Tuyển chọn và nghiên cứu khả năng sinh hợp chất kháng khuẩn của vi khuẩn lactic

Mục tiêu của nghiên cứu này là tuyển chọn những chủng vi khuẩn LAB có khả năng sinh hợp chất kháng khuẩn cao từ một số thực phẩm lên men tự nhiên, đồng thời khảo sát các yếu tố ảnh hưởng của điều kiện lên men đến hoạt tính kháng khuẩn của chúng.

BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM - HỘI NGHỊ KHOA HỌC QUỐC GIA LẦN THỨ DOI: 10.15625/vap.2020.000114 TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH HỢP CHẤT KHÁNG KHUẨN CỦA VI KHUẨN LACTIC Phạm Thị Mỹ*, Lê Thị Mai Tóm tắt: Vi khuẩn lactic (Lactic Acid Bacteria, LAB) tìm thấy sử dụng nhiều sản phẩm lên men truyền thống, theo điều kiện tự nhiên Nhiều nghiên cứu gần chứng minh vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn, có bacteriocin (một loại kháng sinh sinh học có chất protein) Mục tiêu nghiên cứu tuyển chọn chủng vi khuẩn LAB có khả sinh hợp chất kháng khuẩn cao từ số thực phẩm lên men tự nhiên, đồng thời khảo sát yếu tố ảnh hưởng điều kiện lên men đến hoạt tính kháng khuẩn chúng Từ số sản phẩm lên men (dưa chuột muối, rau cải muối, nem chua) phân lập chủng LAB tuyển chọn chủng LAB (N1, D3, D5) có khả đối kháng cao với chủng vi khuẩn thị Đã tiến hành khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn chủng LAB tuyển chọn xác định điều kiện ni cấy thích hơp: mơi trường MRS với pH 6,5 nuôi 37 oC thời gian 48 h Từ khóa: Bacteriocin, kháng khuẩn, lactic, vi khuẩn MỞ ĐẦU Vi khuẩn lactic (Lactic Acid Bacteria, LAB) xem vi sinh vật an toàn (Generally Recognized as Safe, GRAS) sử dụng phổ biến ngành công nghiệp thực phẩm, dược phẩm y tế, (Sabo et al., 2014) Những năm gần đây, nhóm vi khuẩn đánh giá nguồn tiềm to lớn sản sinh hợp chất kháng khuẩn, quan tâm nhiều số bacteriocin Bacteriocin chất kháng khuẩn có chất protein tổng hợp ribosome vi khuẩn Gram (-) Gram (+) (Dobson et al., 2012) Bacteriocin có khả tiêu diệt vi khuẩn tạo thành kênh làm thay đổi tính thấm màng tế bào, nhiều loại bacteriocin cịn có khả phân giải DNA, RNA công vào peptidoglycan làm suy yếu thành tế bào vi khuẩn gây hại (Cleveland et al., 2001; Dimov, 2007) Bacteriocin vi khuẩn lactic xem giải pháp hữu hiệu phòng, chống vi khuẩn gây bệnh gây thối thực phẩm mà không gây dị ứng không gây hại cho sức khỏe người chúng bị thủy phân nhanh protease đường ruột người (De Vuyst, Leroy, 2007; Zhang et al., 2010) Chính nên khơng LAB mà bacteriocin vi khuẩn sinh tổng hợp nghiên cứu rộng rãi (Bromberg et al., 2004; Chen Hoover, 2003) Quá trình sinh tổng hợp hợp chất kháng khuẩn LAB chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố điều kiện lên men, nguồn dinh dưỡng Chính sàng lọc, tuyển chọn chủng LAB có hoạt tính đối kháng mạnh đồng thời nghiên cứu tìm điều kiện ni cấy thích hợp mục tiêu nghiên cứu Trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng *Email: ptmy@ued.udn.vn PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 919 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Một số thực phẩm lên men: Dưa chuột muối, rau cải muối, nem chua thu mua siêu thị Coopmart, Đà Nẵng - Các chủng vi khuẩn lactic