương pháp kết tủa protein 30 1.4.2 Phương pháp chiết lỏng - lỏng 31 1.4.3 Phương pháp chiết pha rắn 33 1.5 Kết luận chung phần t ng quan 38 Chƣơng 2: THỰC NGHIỆM 40 2.1 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 40 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ 40 2.1.2 Chất chuẩn 41 2.1.3 Hóa chất, dung môi 42 2.1.4 Chuẩn bị dung dịch hóa chất .43 2.2 Đối tượng nghiên cứu .44 2.2.1 Bệnh nhân 44 2.2.2 Mẫu nghiên cứu 44 2.3 Phương pháp nghiên cứu 46 2.3.1 Phương pháp định tính PQ nước tiểu .46 2.3.2 Phương pháp lấy mẫu tiền xử lý mẫu huyết tương .46 2.3.3 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng detector DAD (HPLC/ DAD) 47 2.3.3.1 Phương pháp khảo sát điều kiện tối ưu q trình phân tích PQ mẫu huyết tương trắng thêm chuẩn 47 2.3.3.2 Phương pháp tối ưu quy trình xử lý mẫu huyết tương huyết tương phân tích phương pháp HPLC/DAD 48 2.3.4 Phương pháp điện di mao quản (CE - C4D) .49 2.3.4.1 Phương pháp khảo sát điều kiện tối ưu phân tích dung dịch PQ chuẩn 49 2.3.4.2 Phương pháp tối ưu hóa quy trình xử lý mẫu huyết tương phân tích phương pháp CE - C4D 50 2.3.5 Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phân tích 53 2.3.5.1 Tính chọn lọc 53 2.3.5.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) .54 2.3.5.3 Độ chụm phương pháp 54 2.3.5.4 Độ phương pháp phân tích .54 2.3.5.5 Độ ổn định phương pháp 55 2.3.6 Ước lượng độ không đảm bảo đo 55 2.4 Áp dụng chẩn đoán, tiên lượng điều trị ngộ độc cấp PQ 56 2.5 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 58 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 59 3.1 Phát triển phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC/DAD) định lượng paraquat huyết tương 59 3.1.1 Lựa chọn điều kiện phù hợp hệ thống phân tích HPLC/DAD .59 3.1.1.1 Xác định bước sóng phát chất phân tích với detector DAD 59 3.1.1.2 Ảnh hưởng thể tích vòng mẫu 59 3.1.1.3 Lựa chọn loại pha động 61 3.1.1.4 Ảnh hưởng tỉ lệ thành phần pha động 62 3.1.1.5 hảo sát ảnh hưởng pH pha động 64 3.1.1.6 hảo sát nồng độ cấu tử pha động 65 3.1.1.7 hảo sát ảnh hưởng tốc độ d ng 70 3.1.2 hảo sát phương pháp xử l mẫu huyết tương phân tích PQ .71 3.1.2.1 hảo sát nồng độ dung dịch CA .72 3.1.2.2 hảo sát th i gian lắc xoáy 73 3.1.3 Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp HPLC 75 3.1.3.1 ính đặc hiệu 75 3.1.3.2 Đư ng chuẩn giới hạn phát v giới hạn định lượng .76 3.1.3.3 Đánh giá độ xác phương pháp phân tích 78 3.1.3.4 Đánh giá độ lặp lại tái lặp lại phương pháp phân tích 81 3.2 Nghiên cứu định lượng paraquat huyết tương người phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) .88 3.2.1 Tìm điều kiện tối ưu phân tích paraquat phương pháp CE - C4D 88 3.2.1.1 Ảnh hưởng loại đệm 89 3.2.1.2 Khảo sát ảnh hưởng th i gian bơm mẫu 95 3.2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng tách .96 3.2.1.4 Ảnh hưởng cation đến trình phân tách PQ 98 3.2.2 Nghiên cứu xây dựng quy trình xử lý mẫu huyết tương 100 3.2.3 Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp CE - C4D 119 3.2.3.1 ính đặc hiệu phương pháp .119 3.2.3.2 Giới hạn phát giới hạn định lượng 119 3.2.3.3 Xây dựng đư ng chuẩn PQ 121 3.2.3.4 Đánh giá độ phương pháp 123 3.2.3.5 Đánh giá độ chụm (độ chụm lặp lại v độ chụm tái lặp) 124 3.2.3.6 Ước lượng độ không đảm bảo đo 126 3.3 So sánh kết phân tích nồng độ paraquat huyết tương bệnh nhân ngộ độc paraquat phương pháp CE - C4D phương pháp HPLC/DAD 128 3.4 Nghiên cứu áp dụng kết định lượng nồng độ paraquat huyết tương phục vụ chẩn đoán, tiên lượng điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp PQ 132 3.4.1 Đặc điểm chung nhóm bệnh nhân nghiên cứu 133 3.4.1.1 Đặc điểm tuổi 133 3.4.1.2 Đặc điểm giới 133 3.4.1.3 Nguyên nhân ngộ độc .134 3.4.1.4 Th i gian vào viện 134 3.4.2 ngh a định lượng paraquat huyết tương chẩn đoán mức độ nặng tiên lượng bệnh nhân 135 3.4.2.1 Tỷ lệ tử vong bệnh nhân ngộ độc cấp PQ 135 3.4.2.2 Nồng độ paraquat huyết tương hai nhóm sống tử vong 136 3.4.2.3 Giá trị tiên lượng tử vong nồng độ PQ huyết tương điểm SIPP 137 3.4.3 ngh a định lượng PQ huyết tương điều trị ngộ độc PQ (đánh giá hiệu hướng dẫn lọc máu hấp phụ) 138 3.4.3.1 Các biện pháp điều trị áp dụng .138 3.4.3.2 Điều trị lọc máu hấp phụ 139 3.4.3.3 Khảo sát giá trị nồng độ PQ sau lần lọc 140 3.4.3.4 Xác định số lọc cần thiết dựa vào nồng độ PQ 141 ẾT LUẬN 144 DANH MỤC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 146 TÀI LIỆU THAM KHẢO 147 PHỤ LỤC 160 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức hóa học paraquat Hình 1.2 Cơ chế gây độc paraquat Hình 1.3 Biểu đồ liên quan nồng độ Paraquat huyết tương (µg/ml), thời gian sau uống, khả sống 12 Hình 1.4 Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo hệ điện di mao quản 24 Hình 1.5 Sơ đồ thiết kế C4D 26 Hình 1.6 Quy trình chung xử lý mẫu phương pháp chiết pha rắn 34 Hình 2.1 Quy trình định tính PQ nước tiểu người 46 Hình 3.1 Ph hấp thụ UV PQ 59 Hình 3.2 Sắc đồ khảo sát thể tích bơm mẫu 60 Hình 3.3 Sắc đồ phân tích PQ huyết tương với hệ dung môi khác 61 Hình 3.4 Sắc đồ khảo sát t lệ pha động ACN: dung dịch đệm (pH = 2,5) v/v 63 Hình 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng pH 64 Hình 3.6 Sắc đồ khảo sát nồng độ natriheptanesulfonate đệm pH 2,5 66 Hình 3.7 Sắc đồ PQ thay đ i nồng độ Cl pha động .68 Hình 3.8 Sắc đồ PQ thay đ i nồng độ PEG pha động 69 Hình 3.9 Sắc đồ khảo sát tốc độ d ng 70 Hình 3.10 Hiệu loại bỏ protein huyết tương sử dụng TCA 72 Hình 3.11 Sơ đồ quy trình xử lý PQ mẫu huyết tương 74 Hình 3.12 Sắc đồ PQ huyết tương chuẩn áp dụng quy trình xử l mẫu hình 3.11 75 Hình 3.13 Độ đặc hiệu phương pháp HPLC phân tích PQ 75 Hình 3.14 Sắc đồ PQ huyết tương