THỰC PHẨM CÔNG THỨC DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH –XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NATRI FLUOROACETAT –PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG- HAI LẦN KHỐI PHỔ

TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA DT TCVN … : 2019 Xuất lần THỰC PHẨM CÔNG THỨC DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH – XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG NATRI FLUOROACETAT – PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG- HAI LẦN KHỐI PHỔ Infant formula – Determination of sodium fluoroacetate Liquid chromatography-tandem mass spectrometry HÀ NỘI – 2019 TCVN … : 2019 TCVN … : 2019 Lời nói đầu TCVN … : 2019 xây dựng sở tham khảo AOAC 2015.03 Sodium Fluoroacetate in Infant Formula – Liquid chromatography– Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) TCVN … : 2019 Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN … : 2019 TCVN … : 2019 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN … : 2019 Thực phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh – Xác định hàm lượng natri fluoroacetat – Phương pháp sắc ký lỏng-hai lần khối phổ Infant formula – Determination of sodium fluoroacetate – Liquid chromatography tandem mass spectrometry CẢNH BÁO  Khi áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác nguy hiểm Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an toàn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn qui định trước sử dụng tiêu chuẩn Natri fluoroacetat độc với người, thực tất bảo hộ cần thiết, đặc biệt thao tác với dung dịch chuẩn gốc Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng natri fluoroacetat thực phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh dạng lỏng dạng bột từ sữa từ đậu nành phương pháp sắc ký lỏng- hai lần khối phổ (LC-MS/MS) Giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp µg/kg Nguyên tắc Mẫu sữa bột hoàn nguyên nước (mẫu sữa dạng lỏng sử dụng ln) Bổ sung axetonitril vào mẫu để kết tủa protein, sau ly tâm, phần dịch phía rửa n-hexan axit hóa axit sulfuric đặc Bổ sung muối QuERChERS (MgSO NaCl) để tách lớp, hỗn hợp sau ly tâm Phần dịch phía cho bay đến 0,5 ml, ly tâm phân tích hệ thống LC-MS/MS với chế độ ion hóa ESI (-) chế độ theo dõi phản ứng chọn lọc (SRM) Hợp chất phân tích anion fluoroacetat Việc định lượng thực sử dụng chất nội chuẩn natri fluoroacetat dán nhãn đồng vị 13C TCVN … : 2019 Thuốc thử Tất thuốc thử sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, nước sử dụng nước cất hai lần loại ion nước có chất lượng tương đương, trừ có quy định khác 3.1 n-Hexan (C6H14) 3.2 Axetonitril (CH3CN), loại dùng cho LC-MS 3.3 Magie sulfat (MgSO4) 3.4 Natri clorua (NaCl) 3.5 Amoni focmat (HCOONH4) 3.6 Axit sulfuric (H2SO4), 95 % đến 97 % 3.7 Axit formic (HCOOH), đặc 3.8 Natri fluoroacetat (FCH2COONa), CAS No 62-74-8, w = 99 %, 10 µg/ml nước 3.9 Chất chuẩn nội 13C2-Natri fluoroacetat, w = 99 %, độ tinh khiết đồng vị > 99,5 % 3.10 Dung dịch chuẩn gốc natri fluoroacetat (10 µg/ml) nước Dung dịch chuẩn gốc bảo quản nhiệt độ phòng thời gian giấy chứng nhận dung dịch chuẩn 3.11 Dung dịch chuẩn làm việc natri fluoroacetat (1,0 µg/ml) axetonitril:nước (9:1) Lấy 1,0 ml dung dịch chuẩn gốc 10 µg/ml cho vào bình định mức 10 ml thêm axetonitril đến vạch Khi bảo quản -20 ºC dung dịch bền tháng Dung dịch đưa về nhiệt độ phòng trước sử dụng 3.12 Dung dịch chuẩn làm việc natri fluoroacetat (0,2 µg/ml) axetonitril Lấy 2,0 ml dung dịch chuẩn làm việc µg/ml cho vào bình định mức 10 ml thêm axetonitril đến vạch Khi bảo quản -20 ºC dung dịch bền tháng Dung dịch đưa về nhiệt độ phòng trước sử dụng 3.13 Dung dịch chuẩn làm việc natri fluoroacetat (0,05 µg/ml) axetonitril TCVN … : 2019 Lấy 2,5 ml dung dịch chuẩn 0,2 µg/ml cho vào bình định mức 10 ml thêm axetonitril đến vạch Khi bảo quản -20 ºC dung dịch bền tháng Dung dịch đưa về nhiệt độ phòng trước sử dụng 3.14 Dung dịch nội chuẩn gốc 13C2 Natri fluoroacetat (1000 µg/ml) nước Cân 10 mg ± 0,1 mg chất chuẩn nội Hoà tan nước đựng bình định mức 10 ml thêm nước đến vạch Để giảm thiểu tiếp xúc với chất phân tích, cân lọ đựng dung dịch chuẩn (w 1, mg), tiếp tục chuyển toàn chất phân tích vào bình định mức 10 ml Hồ tan hoàn toàn thêm nước đến vạch Cân lại lọ đựng dung dịch chuẩn làm khô (w 2, mg) Nồng độ dung dịch (µg/ml) tính theo cơng thức 1000 x (w1-w2)/10 Khi bảo quản -20 ºC dung dịch bền tháng Dung dịch đưa về nhiệt độ phòng trước sử dụng 3.15 Dung dịch nội chuẩn làm việc 13C2 natri fluoroacetat (0,2 µg/ml) axetonitril Lấy 100 µl dung dịch chất chuẩn nội gốc 1000 µg/ml (3.14) cho vào bình định mức 10 ml thêm axetonitril đến vạch Khi bảo quản -20 ºC dung dịch bền tháng Dung dịch đưa về nhiệt độ phòng trước sử dụng 3.16 Chuẩn bị dãy dung dịch để dựng đường chuẩn, tiến hành pha dãy dung dịch chuẩn theo Bảng thêm axetonitril đến vạch ml Bảng – Thể tích dung dịch chuẩn sử dụng để dựng đường chuẩn Dung dịch chuẩn Dung dịch chuẩn làm việc natri fluoroacetat 0,2 µg/ml, µl 50 150 300 500 1000 Dung dịch nội chuẩn làm việc 0,2 µg/ml, µl 500 500 500 500 500 500 Axetonitril Nồng độ natri tương ứng, ng/ml Định mức đến ml fluoroacetat Nồng độ nội chuẩn, ng/ml 12 20 40 20 20 20 20 20 20 3.17 Pha động A, nước chứa amoni focmat mM axit formic 0,01 % (thể tích) TCVN … : 2019 Cân xác 315 mg ± mg amoni focmat cho vào bình định mức 000 ml Thêm khoảng 300 ml nước (3.1), lắc cho tan hết, thêm 100 µl axit formic đậm đặc Thêm nước (3.1) đến vạch trộn Khi bảo quản nhiệt độ phịng, dung dịch bền tháng 3.18 Dung dịch dùng để rửa kim bơm mẫu tự động axetonitril/nước (1:1) Dùng ống đong lấy 500 ml axetonitril cho vào bình định mức 1000 ml Thêm nước (3.1) đến vạch, cho vào lọ HPLC Khi bảo quản nhiệt độ phòng, dung dịch bền tháng CHÚ THÍCH: Nồng độ dung dịch chuẩn hiệu chỉnh dựa vào độ tinh khiết lượng cân thực tế 3.19 Gói muối chiết QuERChERS, gói chứa g MgSO (3.3) g NaCl (3.4) (Agilent tương đương) Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phịng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 4.1 Ống ly tâm Falcon polypropylen, dung tích 50 ml 4.2 Ống ly tâm Falcon polypropylen, dung tích 15 ml 4.3 Máy ly tâm, rotor phù hợp với ống 15 ml 50 ml: ly tâm 000 x g kiểm soát nhiệt độ 4.4 Máy lắc Vortex 