phân lập từ mẫu thực phẩm lên men nêu - Chủng thị E coli, B subtilis lấy từ Phịng thí nghiệm Khoa Sinh - Môi trường, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Phân lập định danh sơ LAB: Cân xác 10 g mẫu cho vào bình nón chứa 90 mL mơi trường MRS bổ sung nystatin với nồng độ 50 mg/L (Ishola R O et al., 2012) Sau đem ủ lắc với tốc độ 150 vòng/phút 37 oC vòng 24 Thành phần môi trường MRS bao gồm: glucose (20 g); CaCO3(5 g); cao thịt (10 g); pepton (10 g); Cao nấm men (5 g), tween 80 (1 ml); K2HPO4 (2 g); CH3COONa (5 g); triamoni citrate (2 g); MgSO4.7H2O (0,58 g); MnSO4.4H2O (0,28 g); pH 7,0 Sau tăng sinh, pha loãng mẫu độ pha loãng 10-5, 10-6 10-7 Hút 0,1 mL dịch độ pha lỗng cấy vào mơi trường MRS agar có bổ sung nystatin với nồng độ 50 mg/L ủ 37 oC 48 Chọn lọc vi khuẩn lactic dựa vào hình thái khuẩn lạc, sau làm bảo quản Tiến hành số thử nghiệm để định danh sơ vi khuẩn lactic gồm nhuộm Gram, thử nghiệm catalase theo Ashmaig et al., (2009) Karthikeyan & Santhosh (2009) - Kiểm tra khả sinh acid lactic thuốc thử Uffelmann dựa vào nguyên tắc: acid lactic phản ứng với nhân phenol có thuốc thử Uffelmann làm màu thuốc thử chuyển sang màu vàng sáng, dựa vào xác định VK có sinh acid lactic hay không (Nguyễn Lân Dũng nnk., 1972) - Phương pháp xác định khả di dộng vi khuẩn: Chủng vi khuẩn cấy vào ống nghiệm chứa môi trường MRS đặc theo phương thẳng đứng 37 °C 48h Nếu vi khuẩn mọc lan xung quang đường cấy chứng tỏ vi khuẩn có tính di động Nếu vi khuẩn mọc thẳng đứng theo đường cấy chứng tỏ khơng có khả di dộng (James G C and Natalie, 2002) - Phương pháp đục lỗ thạch để nghiên cứu khả kháng khuẩn bacteriocin thô: chủng sinh tổng hợp bacteriocin nuôi tăng sinh môi trường MRS lỏng nhiệt độ 37 °C sau 48 h, chuyển ml vào ống Eppendoff đem ly tâm 10000 vòng/ 10 phút để loại bỏ sinh khối, thu dịch Hút dịch đo pH ban đầu, tiến hành điều chỉnh pH NaOH 0,1 N để đưa pH 6,5 Sau hút 10 µL dịch bacteriocin thơ bơm vào giếng thạch đục lỗ với kích thước (đĩa thạch tra vi sinh vật kiểm định để khô) Tiến hành ủ đĩa 48 h 37 oC, tiến hành quan sát ghi nhận kích thước vùng kháng khuẩn xuất quanh khuẩn lạc vi khuẩn (Hwanhlen et al., 2011) - Phương pháp khảo sát ảnh hưởng pH, nhiệt độ thời gian đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn: 920 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM + pH: Các chủng LAB nuôi cấy lắc môi trường MRS lỏng với giá trị pH khác nhau: pH 5, pH 5,5, pH 6, pH 6,5, pH 7, nhiệt độ 37 oC + Nhiệt độ: Các chủng LAB nuôi cấy lắc mơi mơi trường MRS lỏng có với pH chọn thí nghiệm trước, mức nhiệt độ 25 oC, 30 oC, 37 oC, 45 oC + Thời gian: Tiến hành nuôi cấy lắc chủng LAB môi trường MRS lỏng có pH nhiệt độ chọn thí nghiệm trước, sau mốc thời gian 24 h, 48 h 72 h tiến hành thu dịch thể đem thử hoạt tính kháng vi khuẩn thị Các thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng tiến hành độc lập, thí nghiệm lặp lại lần Khả sinh tổng hợp hợp chất kháng khuẩn đánh giá thơng qua đường kính vịng kháng vi khuẩn thị dịch thể sau ly tâm điều chỉnh pH 6,5 theo điều kiện nuôi cấy khác - Phương pháp xử lý số liệu: Các thí nghiệm lặp