nồng độ khác từ 0,02 - 10,00 µg/ml 76 Hình 3.15 Đường chuẩn PQ huyết tương dựa phương pháp HPLC 77 Hình 3.16 Điện di đồ ảnh hưởng pH đến phân tách PQ .90 Hình 3.17 Điện di đồ ảnh hưởng thành phần dung dịch điện di đến khả phân tách PQ 92 Hình 3.18 Điện di đồ ảnh hưởng nồng độ đệm điện di đến khả phân tách PQ 94 Hình 3.19 Điện di đồ ảnh hưởng thời gian bơm mẫu 96 Hình 3.20 Điện di đồ khảo sát ảnh hưởng điện tách đến thời gian di chuyển phân tách pic 97 Hình 3.21 Điện di đồ ảnh hưởng cation đến tín hiệu PQ 99 Hình 3.22 Điện di đồ chiết tách PQ phương pháp chiết lỏng - lỏng sử dụng chất tạo cặp ion BTB pH = 6,5 101 Hình 3.23 Điện di đồ chiết tách PQ phương pháp chiết lỏng - lỏng sử dụng chất tạo cặp ion sodium 1-heptane sulfonate pH = 3,0 101 Hình 3.24 Điện di đồ phân tích mẫu huyết tương thêm chuẩn PQ µg/ml sử dụng cột WCX cột C18 102 Hình 3.25 Điện di đồ minh chứng loại bỏ cation Na+ 140 mM cột C18 .103 Hình 3.26 Điện di đồ minh chứng loại bỏ cation Ca2+ mM cột C18 .104 Hình 3.27 Điện di đồ minh chứng hiệu sử dụng EDTA đến phân tách PQ 105 Hình 3.28 Điện di đồ ảnh hưởng nồng độ EDTA đến phân tách PQ .107 Hình 3.29 Điện di đồ phân tích mẫu chiết pha rắn điều kiện pH khác 108 Hình 3.30 Điện di đồ ảnh hưởng chất hoạt động bề mặt (HĐBM) trình SPE đến khả tách PQ 109 Hình 3.31 Kết phân tích điện di sau chiết pha rắn sử dụng loại dung dịch rửa tạp khác 111 Hình 3.32 Điện di đồ ảnh hưởng t lệ dung dịch rửa tạp đến khả phân tách PQ 112 Hình 3.33 Điện di đồ ảnh hưởng thành phần dung dịch rửa tạp đến khả tách PQ cột C18 114 Hình 3.34 Ảnh hưởng HCl dung dịch rửa giải đến tín hiệu PQ 115 Hình 3.35 Sự phụ thuộc diện tích pic PQ vào thể tích HCl thêm vào dung dịch rửa giải 115 Analysis of Variance Source Regression Residual Error Total - DF SS 3388299 3388303 MS 3388299 F 3661122,30 P 0,000 Phương pháp CE - C4D:  Đường chuẩn dung dịch chuẩn PQ Regression Analysis: Diện tích pic (mV.s) versus Nồng độ PQ (ppm)_1 The regression equation is Diện tích pic (mV.phut) = - 2,2 + 9,14 Nồng độ PQ (ppm)_1 Predictor Constant Nồng độ PQ (ppm)_1 S = 22,4167 Coef -2,20 9,1410 R-Sq = 98,5% SE Coef 12,01 0,4567 T -0,18 20,02 P 0,861 0,000 R-Sq(adj) = 98,3% Analysis of Variance Source Regression Residual Error Total DF SS 201332 3015 204347 MS 201332 503 F 400,66 P 0,000  Đường chuẩn PQ huyết tương g n n ện ng độ The regression equation is ện - ng độ Predictor Constant ng độ S = 3,96326 Coef -5,323 SE Coef T P 3,333 -1,60 0,209 2714 47,32 0,000 R-Sq = 99,9% R-Sq(adj) = 99,8% Analysis of Variance Source Regression Residual Error Total DF SS 35166 47 35213 MS 35166 16 F 2238,78 P 0,000 Sơ đồ nghiên cứu phác đồ điều trị lọc máu hấp phụ  Sơ đồ nghiên cứu Hình 3.52 Sơ đồ nghiên cứu  Phác đồ lọc máu hấp phụ resin cho bệnh nhân ngộ độc paraquat trung tâm chống độc - CHỈ ĐỊNH BN chẩn đoán ngộ độc paraquat: + BN uống paraquat (>5ml) + Xét nghiệm paraquat niệu dương tính + Đến viện thời gian 12 sau uống - CHỐNG CHỈ ĐỊNH Tuyệt đối: + Suy hô hấp: pO2 < 60 mmHg, SpO2 < 92% + Tụt huyết áp < 90/60 mmHg + Toan chuyển hóa nặng (pH ≤ 7,2) Tương đối: + Rối loạn đông máu + Dị ứng thành phần lọc - TIẾN HÀNH + Phương tiện + Máy lọc máu: máy lọc máu ngắt quãng + Quả lọc:  Quả lọc hấp phụ HA230  Quả lọc máu ngắt quãng + Bộ dây lọc ngắt quãng dây nối lọc + Chống đông + Heparin TLPT thấp: Enoxaparin (Lovenox): + Liều dùng: 60 - 80 UI/Kg + Đường dùng: tiêm t nh mạch + Thời điểm dùng: trước bắt đầu rút máu 20-30 phút + Tiến hành lọc m u + Lọc máu lần đầu:  Bắt đầu lọc chẩn đoán xác định đủ tiêu chuẩn lọc máu + Lọc máu lần 2:  Ch định: sớm tốt sau lọc máu lần 1, không phụ thuộc nồng độ paraquat huyết tương sau lọc lần  Nếu tiểu cầu trước lọc lần thứ 100.000/ml lọc máu lần lọc máu lần vừa lọc vừa truyển tiểu cầu đảm bảo tiểu cầu > 80.000/ml + Lọc máu từ lần 3:  Ch định: Lọc sau lần lọc thứ xét nghiệm paraquat huyết tương sau lọc lần c n dương tính  Lọc sau lần từ - 12 paraquat huyết tương sau lọc lần âm tính, sau 8-12 làm lại dương tính (do tái phân bố)  hông lọc lần sau lọc lần paraquat huyết tương âm tính + Lọc máu từ lần trở đi:  Ch định: Lọc sau lần sau lọc lần paraquat huyết tương dương tính Sau lọc lần âm tính lọc lần sau - 12 (nếu XN dương tính lại)  Các lần lọc sau ch định tương tự + Lọc máu lần cuối sau lần trước paraquat âm tính, thời gian chờ - 12 xét nghiệm dương tính lại Nếu sau - 12 xét nghiệm âm tính khơng cần lọc máu - Xét nghiệm Các loại XN: + Cơ bản: paraquat nước tiểu, công thức máu, đơng máu bản, sinh hóa máu (ure, creatinin, điện giải đồ, canxi, SGOT, SGPT, C , khí máu động mạch, định lượng paraquat huyết tương sau lọc + XN khác: XQ ph i, CT scanner ph i h i điểm l m XN: + Các XN làm trước sau lần lọc máu + XN khác: theo tình trạng bệnh  Những lƣu ý: − hông giới hạn số lần lọc máu tối đa Mục tiêu lọc máu liên tục đến paraquat niệu âm tính lọc thêm lần − Thời gian lọc nhau: 2,5 Tốc độ máu 150-250 ml/phút − Có thể đặt sonde bàng quang lấy nước tiểu xét nghiệm để tránh trì hỗn thời gian bắt đầu lọc máu − Lọc máu lần không cần đợi xét nghiệm công thức máu sau lọc lần Nếu tiểu cầu trước lọc lần < 100.000/ml vừa lọc lần vừa truyền tiểu cầu đảm bảo tiểu cầu >80.000/ml − Các lần lọc từ thứ trở lọc cần có kết xét nghiệm tiểu cầu đông máu để định dùng chống đông truyền tiểu cầu yếu tố đông máu cần − Dự ph ng nguy hạ kali máu thời điểm vào viện q trình điều trị Quy trình phân tích hồn chỉnh định lƣợng paraquat phƣơng pháp HPLC/DAD phƣơng pháp CE-C4D  Quy trình phân tích paraquat phƣơng pháp HPLC/DAD - Xử l mẫu huyết tương: ml huyết tương 1mL TCA % Hỗn dịch Ly tâm 15 phút (4000 Lấy dịch phía vịng/phút) Dung dịch Lọc qua màng cellulose acetate 0,2 µm Dịch