Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu luận án là nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích paraquat trong huyết tương người bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector DAD (HPLC/DAD) và phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C 4D). Áp dụng định lượng paraquat trong huyết tương bệnh nhân ngộ độc paraquat tại các bệnh viện tuyến trung ương và địa phương và nghiên cứu, đánh giá phục vụ điều trị dựa vào nồng độ PQ trong huyết tương
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Vũ Anh Phƣơng NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PARAQUAT VÀ ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN, ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN NGỘ ĐỘC CẤP PARAQUAT Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 62440118 DỰ THẢO TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2018 Cơng trình đƣợc hồn thành Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Tạ Thị Thảo PGS.TS Hà Trần Hưng Giới thiệu 1: Giới thiệu 2: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp sở họp tại: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN vào hồi .giờ .phút, ngày .tháng .năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án tại: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm thông tin - thư viện Đại học Quốc gia Hà Nội MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT, Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI LUẬN VĂN P r qu t viết t t c paraquaternary bipyridyl thuốc diệt c giá thành r , hiệu diệt c tốt nên thường sử dụng rộng rãi Việt Nam Mặc dù paraquat (PQ) thân thiện với môi trường ại độc người Liều tử vong c PQ người trưởng thành ước tính khoảng 10 ml dung dịch 20% Trong năm gần đây, giới Việt N m có nhiều trường hợp ngộ độc PQ (do vơ tình hay có ch ý) Tại Trung tâm Chống độc TTCĐ - Bệnh viện Bạch Mai, số ượng bệnh nhân ngộ độc PQ gi tăng đáng kể, năm 2014 có 391 c ngộ độc, năm 2015 tăng ên đến 401 ca, năm 2016 458 c tháng đầu năm 2017 200 c Trong tỉ lệ tử vong 72,9% Hầu hết bệnh nhân ngộ độc PQ mức độ nặng tỉ lệ tử vong cao Trước thực tế đó, năm trước có nhiều quốc gia (32 quốc gia) cấm ưu hành sử dụng PQ, nhiên đến ngày 08/02/2017 Việt Nam ban hành thông tư việc loại b PQ kh i danh mục hóa chất bảo vệ thực vật HCBVTV phép sử dụng Mặc dù vậy, số ượng bệnh nhân ngộ độc PQ đến cấp cứu TTCĐ có suy giảm khơng đáng kể (từ tháng 1/2017- 6/2017 có khoảng 200 ca ngộ độc) Để định ượng PQ huyết tương, phương pháp phân tích thường sử dụng bao gồm: phương pháp s c ký l ng khối phổ (LC- MS), s c ký khí khối phổ (GC-MS , phương pháp điện di mao quản khối phổ (CEMS , phương pháp s c ký l ng hiệu c o HPLC … Hiện tại, Trung tâm Chống độc - Bệnh viện Bạch Mai có trang bị hai thiết bị phân tích s c ký l ng hiệu c o HPLC/ DAD thiết bị điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D chư có quy trình chuẩn định ượng nồng độ PQ huyết