Phân lập và đánh giá hoạt tính sinh học của một số hợp chất trong lá cây sum liên ( adinandra lienii hien yakovlev)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ VĂN HIỆU PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ CÂY SUM LIÊN (ADINANDRA LIENII HIEN & YAKOVLEV) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ VĂN HIỆU PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ CÂY SUM LIÊN (ADINANDRA LIENII HIEN & YAKOVLEV) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LIỆU-DƯỢC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Lê Nguyễn Thành TS Phạm Hà Thanh Tùng HÀ NỘI 2021 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Lê Nguyễn Thành TS Phạm Hà Thanh Tùng trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ suốt thời gian nghiên cứu, thực đề tài Xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng sau Đại học trường Đại học Dược Hà Nội, Viện Hóa sinh biển, Bộ môn thực vật-Đại học Dược Hà Nội cho phép, tạo điều kiện thuận lợi trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến cán nhân viên Viện Hóa sinh biển, môn thực vật, cán nhân viên Khoa Dược - Đại Học Đại Nam giúp đỡ tơi q trình thực nghiệm hồn tất luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình, học viên chuyên nghành Dược liệu – Dược học cổ truyền khóa 24 ln gắn bó với tơi, nguồn động lực cho tiếp tục phấn đấu học tập công tác Hà nội, tháng 05 năm 2021 Học viên Đỗ Văn Hiệu MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN .2 1.1 Tổng quan họ Pentaphylacaceae 1.2 Tổng quan chi Adinandra Jack 1.2.1 Vị trí phân loại 1.2.2 Về đặc điểm thực vật phân bố 1.2.3 Tình hình nghiên cứu chi Adinandra Jack .4 1.3 Tổng quan loài Adinandra lienii Hien & Yakovlev 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.2 Phương tiện nghiên cứu .17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phương pháp xử lý chiết mẫu 18 2.3.2 Phương pháp phân tách hỗn hợp phân lập hợp chất 19 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất phân lập 20 2.3.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học .20 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ 24 3.1 Chiết xuất, phân lập hợp chất 24 3.1.1 Xử lý mẫu chiết xuất .24 3.1.2 Phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 24 3.1.3 Phân lập hợp chất từ phân đoạn nước 25 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 27 3.2.1 Xác định cấu trúc hợp chất AL1 27 3.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất AL2 30 3.2.3 Xác định cấu trúc hợp chất AL3 33 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất AL4 36 3.2.5 Xác định cấu trúc hợp chất AL5 40 3.2.6 Xác định cấu trúc hợp chất AL6 43 3.3 Kết thử nghiệm hoạt tính gây sinh học .46 3.3.1 Kết thử nghiệm gây độc tế bào 46 3.3.2 Kết thử nghiệm hoạt tính bắt gốc tự DPPH 47 3.3.3 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế α-glucosidase 47 CHƯƠNG BÀN LUẬN .48 4.1 Kết trình chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc 48 4.2 Kết thử nghiệm tác dụng sinh học .49 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 5.1 Kết luận 53 5.2 Kiến nghị .54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CÁC TỪ TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT A Adinandra Adinandra BHT Butylated hydroxytoluene Butylated hydroxytoluen VIẾT TẮT 13 C-NMR CAA DEPT 13 Carbon Nuclear Magnetic Resonance Cellular antioxidant activity Distortionless enhancement by polarization transfer Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C Hoạt tính chống oxy hóa tế bào Phổ DEPT DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxit DPPH Diphenyl picril hydrazilhydrate Diphenyl picril hydrazilhydrat EC50 50% effective concentration Nồng độ 50% tác dụng tối đa Electron Spray Phổ khối ion hóa phun Ionization - Mass Spectrometry mù điện tử EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat EtOH Ethanol Ethanol ESI-MS GC-MS Hep G2 HMBC HPLC Gas Chromatography Mass Spectometry Human hepatocellular