lọc Phân tích HPLC - Điều kiện phân tích thiết bị HPLC: cột tách cột pha đảo Zorbax cột bảo vệ C8 Pha động gồm hai kênh theo tỷ lệ thể tích 5:95 gồm ACN hỗn hợp dung dịch đệm phosphate pH= 2,5 200 ml methanol có thêm 1,10g chất tạo cặp ion sodium 1-heptane sulfonate; 2,00 g KCl; 2,00 ml polyethylenglycol 400 0,05 % triethylamine  Quy trình phân tích paraquat phƣơng pháp CE-C4D (xử lý mẫu phƣơng pháp chiết pha rắn cột C18 không sử dụng chất tạo cặp ion) - Tiền xử l mẫu: Mẫu máu toàn phần bệnh nhân ngộ độc PQ ly tâm 10 phút, tách lấy phần huyết tương Sau đó, thêm vào huyết tương 0,4 ml TCA 0,6 ml nước deion, lắc xoáy phút, ly tâm 4000 v ng/phút 10 phút Dịch phía kiềm hố 0,5 ml dung dịch NH3 25 , sau thêm EDTA 10-3 M Đây dung dịch mẫu chuẩn bị cho qua cột C18 - Chiết mẫu qua cột C18: - Sau thu dịch chiết, tiến hành phân tích điện di mao quản silica có t ng chiều dài 60 cm, chiều dài hiệu dụng 50 cm, đường kính 75 µm; với hệ đệm Histidin (10mM)/ acetic acid (pH=4,0), bơm mẫu theo kiểu thủy động học kiểu xi phông độ cao 10 cm thời gian 30s., tách +20 kV DANI4 SACH BENH NHS NGIIIEN CA Tai Trung tarn Chñng doc — Benh vien Bach Mai STT Hp va ten Tuoi Ng;iyvâoviien Ngay vien Mâluutrii Tran Vân T 1984 03.01.17 05.01.17 T60/10 Tran Van B 1990 04.01.17 05.01.17 T60/11 Php Thi H 1964 08.01.17 08.01.17 T60/304 Doan Th} My L 1998 08.01.17 10.01.17 T60/373 Nguyen Khac H 1987 08.01.17 12.01.17 T60/16 Vu Thp T 1991 10.01.17 11.01.17 T60/4 Nguyen The T 1951 10.01.17 11.01.17 T60/371 Php Quoc H 1985 10.01.17 11.01.17 T60/2 Mai Thanh T 1991 10.01.17 11.01.17 T60/12 10 Hoang Thi Thu H 1999 11.01.17 25.01.17 T60/302 li 12 Tran Van H 1989 12.01.17 14.01.17 T60/357 Php Van T 1991 14.01.17 17.01.17 T60/301 13 Vi Van N 1987 15.01.17 18.01.17 T60/300 14 Khong Thi Thuy D 1995 15.01.17 25.01.17 T60/372 15 Nguyen Th{ Linh N 2002 16.01.17 17.01.17 T60/253 16 Pham Van N 1979 17.01.17 20.01.17 T60/484 17 Hoang Thi Thu T 2002 18.01.17 21.01.17 T60/388 18 Tran Thi G 1935 20.01.17 20.01.17 T60/361 19 Nguyen Phu C 1996 21.01.17 25.01.17 T60/232 20 Hoang Thi N 1993 21.01.17 24.01.17 T60/376 21 Vu V n T 1967 21.01.17 21.01.17 T60/362 22 Duong Hong Q 2003 22.01.17 25.01.17 T60/264 23 Dao Huy H 2000 23.01.17 26.01.17 T60/375 24 Dao Van T 1993 27.01.17 29.01.17 T60/291 25 Nguyen Th} L 1984 25.01.17 27.01.17 T60/485 26 Tran Van Q 1987 27.01.17 31.01.17 T60/385 27 Tran Vân G 1968 30.01.17 30.01.17 T60/288 28 Pham Vin D 1990 31.01.17 02.02.17 T60/474 29 Bui Vân T 1989 01.02.17 03.02.17 T60/274 30 Di Quang B 1967 01.02.17 01.02.17 T60/473 31 Hea Van B 1990 02.02.17 04.01.17 T60/277 32 Vfi Van K 1998 02.02.17 05.02.17 T60/358 33 Le Van T 1996 03.02.17 05.02.17 T60/225 34 Duong Van T 1974 05.02.17 06.02.17 T60/226 35 Diang Ngpc T 1997 08.02.17 13.02.17 T60/468 36 Khuat Vân Q 1973 10.02.17 10.02.17 T60/370 37 Nguyen Van V 1982 12.02.17 16.02.17 T60/30 38 Nguyen Trung K 1993 13.02.17 16.02.17 T60/374 39 HP That B 1946 13.02.17 14.02.17 T60/285 40 Chu Th} H 1994 15.02.17 18.02.17 T60/286 41 Le Thi Thanh N 1990 17.02.17 20.02.17 T60/303 42 Nguyen Thi T 1994 18.02.17 19.02.17 T60/71 43 Nguyen Van D 1989 18.02.17 19.02.17 T60/70 44 Tran Thi Thuy Y 1993 19.02.17 21.02.17 T60/147 45 Do Thi V 2004 19.02.17 20.02.17 T60/21 46 Tran Ngpc D 1978 20.02.17 22.02.17 T60/32 47 Trieu Phi T 1958 21.02.17 21.02.17 T60/92 48 Doan Thi Thanh T 1992 23.02.17 01.03.17 T60/289 49 Nguyen Thi P 1964 27.02.17 27.02.17 T60/252 50 Tran Th} H 1999 01.03.17 04.03.17 T60/299 51 Nguyen Hoang H 1991 01.03.17 03.03.17 T60/57 52 Dfi Duy H 1976 04.03.17 10.03.17 T60/305 53 NguyenThi QT 2002 07.03.17 08.03.17 T60/280 54 Nguyen Thi L 1998 07.03.17 09.03.17 T60/227 55 Nguyen Th{ N 1964 09.03.17 11.03.17 T60/22 56 Nguyen Ich H 1971 10.03.17 11.03.17 T60/284 57 Nguyen Thi D 1963 10.03.17 11.03.17 T60/483 58 Nguyen Van L 1983 10.03.17 13.03.17 T60/273 59 Php Thi M 1942 12.03.17 12.03.17 T60/151 60 Dao Xuan T 1990 12.03.17 13.03.17 T60/265 2002 13.03.17 14.03.17 T60/251 61 62 Ly Thao H 2004 20.03.17 23.03.17 T60/278 63 Trtnh Van T 1963 21.03.17 22.03.17 T60/263 64 Nguyen Vân S 1984 25.03.17 26.03.17 T60/258 65 Luong Thi H 1999 25.03.17 27.03.17 T60/228 66 Doan Thi T 2000 25.03.17 29.03.17 T60/259 67 Orang Vân H 1971 25.03.17 30.03.17 T60/233 68 Tran Dinh H 1980 26.03.17 27.03.17 T60/275 69 Do Th} L 1961 28.03.17 29.03.17 T60/297 70 Vfi Thi N 1963 29.03.17 30.03.17 T60/287 71 Nguyen Duc B 1995 29.03.17 31.03.17 T60/246 72 Ho Van C 1984 30.03.17 01.04.17 T60/224 73 Nguyen Thi C 1984 31.03.17 02.04.17 T60/201 74 Dao Huy H 1992 31.03.17 01.04.17 T60/245 75 Quâch Cñng N 1987 31.03.17 03.04.17 T60/223 76 Le Dac N 1993 01.04.17 03.04.17 T60/88 77 Tran Ngpc M 1955 02.04.17 02.04.17 T60/146 78 Nguyen Duc T 1967 05.04.17 07.04.17 T60/296 79 Cao Thi L 1997 08.04.17 08.04.17 T60/306 80 Tran The M 1985 08.04.17 09.04.17 T60/270 81 Do Thi H 1987 09.04.17 11.04.17 T60/271 82 Nguyen Thi L 1935 12.04.17 15.04.17 T60/387 83 Nguyen Thi H 1991 12.04.17 13.04.17 T60/149 84 Trieu Th{ B 1984 13.04.17 15.04.17 CCM 85 Pham Thi H 1991 14.04.17 17.04.17 T60/230 86 Nguyen Thi T 1983 18.04.17 18.04.17 T60/272 87 Than Vân B 1996 18.04.17 22.04.17 T60/390 88 Orang Thi N 1936 19.04.17 21.04.17 T60/243 89 Luong Dinh T 1956 19.04.17 26.04.17 T60/240 90 Nguyen VanK 1972 20.04.17 20.04.17 T60/127 91 Nguyen Th{P 1991 21.04.17 24.04.17 T60/93 92 Do XuanT 1996 23.04.17 25.04.17 T60/254 93 TrinhXuan B 1986 24.04.17 26.04.17 T60/239 94 Dong XuanK 1979 24.04.17 24.04.17 T60/157 95 HaTrungH 2004 23.04.17 26.04.17 T60/238 96 Tran Thi L 1964 24.04.17 25.04.17 T60/293 97 ChuVanC 1933 25.04.17 28.04.17 T60/141 98 Nguyen Thi C 1960 27.04.17 