tương c a bệnh nhân ngộ độc PQ Do vậy, luận án hướng tới xây dựng quy trình phân tích để định ượng PQ phương pháp HPLC, phục vụ điều trị Trung tâm Chống độc nói riêng hay bệnh viện tuyến trung ương nói chung Đồng thời, luận án xây dựng quy trình phù hợp để phân tích phương pháp CE - C4D nhằm áp dụng cho tuyến đị phương nơi mà khó tr ng bị thiết bị đ t tiền HPLC) Trên sở đó, tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích paraquat đánh giá khả ứng dụng chẩn đoán, điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp paraquat” với hi vọng đóng góp phần chẩn đoán điều trị sớm cho bệnh nhân ngộ độc paraquat bệnh viện tuyến trung ương đị phương MỤC TIÊU, NHIỆM VỤ CỦA LUẬN ÁN Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích paraquat huyết tương người phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector DAD (HPLC/DAD) phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) Áp dụng định lượng paraquat huyết tương bệnh nhân ngộ độc paraquat bệnh viện tuyến trung ương địa phương nghiên cứu, đánh giá phục vụ điều trị dựa vào nồng độ PQ huyết tương PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU, NGUYÊN LIỆU, THIẾT BỊ 3.1 Phương pháp phân tích: • Phương pháp phân tích lựa chọn phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC/ DAD) phƣơng pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE-C4D) - Phù hợp với đối tượng phân tích huyết tương - Chính xác, độ nhạy độ lặp lại tốt, nhanh - Phù hợp với điều kiện bệnh viện tuyến trung ương đị phương 3.2 Đối tượng nghiên cứu - Mẫu huyết tương tr ng lấy từ Viện huyết học truyền máu Trung ương - Mẫu huyết tương c a bệnh nhân ngộ độc paraquat TTCĐ - BV Bạch Mai 3.3 Thiết bị dụng cụ: Thiết bị - Thiết bị CE loại bán tự động, cung cấp công ty 3sanalysis (http://www.3sanalysis.vn/) - Thiết bị s c ký l ng hiệu c o Agi ent 1200 - Cân phân tích Precis XT 220A, độ xác 0,0001 g - Máy đo pH Meter 744, giá trị đọc ± 0,01, khoảng đo từ 0,00- 14,00 - Máy y tâm Univers 320, hãng Hettich, Đức, tốc độ tối đa 4000 vòng/phút - Máy l c votex 3005 hãng Memmert, Đức Dụng cụ - Cột chiết pha r n Sep- Pak C18 Vac 3cc (500 mg) - Pipetman loại từ - 1000 µL - Mao quản đường kính 75 μm, LT = 60 cm, Leff = 50 cm - Các lọ falcon 15 ml, 45 ml lọ polypropylen (PP) để đựng dung dịch chuẩn - Ống nghiệm lấy máu có chứa chất chống đơng ống nghiệm có nút xốy Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN Nghiên cứu xây dựng tối ưu hó quy trình phân tích paraquat mẫu huyết tương người phương pháp CE-C4D phương pháp HPLC - Hai phương pháp có độ nhạy, độ lặp lại tái lặp lại tốt, độ xác cao - Có thể ứng dụng để phân tích nồng độ paraquat mẫu huyết tương c a bệnh nhân ngộ độc paraquat, giúp ích chẩn đốn điều trị 5 KẾT CẤU LUẬN ÁN Luận án ngồi phần mở đầu, danh mục hình, danh mục sơ đồ, bảng ký hiệu chữ viết t t, kết luận, tài liệu tham khảo, phụ lục có chương s u: Chương Tổng quan Chương Thực nghiệm Chương Kết CHƢƠNG