THỬ NGHIỆM SINH HOÁ – MIỄN DỊCH DÙNG TRONG CHẨN ĐOÁN VI SINH VẬT

THỬ NGHIỆM SINH HOÁ – MIỄN DỊCH DÙNG TRONG CHẨN ĐỐN VI SINH VẬT MỤC TIÊU Trình bày sở thử nghiệm sinh hoá dùng chẩn đốn vsv Trình bày cách thực đọc kết số thử nghiệm sinh hoá Trình bày nguyên lý cách thực kit thử chẩn đoán viêm gan B I CÁC THỬ NGHIỆM SINH HỐ Định danh vi khuẩn • Khảo sát hình thái, tính chất bắt màu vi khuẩn kính hiển vi • Khảo sát hình thái khuẩn lạc • Xác định tính chất sinh hố • Xác định tính chất kháng nguyên Xác định tính chất sinh hố Có cách sử dụng thử nghiệm sinh hóa để định danh VSV:  Cách truyền thống  Sử dụng KIT  Sử dụng thiết bị tự động Hệ thống xác định vi sinh vật API-20E (bioMerieux, Inc) Thử nghiệm khả sinh Indol Mục đích: Phát VSV có enzyme tryptophanase chuyển tryptophan thành Indol 37oC / 24h Thuốc thử Kovac’s Chủng VSV MT canh trypton Pứ dương tính Pứ âm tính Thử nghiệm khả sinh H2S • Mục đích: vi khuẩn sử dụng hợp chất chứa Sthiosulfate tạo thành H2S • Cơ sở sinh hóa: Acid amin chứa S Thiosulfate desulfohydras e thiosulfate reductase HS H2S  H2S sinh nhận biết ion sắt, chì tạo kết tủa màu đen (FeS, PbS) Thử nghiệm catalase • Mục đích: phát vi sinh vật có hệ enzym catalase • Cơ sở sinh hố: Catalase diện VSV hiếu khí kỵ khí tùy ý H2O2 catalase H2O + O2 (bọt khí) (Hydrogen peroxide) Thử nghiệm catalase • Thực – VSV lấy từ môi trường nuôi cấy (lỏng, rắn) – Đặt VSV lên lam kính – Nhỏ H2O2 30% – Quan sát sau 1-2 giây • Phản ứng (+): có bọt khí xuất • Phản ứng (-): khơng có bọt khí xuất Thử nghiệm catalase Thử nghiệm catalase Thử nghiệm catalase đĩa petri: sử dụng H2O2 30% THỬ NGHIỆM COAGULASE • Mục đích: Thử nghiệm khả làm đơng tụ huyết tương enzyme coagulase • Là bước cuối định danh giống Staphylococcus • Chủng đối chứng (+): S aureus (-): S epidermidis • Thử nghiệm tiến hành với huyết tương fibrinogen THỬ NGHIỆM COAGULASE Thử nghiệm cách: Thử phiến kính Đọc kết Giọt nước + Sinh khối vsv + Huyết tương người Thử nghiệm ống nghiệm: 0,5ml huyết tương Ủ đọc kết 0,5ml huyết dịch sinh khối 30 phút THỬ NGHIỆM COAGULASE Kết thử nghiệm Coagulase (+) xuất khối đông tụ huyết tương (-) không xuất khối đông tụ, dung dịch đồng Thử nghiệm oxydase • Mục tiêu: phát VSV có hệ enzym oxydase (hệ cytochrom C) • Cơ sở sinh hoá Cytochrom C khử + H+ + O2 Cytochrom C ơxi hố + H2O Cytochrom C ôxi hoá + TMPD khử  TMPD ôxi hoá (màu xanh) Thử nghiệm oxydase • Thuốc thử – TMPD (0,1%): N,N,N’,N’-tetramethyl-pphenylenediamine – Bảo quản lạnh tối – Thời hạn bảo quản: tuần • Đối chứng (+): Serratia marcescens (-) : Proteus rettgeri Thử nghiệm oxydase • Thực hiện: – Lấy VSV từ Nitrient Agar đặt lên giấy thấm – Nhỏ thuốc thử TMPD – Quan sát sau 30 giây Phản ứng (+): sinh khối chuyển màu xanh Phản ứng (-): sinh khối màu trắng Thử nghiệm oxydase II PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH Kit thử chẩn đoán viêm gan B Mục đích: Kit thử chẩn đốn Viêm gan B (HBsAg) dụng cụ xét nghiệm sắc ký miễn dịch định tính phát có mặt kháng nguyên virus Viêm gan B huyết huyết tương HBsAg Kit thử chẩn đoán viêm gan B Vạch chứng (C) Vạch thử (T) Vùng phản ứng K - KT HBsAg Anti - HBsAg KT HBsAg* Huyết KN HBsAg + + KT HBsAg* KN HBsAg + KT HBsAg* Kit thử chẩn đoán viêm gan B Đọc kết quả: VẠCH CHỨNG VẠCH THỬ KẾT QUẢ + Dương tính (Có KN HBsAg bệnh phẩm) + - Âm tính (Khơng có KN HBsAg bệnh phẩm) - -/+ + Kết khơng có giá trị ... sở thử nghiệm sinh hoá dùng chẩn đoán vsv Trình bày cách thực đọc kết số thử nghiệm sinh hố Trình bày nguyên lý cách thực kit thử chẩn đoán vi? ?m gan B I CÁC THỬ NGHIỆM SINH HOÁ Định danh vi. .. sở: Vi sinh vật di động nhờ tiêm mao • Các tiến hành: Cấy đâm sâu vi sinh vật vào môi trường thạch mềm (0,5% agar) – Vi sinh vật di động làm môi trường đục, phát triển lan khỏi vết cấy – Vi sinh. .. thử TMPD – Quan sát sau 30 giây Phản ứng (+): sinh khối chuyển màu xanh Phản ứng (-): sinh khối màu trắng Thử nghiệm oxydase II PHẢN ỨNG MIỄN DỊCH Kit thử chẩn đoán vi? ?m gan B Mục đích: Kit thử