carcinoma Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Performance Liquid Chromatography Sắc ký khí ghép khối phổ Dòng tế bào ung thư gan Phổ HMBC Sắc ký lỏng hiệu cao HSQC H-NMR IC50 Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân Coherence qua liên kết Proton nuclear magnetic resonance 50% inhibitory concentration Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H Nồng độ ức chế 50% đối tượng thử LU Human lung carcinoma LU MCF-7 Human breast carcinoma MCF-7 MS Mass Spectroscopy Phổ khối lượng 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)- 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)- 2,5-diphenyl tetrazolium 2,5-diphenyl tetrazolium bromide bromid MTT ORAC PSC Oxygen Radical Absorbance Capacity peroxyl radical scavenging capacity khả hấp thụ gốc oxy hóa Khả bắt gốc peroxyl TLC Thin-layer chromatography Sắc kí lớp mỏng % CS % Cell survival Tỷ lệ phần trăm tế bào sống sót DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách loài thuộc chi Adinandra Jack phân bố Việt Nam Bảng 1.2 Hoạt tính ức chế dòng ung thư Hep G2 MCF-7 số loài thuộc chi Adinandra Jack 15 Bảng 3.1 Số liệu phổ hợp chất AL1 29 Bảng 3.2 Số liệu phổ hợp chất AL2 32 Bảng 3.3 Số liệu phổ hợp chất AL3 .35 Bảng 3.4 Số liệu phổ hợp chất AL4 39 Bảng 3.5 Số liệu phổ hợp chất AL5 42 Bảng 3.6 Số liệu phổ hợp chất AL6 45 Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào 46 Bảng 3.8 Kết thử hoạt tính bắt gốc tự DPPH .47 Bảng 3.9 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế α-glucosidase 47 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Các hợp phân lập từ A nitida theo Wang (2003) .5 Hình 1.2 Các hợp chất flavonoid từ A nitida theo Jie Zhang (2005) Hình 1.3 Các hợp chất phân lập từ A nitida theo Wang (2008) Hình 1.4 Một số hợp chất phân lập Lu (2018) từ loài A nitida Hình 1.5 Các hợp chất phân lập từ loài A hainanensis .9 Hình 1.6 Chỉ số ORAC, PSC CAA số loài Adinandra Jack theo nghiên cứu Chen (2015) 12 Hình 1.7 Khả ức chế tăng sinh tế bào Caco-2 dịch chiết A nitida giai đoạn khác trình tiêu hóa mơ 14 Hình 2.1 Adinandra lienii Hien & Yakovlev 17 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất sử dụng nghiên cứu .19 Hình 2.3 Phản ứng oxi hóa khử phương pháp MTT 20 Hình 3.1 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 25 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn nước .26 Hình 3.3 Cấu trúc hợp chất AL1 27 Hình 3.4 Phổ 1H NMR hợp chất AL1 28 Hình 3.5 Phổ 13C-NMR hợp chất AL1 28 Hình 3.6 Cấu trúc hợp chất AL2 30 Hình 3.7 Phổ 1H NMR hợp chất AL2 31 Hình 3.8 Phổ 13C-NMR hợp chất AL2 31 Hình 3.9 Cấu trúc hợp chất AL3 33 Hình 3.10 Phổ 1H NMR hợp chất AL3 34 Hình 3.11 Phổ 13C-NMR hợp chất AL3 34 Hình 3.12 Cấu trúc hợp chất AL4 36 Hình 3.13 Phổ 1H NMR hợp chất AL4 37 Hình 3.14 Phổ 13C-NMR hợp chất AL4 37 Hình 3.15 Phổ HMBC hợp chất AL4 38 Hình 3.16 Cấu trúc hợp chất AL5 40 Hình 3.17 Phổ 1H NMR hợp chất AL5 41 Hình 3.18 Phổ 13C-NMR hợp chất AL5 41 Hình 3.19 Cấu trúc hợp chất AL6 43 Hình 3.20 Phổ 1H NMR hợp chất AL6 44 Hình 3.21 Phổ 13C-NMR hợp chất AL6 44 Hình 4.1 Các hợp chất phân lập đề tài 48 Hình 4.2 IC50 phân đoạn, hợp chất thử nghiệm gây độc tế bào .50 Hình 4.3 EC50 phân đoạn, hợp chất thử nghiệm bắt gốc tự DPPH .51 135 135.11 132.20 132.15 130 125 122.77 120 115 110 105 100 WAL7-MeOD-C13CPD 116.42 116.34 105.87 105.79 102.13 101.42 101.02 99.78 95 94.73 94.66 90 85 80 80.05 77.16 75 70 73.99 72.63 72.38 72.24 71.04 70.14 68.23 66.89 65 ppm 65.02 WAL7-MeOD-HMBC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ppm WAL7-MeOD-HMBC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 135 140 145 150 155 160 165 170 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 ppm WAL7-MeOD-HMBC ppm 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 ppm WAL7-MeOD-HMBC ppm 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 ppm WAL7-MeOD-HSQC ppm 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 ppm WAL7-MeOD-HSQC ppm 95 100 105 110 115 120 125 130 8.0 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 