Từ bộ sưu tập vi khuẩn Serratia marcescens SH1, SH4, SH5, SB, HB được phân lập từ tuyến trùng EPN Heterorhabditis indica CP 16, chủng HB có khả năng tổng hợp sắc tố đỏ prodigiosin và enzyme ngoại bào protease, chitinase cao nhất được chọn để sản xuất chế phẩm diệt sâu. Xử lý formalin 0.5%, 30 phút dịch nuôi cấy Serratia marccescens HB trong môi trường peptone glycerol tiêu diệt hoàn toàn tế bào mà ít ảnh hưởng nhất lên nồng độ prodigiosin, cũng như hoạt tính enzyme ngoại bào protease và chitinase. Mời các bạn cùng tham khảo!
hút enzyme bị bất hoạt [3] Sử dụng formalin đến 1% ảnh hưởng lên nồng độ prodigiosin bảng Điều giải thích formalin dung dịch formaldehyde 37% thường sử dụng để diệt khuẩn nên nồng độ đủ cao ảnh hưởng đến hoạt chất dịch ni cấy prodigiosin enzyme ngoại bào Vì nồng độ formalin 0,5% nồng độ chọn để xử lý diệt tế bào mà không ảnh hưởng lên nồng độ prodigiosin Enzyme ngoại bào protease chitinase dịch ni cấy sau xử lý formalin trình bày bảng Bảng Hoạt tính enzyme ngoại bào dịch nuôi cấy xử lý 0,5% formalin 30 phút Đƣờng kính vịng phân giải (D-d) mm Độ pha loãng protease (D-d), mm chitinase (D-d), mm Dịch vi khuẩn không xử lý 20,67â ± 4,04 15,33a ± 0,57 15,33b ± 0,57 14,33a ± 3,05 15,33b ± 0,57 12,66ab± 2,08 11,33c ± 1,52 8,66bc ± 3,21 16 8,33c ± 0,57 8,0bc ± 5,19 32 6,00d ± 6,66c± 0,57 64 5,67d ± 1,52 5,33c ± 0,57 Dựa kết xử lý thống kê cho thấy hoạt tính protease chitinase chủng Serratia marcescens HB khơng bị biến đổi nhiều sau xử lý formalin 0,5% 30 phút Do xử lý formalin 0,5% 30 phút chọn để diệt tế bào vi khuẩn làm chế phẩm diệt sâu 725 3.4 Hiệu lực diệt sâu Để tạo thành chế phẩm dịch nuôi cấy S.marcescens sau xử lý tiêu diệt bào cần bổ sung phụ gia Các phụ gia chọn bao gồm rỉ đường, CMC Tween 80 với công dụng biết sản xuất chế phẩm CMC giúp tăng độ kết bám chế phẩm lên lá, giảm thất thoát prodigiosin Rỉ đường khơng kích thích vị sâu giúp sâu ăn ngon miệng nên sâu ăn nhiều hấp thu lượng prodigiosin lớn bề mặt mà chất che giúp bảo vệ prodigiosin tác động ánh sáng, nguyên nhân hàng đầu dễ gây biến tính prodigion ngồi tự nhiên Khi sâu khoang tiêu hóa chế phẩm, lượng Tween 80 bổ sung vào chế phẩm giúp prodigiosin khuếch tán tốt vào thể sâu, ngồi cịn có enzyme ngoại bào protease chitinase phá hủy kết cấu thể giúp cho hoạt chất prodigiosin hoạt động tốt gây chết sâu nhanh Hình trình bày hiệu lực diệt sâu khoang ăn tạp tính theo công thức Abbott công thức chứa nồng độ prodigiosin pha lỗng 104 lần từ dịch ni cấy theo nghiên cứu từ trước (Nguyễn Hoàng Anh Kha 2015, Nguyễn Hoài Hương 2016, Trương Hoài Nguyên 2018) Thí nghiệm cho thấy hiệu lực diệt sâu chế phẩm CT5 điều kiện bảo quản tối đạt cao tương đương thuốc trừ sâu Reasgant 3.6EC Hiệu lực diệt sâu công thức bảo quản nắng ngày đạt tối đa 