lại lần Số liệu phân tích từ thí nghiệm tính tốn thống kê chương trình SPSS KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Phân lập chủng vi khuẩn lactic Đã phân lập chủng vi khuẩn từ số mẫu thực phẩm lên men tự nhiên (dưa chuột muối, rau cải muối, nem chua) Kết cho thấy, đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chủng đa dạng có khả sinh acid lactic thử nghiệm môi trường MRS (Bảng 1) Bảng Một số đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chủng LAB phân lập Hình Khả Khả Nguồn Kí hiệu Hoạt tính Hình thái khuẩn lạc, TT dạng tế Gram di sinh acid phân lập chủng catalase kích thước bào động lactic Tròn, trơn nhẵn, trắng D1 Cầu + + ngà, 1,8 - mm Dưa Que Tròn, trơn nhẵn, trắng chuột D3 + + ngắn sữa, 0,8 - mm muối Tròn, trơn, nhẵn, trắng D5 Cầu + + đục - 1,2 mm Que Tròn, trơn nhẵn, trắng R1 + + ngắn sữa, 0,2 - 0,5 mm Rau cải Tròn, trơn nhẵn, trắng R2 Cầu + + muối sữa, 0,6 - 0,8 mm Que Tròn, trơn nhẵn, trắng sữa R4 + + ngắn 0,8 - mm Tròn, trơn nhẵn, màu N1 Cầu + + trắng ngà, 1,8 - mm Que Tròn, trơn nhẵn, trắng Nem chua N2 + + ngắn sữa, 0,8 - 1,2 mm Tròn, trơn nhẵn, trắng N7 Que + + sữa, 0,8 - 1,25 mm PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 921 Kết nghiên cứu đặc điểm tế bào cho thấy hình dạng chủng phân lập chủ yếu hình que ngắn hình cầu hình thái khuẩn lạc chủ yếu tròn, trơn nhẵn, màu trắng sữa trắng ngà, kích thước khuẩn lạc từ nhỏ khoảng 0,5-1,3 mm, mọc riêng rẽ, chủng có khả sinh axit lactic, âm tính với phản ứng catalase, khơng có khả di động Gram (+) Bước đầu nhận định chủng vi khuẩn xác suất cao chủng LAB Tiếp theo, sử dụng chủng vi khuẩn để tiến hành tuyển chọn chủng có khả sinh hợp chất kháng khuẩn cao 3.2 Tuyển chọn chủng LAB sinh chất kháng khuẩn Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chủng LAB phân lập với vi khuẩn kiểm định E coli B subtilis thể Hình Bảng Hình Hoạt tính kháng vi khuẩn thị chủng LAB Từ kết thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng vi khuẩn thị chủng LAB phân lập nhóm nghiên cứu đo kích thước vịng kháng khuẩn Kết trình bày Bảng STT Bảng Đường kính vịng kháng vi khuẩn thị chủng LAB Đường kính vịng kháng khuẩn (∆D mm) Chủng vi khuẩn E coli B subtilis a D1 13,33 7,67a b D3 18,33 12,67b bc D5 20,33 17,67c R1 14ae 8,67ae af R2 12,33 10bf R4 N1 17,33bd 16d N4 N7 - * Các mẫu tự khác (a, b, c, d, e, f) biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa (theo cột) độ tin cậy 95% 922 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM Kết nghiên cứu Bảng Hình cho thấy, chủng LAB phân lập có chủng (D1, D3, D5, R1, R2, N1) có khả đối kháng với chủng thị chủng lại (R4, N4, N7) khả ức chế chủng thị Tuy nhiên, khả đối kháng chủng khác khác chủng thị Cụ thể chủng có khả đối kháng với chủng thị nhận thấy có chủng (N1, D3, D5) chủng có hiệu lực ức chế mạnh với đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng là: ∆DE(N1) = 17,33abd mm, ∆DB(N1) = 16d mm, ∆DE(D3)= 18,33b mm, ∆DB(D3)= 12,67b mm ∆DE(D5) = 20,33bc mm, ∆DB(D5) = 17,67c mm Kết khả quan so với kết nghiên cứu Ngô Thị Phương Dung nnk (2011), 46 dòng LAB phân lập từ dưa cải muối chua, kim chi, sữa chua vinamilk, sữa chua uống yakul, nem chua, men tiêu hóa đơng khơ, 10 dòng sinh chất bacteriocin chống lại vi khuẩn thị B subtilis , có dịng DC213A có đường kính vịng vơ khuẩn rộng 22 mm Trong nghiên cứu khác Onda et al (1999), có 125 dịng LAB phân lập từ sản phẩm Miso Nhật Bản biểu tính kháng khuẩn hai dịng thị B subtilis JCM1465 Staphylococcus aureus JCM1465 Như vậy, sau khảo sát khả kháng chủng vi khuẩn thị chủng LAB phân lập thấy có chủng D3, D5, N1 có hoạt tính kháng khuẩn cao chủng cịn lại Vì thế, chủng D3, D5, N1 lựa chọn cho nghiên cứu 3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn chủng LAB tuyển chọn Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy pH môi trường có tác động đáng kể vào tăng trưởng khả sinh hợp chất kháng khuẩn đặc biệt bacteriocin LAB (Todorov et al., 2005) Thí nghiệm tiến hành môi trường MRS 37 oC với pH thay đổi khoảng từ 5-7 Kết ảnh hưởng pH đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn thể Bảng Bảng Kích thước vịng ức chế vi khuẩn thị chủng LAB (N1, D3, D5) nuôi môi trường MRS giá trị pH khác Chủng Kích thước vịng ức chế vi khuẩn thị (mm) N1 D3 D5 pH E coli B subtilis E coli B subtilis E coli B subtilis 12,67a 10,33a 14,67b 11,00ab 12,67ac 14,67c 5.5 15,67a 14,67a 16,67ab 12,67ab 17bc 16ac bd d b b bc 17,33 16 18,33 12,67 20,33 17,67c a a ab b c 6.5 20,67 17,67 19,33 16,67 22,33 19,33c a a b ab ac 16,33 11,33 13,33 12,33 16,67 16,33c * Các mẫu tự khác (a, b, c, d) biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa (theo dịng) độ tin cậy 95% Kết Bảng cho thấy pH mơi trường ni cấy có ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp chất kháng khuẩn chủng N1, D3, D5 nhiên với mức độ không nhiều Khi tăng dần giá trị pH từ đến 6,5 hoạt tính ức chế phát triển vi khuẩn PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 923 thị tăng lên đạt giá trị cực đại pH = 6,5 với đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng: ∆DE(N1) = 20,67a mm, ∆DB(N1) = 17,67a mm, ∆DE(D3) = 19,33ab mm, ∆DB(D3) = 16,67b mm ∆DE(D5) = 22,33c mm, ∆DB(D5) = 19,33c mm Tiếp tục tăng pH lên nhận thấy hoạt tính ức chế giảm Điều chứng tỏ pH 6,5, chủng LAB thể hoạt tính kháng vi khuẩn thị cao Kết nghiên cứu phù hợp với nhiều nghiên cứu nước Todorov Dicks (2005), khảo sát khả sinh bacteriocin vi khuẩn L plantarum ST194BZ điều kiện pH khác cho hoạt tính bacteriocin cao với pH môi trường 6,5 Theo nghiên cứu Patil et al., 2011, chủng Pediococcus acidilactici MPK1 sinh hoạt tính mạnh pH Cịn chủng L plantarum SC01 sinh hoạt tính mạnh pH (Lê Ngọc Thùy Trang Phạm Minh Nhựt, 2014) Thơng qua nghiên cứu thấy, thuộc nhóm LAB chủng phân lập từ nguồn mẫu khác vùng khác chúng có khả phát triển tốt giá trị pH khác Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ Nhiệt độ ni cấy có ảnh hưởng quan trọng đến khả sinh trưởng sinh tổng hợp hợp chất vi sinh vật (Nguyễn Lân Dũng nnk., 1998) Với mục đích xác định nhiệt độ tối thích cho q trình tổng hợp chất, kháng khuẩn, nhóm nghiên cứu tiến hành thí nghiệm khảo sát mơi trường MRS pH 6,5 nuôi dải nhiệt độ 25 oC, 30 oC, 37 oC, 45 oC Kết thể Bảng Dựa vào Bảng 4, nhận thấy