Thông tin tài liệu
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THÀNH DUY CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ MỘT SỐ HỢP CHẤT SAPONIN TỪ LOÀI PARIS VIETNAMENSIS (TAKHT) H.LI, HỌ TRILLIACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THÀNH DUY 1601162 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ MỘT SỐ HỢP CHẤT SAPONIN TỪ LOÀI PARIS VIETNAMENSIS (TAKHT) H.LI, HỌ TRILLIACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh ThS Nguyễn Thị Thu Nơi thực hiện: Bộ môn Dược học cổ truyền Khoa Hóa Phân tích & Tiêu chuẩn Viện Dược liệu HÀ NỘI - 2021 LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu, hồn thành khóa luận tốt nghiệp Khoa Hóa Phân tích & Tiêu chuẩn – Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền – Trường Đại học Dược Hà Nội, em nhận nhiều hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ Thầy Cô, anh chị bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lịng kính trọng lời cảm ơn chân thành đến: TS Hà Vân Oanh, người tạo điều kiện, dẫn dắt em đến với ngày đầu tham gia nghiên cứu, hỗ trợ em suốt trình thực khóa luận ThS Nguyễn Thị Thu, người tận tình hướng dẫn, quan tâm, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình nghiên cứu thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn PGS TS Đỗ Thị Hà nhà khoa học Khoa Hóa Phân tích & Tiêu chuẩn – Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em q trình hồn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học lồi Paris vietnamensis, họ Trilliaceae”- Đề tài nghiên cứu cấp sở, Viện Dược liệu, Bộ Y tế tạo điều kiện hỗ trợ kinh phí để em thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu Thầy Cô Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện giúp đỡ em trình thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè ln bên đồng hành giúp đỡ em trình học tập hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2021 Sinh viên Vũ Thành Duy MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Paris L 1.1.1 Vị trí, phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Sinh thái phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng sinh học 10 1.1.6 Công dụng 11 1.2 Tổng quan loài Paris vietnamesis (Takht) H.Li 11 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố 11 1.2.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học 12 1.2.3 Các nghiên cứu tác dụng sinh học 14 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Hóa chất, dung mơi 16 2.3 Máy móc, trang thiết bị nghiên cứu 16 2.4 Nội dung nghiên cứu 17 2.5 Phương pháp nghiên cứu 17 2.5.1 Phương pháp chiết xuất 17 2.5.2 Phương pháp phân lập hợp chất 18 2.5.3 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Kết chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hợp chất 21 3.1.1 Kết chiết xuất phân lập 21 3.1.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 24 3.2 Bàn luận 31 3.2.1 Về kết chiết xuất, phân lập hợp chất 31 3.2.2 Về hợp chất PV-5A3 33 3.2.3 Về hợp chất PV-8B2 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 35 KẾT LUẬN 35 KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết đầy đủ Ký hiệu, chữ viết tắt 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13) 1D-NMR One-demensional Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều) H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) Araf Arabinofuranosyl d Doublet DEPT Distortionless Enhancement By Polarization Transfer (Phổ DEPT) EC50 Half-maximal Effective Concentration (Nồng độ có hiệu 50%) ESI-MS Electrospray ionization - Mass spectrometry EtOH Ethanol Fuc Fructopyranosyl Gal Galactopyranosyl Glc Glucopyranosyl HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation (Tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết) HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation (Tương tác dị hạt nhân qua liên kết) IC50 Half-maximal Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế 50%) J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) MeOH Methanol MIC Minimum Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế tối thiểu) Na+-K+ ATPase Kênh vận chuyển Na+-K+ có sử dụng ATP NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân OMe Methoxy P Paris Rha Rhamnopyranosyl s Singlet SKC Sắc ký cột STT Số thứ tự TLC Thin Layer Chromatography (Sắc kí lớp mỏng) TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử tt Thể tích UHPLC Ultra-High-Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng siêu hiệu năng) Xyl Xylopyranosyl δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số hợp chất saponin steroid phân lập từ chi Paris L Bảng 1.2 Một số hợp chất flavonoid phân lập từ chi Paris L Bảng 1.3 Một số hợp chất phytoecdyson phân lập từ chi Paris L Bảng 1.5 Các hợp chất saponin phân lập từ loài P vietnamesis 12 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PV-8B2 ophiopogonin C′ 25 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR hợp chất PV-5A3 paris saponin H 29 DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Khung cấu trúc diosgenin pennogenin Hình 2.1 Dược liệu thân rễ loài Paris vietnamesis (Takht) H.Li 16 Hình 3.1 Sơ đồ quy trình chiết xuất thu tủa từ dịch chiết tổng 21 Hình 3.2 Sắc kí đồ phân đoạn thơ sau q trình chiết xuất 22 Hình 3.3 Sắc ký đồ hợp chất phân lập 23 Hình 3.4 Sơ đồ quy trình phân lập hai hợp chất PV-5A3 PV-8B2 24 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (→) hợp chất PV-8B2 27 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC (→) hợp chất PV-5A3 30 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam quốc gia có hệ sinh thái động thực vật phong phú đa dạng Thống kê cho thấy nước ta sở hữu khoảng 3850 loài thực vật làm thuốc Số lượng lớn loài thực vật làm thuốc kết hợp với tri thức, kinh nghiệm sử dụng thuốc dân gian Việt Nam tạo nên lợi để phát triển phương pháp điều trị bệnh sử dụng nguyên liệu nguồn gốc tự nhiên [1] Chi Paris L (Họ Trọng lâu - Trilliaceae) số nhiều chi thực vật sử dụng làm thuốc Việt Nam [1] Bộ phận thường dùng thân rễ, chứa thành phần saponin [48] Y học cổ truyền Việt Nam, Trung Quốc, Ấn Độ,… sử dụng thân rễ loài chi Paris L để chữa số bệnh rắn cắn, sưng tấy, tiêu đờm, hen suyễn,… [4], [18] Các nghiên cứu dược lý cho thấy saponin chi có nhiều tác dụng sinh học tiềm tế bào ung thư, điều hòa miễn dịch, kháng khuẩn, trị nấm,…[10], [11], [26], [42], [46] Paris vietnamensis (Takht) H.Li – Bảy hoa Việt Nam, loài thuộc chi Paris L., phân bố chủ yếu khu vực rừng núi Bắc Bộ, Bắc Trung Bộ Tây Nguyên nước ta [32] So với số loài chi, P vietnamensis (Takht) H.Li chưa có nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Một số cơng bố cho thấy P vietnamensis có thành phần saponin [20], [25], [31], [42], [64] với tác dụng gây độc dòng tế bào ung thư [42], ngăn ngừa tăng sinh tế bào u nguyên bào thần kinh đệm tế bào u nguyên bào thần kinh đệm kháng temozolomid (U87R) [57], kích thích tế bào tim in vitro làm tăng hấp thu calci vào tế bào tim [31] ức chế phát triển vi sinh vật [42] Vì vậy, với mục tiêu bổ sung liệu hóa học nhóm hợp chất saponin, qua mở hướng nghiên cứu tác dụng sinh học loài Bảy hoa Việt Nam, đề tài: “Chiết xuất, phân lập tinh chế số hợp chất saponin từ loài Paris vietnamensis (Takht) H.Li, họ Trilliaceae.” tiến hành với mục tiêu chiết tách số hợp chất saponin từ thân rễ loài P vietnamensis Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất PV-8B2 Phụ lục 4.4 Phổ COSY (500/500 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-8B2 Phụ lục 4.5 Phổ HMBC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-8B2 Phụ lục 4.6 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-8B2 Positive Inten.(x1,000,000) 786.65 3.0 2.5 2.0 443.00 274.45 1.5 575.60 1.0 723.65 531.60 302.50 398.40 342.35 0.5 487.55 230.40 0.0 100 200 300 400 843.60 500 600 700 800 919.65 900 m/z Inten.(x1,000,000) 786.65 3.0 745.65 2.5 2.0 1.5 723.65 1.0 763.35 0.5 603.50 731.60 600.0 625.0 650.0 675.0 700.0 725.0 843.60 750.0 775.0 800.0 825.0 850.0 875.0 m/z 800.0 825.0 850.0 875.0 m/z Negative Inten.(x1,000,000) 721.60 757.60 3.0 2.5 2.0 767.60 1.5 1.0 0.5 600.0 625.0 650.0 675.0 700.0 725.0 750.0 775.0 Phụ lục 4.7 Phổ ESI-MS hợp chất PV-8B2 PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT PV-5A3 Cấu trúc hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.3 Phổ DEPT hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.4 Phổ COSY (500/500 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.5 Phổ HMBC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.6 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.7 Phổ ESI-MS hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.3 Phổ DEPT hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.4 Phổ COSY (500/500 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.5 Phổ HMBC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Phụ lục 5.6 Phổ HSQC (500/125 MHz, pyridin-d5) hợp chất PV-5A3 Positive Inten.(x1,000,000) 1.25 893.65 274.45 1.00 0.75 517.05 413.50 318.50 0.50 934.65 0.25 330.50 200 575.60 437.35 230.45 0.00 100 300 400 500 853.60 637.50 600 700 800 900 m/z Inten.(x1,000,000) 1.25 893.65 1.00 0.75 0.50 934.65 0.25 909.60 853.60 950.60 0.00 725.0 750.0 775.0 800.0 825.0 850.0 875.0 900.0 925.0 950.0 975.0 m/z 950.0 975.0 m/z Negative Inten.(x1,000,000) 869.65 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 905.60 915.60 0.5 932.60 0.0 725.0 750.0 775.0 800.0 825.0 850.0 875.0 900.0 925.0 Phụ lục 5.7 Phổ ESI-MS hợp chất PV-5A3 PHỤ LỤC PHIẾU GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC CỦA LOÀI BẢY LÁ MỘT HOA VIỆT NAM ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI VŨ THÀNH DUY 1601162 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ MỘT SỐ HỢP CHẤT SAPONIN TỪ LOÀI PARIS VIETNAMENSIS (TAKHT) H.LI, HỌ TRILLIACEAE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người... tài: ? ?Chiết xuất, phân lập tinh chế số hợp chất saponin từ loài Paris vietnamensis (Takht) H.Li, họ Trilliaceae. ” tiến hành với mục tiêu chiết tách số hợp chất saponin từ thân rễ loài P vietnamensis. .. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau tiến hành đề tài:“ Chiết xuất, phân lập tinh chế số hợp chất saponin từ loài P vietnamensis (Takht) H.Li, họ Trilliaceae. ”, kết thu hợp chất tinh khiết từ phân
Ngày đăng: 10/12/2021, 21:48
Xem thêm:
