PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG THUỐC KHÁNG SINH SULFONAMIDE VÀ QUINOLONE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG THUỐC KHÁNG SINH SULFONAMIDE VÀ QUINOLONE TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Kim Diễm Mai Nhóm: Nevertheless TĨM TẮT 01 Tổng quan 04 Quy trình, Hố chất dụng cụ 02 Mục tiêu 05 Nội dung nghiên cứu 03 Phương pháp nghiên cứu 06 Phạm vi, kế hoạch nghiên cứu 1.1 TỔNG QUAN VỀ SULFONAMIDE KHÁI NIỆM CƠ CHẾ VÀ CÔNG DỤNG CỦA HỢP CHẤT MỘT SỐ THÔNG TIN THÊM KHÁI NIỆM SULFONAMIDE Sulfonamide, gọi thuốc sulfa, dẫn xuất sulfanilamide (paminobenzenesulfonamide), Sulfonamide sử dụng phổ biến việc sản xuất dược liệu cho người thú y Khung sulfonamide số hợp chất phổ biến CƠ CHẾ Cơ chế hoạt động: dựa ức chế chuyển đổi p-aminobenzoic acid, làm gián đoạn trình vi khuẩn sử dụng hợp chất để tổng hợp folic acid, purine, DNA CÔNG DỤNG CỦA CÁC HỢP CHẤT Những hợp chất chúng dùng để điều trị nhiễm trùng đường tiết niệu, nhiễm trùng tai, viêm phế quản, viêm màng não vi khuẩn, nhiễm trùng mắt, viêm phổi carinii, số loại nhiễm trùng khác MỘT SỐ THƠNG TIN THÊM FDA khảo sát tồn quốc 45% mẫu sữa thu thập xác định có chứa dư Báo cáo từ NCTR cho thấy lượng sulfamethazine sulfamethazine xác Tiến hành khảo sát 30 mẫu   định tác nhân gây ung sữa Canada dư lượng thư sulfamethazine hai mẫu mức 11.40 5.24 Ảnh hưởng: + Dẫn đến dị ứng gây độc cho người tiêu thụ + Thúc đẩy xuất vi khuẩn kháng kháng sinh ppb 1.2 TỔNG QUAN VỀ QUINOLONE KHÁI NIỆM CƠ CHẾ MỘT SỐ THÔNG TIN THÊM KHÁI NIỆM Kháng khuẩn quinolone định nghĩa 1-substitued-1,4dihydro-4-oxo-3pyridinecarboxylic acids có vịng vị trí số 5,6 CƠ CHẾ • Quinolones ức chế chép DNA vi khuẩn cách ngăn chặn miền ligase gyrase DNA vi khuẩn • Những enzyme thường cắt chuỗi xoắn kép DNA, đưa phần khác sợi qua khoảng trống, sau hàn gắn vết cắt Nhưng quinolone liên kết với enzym, ngăn không cho chúng hàn gắn vết cắt 10 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN Sulfonamide Mẫu Sữa (1g) Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide pH=4.7 Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide AcCN pH=4.7 Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide Lớp AcCN Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide Lớp 10 mL n-hexane ly tâm 3500 rpm, phút n-hexane AcCN Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide Lớp 10 mL n-hexane ly tâm 3500 rpm, phút Lớp AcCN Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide Lớp 10 mL n-hexane ly tâm 3500 rpm, phút Lớp đặc, sau pha lỗng với 0.5 mL AcCN : H2O (1:1) ly tâm 14000 rpm, 10 phút AcCN H2O Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide Quinolone Lớp Lớp 10 mL n-hexane ly tâm 3500 rpm, phút 10 mL n-hexane ly tâm 3500 rpm, phút Lớp cô đặc, sau pha lỗng với 0.5 mL AcCN : H2O (1:1) ly tâm 14000 rpm, 10 phút mL CCl3CO2H 2.5% (pH = 0.84), phút 10 mL AcCN, ly tâm 5000 rpm, 20 phút Lớp cô đặc, sau pha lỗng với 0.5 mL AcCN : H2O (1:1) ly tâm 14000 rpm, 10 phút AcCN Lớp Lớp Lọc nylon 0.2 HPLC Sắc ký đồ 4.2 HOÁ CHẤT VÀ DỤNG CỤ Hoá chất - Mẫu sữa phân tích - Các hố chất cho q trình tách chiết HPLC: potassium dihydrophosphate, acetonitrile, nhexane, trichloroacetic acid, nước cất - Các hoá chất chuẩn hoá hiệu chỉnh hệ thống: sulfadiazine, sulfathiazole, sulfamethazine, sulfamethizole, sulfamethoxypyridazine, sulfamonomethoxine, sulfamethoxazole, sunfasoxazole, sulfadimethoxine, sulfaquinoxaline, ciprofloxacin, danofloxacin, enrofloxacin, sarafloxacin, oxolinic acid, nalidixic acid flumequine Dụng cụ - Dụng cụ xử lý mẫu: Bình cầu 250 mL; Cốc thủy tinh 250 mL, 100 mL; Phễu chiết 100 mL; Ống đong 25 mL; Đũa thủy tinh; Cân điện tử số Satorius AG Germani CPA3235; Máy khuấy từ gia nhiệt Stone Staffordshire England ST15OSA; Máy ly tâm; Lọc nylon m - Cột sắc ký C18 250 mm x 4.6 mm WatersTM - Hệ thống HPLC Agilent 1260 Infinity II LC System (Phòng Phân tích Trung Tâm, trường Đại học Sư Phạm TPHCM) NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Quy trình tách sulfonamide quinolone khỏi sữa - Sử dụng sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng sulfonamide quinolone sữa 25 6.1 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Địa điểm: Thời gian: Tháng 10/2021 đến tháng 5/2022 - Mẫu sữa lấy siêu thị thành phố Hồ Chí Minh - Phịng Phân tích Trung tâm, trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh 26 6.2 KẾ HOẠCH NGHIÊN CỨU STT Công việc thực Sản phẩm Xác định đề tài Tên đề tài Tổng quan tài liệu Cơ sở lí luận thực tễn đề tài Đề xuất phương pháp thực nghiệm Các phương pháp thực nghiệm Khảo sát ý kiến chuyên gia phương pháp thực Các phương pháp thực nghiệm nghiệm Thu thập mẫu sữa siêu thị Mẫu sữa Xử lí mẫu sữa Mẫu sữa xử lí Tiến hành khảo sát đặc trưng mẫu Các thông số đặc trưng mẫu Phân tích, xử lí số liệu, chọn mẫu tối ưu Mẫu tối ưu Tiến hành phân tích mẫu phương pháp HPLC đầu dị UV fluorescene Dữ liệu thực nghiệm 10 Phân tích, xử lí số liệu Kết thực nghiệm 11 Viết báo cáo Báo cáo tổng kết Thời gian 1/10/2021 – 5/10/2021 10/2021 – 11/2021 11/2021 – 1/2022 1/2022 – 2/2022 2/2022 – 3/2022 3/2022 – 4/2022 Tháng 5/2022 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] E P Tolika, V F Samanidou, and I N Papadoyannis, “Development and validation of an HPLC method for the determination of ten sulfonamide residues in milk according to 2002/657/EC,” Journal of Separation Science, vol 34, no 14, pp 1627–1635, Jul 2011, doi: 10.1002/JSSC.201100171 [2] M J García-Galán, M Silvia Díaz-Cruz, and D Barceló, “Identification and determination of metabolites and degradation products of sulfonamide antibiotics,” TrAC Trends in Analytical Chemistry, vol 27, no 11, pp 1008–1022, Dec 2008, doi: 10.1016/J.TRAC.2008.10.001 [3] V K Agarwal, “High-performance liquid chromatographic methods for the determination of sulfonamides in tissue, milk and eggs,” Journal of Chromatography A, vol 624, no 1–2 pp 411–423, Oct 30, 1992 doi: 10.1016/0021-9673(92)85692-M [4] M P Wentland and J B Cornett, “Quinolone Antibacterial Agents,” Annual Reports in Medicinal Chemistry, vol 20, pp 145– 154, Jan 1985, doi: 10.1016/S0065-7743(08)61041-6 [5] J Marchant, “When antibiotics turn toxic,” Nature, vol 555, no 7697, pp 431–433, Mar 2018, doi: 10.1038/D41586-018-032675 [6] D G Waller and A P Sampson, “Chemotherapy of infections,” in Medical Pharmacology and Therapeutics, 5th ed., W Derek and S Anthony, Eds Amsterdam: Elsevier, 2018, pp 581–629 doi: 10.1016/B978-0-7020-7167-6.00051-8 [7] FDA, “FDA updates warnings for fluoroquinolone antibiotics on risks of mental health and low blood sugar adverse reactions | FDA,” U S Food and Drug Adminstration, Jul 2018 [Online] Available: https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/fdaupdates-warnings-fluoroquinolone-antibiotics-risks-mental-health-and-low-blood-sugar-adverse (accessed Oct 04, 2021) [8] L Riaz et al., “Fluoroquinolones (FQs) in the environment: A review on their abundance, sorption and toxicity in soil,” Chemosphere, vol 191, pp 704–720, Jan 2018, doi: 10.1016/J.CHEMOSPHERE.2017.10.092 [9] L S Ettre and J v Hinshaw, “M S Tswett, and the Invention of Chromatography: Part I: Life and Early Work (1872–1903),” in Chapters in the