4.5 Máy ly tâm, để ly tâm ống ml, ly tâm 17 000 x g 4.6 Ống ly tâm popypropylen, dung tích ml 4.7 Cân phân tích, cân xác đến 0,01 mg 4.8 Máy lắc 4.9 Bộ làm bay 4.10 Cột HPLC, kích thước 2,1 mm x 100 mm x 1,7 µm (ví dụ: Waters tương đương) 4.10 Hệ thống HPLC-MS/MS, ví dụ: Agilent 1200 SL kết hợp với máy quang phổ khối lượng tứ cực Sciex 5500 có trang bị nguồn ion hóa TurboIonSpray tương đương 4.11 Dụng cụ thủy tinh, bình định mức ống đong có dung tích thích hợp TCVN … : 2019 Lấy mẫu Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Mẫu phòng thử nghiệm nhận phải mẫu đại diện không bị hư hỏng bị biến đổi chất lượng suốt trình bảo quản vận chuyển Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị mẫu Trước tiến hành phân tích, mẫu trộn đồng kỹ máy đồng mẫu Các mẫu kiểm soát chất lượng (QC) phải thường xuyên phân tích lặp lại phân tích với mẫu thử Nếu cần thiết, sử dụng bình định mức khác trình xử lý mẫu để trì tỉ lệ pha lỗng 6.2 Chuẩn bị phần mẫu thử 6.2.1 Mẫu dạng bột Dùng thìa trộn kỹ mẫu phịng thí nghiệm trước phần mẫu thử chuyển toàn mẫu sang vật chứa có dung tích lớn hấp hai lần mẫu thử, đậy nắp, lắc đảo chiều vật chứa mẫu Cân 5,0 g ± 0,1 g phần mẫu thử cho vào ống falcon 50 ml (4.1), ghi lại khối lượng xác đến 0,1 g Thêm 20 ml nước dùng cho sắc ký Lắc máy lắc 1,5 với tốc độ 1500 r/min Mẫu phải phân tán đều, khơng bị vón cục Chuyển 5,0 g ± 0,1 g hỗn hợp cho vào ống Falcon 15 ml (4.2), ghi lại khối lượng xác đến 0,1 g Thêm 50 µl dung dịch nội chuẩn làm việc 0,2 µg/ml (3.15), lắc Lượng nội chuẩn thêm vào tương đương với hàm lượng mẫu 10 µg/kg 6.2.2 Mẫu dạng lỏng Lắc kỹ vật chứa mẫu Cân 5,0 g ± 0,1 g mẫu cho vào ống falcon 15 ml (4.2) Thêm 250 µl dung dịch nội chuẩn làm việc 0,2 µg/ml (3.15), lắc đảm bảo chất chuẩn nội phân tán mẫu Lượng nội chuẩn thêm vào tương đương với hàm lượng mẫu 10 µg/kg 6.3 Chiết mẫu Thêm ml axetonitril (3.2) vào phần mẫu 6.2.1 6.2.2, trộn kỹ lắc máy lắc 1,5 với tốc độ 1500 r/min Ly tâm nhiệt độ phịng 4000 x g, sau chuyển phần dịch phía (khoảng ml đến 10 ml) sang ống Falcon 50 ml TCVN … : 2019 Thêm 10 ml hexan, lắc máy lắc 1,5 với tốc độ 1500 r/min Ly tâm nhiệt độ phòng 4000 x g Hút bỏ lớp hexan phía Thêm 100 µl axit sulfuric đặc (3.6) vào dung dịch chứa chất phân tích, lắc pH hỗn hợp phải ≤ để chất phân tích dạng axit (pKa axit fluoroaxetic 2,39) Thêm tiếp gói muối QuERChERS (3.19) có chứa 4,0 g ± 0,4 g MgSO 1,0 g ± 0,1 g NaCl vào hỗn hợp Lắc nhanh để tránh vón cục, lắc tiếp máy lắc 1,5 với tốc độ 1500 r/min Ly tâm nhiệt độ phòng 4000 x g Chuyển phần dịch phía (khoảng ml) vào ống Falcon 15 ml Cho bay phần dịch thu dòng khí nitơ nhiệt độ 40 ºC ± 20 ºC 0,5 ml (vạch mức 0,5 ml nhìn thấy thân ống Falcon) Khơng làm bay đến thể tích nhỏ 0,5 ml để tránh bị mẫu Chuyển 0,5 ml dịch thu sang ống ml, ly tâm nhiệt độ phòng 17 000 x g Chuyển phần dịch vào lọ HPLC phân tích hệ thống LC-MS/MS 6.4 Mẫu trắng thuốc thử Để kiểm sốt việc nhiễm chéo q trình phân tích mẫu, mẫu trắng thuốc thử cần phân tích đồng thời với mẫu thử, phần mẫu sữa thay nước với giai đoạn chuẩn bị mẫu tương tự 6.4 Phân tích sắc ký 6.4.1 Điều kiện phân tích LC-MS/MS