28.04.17 T60/260 99 NguyenTh{T 2000 29.04.17 03.05.17 T60/206 100 BuiQuangN 2005 29.04.17 01.05.17 T60/294 101 Tran Thi ThanhH 1997 29.04.17 01.05.17 T60/244 102 PhamDângH 1999 29.04.17 06.05.17 T60/359 103 Phan Trpng T 1989 30.04.17 02.05.17 T60/222 104 Ph 1993 30.04.17 02.05.17 T60/234 105 NguyénQuang H 1994 01.05.17 04.05.17 T60/241 106 Truong VanH 1991 01.05.17 03.05.17 T60/235 107 Lai ThiN 1974 01.05.17 02.05.17 T60/729 108 Tran VanT 1965 02.05.17 02.05.17 T60/282 109 VfiDinhT 1995 04.05.17 05.05.17 T60/283 110 Hoang Th}P 1993 05.05.17 06.05.17 T60/360 i 11 Truong VanH 1971 08.05.17 08.05.17 T60/242 112 LamV nV 2000 09.05.17 10.05.17 T60/475 113 Tac ThiM 1982 10.05.17 11.05.17 T60/236 114 Vuong Hong M 1983 11.05.17 12.05.17 T60/203 115 TranM 1985 13.05.17 16.05.17 T60/307 116 NguyénDinh T 1959 13.05.17 13.05.17 T60/356 117 Truong ThtQ 1993 13.05.17 14.05.17 T60/116 118 Nguyen VanC 1995 14.05.17 14.05.17 T60/386 119 Nguyen Trpng T 1983 16.05.17 18.05.17 T60/298 120 Nguyen Viet T 1992 17.05.17 18.05.17 T60/217 121 Ngp VânT 1983 18.05.17 18.05.17 T60/197 122 VuVânT 1958 18.05.17 19.05.17 T60/482 123 NguyénQuang T 1975 18.05.19 19.05.17 T60/480 124 LuongKim T 1995 18.05.17 18.05.17 T60/364 125 Nguyen Tién T 1985 20.05.17 22.05.17 T60/481 VânD T 126 LéThiT 1963 22.05.17 23.05.17 T60/355 127 Truong Thi T 1985 23.05.17 25.05.17 T60/185 128 Quach ThiMaiH 1968 27.05.17 02.06.17 T60/187 129 LéVânV 1986 27.05.17 28.05.17 T60/202 130 Truong Th}Hai A 1998 29.05.17 31.05.17 T60/456 131 Nguyen Van T 1988 29.05.17 30.05.17 T60/170 132 Orang Thi M 1982 31.05.17 03.06.17 T60/208 133 Nguyen Thi D 1991 01.06.17 04.06.17 T60/200 134 NguyénGiaS 1961 05.06.17 05.06.17 T60/161 135 Nguyen VanD 1979 06.06.17 08.06.17 T60/213 136 Mai ThuQ 2001 07.06.17 09.06.17 T60/174 137 NguyenDucD 1976 09.06.17 11.06.17 T60/173 138 HoangThi.D 1959 10.06.17 13.06.17 T60/218 139 BuiHñuN 1989 13.06.17 13.06.17 T60/191 140 Dao TrungH 1999 13.06.17 14.06.17 T60/354 141 DuongDinhA 1995 13.06.17 18.06.17 T60/196 142 LéQuangN 1987 13.06.17 18.06.17 T60/205 143 Bui VanQ 1997 13.06.17 18.06.17 T60/168 144 Nguyen VanQ 1967 16.06.17 17.06.17 T60/348 145 Le ThiHoaiN 2004 17.06.17 19.06.17 T60/414 146 TruongQaang H 1996 17.06.17 18.06.17 T60/167 147 Ngo VanT 1965 19.06.17 21.06.17 T60/164 148 NgñThi.N 1971 19.06.17 23.06.17 T60/346 149 Hoang ThtH 1998 21.06.17 24.06.17 T60/311 150 Khuong ViétK 1958 23.06.17 23.06.17 T60/380 15 l PhanThi T 1995 23.06.17 26.06.17 T60/368 152 Le Thi V 1984 24.06.17 28.07.17 T60/384 153 Hoang Thi Cñng L 1935 24.06.17 25.06.17 CCM 154 Nguyen Hñu S 1963 24.06.17 24.06.17 T60/382 155 Bui Van T 1997 24.06.17 24.06.17 T60/381 156 Nguyen Van V 1968 25.06.17 27.06.17 T60/367 157 Bui Kim H 1997 26.06.17 29.06.17 T60/415 158 Bui Xuan T 1974 27.06.17 28.06.17 T60/465 159 Do Hoa