tăng nhiệt độ nuôi cấy, khả sinh tổng hợp chất kháng khuẩn chủng VK N1, D3, D5 tăng dần đạt cực đại khoảng 37 oC với đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng: ∆DE(N1) = 20,67a mm, ∆DB(N1) = 17,67a mm, ∆DE(D3) = 19,33ab mm, ∆DB(D3)= 16,67b mm ∆DE(D5) = 22,33c mm, ∆DB(D5) = 19,33c mm, tiếp tục tăng nhiệt độ lên 45 oC khả kháng vi khuẩn thị lại giảm Kết trùng khớp với nghiên cứu Todorov Dicks (2005) trước Như vậy, kết thí nghiệm cho thấy 37 oC nhiệt độ thích hợp để ni cấy chủng LAB sinh tổng hợp hợp chất kháng khuẩn mạnh Bảng Kích thước vịng ức chế vi khuẩn thị chủng LAB (N1, D3, D5) nuôi môi trường MRS mức nhiệt độ Chủng Kích thước vịng ức chế vi khuẩn thị (mm) N1 D3 D5 t°C E coli B subtilis E coli B subtilis E coli B subtilis 25 °C 12a 10,67a 12,33ab 12,33ab 14,67abc 12c ° a a b ab bc 30 C 17 16 15,33 13 16,67 14,67bc 37 °C 20,67a 17,67a 19,33ab 16,67b 22,33c 19,33c ° a a b b ac 45 C 17,33 15,67 17 14 19,33 17,33c *Các mẫu tự khác (a, b, c) biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa (theo dịng) độ tin cậy 95% Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian nuôi cấy Để kiểm tra ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn chủng LAB, nhóm nghiên cứu tiến hành nuôi chủng LAB (N1, D3, D5) 924 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM môi trường MRS pH 6,5, nhiệt độ 37 oC thu nhận dịch vi khuẩn thời điểm khác nhau: 24 h, 48 h 72 h Kết thể Bảng Bảng Kích thước vịng ức chế vi khuẩn thị chủng LAB (N1, D3, D5) thời điểm khác Chủng Kích thước vòng ức chế vi khuẩn thị (mm) N1 D3 D5 Thời gian E coli B subtilis E coli B subtilis E coli B subtilis 24h 8,33a 8,33a 6,33b 6,33ab 8,67bc 8bc a a ab b c 48h 20,67 17,67 19,33 16,67 22,33 19,33c 72h 15,67a 16,33a 17ab 14b 18,67ac 17,33bc *Các mẫu tự khác (a, b, c) biểu diễn mức độ sai khác có ý nghĩa (theo dịng) độ tin cậy 95% Kết đo kích thước vòng ức chế chủng VK thị Bảng cho thấy, khả ức chế vi sinh vật thị chủng LAB phụ thuộc vào thời gian nuôi cấy Tại thời điểm sau 48h nuôi cấy, khả sinh tổng hợp chất kháng khuẩn chủng N1, D3, D5 cho kết cao với đường kính vịng kháng khuẩn tương ứng: ∆DE(N1) = 20,67a mm, ∆DB(N1) = 17,67a mm, ∆DE(D3)= 19,33ab mm, ∆DB(D3)= 16,67b mm ∆DE(D5) = 22,33c mm, ∆DB(D5) = 19,33c mm Khi tiếp tục tăng thời gian nuôi cấy lên 72h thấy đường kính vịng ức chế chủng VK thị giảm Trong nghiên cứu thực ghi nhận hoạt tính kháng khuẩn thơng qua vịng kháng khuẩn nhận thấy hoạt tính 48h mạnh nhất, là thời điểm vi khuẩn lactic sinh trưởng mạnh sinh khối đạt cực đại, khả sinh hợp chất lớn có hoạt tính mạnh Tiếp tục tăng thời gian nuôi cấy, vi khuẩn bước vào pha suy vong, tế bào trở nên già chết dẫn đến khả sinh tổng hợp hợp chất sơ cấp giảm đi, đồng thời hoạt tính kháng khuẩn bị giảm theo thời gian Bên cạnh đó, vi khuẩn bước vào pha suy vong có nhiều tế bào bị chết, tự phân/vỡ tế bào giải phóng loạt chất bên tế bào Các chất nguồn dinh dưỡng bổ sung giúp tế bào sống tăng sinh thêm lần (gọi sinh trưởng rốn/sinh trưởng thêm) nguồn chất ức chế sinh trưởng (VD: protease giải phóng) dẫn đến kích thích tế bào cịn lại tự phân/tự vỡ tế bào Protease