TỔNG QUAN Paraquat từ viết t t c a paraquaternary bipyridyl, tên khoa học 1,1' - dimethyl - 4,4' bipyridilium PQ thuộc nhóm hợp chất amin bậc 4, thuốc diệt c sử dụng rộng rãi với đặc tính diệt c nhanh hiệu PQ tan tốt nước độ tan 700 g/l 20oC), tan dung mơi hữu cơ, PQ bị phân h y ánh sáng UV, bị bất hoạt tác nhân hoạt động bề mặt anionic đất sét, bị hoạt tính nhanh tiếp xúc với đất PQ không b y Dung dịch PQ đặc ăn mòn thép, thiếc, s t mạ kẽm nhôm Lượng thuốc trừ c chứa thành phần PQ nước ta ưu tiên sử dụng hàng đầu việc diệt c Bên cạnh đó, có nhiều người dân sử dụng sai mục đích c a thuốc trừ c PQ, dùng để tự tử Hàng năm, Trung tâm Chống độc - Bệnh viện Bạch Mai tiếp nhận nhiều trường hợp ngộ độc PQ số đótỉ lệ tử vong cao Năm 2011 tỉ lệ tử vong bệnh nhân ngộ độc PQ 72,9% Tỉ lệ tiếp tục gia tăng năm gần Trước thực trạng đó, đầu năm 2017 (08/02/2017), Bộ NN & PTNT đư định loại b PQ kh i danh mục thuốc BVTV phép sử dụng Việt Nam Tuy nhiên, với ượng PQ nhập năm trước (theo thống kê trên) PQ cịn tồn dư nhiều, sử dụng thời gian dài Do vậy, nguy người dân dùng PQ tự tử có khả xảy cao Việc định ượng paraquat huyết tương có ý nghĩ quan trọng chẩn đoán điều trị CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 Nghiên cứu điều kiện tối ƣu đánh giá phƣơng pháp phân tích 2.1.1 Phương pháp nghiên cứu điều kiện tối ưu cho q trình phân tích paraquat phương pháp HPLC phương pháp CE-C4D Thông qua tài liệu tham khảo số khảo sát sơ bộ, đư r số điều kiện cố định để phân tích PQ phương pháp HPLC CE - C4D s u: Điều kiện CE - C4D: mao quản có chiều dài 60 cm, chiều dài hiệu dụng 50 cm, đường kính 75 µm Mẫu bơm vào m o quản phương pháp th y động lực học kiểu xi phông cách nâng đầu mao quản ên độ cao 10 cm so với đầu mao quản lại thời gian 30s, PQ tách +20kV Hệ đệm His/ace 10 mM (pH=4,0) Điều kiện HPLC/DAD: ph tĩnh: cột ph đảo Agilent C8, nhiệt độ cột: 30oC, thể tích bơm mẫu 30 µL, bước sóng phát hiện: 259 nm, tốc độ dòng pha động: 0,5 m /phút, ph động: ACN - Đệm 5:95, v/v đệm gồm 1,10 g natri heptanesulfonate; 2,00 g KCl; 2,00 ml polyethylenglycol 400; 0,05% triethy mine; 200 mL MeOH; thêm nước đến gần 1000 mL, điều chỉnh pH đến 2,5 dung dịch H3PO4 đặc, định mức vừ đ 1000 m nước deion 2.1.2 Đánh giá phương pháp phân tích 2.1.2.1 Đánh giá độ lặp lại S u có đầy đ điều kiện tối ưu, tiến hành dựng đường chuẩn thu phương trình đường chuẩn Đánh giá s i số hệ thống c a hệ số phương trình hồi quy sử dụng chuẩn Student Fisher để đánh giá kết luận, s u tiến hành phân tích mẫu thực tế Khi phân tích mẫu thực độ lặp lại c a trình xử lý mẫu khảo sát đánh giá Để đánh giá độ lặp lại, mẫu xử lý điều kiện Mỗi mẫu sau xử ý bơm ần để thu kết trung bình Các giá trị trung bình sử dụng để đánh giá độ lặp c phương pháp xử lý mẫu Giá trị % RSD dùng làm giá trị đánh giá độ lặp c a phương pháp xử lý mẫu Để đánh giá độ tái lặp lại, tiến hành phân tích mẫu thử qu ngày khác nh u Các kết thu dùng làm giá trị đánh giá độ lệch chuẩn tái lặp tương đối (% RSDR) 2.1.2.2 Đánh giá độ phương pháp Mẫu tr ng thêm ượng định chất chuẩn vào mức nồng độ s o cho hàm ượng chất phân tích sau xử lý khơng bị vượt q đường chuẩn Xử lý mẫu theo quy trình chọn phân tích hệ thống HPLC CE-C4D thu hàm ượng chất thêm vào đánh giá độ thu hồi c phương pháp xử lý mẫu S u đó, tiến hành đánh giá, kiểm tra sai khác khác giá trị phân tích lại giá trị thêm chuẩn Nếu s i khác khơng có ý nghĩ thống kê, chứng t phương pháp phân tích khơng m c sai số hệ thống ngược lại) 2.2 Phân tích mẫu thực tế 199 mẫu thực s u xử ý thu dung dịch phân tích đồng thời thiết bị HPLC CE-C4D Mỗi mẫu phân tích lặp lại lần lấy kết trung bình Tính tốn giá trị nồng độ paraquat dự vào đường chuẩn xây dựng mẫu huyết tương Đánh giá kết phân tích cách so sánh cặp giá trị nồng độ PQ CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu định lƣợng paraquat huyết tƣơng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC/ DAD) 3.1.1 ối ưu h điều iện c hệ thống phân tích s c ng hiệu c o (HPLC) Thông qua tài liệu tham khảo số khảo sát sơ bộ, đư r điều kiện tối ưu cho phân tích dung dịch chuẩn PQ phương pháp HPLC s u: - Ph tĩnh: cột ph đảo Agilent C8 (150 mm x 4,6 mm; µm) cột bảo vệ C8 (20 mm x 4,0 mm, μm) Nhiệt độ cột: 30oC Thể tích bơm mẫu 30 µL - Bước sóng phát hiện: 259 nm (detetor DAD) - Tốc độ dòng ph động: 0,5 ml/phút - Ph động: ACN - Đệm (5:95, v/v Đệm gồm 1,10 g natri heptanesulfonate; 2,00 g KCl; 2,00 ml polyethylenglycol 400; 0,05% triethy mine; 200 mL MeOH; thêm nước đến gần 1000 mL Điều chỉnh pH đến 2,5 dung dịch H3PO4 đặc Định mức vừ đ 1000 m nước deion 3.1.2 Khảo sát phương pháp xử lý mẫu huyết tương phân tích PQ Qua kết khảo sát phương pháp kết t a protein TCA, thời gian l c xoáy, y tâm, chúng tơi thu quy trình xử lý mẫu huyết tương hình 3.1 10 Bảng 3.1 Điều kiện tối ưu cho phân tích PQ phương pháp CE - C4D Các yếu tố Điều kiện Detector CE - C4D Mao quản silica, tổng chiều dài 60 cm, Mao quản chiều dài hiệu dụng 50 cm, đường kính 75 µm Phương pháp bơm mẫu Th y động lực học kiểu xiphông: 10 cm Thời gi n bơm mẫu 30s Dung dịch đệm điện di His/Ace (10 mM), pH=4,0 Thế tách +20kV 3.2.2 Nghiên cứu quy trình tách chiết PQ mẫu huyết tương phương pháp chiết pha r n Khảo sát thành phần, tỉ lệ dung dịch rửa tạp Chúng sử dụng loại dung dịch rửa tạp sau: - Dung dịch 1: Dung dịch 2: x 2,5ml H2O x 2,5 ml H3PO4 10mM - Dung dịch 2: x 2,5 ml dung dịch đệm phosphate pH=7,0 - Dung dịch 3: x 2,5 ml H2O4 x 2,5 ml MeOH (rửa lần ượt, riêng rẽ) Các kết khảo sát thể Hình 3.3 13 20 mV PQ 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 Thêi gian di chuyÓn (phót) 4.6 4.8 5.0 Hình 3.3 Kết phân tích điện di sau chiết pha r n sử dụng loại dung dịch rửa tạp khác Các kết khảo sát cho thấy rửa tạp dung dịch H3PO4 10 mM dung dịch đệm phosphate (pH=7,0) khơng xuất tín hiệu PQ, chứng t PQ không giữ lại cột C18 (thử màu dung dịch có PQ (màu xanh)) Khi rửa tạp lần ượt với nước, s u đến methanol cho tín hiệu PQ tốt, pic s c, nhọn hiệu suất thu hồi đạt 80% Do vậy, lựa chọn dung dịch rửa tạp bao gồm nước methanol Sau lựa chọn thành phần dung dịch rửa tạp, tiến hành khảo sát tiếp tỉ lệ thành phần này, nhằm tìm r điều kiện tối ưu Các tỉ lệ H2O/MeOH khảo sát s u: - Dung dịch 1: Dung dịch trộn H2O/MeOH 100:0 (v/v) - Dung dịch 2: Dung dịch trộn H2O/MeOH 90:10 (v/v) - Dung dịch 3: Dung dịch trộn H2O/MeOH 70:30 (v/v) - Dung dịch 4: Rửa theo thứ tự lần ượt x 2,5 ml H2O ; x 2,5 ml MeOH Các kết khảo sát thể Hình 3.4 14 PQ 20 mV 3.5 4.0 4.5 Thêi gian di chun (phót) 5.0 5.5 Hình 3.4 Điện di đồ ảnh hưởng c a tỉ lệ dung dịch rửa tạp đến khả phân tách PQ Từ kết khảo sát cho thấy sử dụng dung dịch trộn H2O/MeOH tỉ lệ thời gian cạn mẫu âu, ượng cation trước sau PQ nhiều, hiệu suất thu hồi đạt ngưỡng thấp giảm dần ( 0,05 độ tin cậy 95% chứng t h i phương pháp cho kết tương đồng Vì bên cạnh phương pháp HPLC, phương pháp CE C4D phương pháp tốt, tin cậy để định ượng PQ huyết tương ứng dụng chẩn đốn, điều trị tiên ượng ngộ độc PQ từ tuyến sở 20 3.4 Nghiên cứu áp dụng kết định lƣợng nồng độ PQ huyết tƣơng phục vụ chẩn đoán, tiên lƣợng điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp PQ - Nồng độ PQ huyết tương hai nhóm sống tử vong Hình 3.10 Nồng độ Paraquat huyết tương hai nhóm sống tử vong Kết cho thấy nhóm bệnh nhân sống nồng độ PQ huyết tương vào viện thấp, nhóm bệnh nhân có nồng độ PQ huyết tương thời điểm vào viện c o tử vong Giá trị nồng độ PQ huyết tương tiên ượng tử vong xuất s c chứng minh nghiên cứu c a Proudfoot Schermann cho thấy tử vong nồng độ PQ huyết tương > mg/L sau uống lớn 0,1 µg/mL s u uống 24 Nghiên cứu c a Gil (2008) bệnh nhân tử vong nồng độ PQ huyết tương ớn 0,12 μg/ml sau uống; 0,02 μg/ml 12 sau uống; 0,01 μg/ml 24 sau uống Giá trị c a nồng độ PQ huyết tương có giá trị tiên ượng tử vong tương tự nghiên cứu bước đầu c a chúng tôi, bệnh nhân đến viện vịng 10 có nồng độ PQ c o 10 g/m tử vong Tuy nhiên, giá trị nồng độ PQ huyết tương cần đánh giá theo thời gian 21 - Điều trị lọc máu hấp phụ: Có 142 bệnh nhân tiến hành lọc máu hấp phụ Số lần lọc nhiều lần, lần, ch yếu - lần Tuy nhiên, có 80 bệnh nhân tiến hành lọc máu âm tính Hầu hết BN áp dụng vòng từ - 12h s u ngộ độc Hình 3.11 Nồng độ PQ huyết tương hi vào viện sau lọc phương pháp HPLC CE Kết định ượng nồng độ PQ huyết tương s u lần lọc nghiên cứu c a cho thấy lọc máu hấp phụ có tác dụng rõ rệt việc lấy PQ kh i thể, đặc biệt lần lọc Khi nồng độ PQ giảm thấp, hiệu lần lọc sau giá trị dù không lần lọc đầu - Ước ượng số lọc máu HP dựa vào nồng độ PQ Bảng 3.3 Số lọc trung bình dựa theo nồng độ PQ huyết tương Nồng độ paraquat huyết tƣơng Số lọc < µg/mL 1,9 0,69 (n=42) (1-4) 1-2 µg/mL 3,3 0,96 (n=13) (2-5) >2 µg/mL 3,6 1,11 (n=25) (2-6) 22 p < 0,001 Hình 3.12 Ước ượng số lọc theo nồng độ PQ huyết tương úc vào viện Để đánh giá khả