PHÂN BÓN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT AMIN TỰ DOFertilizers - Determination of free amino acids content

TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN .-2 :2018 Xuất lần PHÂN BÓN - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT AMIN TỰ DO Fertilizers - Determination of free amino acids content HÀ NỘI - 2018 TCVN ………….-2:2018 TCVN ……-2:2018 Lời nói đầu TCVN …….-2:2018 Viện Quy hoạch Thiết kế Nông nghiệp biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN ………….-2:2018 TCVN ……-2:2018 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN -2:2018 Phân bón – Phương pháp xác định hàm lượng axit amin tự Fertilizers - Determination of free amino acids content Phạm vi áp dụng Phương pháp quy định phương pháp xác định tổng hàm lượng axit amin tự loại axit amin tự do; Đối với phương pháp xác định tổng axit amin sử dụng phương pháp định l ượng nito formol hiệu chỉnh với nitơ ammoniac; Đối với phương pháp xác định loại axit amin tự (tổng hợp tự nhiên) dùng phương pháp với việc sử dụng thiết bị phân tích axit amin thiết bị sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) có cột trao đổi ion Phương pháp áp dụng cho axit amin sau: - tổng cystin cystein; methionin; lysin; threonin; alanin; arginin; axit aspartic; axit glutamic; glycin; histidin; iso leucin; leucin; phenylalanin; prolin; serin; tyrosin; valin Phương pháp không phân biệt muối axit amin, không phân biệt dạng đồng phân D L axit amin Phương pháp không cho phép xác định tryptophan chất tương tự axit amin có chứa nhóm hydroxyl Nguyên tắc Các axit amin tự chiết với dung dịch axit clohydric loãng Các chất đồng chiết xuất có phân tử lượng lớn chứa nitơ kết tủa với axit sulfosalicylic loại cách lọc Dung dịch lọc dùng để xác định hàm lượng axit amin tự 2.1 Tổng axit amin tự nước có mơi trường trung tính, nhóm chức axit (-HCOOH) amin (-NH 2) yếu, trình điện ly kém, đồng thời nhóm chức cịn trung hịa lẫn Khi mẫu thử kết hợp với formol, nhóm amin kết hợp với formol tạo thành nhóm methylenic, muối amoni trung tính kết hợp với formol tạo thành hexamethylen tetraamin HCl Do làm tính kiềm dung dịch, chuẩn độ lượng HCl nhóm COOH giải phóng phản ứng dung dịch natri hydroxyt 0,1N pH dung dịch đạt 9,2 Dựa vào l ượng kiềm tiêu tốn chuẩn độ để tính tổng hàm lượng nitơ amin nitơ amoniac (gọi chung nitơ formol) Hàm TCVN ………….-2:2018 lượng nitơ axit amin tính cách hiệu chỉnh hàm lượng nitơ formol với hàm lượng nitơ amoniac - Muối amoni có mẫu thử sau hịa tan n ước kiềm hóa dung dịch magie oxit Hàm lượng nitơ amoniac định lượng phương pháp kjeldahl 2.2 Dịch lọc điều chỉnh pH tới 2,20 Các axit amin tách riêng biệt cột trao đổi ion thiết bị phân tích axit amin thiết bị HPLC xác định phản ứng với ninhydrin sử dụng detector quang đo bước sóng 570 nm Hóa chất thuốc thử Hóa chất thuốc thử chất lượng PA dùng cho sắc ký 3.1 Nước, sử dụng nước cất hai lần nước có chất lượng tương tự (độ dẫn điện 99% 3.32 Axit 5-sulfosalicylic (C7H6O6S) tinh thể 3.33 Natri citrat (Na 3C6H5O7) tinh thể 3.34 Natri clorua (NaCl) tinh thể 3.35 Dầu nhẹ, nhiệt