giải phóng từ bên tế bào ngồi mơi trường xúc tác thủy phân bacteriocin bên ngồi mơi trường, làm hoạt tính bacteriocin (vì bacteriocin có chất peptides) Nếu chất kháng khuẩn khơng có chất protein bị trung hịa, bị bất hoạt chất tế bào chết tiết đơn giản chúng không bền nên thời gian lâu chúng giảm hoạt tính (Wood & Holzapfel, 1995; Nguyễn Lân Dũng, 1998) Từ nghiên cứu trên, nhóm nghiên cứu tìm điều kiện thích hợp để thu chất kháng khuẩn lớn chủng LAB (N1, D3, D5) là: mơi trường MRS pH 6,5, nhiệt độ 37 oC thu nhận sau 48 h nuôi cấy KẾT LUẬN Từ số sản phẩm lên men (dưa chuột muối, rau cải muối, nem chua) phân lập chủng LAB tuyển chọn chủng LAB (N1, D3, D5) có khả đối PHẦN II NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 925 kháng mạnh với hai chủng vi khuẩn thị Đã tiến hành khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp hợp chất kháng khuẩn chủng LAB tuyển chọn xác định điều kiện ni cấy thích hợp để thu chất kháng khuẩn lớn nhất: môi trường MRS với pH 6,5 nuôi 37 oC thời gian 48 h TÀI LIỆU THAM KHẢO Ashmaig A., Hasan A., El Gaali E., 2009 Identification of lactic acid bacteria isolated from traditional Sudanese fermented camel’s milk (Gariss) Afr J Microbiol Res., 3(8): 451-457 Bromberg R., Moreno I., Zaganini C L., Delboni R R., Oliveira J D., 2004 Isolation of bacteriocinproducing lactic acid bacteria from meat and meat products and its spectrum of inhibitory activity Braz J Microbiol., 35 (1): 1678-4405 Chen H and Hoover D G., 2003 Bacteriocins and their food applications Compr Rev Food Sci Food Saf., 2:82-100 Cleveland J., Montville T M., Nes I F., Chikindas M L.,2001 Bacteriocins: safe, natural antimicrobials for food preservation, Int J Food Microbiol 71: 1-20 De Vuyst L., Leroy F., 2007 Bacteriocins from lactic acid bacteria: production, purifi cation, and food applications J Mol Microbiol Biotechnol, 13(4): 194-9 Dimov S G., 2007 A novel bacteriocin - like substance produced by Enterococcus facium 3587, Current Microbiology, 55: 323-327 Dobson A., Cotter P D., Ross R P., Hill C., 2012 Bacteriocin Production: a Probiotic Trait, Appl Environ Microbiol., 78(1): 1-6 Ngô Thị Phương Dung, Huỳnh Thị Yến Ly Huỳnh Xuân Phong, 2011 Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn Tạp chí Khoa học, 19a: 176-184 Nguyễn Lân Dũng, Đoàn Xuân Muộn, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn Ty, 1972 Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 1, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 450 trang Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, 1998 Vi sinh vật học, Nxb Giáo dục, 617 trang Ishola R O., Adebayo-Tayo B C., 2012 Screening lactic acid bacteria isolated from Fermented food for Bio-molecules production Au J.T., 15(4): 205-217 Hwanhlem N., Buradaleng S., Wattanachant S., Benjakul S., Tani A., Maneerat S., 2011 Isolation and screening of lactic acid bacteria from Thai traditional fermented fish (Plasom) and production of Plasom from selected strains Food control, 22: 401-407 James G C., Natalie, 2002 Microbiology - A Labaratory Manual Nineth Edition Pearson Education, Inc., Sanfransisco, 