Evolution of Chromatography, London: Imperial College Press, 2008, pp 49–59 doi: 10.1142/9781860949449_0005 [10] L R Snyder and J W Dolan, “Milestones in the Development of Liquid Chromatography,” in Liquid Chromatography: Fundamentals and Instrumentation, Eds Amsterdam: Elsevier, 2013, pp 1–17 doi: 10.1016/B978-0-12-415807-8.00001-8 TÀI LIỆU THAM KHẢO [11] A R Long, L C Hsieh, M S Malbrough, C R Short, and S A Barker, “Matrix solid phase dispersion (MSPD) extraction and liquid chromatographic determination of five benzimidazole anthelmintics in pork muscle tissue,” Journal of Food Composition and Analysis, vol 3, no 1, pp 20–26, Mar 1990, doi: 10.1016/0889-1575(90)90005-7 [12] M T Combs, M Ashraf-Khorassani, and L T Taylor, “HPLC/atmospheric pressure chemical ionization-mass spectroscopy of eight regulated sulfonamides,” Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, vol 19, no 3–4, pp 301–308, Mar 1999, doi: 10.1016/S0731-7085(98)00121-6 [13] N Furusawa, “Simplified determining procedure for routine residue monitoring of sulphamethazine and sulphadimethoxine in milk,” Journal of Chromatography A, vol 898, no 2, pp 185–191, Nov 2000, doi: 10.1016/S0021-9673(00)00843-8 [14] B Delepine, D Hurtaud-Pessel, and P Sanders, “Simultaneous determination of six quinolones in pig muscle by liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionisation mass spectrometry,” Analyst, vol 123, no 12, pp 2743–2747, Jan 1998, doi: 10.1039/A804911D [15] J C Yorke and P Froc, “Quantitation of nine quinolones in chicken tissues by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection,” Journal of chromatography A, vol 882, no 1–2, pp 63–77, Jun 2000, doi: 10.1016/S0021-9673(00)00165-5 [16] L Okerman, S Croubels, S de Baere, J van Hoof, P de Backer, and H de Brabander, “Inhibition tests for detection and presumptive identification of tetracyclines, beta-lactam antibiotics and quinolones in poultry meat,” Food additives and contaminants, vol 18, no 5, pp 385–393, 2001, doi: 10.1080/02652030120410 [17] M Touraki, M Ladoukakis, and C Prokopiou, “High-performance liquid chromatographic determination of oxolinic acid and flumequine in the live fish feed artemia,” Journal of Chromatography B, vol 751, no 2, pp 247–256, Feb 2001, doi: 10.1016/S03784347(00)00474-6 [18] J M Delmas, A M Chapel, and P Sanders, “Determination of flumequine and 7-hydroxyflumequine in plasma of sheep by highperformance liquid chromatography,” Journal of chromatography B, vol 712, no 1–2, pp 263–268, Aug 1998, doi: 10.1016/S03784347(98)00159-5 [19] E N Evaggelopoulou and V F Samanidou, “HPLC confirmatory method development for the determination of seven quinolones in salmon tissue (Salmo salar L.) validated according to the European Union Decision 2002/657/EC,” Food Chemistry, vol 136, no 2, pp 479–484, Jan 2013, doi: 10.1016/J.FOODCHEM.2012.08.075 THANK YOU! SEE YOU SOON 30 ... Phạm TPHCM) 5 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU - Quy trình tách sulfonamide quinolone khỏi sữa - Sử dụng sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) để định lượng sulfonamide quinolone sữa 25 6.1 PHẠM VI NGHIÊN CỨU Địa điểm:... VỀ SULFONAMIDE KHÁI NIỆM CƠ CHẾ VÀ CÔNG DỤNG CỦA HỢP CHẤT MỘT SỐ THƠNG TIN THÊM KHÁI NIỆM SULFONAMIDE Sulfonamide, cịn gọi thuốc sulfa, dẫn xuất sulfanilamide (paminobenzenesulfonamide), Sulfonamide. .. TRÌNH THỰC HIỆN Sulfonamide Mẫu Sữa (1g) Quinolone 4.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN mL KH2PO4 0.1% (pH = 4.7), phút 10 mL AcCN, ly tâm 4000 rpm, 15 phút Mẫu Sữa (1g) Sulfonamide pH=4.7 Quinolone 4.1 QUY