hướng dẫn điều trị (lọc máu hấp phụ), 80 bệnh nhân lọc máu hấp phụ tới PQ âm tính chia vào nhóm: nhóm có nồng độ PQ huyết tương vào viện < 1, - , > µg/mL so sánh số lọc nhóm Kết cho thấy số lọc tăng theo nồng độ PQ huyết tương Do ngưỡng định ượng c phương pháp CE c o nên nồng độ PQ huyết tương đo phương pháp CE - C4D âm tính phương pháp HPLC cịn dương tính, tức cịn định lọc HP Vì lọc đến xét nghiệm CE - C4D âm tính chư đ số lọc, số lọc chênh lệch giữ phương pháp d o động từ - cuộc, trung bình 0,9 ± 0,9 Nồng độ PQ huyết tương giúp đánh giá mức độ nặng (tiến triển tổn thương tạng) yếu tố độc lập tiên ượng tử vong bệnh nhân ngộ độc PQ Nồng độ PQ huyết tương có giá trị tốt đánh giá hướng dẫn điều 23 trị lọc máu HP Kết định ượng nồng độ PQ huyết tương s u lần lọc cho thấy lọc máu HP có tác dụng rõ rệt việc lấy PQ kh i thể, đặc biệt lần lọc Định ượng PQ CE - C4D tương tự HPLC giúp xác định số lọc HP bệnh nhân ngộ độc PQ Như vậy, lần cho thấy phương pháp CE - C4D hoàn toàn đáp ứng yêu cầu chẩn đoán điều trị kịp thời cho bệnh nhân ngộ độc PQ từ tuyến y tế đị phương 24 KẾT LUẬN Với mục tiêu đặt r nghiên cứu quy trình định ượng nồng độ paraquat huyết tương phương pháp HPLC phương pháp CE C4D, từ nghiên cứu đánh giá kết phục vụ điều trị bệnh nhân, thu kết s u: Đã xây dựng quy trình phân tích PQ mẫu huyết tương phương pháp HPLC-DAD o Tối ưu hó điều kiện để tách PQ xá định phương pháp HPLC, detetor DAD λ=259 nm Các điều kiện tối ưu b o gồm: cột ph đảo Agilent C8 ((150 mm x 4,6 mm; µm) cột bảo vệ C8 (20 mm x 4,0 mm, μm) Pha động đệm photphat pH=2,5 theo thể tích (5:95) gồm ACN - Đệm gồm (natri heptanesulfonate; KCl; polyethylenglycol; triethylamine; MeOH) o Điều kiện xử lý mẫu PQ kh i mẫu huyết tương có TCA ly tâm lọc lấy dung dịch xác định hệ thống HPLC o Phương pháp phân tích PQ mẫu huyết tương thu phương trình đường chuẩn khoảng nồng độ từ 0,040 - 10 µg/ml y = (0,84 ±0,32) + (205,06 ± 0,08) x có LOD= 0,013 µg/ml; LOQ = 0,040 µg/ml hệ số tương qu n R2 = 0.9999 Độ lặp lại c thiết bị phương pháp phân tích RSD nh 3% độ tái ặp lại (RSDR nh 1% ; độ ổn định thời gi n phân tích độ ổn định thời gi n bảo quản RSD nh 2% ; tính tuyến tính (giá trị R2 = 0,9999 ; độ thu hồi (hiệu suất thu hồi c PQ trung bình 100,56% Đã xây dựng quy trình phân tích PQ phương pháp điện di mao quản sử dụng detector độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) 25 Các điều kiện tối ưu b o gồm: dung dịch đệm His/ace (10mM), pH = 4,0; mẫu bơm vào thiết bị với độ cao 10 cm thời gian 30s Thế tách +20 kV Nghiên cứu, tối ưu điều kiện chiết PQ huyết tương cột C18 Đề xuất hai quy trình xử lý mẫu cột SPE Cả hai quy trình cho hiệu suất thu hồi PQ đạt ~ 80%, khoảng tuyến tính rộng: 1,50 - 130,00 µg/ml Giới hạn phát c a PQ huyết tương MDL thấp đạt 0,50 µg/ml Xây dựng đường chuẩn dung dịch chuẩn PQ khoảng nồng độ 1,00 - 20,00 µg/m , phương trình hồi quy cho hệ số tương quan R2= 0,998 Giá trị giới hạn