80% so với CT5 đối chứng dương, nhiên sai khác khơng có ý nghĩa thống kê chúng với Điều giải thích prodigiosin hoạt chất dễ bị phân hủy ánh nắng mặt trời, nồng độ chất phụ gia bổ sung rỉ đường từ 0,2-0,4% khơng có tác dụng bảo vệ prodigiosin trường hợp tối Thời gian ngày thời gian thử nghiệm trước sâu để hiệu lực diệt sâu cực đại Nghiên cứu cần xác định phụ giả bảo quản prodigiosin hiệu Hình Hiệu lực diệt sâu khoang Spodoptera litura công thức chế phẩm từ dịch nuôi cấy vi khuẩn S mascescens HB biến đổi theo thời gian KẾT LUẬN Chủng Serratia marcescens HB thể có khả sinh enzyme ngoại bào prodigiosin tương đương chủng SH1 sử dụng sản xuất chế phẩm Vi khuẩn Serratia marcescens HB nuôi cấy môi trường PG nhiệt độ 250C, máy lắc 150 vòng / phút để tạo độ khuếch tán oxy tốt cho vi khuẩn phát triển sinh tổng hợp prodigiosin 48 Xử lý dịch nuôi cấy S marcescens formalin nồng độ 0,5% thời gian 30 phút có khả tiêu diệt tồn tế bào, không ảnh hưởng đến nồng độ prodigiosin mà giữ hoạt tính enzyme ngoại bào protease chitinase Ở nồng độ pha lỗng dịch ni cấy 10-4 bổ sung chất phụ gia 0,2% CMC, 0,04% Tween 80 0,2% rỉ đường sử dụng diệt sâu khoang Spodoptera litura 100% 96 bảo quản chế phẩm tối, hiệu lực giảm 80% trường hợp chế phẩm để nắng ngày Quy trình sản xuất chế phẩm bảo quản cần tiếp tục hoàn thiện 726 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Nguyễn Hồi Hương Nguyễn Hồng Anh Kha, Tạp chí Phát triển Khoa học Công nghệ, Tập 18 (2015), trang 5-14 [2] Lê Quốc Vũ, Nguyễn Hoài Hương (2016) Hội nghị Khoa Học HUTECH 2016 [3] Lê Thị Ngọc Dung (2016) đồ án tốt nghiệp K2012, CNSH, trường Đại học Cơng nghệ TP.HCM [4] Trương Hồi Ngun, Hồ Trung Lộc, Nguyễn Hoài Hương (2018) Hội nghị Khoa học HUTECH 2018 [5] Lacey (2012) Manual of Techniques in Invertebrate Pathology, 2nd Edition Academic Press, pp 504 [6] Krishna J.G (2008) Pigment production by marine Serratia dissertation, University of Science and Technology, Kerala, India [7] Kenichi I., Tatsuo A., Takashi H., Hiroshi H Kazuhisa S (2014) Identification of a Serratia marcescens virulence factor that promotes hemolymph bleeding in the silkworm, Bombyx mori Vol 117, pp.61-67 727 sp BTWJ8, PhD ... hiệu Hình Hiệu lực diệt sâu khoang Spodoptera litura công thức chế phẩm từ dịch nuôi cấy vi khuẩn S mascescens HB biến đổi theo thời gian KẾT LUẬN Chủng Serratia marcescens HB thể có khả sinh... lực diệt sâu Để tạo thành chế phẩm dịch nuôi cấy S .marcescens sau xử lý tiêu diệt bào cần bổ sung phụ gia Các phụ gia chọn bao gồm rỉ đường, CMC Tween 80 với công dụng biết sản xuất chế phẩm. .. đương chủng SH1 sử dụng sản xuất chế phẩm Vi khuẩn Serratia marcescens HB nuôi cấy môi trường PG nhiệt độ 250C, máy lắc 150 vòng / phút để tạo độ khuếch tán oxy tốt cho vi khuẩn phát triển sinh