độ sôi từ 40 0C đến 600C 3.36 NorLeucin, hay chất khác phù hợp để sử dụng làm chất nội chuẩn 3.37 Khí nitơ 5.0 3.38 Các axit amin 3.38.1 Các chất chuẩn axit amin Điều 3.38.2 Axit cysteic 3.38.3 Methionin sulfon GHI CHÚ 1: Sử dụng hợp chất tinh khiết không chứa nước kết tinh Làm khơ chân khơng có chứa P O5 H 2SO4 tuần trước sử dụng 3.39 Hỗn hợp chiết (axit clohydric 0,1M chứa % thiodiglycol): Hút 8,2mL axit clohydric đậm đặc (3.4) pha loãng với khoảng 900mL nước Thêm 20mL thiodiglycol (3.7) định mức tới 1000mL nước (3.1) GHI CHÚ 2: Không trộn trực tiếp axit clohydric đậm đặc (3.4) thiodiglycol (3.7) 3.40 Dung dịch axit sulfosalicylic %: Hòa tan 60g axit sulfosalicylic (3.8) nước (3.1) định mức đến 1000mL nước (3.1) 3.41 Đệm citrat (Na +: 0,2M) , pH = 2,20 Hòa tan 19,61g natri citrat (3.9), 5mL thiodiglycol (3.7), 1g phenol (3.6) 16,50mL axit clohydric đậm đặc (3.4) khoảng 800mL nước (3.1) Điều chỉnh pH tới 2,20 Định mức đến 1000mL nước (3.1) 3.42 Đệm rửa giải, chuẩn bị theo điều kiện thiết bị phân tích sử dụng 3.43 Thuốc thử ninhydrin, chuẩn bị theo điều kiện thiết bị phân tích sử dụng 3.44 Dung dịch chuẩn axit amin 3.45.1 Dung dịch chuẩn gốc axit amin (theo điều 1) có nồng độ 2,5 μmol/mL axit HCl Các dung dịch thường có sẵn thị trường 3.46.2 Dung dịch chuẩn gốc axit cysteic methionin sulfon, 1,25 μmol/mL TCVN ……-2:2018 Hòa tan 0,2115 g axit cysteic (3.16.2) 0,2265g methionin sulfon (3.16.3) đệm citrat (3.24) vào bình định mức 1000mL định mức đến vạch đệm citrat GHI CHÚ 4: Các dung dịch chuẩn bảo quản OC không 12 tháng Dung dịch không nên dùng dung dịch chuẩn gốc (3.26.1) có chứa axit cysteic methionin sulfon 3.46.3 Dung dịch chuẩn gốc chất nội chuẩn, ví dụ norleucin 20 μmol/mL Hịa tan 0,6560g norleucin (3.14) đệm citrat (3.24) vào bình định mức 250mL định mức đến vạch đệm citrat Bảo quản OC không tháng 3.46.4 Dung dịch chuẩn làm việc chất chuẩn axit amin , sử dụng cho dịch thủy phân, axit cysteic methionin sulfon có nồng độ 0,1μmol/mL axit amin khác 0,2μmol/mL Hòa tan 2,2 g natri clorua (3.10) cốc 100mL với 30mL đệm citrat (3.24) Thêm 4,00 mL dung dịch chuẩn gốc axit amin (3.27.1), 4,00 ml dung dịch chuẩn gốc axit cysteic methionin sulfon (3.27.2), 0,50mL chuẩn gốc dung dịch nội chuẩn (3.27.3) cần sử dụng Điều chỉnh pH tới 2,20 dung dịch natri hydroxit 1M (3.18) Chuyển định lượng vào bình định mức 50mL định mức đệm citrat (3.24), trộn Bảo quản oC không tháng 3.46.5 Dung dịch hiệu chuẩn chất chuẩn axit amin Đối với đường chuẩn axit amin (điều 1) sử dụng dịch thủy phân chuẩn bị theo 5.3.3.2 sử dụng với dịch chiết (5.2) Đối với đường chuẩn axit cysteic methionin sulfon chuẩn bị dung dịch tương tự 3.27.4 không dùng natri clorua Bảo quản dung dịch oC không tháng Thiết bị dụng cụ Sử dụng thiết bị dụng cụ thơng thường phịng thí nghiệm 4.1 Bình cầu đáy trịn, dung tích 100mL 250mL có sinh hàn hồi lưu 4.2 Bình thủy tinh bosilicat, dung tích 100mL với nắp cao su/teflon (ví dụ: Duran, Schott) chịu nhiệt 4.3 Tủ sấy, có điều khiển nhiệt độ 4.4 Máy đo pH, đọc đến ba số thập phân 4.5 Màng lọc, 0,2 μm 4.6 Máy ly tâm 4.7 Máy lắc khuấy từ 4.8 Rây 0,25mm TCVN ………….