phát (LOD) c a thiết bị 0,30 µg/ml Các giá trị CV % c phép đo nh 3%, nằm giới hạn cho phép Luận án áp dụng thành công phương pháp HPLC CE - C4D định ượng PQ huyết tương 199 bệnh nhân ngộ độc PQ Kết nghiên cứu cho thấy nồng độ PQ huyết tương định ượng hai phương pháp có tương qu n tuyến tính chặt chẽ (r = 0,985, p < 0,001) Nồng độ PQ huyết tương giúp đánh giá mức độ nặng (tiến triển tổn thương tạng) yếu tố độc lập tiên ượng tử vong bệnh nhân ngộ độc PQ Nồng độ PQ huyết tương có giá trị tốt đánh giá hướng dẫn điều trị lọc máu hấp phụ Kết định ượng nồng độ PQ huyết tương s u lần lọc cho thấy lọc máu HP có tác dụng rõ rệt việc lấy PQ kh i thể, đặc biệt lần lọc Định ượng PQ CE - C4D tương tự HPLC giúp xác định số lọc HP bệnh nhân ngộ độc PQ Như vậy, lần cho thấy phương pháp CE - C4D hồn tồn đáp ứng u cầu chẩn đốn điều trị kịp thời cho bệnh nhân ngộ độc PQ từ tuyến y tế đị phương 26 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Anh Phuong Vu, Thi Ngan Nguyen, Thi Trang Do, Thu Ha Doan, Tran Hung Ha, Thi Thao Ta, Hung Long Nguyen, Peter C Hauser, Thi Anh Huong Nguyen Th nh Duc M i 2017 , “C inic screening of paraquat in plasma samples using capillary electrophoresis with contactless conductivity detection: Towards rapid diagnosis and therapeutic treatment of acute paraquat poisoning in Vietn m”, Journal of Chromatography B 1060, pp.111-117 Phuong Anh Vu, Nguyen Thi Ngan, Nguyen Thi Kim Thuong, et 2017 , “An HPLC Qu ntit tive An ysis of P r qu t in Hum n Plasma: A Helpful Tool for Diagnosis and Evaluation of Treatment of Paraquat Poisoning in Vietnamese Hospit s”, Int J Sci Basic Appl Res IJSBAR, 35(2), tr.1-9 Vũ Anh Phương, Hà Trần Hưng, Nguyễn Thị Ngân, Tạ Thị Thảo 2018 , “B n đầu nghiên cứu điều kiện tối ưu xác định paraquat phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc CE - C4D”, Tạp chí phân tích hóa, lý sinh học, (23), tr.30-35 Vũ Anh Phương, Tạ Thị Thảo, Hà Trần Hưng 2018 , “Ứng dụng phương pháp s c ký l ng hiệu c o HPLC điện di mao quản (CE-C4D điều trị ngộ độc cấp p r qu t”, Y học thực hành, số (1068), tr.15-17 Vũ Anh Phương, Tạ Thị Thảo, Hà Trần Hưng 2018 “Ứng dụng phương pháp s c ký l ng hiệu c o HPLC điện di mao quản (CE-C4D) chẩn đoán tiên ượng bệnh nhân ngộ độc cấp p r qu t”, Y học Việt Nam, số (466), tr.79-82 27 ... ? ?Nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích paraquat đánh giá khả ứng dụng chẩn đoán, điều trị bệnh nhân ngộ độc cấp paraquat? ?? với hi vọng đóng góp phần chẩn đoán điều trị sớm cho bệnh nhân ngộ. .. trọng chẩn đốn điều trị CHƢƠNG THỰC NGHIỆM 2.1 Nghiên cứu điều kiện tối ƣu đánh giá phƣơng pháp phân tích 2.1.1 Phương pháp nghiên cứu điều kiện tối ưu cho q trình phân tích paraquat phương pháp. .. tốn giá trị nồng độ paraquat dự vào đường chuẩn xây dựng mẫu huyết tương Đánh giá kết phân tích cách so sánh cặp giá trị nồng độ PQ CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu định lƣợng paraquat