thích hợp nêu Phụ lục A 6.4.2 Thứ tự bơm mẫu hệ thống LC-MS/MS sau: - axetonitril (dung mơi trắng) 03 lần; - dung dịch chuẩn (3.16); - axetonitril, 03 lần; - mẫu trắng thuốc thử; - dung dịch chiết mẫu thử; - dung dịch chuẩn; - lặp lại thứ tự Sau 03 04 mẫu thử cần bơm axetonitril để kiểm tra nhiễm chéo lần bơm 10 TCVN … : 2019 6.4.3 Dựng đường chuẩn Dựng đường chuẩn biểu thị mối tương quan tuyến tính tỉ lệ diện tích pic chất phân tích với chất nội chuẩn (trục y) tỉ lệ nồng độ chất phân tích tương ứng với nội chuẩn (trục x) Lập phương trình đường chuẩn tuyến tính y = ax + b Kiểm tra độ tuyến tính đường chuẩn (hệ số hồi quy R2 > 0,98 độ lệch chuẩn tương đối trung bình hệ số đáp ứng (= y/x) < 15 %) 6.4.4 Xác định khẳng định Chất phân tích phải có đầy đủ thông số sau: - Trên sắc đồ dung dịch, tỉ lệ thời gian lưu chất phân tích với nội chuẩn (thời gian lưu tương đối) tương ứng với tỉ lệ trung bình thời gian lưu tương đối dãy dung dịc chuẩn với ± 2,5 % dung sai cho phép - Tỉ lệ diện tích pic mảnh ion chuẩn nội chuẩn phù hợp với Bảng Bảng – Thông tin mảnh ion tỉ lệ diện tích pic Chất phân tích Fluoroaxetat 13 C2-Fluoroacetat (IS) a Định lượng (m/z) Khẳng định (m/z) Tỉ lệ diện tích pic 77,0 – 33,0a 77,0 – 57,0 a 0,64 đến 0,96 79,0 - 35,0 79,0 – 59,0 0,544 đến 0,816 m/z 57 tương ứng với việc thất thoát axit hydrofluoric [M-HF]- m/z 33 tương ứng với việc thát thoát cacbon dioxit [M-CO2]- - Thời gian phân tích: 24 h phân tích 20 mẫu Tính biểu thị kết 7.1 Tính kết Hàm lượng natri fluoroacetat (µg/kg) mẫu tính theo cơng thức sau: W = [(Aa/AIS) – 1]/S x (mIS/ma) Trong đó: Aa diện tích pic chất phân tích (tính theo mảnh định lượng); AIS S diện tích pic nội chuẩn (tính theo mảnh định lượng); hệ số b phương trình đường chuẩn; hệ số a phương trình đường chuẩn; 11 TCVN … : 2019 mIS lượng chất chuẩn nội bổ sung vào phần mẫu thử (10 ng với mẫu dạng bột 50 ng với mẫu dạng lỏng); ma khối lượng phần mẫu thử (1 g với mẫu dạng bột g với mẫu dạng lỏng) 7.2 Biểu thị kết Báo cáo kết chất phân tích theo số µg/kg đến số thập phân Các mẫu không phát phải biểu thị < µg/kg Đảm bảo chất lượng thử nghiệm Mẫu đảm bảo chất lượng (QC) (được chứng nhận, P-test, mẫu chuẩn nội mẫu thêm chuẩn) phải thường xuyên phân tích với mẫu phân tích lặp lại Thí nghiệm thêm chuẩn thêm vào mẫu 20 µl (cho mẫu dạng bột) 100 µl cho mẫu dạng lỏng dung dịch chuẩn làm việc 0,05 µg/ml Đồng thời thêm nội chuẩn tương ứng Mức thêm chuẩn tương ứng với 10 µg/kg Tính tốn kết tỉ lệ thu hồi (Rec) mẫu thêm chuẩn theo công thức sau : Trong : PT tổng nồng độ natri fluoroaxetat tính mẫu thêm chuẩn tính microgam kilogam; PN tổng nồng độ natri fluoroaxetat tính mẫu khơng thêm chuẩn tính microgam kilogam; PSpiked tổng nồng độ natri fluoroaxetat tính mẫu tính microgam kilogam Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau đây: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu, biết; c) phương pháp thử, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn xem tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu 12 TCVN … : 2019 f) kết thử nghiệm thu 13 TCVN … : 2019 Phụ lục A (tham khảo) Các điều kiện phân tích thích hợp Với thiết bị cụ thể nêu trên, sử dụng thay loại tương đương tốt Khi thay cột pha tĩnh HPLC, cần đảm bảo thời gian lưu chất phân tích phải gấp 02 lần thời gian lưu tương đương với thể tích cột sắc ký Điều kiện HPLC: Bảng A.1 – Các điều kiện HPLC để phân tích natri fluoroacetat Pha động A Amoni focmat mM, axit formic 0,01 %/nước Pha động B Axetonitril Thể tích bơm 20 µl Cột pha tĩnh Amide (2,1 mm x 100 mm, 1,7 µm) Nhiệt độ buồng cột 450 ºC Tốc độ dòng 0,45 ml/min Rửa kim Rửa 20 s với dung dịch axetonitril/nước (1:1) Diverter valve Dòng vào detector MS từ 1,0 đến 2,5 Gradient Xem Bảng A.2 Với điều kiện thời gian lưu chất phân tích khoảng 1,7 Bảng A.2 – Chương trình gradient để phân tích natri fluoroacetat Thời gian (min) Pha động A (%) Pha động B (%) 10 90 2,0 10 90 3,0 60 40 4,5 60 40 4,6 10 90 8,0 10 90 (2) Các thông số detector khối phổ 14 TCVN … : 2019 Các thơng số thu phân tích dung dịch chuẩn chất chưa biết biết (khoảng 1µg/ml) truyền trực tiếp từ syringe (tốc độ khoảng 10µl/min) vào detector kết hợp với dịng dung môi từ phần HPLC (với tốc độ 0,45 ml/min) thông qua phận kết nối Dịng HPLC trì với 10 % kênh A, 90 % kênh B Bảng A.3 – Các thơng số MS để phân tích natri fluoroacetat Chế độ ion hóa ESI (-) Thế phun -4500 V Nhiệt độ nguồn 5000 ºC Khí Vị trí nguồn Curtain gas: 30 psi; GS1 GS2: 40 psi Dọc: 5,0; ngang 5,0; điện cực thò 1,0 mm Năng lượng va chạm (CE) -15 V Thế lối vào (EP) -10 V Thế sau va chạm (CXP) -9 V Thế chùm (DP) -45 V Áp suất khí CAD Độ phân giải Thời gian quét Trung bình (6) Cao phần tứ cực 100 ms Với điều kiện thời gian lưu chất phân tích khoảng 1,7 Kiểm tra thiết bị: Trước phân tích mẫu, phải đảm bảo phận hệ thống LC-MS/MS hoạt động theo điều kiện phương pháp phù hợp với mục đích sử dụng Nếu cần thiết bơm dung dịch chuẩn có nồng độ thấp (dung dịch chuẩn 2) để kiểm tra thiết bị đủ độ nhạy 15 TCVN … : 2019 Phụ lục B (tham khảo) Các ví dụ sắc đồ điển hình Thực phẩm cơng thức sữa dạng bột (khơng chứa lactose) LIMS 890000008555 Mẫu không thêm chuẩn Thực phẩm công thức sữa dạng bột (không chứa lactose) LIMS 890000008555 Mẫu thêm chuẩn mức µg/kg Hình B.1 – Sắc kí đồ mẫu khơng thêm chuẩn mẫu thêm chuẩn mức µg/kg (IS 10 µg/kg) thực phẩm công thức sữa dạng bột 16 TCVN … : 2019 Thực phẩm công thức dạng sữa lỏng (uống liền) LIMS 890000008557 Mẫu không thêm chuẩn Thực phẩm công thức dạng sữa lỏng (uống liền) LIMS 890000008555 Mẫu thêm chuẩn mức µg/kg Hình B.2 – Sắc ký đồ mẫu không thêm chuẩn mẫu thêm chuẩn mức µg/kg (IS 10 µg/kg) thực phẩm công thức sữa dạng lỏng (uống liền) 17 TCVN … : 2019 Thực phẩm công thức đậu nành LIMS 890000008560 Mẫu không thêm chuẩn Thực phẩm công thức đậu nành LIMS 890000008560 Mẫu thêm chuẩn mức µg/kg Hình B.3 – Sắc kí đồ mẫu không thêm chuẩn mẫu thêm chuẩn mức µg/kg (IS 10 µg/kg) thực phẩm công thức đậu nành dạng bột Thực phẩm công thức sữa LIMS 890000008562 Mẫu không thêm chuẩn Thực phẩm công thức sữa LIMS 890000008562 Mẫu thêm chuẩn mức µg/kg Hình B.4 – Sắc kí đồ mẫu khơng thêm chuẩn mẫu thêm chuẩn mức µg/kg (IS 10 µg/kg) thực phẩm cơng thức sữa 18 TCVN … : 2019 Phụ lục C (Tham khảo) Hiệu