491 p Karthikeyan V., Santhosh S W., 2009 Isolation and partial characterization of bacteriocin produced from Lactobacillus plantarum Afr J Microb Res., 3(5): 233- 239 Onda, Takumi F., Yanagida M., Tsufi S., and Shinohara T., 1999 Isolation and characterization of acid lactic bacteria strain GM005 producing antibacterial substance from Miso-paste product Food Science and Technology Research 5(3): 247-250 Sabo S D., Vitolo M., González J J., Oliveira R P., 2014 Overview of Lactobacillus plantarum as a promising bacteriocin producer among lactic acid bacteria, Food Res Intern., 64: 527 – 536 926 BÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM Todorov S.D Dicks L.M.T., 2005 Effect of growth medium on bacteriocin production by Lactobacillus plantarum ST194BZ, a strain isolated from Boza Food Technol Biotechnol., 43(2): 165-173 Lê Ngọc Thùy Trang, Phạm Minh Nhựt, 2014 Phân lập khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sản sinh hợp chất kháng khuẩn Lactobacillus plantarum Tạp chí Sinh học, 36 (1se): 97-106 Zhang J., Liu G., Li P., Qu Y., 2010 Pentocin 31-1, a novel meat-borne bacteriocin and its application as biopreservative in chill-stored tray-packaged pork meat Food control, 21: 198-202 Wood B.J.B., Holzapfel W.H., 1995 The genera of Lactic acid bacteria, Spinger science and business media, 392 p SCREENING LACTIC ACID BACTERIA AND STUDY ON THE PRODUCTION OF THEIR ANTIBACTERIAL COMPOUNDS Pham Thi My *, Le Thi Mai Abstract: Lactic acid bacteria (LAB) have been found and used commonly in many traditional fermented products Recent studies have proved that LAB have the ability to produce antibacterial compounds, including bacteriocin (an antibacterial peptides) The objective of this study is to select LAB strains producing high antibacterial compounds from some naturally fermented foods and to evaluate the fermentation factors affecting the production of antibacterial compounds from selected LAB From some fermented products, nine LAB strains were isolated, in which three strains (N1, D3, D5) were selected based on the level of antibacterial compounds biosynthesis in MRS medium Cultivation in MRS broth at 37 oC, pH 6.5 for 48h was found to be the most suitable condition for the highest antibacterial activities of selected strains Keywords: Antibacterial compounds, bacteriocin, lactic acid bacteria (LAB) University of Science and Education, The University of Danang *Email: ptmy@ued.udn.vn ... chủng vi khuẩn để tiến hành tuyển chọn chủng có khả sinh hợp chất kháng khuẩn cao 3.2 Tuyển chọn chủng LAB sinh chất kháng khuẩn Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chủng LAB phân lập với vi khuẩn. .. tính kháng vi khuẩn thị Các thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng tiến hành độc lập, thí nghiệm lặp lại lần Khả sinh tổng hợp hợp chất kháng khuẩn đánh giá thông qua đường kính vịng kháng vi khuẩn. .. N1 lựa chọn cho nghiên cứu 3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh hợp chất kháng khuẩn chủng LAB tuyển chọn Khảo sát ảnh hưởng pH mơi trường ni cấy pH mơi trường có tác động đáng kể vào tăng