-2:2018 4.9 Bể điều nhiệt 4.10 Thiết bị chưng cất Kjeldahl, có dung tích 250mL bao gồm 4.10.1 Ống sinh hàn 4.10.2 Bình cất Kjeldahl, dung tích 250mL (Nếu đun trực tiếp sử dụng bình đáy cầu dung tích 1000mL) 4.10.3 Đầu tránh bắn, có đầu vào đầu nối với phễu nhỏ giọt 4.10.4 Phễu nhỏ giọt có khóa 4.10.5 Bình hứng, dung tích 250mL (hoặc 500mL) 4.11 Máy phân tích axit amin thiết bị HPLC có cột trao đổi ion, thiết bị dẫn suất sau cột cho ninhydrin detector quang Cột nhồi với hạt nhựa polystyren sulfonat hóa có khả tách axit amin khỏi khỏi chất khác dương tính với ninhydrin Tốc độ dịng dung dịch đệm ninhydrin điều chỉnh bơm để có tốc độ dịng ổn định ± 0,5% suốt q trình chạy đường chuẩn phân tích mẫu Đối với số máy phân tích axit amin, q trình thủy phân sử dụng mà dịch thủy phân có nồng độ natri 0,8M chứa tất lượng axit formic dư từ bước oxy hóa Một số máy khác khơng tách tốt số axit amin định dung dịch thủy phân chứa nồng độ axit formic dư và/hoặc nồng độ ion natri cao Trong trường hợp này, giảm thể tích axit cách làm bay tới xấp xỉ 5mL sau thủy phân trước điều chỉnh pH Quá trình bay nên thực điều kiện chân không nhiệt độ không vượt 40 oC Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu: 5.1.1 Phân bón dạng rắn: Chuẩn bị mẫu thử theo TCVN 10683:2015 5.1.2 Phân bón dạng lỏng - Dạng dung dịch: Mẫu lấy ban đầu khơng 50mL, trước lấy mẫu để tiến hành phép thử, mẫu phải lắc - Dạng lỏng sền sệt: Mẫu lấy ban đầu khơng 200g, trước lấy mẫu để tiến hành phép thử, mẫu phải trộn GHI CHÚ 3: Các mẫu có độ ẩm cao sấy khơ khơng khí nhiệt độ khơng q 50 o C đông khô trước nghiền Các mẫu có hàm lượng chất béo cao chiết với dầu nhẹ (3.13) trước nghiền 5.2 Xác định tổng axit amin tự 10 TCVN ……-2:2018 Cân khoảng gam mẫu xác đến 0,0001g chuẩn bị theo (5.1) vào bình nón thêm 100,0mL hỗn hợp dịch chiết (3.39) Lắc 60 sử dụng máy lắc máy khuấy từ Để cho lắng cặn dùng pipet hút 10,0mL dung dịch phía cho vào cốc có mỏ 100mL Đối với mẫu dạng lỏng (5.1.2), dùng pipet hút khoảng 5mL dung dịch mẫu cân xác đến 0,0001g để xác định khối lượng (g), sau tiến hành tương tự mẫu rắn mẫu lỏng dạng sền sệt; Thêm 5,0mL dung dịch axit sulfosalicylic 6% (3.22), dịch khuấy tiếp tục khuấy máy khuấy từ Lọc ly tâm phần phía để loại bỏ kết tủa Dung dịch (A) thu dùng để xác định tổng axit amin tự 5.2.1 Xác định hàm lượng nitơ ammoniac 5.2.1.1 Lắp đặt, kiểm tra thiết bị chưng cất Kjeldahl: Tùy theo thực tế thiết bị mà cách lắp đặt khác nhau, phải tuyệt đối kín suốt q trình hoạt động, có khả điều chỉnh tốc độ cất tốc độ ngưng; Trước chưng cất mẫu phải kiểm tra thiết bị Kjeldahl cách chưng cất 50mL dung dịch amoni sulfat 0,5gN/L (4.23) với kiềm Chuẩn độ lượng nitơ bình hứng hết 17,85mL ± 0,1mL dung dịch chuẩn độ tiêu chuẩn acid chlohydric 0,1N (4.2) đạt yêu cầu, thiết bị cất bị hở, lớn bị bắn kiềm từ bình cất thiết bị không sạch, cần khắc phục kiểm tra lại 5.2.1.2 Chưng cất mẫu Hút 50mL dung dịch A thêm ≥ 2g magie oxit không chứa carbonate (4.1); Dùng phễu nhỏ giọt, rót từ từ vào bình chưng cất 100ml dung dịch