phương pháp Phương pháp thẩm định sử dụng mẫu cung cấp AOAC Stake Holder Panel on Infant Formula and Adult Nutritionals (SPIFAN) Sản phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh mô tả Bảng C.1 Sản phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh sử dụng để thẩm định phương pháp Bảng C.1 – Sản phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh sử dụng để thẩm định phương pháp Sản phẩm công thức dành cho trẻ Lô Hãng sản xuất (Mỹ) Nền sữa K16NTAV PBM Nutritionals Nền đậu nành E10NWZC PBM Nutritionals Nền sữa thuỷ phân phần 410057652Z Nestlé Nền đậu nành thuỷ phân phần 410457651Z Nestlé Thực phẩm dinh dưỡng nhiều chất 00729RF00 Abbott Nutrition 00730RF00 Abbott Nutrition sơ sinh béo Thực phẩm dinh dưỡng giàu protein Thẩm định phương pháp tiến hành theo SANCO/12571/2013 (2) Dữ liệu độ xác thu từ giá trị mẫu thêm chuẩn nồng độ 10 µg/kg (tương ứng với hai mức x LOQ 10 x LOQ) Ít hai kiểm nghiệm viên tham gia vào thí nghiệm này, kiểm nghiệm viên phân tích lần lặp lại mức thêm chuẩn hai ngày khác (khoảng 10 thí nghiệm riêng biệt cho mức thêm chuẩn) Mẫu không thêm chuẩn phân tích để khẳng định khơng có mặt chất phân tích trước thêm chuẩn Độ tuyến tính: Độ tuyến tính xác định qua 0-2 tỉ lệ diện tích, tương ứng với 0-0,8 ng natri fluoroacetat (0,4 ng IS) bơm vào cột Đường chuẩn dựng theo mơ hình tuyến tính với R > 0,99 độ lệch chuẩn tương đối giá trị trung bình độ đáp ứng < 15% Giới hạn định lượng (LOQ): LOQ phương pháp µg/kg cho sản phẩm cơng thức cho trẻ sơ sinh Nồng độ tương ứng với mức thêm chuẩn thấp trình thẩm định Độ thu hồi, độ lặp lại độ tái lặp trung gian nêu Bảng C.2 Bảng C.2 – Giá trị độ thu hồi, độ tái lặp độ tái lặp trung gian mẫu khác 19 TCVN … : 2019 Mẫu Độ thu hồi (%) CV(r) (%) CV(iR) (%) µg/kg 10 µg/kg µg/kg 10 µg/kg µg/kg 10 µg/kg Nền sữa 134 105 11 Nền đậu nành 117 103 Nền sữa thuỷ phân phần 111 108 Nền đậu nành thuỷ phân phần 116 103 Thực phẩm dinh dưỡng nhiều chất béo 112 101 Thực phẩm dinh dưỡng giàu protein 96 99 Tồn giá trị độ xác đạt yêu cầu SANCO 12571/2013 CV(r) CV(iR) ≤ 20 %, độ thu hồi đạt khoảng 70 % đến 120 % Giá trị độ thu hồi cho sữa mức µg/kg 134 % Điều giải thích Một píc nhỏ quan sát mẫu không thêm chuẩn cho thấy natri fluoroacetat tồn với nồng độ thấp giới hạn định lượng phương pháp 20 TCVN … : 2019 Thư mục tài liệu tham khảo [1] Infant formula – Determination of sodium fluoroacetate -Liquid chromatography tandem mass spectrometry method _ 21 .. .TCVN … : 2019 TCVN … : 2019 Lời nói đầu TCVN … : 2019 xây dựng sở tham khảo AOAC 2015.03 Sodium Fluoroacetate in Infant Formula – Liquid chromatography– Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) TCVN. .. Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN … : 2019 TCVN … : 2019 TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN … : 2019 Thực phẩm công thức dành cho trẻ sơ sinh – Xác định hàm lượng natri fluoroacetat – Phương pháp sắc... tiêu chuẩn Natri fluoroacetat độc với người, thực tất bảo hộ cần thiết, đặc biệt thao tác với dung dịch chuẩn gốc Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp xác định hàm lượng natri fluoroacetat