C 1969 27.06.17 02.07.17 T60/321 160 Bui Xuan Ng9c A 1996 01.07.17 05.07.17 T60/383 161 Tran Thi Q 2000 02.07.17 06.07.17 T60/401 162 Chu Thi P 1978 05.07.17 07.07.17 T60/317 163 Mac Th} T 1988 09.07.17 09.07.17 T60/379 164 Tran Thi L 1982 10.07.17 11.07.17 T60/312 165 Phi Thi Thanh N 1987 11.07.17 12.07.17 T60/457 166 Nguyen Th} H 1997 12.07.17 14.07.17 T60/366 167 Nguyen Van Q 1990 15.07.17 17.07.17 T60/476 168 Nguyen Ba L 1965 16.07.17 17.07.17 T60/402 169 Vfi Thi N 1988 16.07.17 16.07.17 T60/403 170 Nguyen Hñu M 1963 17.07.17 18.07.17 CCM 171 Diang Van T 1974 19.07.17 19.07.17 T60/472 172 Nguyen Hong S 2000 19.07.17 22.07.17 CCM 173 Nguyen Thi D 1951 20.07.17 06.08.17 CCM 174 Le Quang T 1979 21.07.17 21.07.17 T60/365 175 Vu Thi Thanh L 1987 22.07.17 24.07.17 T60/377 176 Le Thi Ngpc A 1994 26.07.17 28.07.17 T60/438 177 Bui Sy H 1964 28.07.17 29.07.17 T60/470 178 Phan Thi T 1995 30.07.17 01.08.17 T60/369 179 Truong Thi H 1991 31.07.17 01.08.17 T60/409 180 Nguyen Tr9ng M 1989 01.08.17 02.08.17 T60/516 181 Do V n V 1966 02.08.17 03.08.17 T60/517 182 Nguyen Vân H 1984 02.08.17 03.08.17 T60/518 183 Pham Van H 1958 02.08.17 03.08.17 T60/308 184 Nguyen Th{ H 1964 02.08.17 03.08.17 T60/519 185 Bui Van T 1993 05.08.17 07.08.17 T60/520 186 Tran Due T 1951 11.08.17 12.08.17 T60/528 187 Le Vân 1976 13.08.17 13.08.17 T60/523 188 Do Xuân N 1987 13.08.17 14.08.17 T60/524 189 Diang Tién N 1981 13.08.17 15.08.17 T60/525 190 Trinh Xuan P 2001 14.08.17 15.08.17 T60/526 191 Pham Ngoc H 1972 15.08.17 17.08.17 T60/507 192 Pham Van H 1987 17.08.17 19.08.17 T60/508 193 Try Trung T 1975 18.08.17 20.08.17 T60/509 194 Nguyen Due D 2003 19.08.17 20.08.17 T60/514 195 Vu Xuan T 1993 19.08.17 21.08.17 T60/510 196 Le The T 1998 24.08.17 25.08.17 T60/511 197 Nguyen Thi L 1997 25.08.17 15.08.17 T60/448 198 Nguyen Van H 1990 27.08.17 31.08.17 T60/527 199 Do Anh D 1988 28.08.17 28.08.17 T60/515 Ha Noi 29 thang 11 nam 2017 DC NHLAN CUA TO LUIJ TR”U HO SCf Nghién cpu sinh Vu Anh Phvong dâ nghién ct:u 199 benh ân câ tén vâ mâ lu:u try nhv trén Ngu:âi xâc nhan PHONG HOACII TONG HCfP BENH BACH MAI ... ? ?Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích paraquat huyết tƣơng áp dụng phục vụ chẩn đoán, điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp paraquat? ?? với ba mục tiêu: Nghiên cứu phát triển phương pháp phân tích paraquat. .. NHIÊN Vũ Anh Phƣơng NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PARAQUAT TRONG HUYẾT TƢƠNG VÀ ỨNG DỤNG PHỤC VỤ CHẨN ĐOÁN ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN NGỘ ĐỘC CẤP PARAQUAT Chun ngành: Hóa phân tích Mã số: 62440118... địa phương Áp dụng định lượng paraquat mẫu huyết tương bệnh nhân ngộ độc paraquat bệnh viện tuyến trung ương hai phương pháp từ đánh giá hiệu phục vụ điều trị ngộ độc cấp PQ dựa vào nồng độ PQ huyết