natri hidroxyt 400g/L (4.23) 20ml mẫu không qua thủy phân phân hủy, giữ lại khoảng 2ml phễu; Dùng buret cho vào bình hứng chứa 50ml dung dịch axit boric 5% (4.25) có chứa sẵn hỗn hợp thị (4.27) 35mL axit sunfuric tiêu chuẩn 0,1N (4.2); Lắp bình vào chưng cất cho đầu ống sinh hàn thấp bề mặt dung dịch axit, cần cho thêm nước; Tiến hành chưng cất thu khoảng 200mL dung dịch bình hứng Ngừng đun, tháo ống sinh hàn, dùng bình tia tráng rửa ống sinh hàn, nước rửa thu vào bình hứng 5.2.1.3 Chuẩn độ mẫu Chuẩn độ lượng axit dư bình hứng dung dịch tiêu chuẩn natri hidroxit 0,1N (4.3) đến màu dung dịch chuyển từ xanh tím sang xanh cây; Tiến hành phép thử trắng điều kiện với lượng loại thuốc thử khơng có mẫu phân tích 11 TCVN ………….-2:2018 5.2.1.4 Tính kết Tổng hàm lượng nitơ - amoniac, tính phần trăm khối lượng theo cơng thức (1): % N amoniac  k (V2  V1 ) 0,001401 100 m (1) Trong đó: k hệ số hiệu chuẩn nồng độ dung dịch natri hydroxit 0,1N; V1 thể tích dung dịch natri hidroxyt 0,1N dùng để chuẩn độ lượng axit dư mẫu phân tích, tính mililít (mL); V2 thể tích dung dịch natri hidroxyt 0,1N dùng để chuẩn độ lượng axit dư màu trắng, tính mililít (mL); m khối lượng mẫu, tính gam (g); 0,001401 khối lượng nitơ tương ứng với 1mL dung dịch axit sunfuric 0,1N Kết phép thử giá trị trung bình kết hai phép thử tiến hành song song, sai lệch cho phép chúng không vượt 0,30% giá trị tuyệt đối 5.2.2 Xác định hàm lượng nito amin – amoniac (nito formol) 5.2.2.1 Cách tiến hành Hút 50mL dung dịch A thêm khoảng 400mL dung dịch kali clorua 1M (4.9), lắc khoảng 30 phút với với tốc độ lắc 30-40 vòng/phút; Thêm dung dịch nhôm clorua 1M (4.11) (3ml AlCl 1M cho 0,04g P hay 0,1g P 2O5 dung dịch mẫu) vài giọt thị methyl đỏ 0,1g/100mL (4.19); Thêm (vừa lắc vừa thêm) dung dịch kali hydroxit 170g/L (4.13) dung dịch chuyển thành màu vàng nhạt; Thêm nước cất đến vạch mức, lắc lọc; Dùng pipet lấy xác 20mL dịch sau lọc cho vào cốc dung tích 250mL, thêm n ước đến thể tích khoảng 50mL, trung hịa dịch lọc dung dịch axit clohydric 1: 200 thể tích (4.15) dung dịch có màu hồng nhạt; Dùng buret cho thêm 20mL dung dịch formol trung tính (4.7) vào khuấy đều, để yên phút; Chuẩn độ dung dịch natri hydroxyt 0,1N pH dung dịch 9,2 (sử dụng máy đo pH dùng thị thymol xanh (4.21) màu dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu xanh da trời; 12 TCVN ……-2:2018 Tiến hành xác định mẫu trắng với tất lượng hóa chất bước thử nghiệm trên, thay dịch mẫu thử 20mL nước cất 5.2.2.2 Tính kết Tổng hàm lượng nitơ - formol, tính phần trăm khối lượng theo công thức (2): % N formol  (V1  V2 ) 500 0,001401 100 20 m (2) Trong đó: V1 Thể tích dung dịch NaOH 0,1N tiêu tốn chuẩn độ mẫu thử, tính mililit (mL); V2 Thể tích dung dịch NaOH 0,1N tiêu tốn chuẩn độ mẫu trắng, tính mililit (mL); m Khối lượng mẫu thử, tính gam (g); 0,001401 Số gam nitơ tương ứng với 1mL dung dịch NaOH 0,1N ; 500 Thể tích tồn dịch lọc, tính mililit (mL); 20 Thể tích dịch lọc dùng để xác định, tính mililit (mL) 5.2.3 Hàm lượng nitơ - axit amin (N axit amin) tính phần trăm theo cơng thức (3): Naxit amin = Nformol – Namoniac (3) Trong đó: Namoniac : Hàm lượng nitơ amoniac tính phần trăm theo công thức (1) Nformol: Hàm lượng nitơ formol tính phần trăm theo cơng thức (2) 5.2.4 Hàm lượng axit amin tổng số tính phần trăm theo công thức (4): % Axit amin (tổng số) = N axit amin x 6,25 (4) Chênh lệch hai kết xác định song song không lớn 0,5% 5.3 Xác định loại axit amin tự 5.3.1 Chiết mẫu Cân lượng mẫu phân bón phù hợp (1g đến g) xác đến 0,0001g chuẩn bị theo (5.1) vào bình nón thêm 100,0mL hỗn hợp dịch chiết (3.21) Lắc 60 sử dụng máy lắc máy khuấy từ Để cho lắng cặn dùng pipet hút 10,0mL dung dịch phía cho vào cốc có mỏ 100mL GHI CHÚ 4: Lượng mẫu cân nên chứa hàm lượng nitơ khoảng 10 mg hàm lượng nước không vượt 100 mg; Lượng mẫu cân chuẩn bị tính tốn sau: 13 TCVN ………….-2:2018 W s 1000  Ns Trong đó: Ns Hàm lượng nitơ mẫu thử, tính phần trăm, % Ws Khối lượng phần mẫu thử tương đương với hàm lượng nitơ khoảng 10mg, tính miligram, mg Thêm 5,0mL dung dịch axit sulfosalicylic 6% (3.22), dịch khuấy tiếp tục khuấy máy khuấy từ Lọc ly tâm phần phía để loại bỏ kết tủa Lấy 10,0mL dung dịch vào cốc 100mL, điều chỉnh pH tới 2,20 dung dịch natri hydroxit 1M (3.18) Chuyển tồn dung dịch vào bình định mức 100mL, tráng rửa đệm citrat (3.24) định mức đến vạch dung dịch đệm (3.24) Nếu sử dụng chất nội chuẩn, thêm 1,00mL dung dịch nội chuẩn (3.27.3) cho 100mL dịch cuối định mức đến vạch dung dịch đệm (3.24) Chạy sắc ký 5.3 Nếu dịch chiết khơng sử dụng ngày phải bảo quản nhiệt độ oC 5.3.2 Chạy sắc ký Trước thực chạy sắc ký, đưa dịch chiết (5.2) nhiệt độ phòng Lắc hỗn hợp lọc lượng phù hợp qua màng lọc cỡ 0,2 μm Đưa dịch lọc vào cột trao đổi ion, sử dụng máy phân tích axit amin thiết bị HPLC Bơm mẫu thực tay tự động Điều quan trọng đưa lên cột phân tích lượng dung dịch chất chuẩn mẫu thử không sai khác 0,5% trừ chất nội chuẩn sử dụng, tỷ lệ lượng natri:axit amin chất chuẩn dung dịch mẫu tương tự thực Nói chung, tần suất chạy dung dịch chuẩn phụ thuộc độ ổn định thuốc thử ninhydrin hệ thống phân tích Pha lỗng chất chuẩn mẫu với dung dịch đệm citrat (3.23) để có diện tích pic chất chuẩn vào khoảng 30% đến 200% điện tích pic mẫu axit amin Sắc ký đồ axit amin thay đổi tùy theo máy phân tích chất nhồi cột sử dụng Hệ thống phân tích chọn phải có khả tách axit amin khỏi khỏi chất dương tính với ninhydrin Trong phạm vi hoạt động, hệ thống sắc ký phải đáp ứng tuyến tính với thay đổi lượng axit amin đưa vào cột Trong suốt trình chạy sắc ký, tỷ số chiều cao lõm : pic đề cập áp dụng dung dịch có nồng độ mol (của axit xác định) phân tích Dung dịch axit amin nồng độ mol chứa 30 % lượng axit amin tải tối đa axit amin mà đo xác với hệ thống máy phân tích axit amin (4.9) 14 TCVN ……-2:2018 Để tách threonin serin, tỷ số chiều cao lõm : pic pic thấp hai axit amin chồng lên sắc ký đồ không vượt 2:10 (nếu cystein, methionin lysin xác định, tách không rõ ràng pic liền kề gây sai số đến phép đo) Đối với tất axit amin tỷ số tách tốt nên 1:10 Hệ thống nên đảm bảo lysin tách khỏi "lysin nhân tạo" ornithin 5.3.3 Biểu thị kết Diện tích pic mẫu chất chuẩn đo cho axit