135 ppm WAL7-MeOD-HSQC ppm 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 4.2 4.1 4.0 3.9 3.8 3.7 3.6 3.5 3.4 3.3 ppm DỮ LIỆU PHỔ HỢP CHẤT AL6 1.194 7.266 7.263 AL7−CDCl3&MeOD−1H 0.814 1.130 2.877 6.610 4.307 4.915 5.009 4.944 7.030 3.235 2.535 3.595 1.467 1.000 ppm 5.171 5.165 5.159 3.367 3.305 3.302 3.299 3.140 3.122 3.107 2.127 2.104 1.929 1.920 1.901 1.893 1.844 1.837 1.819 1.798 1.790 1.650 1.624 1.585 1.565 1.557 1.536 1.520 1.512 1.500 1.492 1.471 1.442 1.430 1.413 1.398 1.299 1.286 1.266 1.246 1.240 1.225 1.217 1.185 1.065 1.012 F2 − Processing parameters SI 32768 SF 500.1300106 MHz WDW EM SSB LB 0.30 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 1H P1 8.50 usec PL1 −3.00 dB SFO1 500.1337510 MHz F2 − Acquisition Parameters Date_ 20210116 Time 17.47 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 16 DS SWH 10000.000 Hz FIDRES 0.152588 Hz AQ 3.2769001 sec RG 143.7 DW 50.000 usec DE 6.00 usec TE 300.0 K D1 1.00000000 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec Current Data Parameters NAME 2OANH-AL7 EXPNO PROCNO 5.2 1.000 2.1 ppm 2.2 3.140 3.122 3.107 1.194 2.0 1.8 1.9 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 1.467 2.127 2.104 AL7−CDCl3&MeOD−1H 1.130 6.610 4.307 4.915 5.009 4.944 7.030 3.235 2.535 3.595 5.171 5.165 5.159 ppm 0.814 2.877 1.929 1.920 1.901 1.893 1.844 1.837 1.819 1.798 1.790 1.650 1.624 1.585 1.565 1.557 1.536 1.520 1.512 1.500 1.492 1.471 1.442 1.430 1.413 1.398 1.299 1.286 1.266 1.246 1.240 1.225 1.217 1.185 1.065 1.012 0.953 0.930 0.905 0.876 0.863 0.848 0.833 0.825 0.805 0.792 0.779 0.737 0.708 0.699 0.658 0.635 ppm 200 180.551 180 160 138.070 140 120 125.402 AL7−CDCl3&MeOD−C13CPD 100 80 60 40 20 ppm 78.790 77.272 77.017 76.761 55.136 52.709 49.531 49.359 49.189 49.018 48.847 48.677 48.505 47.708 47.452 41.956 39.360 38.972 38.781 38.578 38.549 36.827 36.699 32.928 30.558 27.913 26.764 24.094 23.383 23.274 23.153 21.000 F2 − Processing parameters SI 32768 SF 125.7577964 MHz WDW EM SSB LB 1.00 Hz GB PC 1.00 ======== CHANNEL f2 ======== CPDPRG2 waltz16 NUC2 1H PCPD2 80.00 usec PL2 −3.00 dB PL12 16.47 dB PL13 22.00 dB SFO2 500.1320005 MHz ======== CHANNEL f1 ======== NUC1 13C P1 7.50 usec PL1 0.00 dB SFO1 125.7715724 MHz F2 − Acquisition Parameters Date_ 20210117 Time 11.05 INSTRUM spect PROBHD mm Multinucl PULPROG zgpg30 TD 65536 SOLVENT CDCl3 NS 384 DS SWH 31446.541 Hz FIDRES 0.479836 Hz AQ 1.0420883 sec RG 32768 DW 15.900 usec DE 6.00 usec TE 300.0 K D1 2.00000000 sec d11 0.03000000 sec DELTA 1.89999998 sec MCREST 0.00000000 sec MCWRK 0.01500000 sec Current Data Parameters NAME 2OANH-AL7 EXPNO PROCNO 55 55.136 52.709 50 49.531 49.359 49.189 49.018 48.847 48.677 48.505 47.708 47.452 45 41.956 40 35 30 AL7−CDCl3&MeOD−C13CPD 39.360 38.972 38.781 38.578 38.549 36.827 36.699 32.928 30.558 27.913 26.764 25 24.094 23.383 23.274 23.153 21.000 20 ppm 18.194 16.851 16.756 16.689 15.454 15.405 15.272 15.131 170 180 C13CPD 180 170 170 CH2 CH&CH3 DEPT135 180 DEPT90 160 160 160 150 150 150 140 140 140 130 130 130 120 120 120 110 110 110 100 100 100 90 90 90 80 80 80 70 70 70 AL7−CDCl3&MeOD−C13CPD &DEPT 60 60 60 50 50 50 40 40 40 30 30 30 20 20 20 ppm ppm ppm 55 C13CPD 55 CH2 CH&CH3 DEPT135 55 DEPT90 50 50 50 45 45 45 40 40 40 35 35 35 30 30 30 AL7−CDCl3&MeOD−C13CPD&DEPT 25 25 25 20 20 20 ppm ppm ppm ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ VĂN HIỆU PHÂN LẬP VÀ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG LÁ CÂY SUM LIÊN (ADINANDRA LIENII HIEN & YAKOVLEV). .. học lồi thuộc chi Adinandra nói chung lồi đặc hữu Adinandra lienii nói riêng tơi thực đề tài: ? ?Phân lập đánh giá hoạt tính sinh học số hợp chất Sum liên (Adinandra lienii Hien & Yakovlev)? ?? với hai... Yakovlev)? ?? với hai mục tiêu: - Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất từ Sum liên (Adianandra lienii Hien & Yakovlev) - Đánh giá số tác dụng sinh học hợp chất phân lập 1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng