PP Kiểm Tra Hiện Đại

MỘT SỐ KỸ THUẬT KiỂM TRA HIÊN ĐẠI ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay Kỹ thuật ELISA?  Là kỹ thuật dùng để phát hiện các phân tử đặc trưng trong mẫu (e.g. proteins & carbohydrates, vi khuẩn, virus, độc tố .)  Là công nghệ của lĩnh vực miễn dịch: sử dụng kháng thể (antibodies).  Dùng để định tính và định lượng mẫu.  Rất nhạy.  Được ứng dụng nhiều trong y học và thực phẩm  Có khả năng phát hiện và liên kết với kháng nguyên (antigens) Antibodies  Là những Proteins được tiết ra bởi tế bào B- lymphocytes (bạch cầu) ở động vật có xương sống. IgG molecule Fab fragments Fc fragments Các bước cơ bản của phương pháp ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay 1. Antigen được hấp thu trên bề mặt plastic (‘sorbent’). 2. Antigen được nhận biết bởi các antibody đặc trưng (‘immuno’). 3. Antibody được nhận diện bởi antibody (‘immuno’) thứ 2 có gắn với enzyme (‘enzyme-linked’). 4. Phản ứng cơ chất với enzym được thực hiện (thường tạo hợp chất màu) Màu của sản phẩm= đo được sự hiện diện của antigen Substrate Primary antibody Secondary antibody Different antigens in sample Coloured product Botrytis cinerea conidiophore Chuẩn bị mẫu Place half a raspberry in tube Add 2ml PBS Break up tissue with glass rod Filter into new tube using muslin Coating the wells  Nhỏ 1 giọt mẫu vào giếng (well)  Giữ yên trong khoảng 10 phút để mẫu hấp thu vào bề mặt plastic. Thêm kháng thể (primary antibody)  Thêm vào khoảng 4 giọt primary antibody (mouse monoclonal) vào mỗi giếng