amin lượng mẫu tính theo gam axit amin /kilogam mẫu, tính theo cơng thức (5): w= A e c M Ve A c m 1000 Nếu chất nội chuẩn sử dụng, nhân với (5) A ic A ie Trong Ae diện tích pic chất thủy phân chất chiết; Ac diện tích pic dung dịch chuẩn hiệu chuẩn; Aie diện tích pic chất nội chuẩn thủy phân chiết; Aic diện tích pic chất nội chuẩn dung dịch chuẩn hiệu chuẩn; M khối lượng phân tử axit amin xác định; C nồng độ chất chuẩn, μmol/mL; m khối lượng mẫu, tính g (tính khối lượng ban đầu mẫu làm khô loại chất béo); Ve thể tích tổng dịch thủy phân (5.3.4), tính mililit, tính theo tổng thể tích pha lỗng dịch chiết tính mililit Cả cystin cystein xác định giống axit cysteic thủy phân mẫu oxy hóa, tính theo tổng cystein cystin sử dụng M = 120,15g (= 0,5 x 240,30) (C 6H12N2O4S2, M=240,30g) Methionin xác định methionin sulfon thủy phân mẫu oxy hóa, tính tốn cách sử dụng M methionin = 149,21g Methionin tự thêm vào xác định sau chiết tách methionin; tính tốn tương tự sử dụng chung M 15 TCVN ………….-2:2018 Tổng thể tích dịch chiết pha lỗng (Ve) dùng để xác định axit amin tự (5.2) tính theo công thức sau: Ve = 100 x (10  5) Vef x 10 10 Trong Vef thể tích chiết cuối cùng, tính mililit Các kết tính theo %: kết tính theo % = 0,1 x kết tính theo gam kilogam Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm bao gồm thông tin sau: a) Viện dẫn tiêu chuẩn này; b) Đặc điểm nhận dạng mẫu; c) Kết thử nghiệm; d) Mọi thao tác không quy định tiêu chuẩn này, đ ược coi tùy chọn yếu tố ảnh hưởng đến kết thử nghiệm; e) Ngày thử nghiệm Một số lưu ý phương pháp 7.1 Do việc sử dụng thiết bị phân tích axit amin khác nhau, nên nồng độ cuối axit amin (mục 3.27.4 3.27.5) dịch thủy phân (5.3.4) nên thực theo hướng dẫn Khoảng đáp ứng tuyến tính thiết bị phân tích nên kiểm tra áp dụng cho tất axit amin 7.2 Khi thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao sử dụng để phân tích dung dịch thủy phân, điều kiện thí nghiệm nên tối ưu hóa phù hợp với yêu cầu nhà cung cấp thiết bị 7.3 Với việc sử dụng phương pháp để phân tích mẫu thức ăn chăn ni có chứa 1% hàm lượng clo (thức ăn đậm đặc, thức ăn bổ sung khống, thức ăn bổ sung…) việc ước lượng thiếu hàm lượng methionin xảy cần có phương pháp xử lý đặc biệt theo cách (phương pháp Slump) Sau thêm 5mL hỗn hợp chất oxi hóa 5.3.1, thêm tiếp 12,5mL nước khuấy mẫu máy khuấy từ 15min Sau lại tiếp tục thực quy trình thơng thường Quy trình khơng dùng để định lượng xác định hàm lượng tổng số cystein cystin 16 TCVN ……-2:2018 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 8764:2012 (ISO 13903:2005), Thức ăn chăn nuôi – Phương pháp xác định axit amin; [2] AOAC 994.12, Amino Acids in Feeds; [3] AOAC 999.13, Lysine, methionine, and threonine in feed grade amino acids and premixes [4] AOAC 920.03 determining formaldehyde titration method subtracting by ammoniacal nitrogen (magnesium oxide method) [5] AOAC 920.04 Nitrogen (Ammoniacal) in Fertilizers Formaldehyde; [6] REP 12/MAS : report of the thirty session of the codex committee on methods of analysis and sampling – budapest, hungary, 5-9 march 2012 17