Xác định hàm lượng vitamin c bằng thuốc thử 2,6 diclophenolindophenol

Lời cảm ơn Em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới cô giáo Võ Thị Hoà đà tận tình hớng dẫn, giúp đỡ em qúa trình chọn thực đề tài Em xin cảm ơn ban chủ nhiệm Khoa Hoá - Trờng Đại Học Vinh, thầy cô giáo, cán khoa, tổ môn Hoá Phân Tích, Phòng thí nghiệm hoá phân tích đà tạo điều kiện thuận lợi để em thực tốt đề tài này! Em xin gửi tới thầy cô lời cảm ơn chân thành Sinh Viên: Lê Thị Sen Lớp B2 - K41 - Khoa Hoá - Đại Học Vinh Khoá luận tốt nghiệp Lời mở đầu Đà từ lâu ngời ta biết đợc thức ăn bao gồm chất dinh dỡng: protit, gluxit, lipit số muối khoáng Nhng sau ngời ta thÊy mét sè bƯnh g©y thiÕu mét chất thức ăn, vitamin (theo tiÕng La Tinh: Vita lµ sù sèng, vitamin lµ amin sống) Vitamin chất hữu có chất hoá học rât khác nhau, mà cần lợng nhỏ thức ăn ngời ®éng vËt bËc cao cịng ®đ ®¶m b¶o sù sinh trởng phát triển bình thờng thể Nhng với lợng bé nh chúng chất cung cấp lợng Ngày ngời ta đà rõ vai trò xúc tác vitamin trình biến đổi thể Theo y học, loại vitamin cần thiết cho hoạt động sống thể nào, làm xúc tác cho trình sinh hoá, gắn liền với việc giải phóng lợng, tham gia phản ứng tế bào Việc cung cấp không đầy đủ vitamin cho thể ảnh hởng xấu làm việc hệ thần kinh mà loạt quan khác bên thể Vì điều quan trọng phần ăn ngời phải có giá trị hoàn chỉnh phơng diện calo, phơng diện chất đạm mà phơng diện vitamin Đối với vitamin C nói riêng có vai trò quan trọng, có vị trí đặc biệt lich sư cđa häc thut vỊ vitamin ThiÕu vitamin C thể bị bệnh hoại huyết, ảnh hởng tiêu cực đến tự vệ thể với bệnh nhiễm trùng khác Cơ thể hoàn toàn không tự tổng hợp đợc vitamin C mà phải lấy từ nguồn thức ăn vào Vì việc phân tích vitamin C thực phẩm điều cần thiết Tuy nhiên hợp chất hữu thuộc đối tợng khó phân tích, mẫu phân tích tồn nhiều chất hữu vô dạng khác Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp nhau, gây cản trở cho trình định lợng Do cần phải lựa chọn phơng pháp phân tích hữu hiệu Có thể phân tích vitamin C phơng pháp: sắc ký giấy, cực phổ, trắc quang, hóa học Trong phơng pháp cực phổ phơng pháp đặc trng nhất, đợc dùng nhiều thực tế để định lợng hàng loạt Phơng pháp cực phổ đáp ứng đợc yêu cầu phân tích hợp chất vô cơ, hữu với hàm lợng nhỏ, xác Tuy nhiên điều kiện phòng thí nghiệm cha đáp ứng đợc nên không sử dụng đợc phơng pháp có u điểm rõ rệt Khi định lợng vitamin C phơng pháp trắc quang ngời ta sử dụng số thuốc thử vô nh: axit photphovonframic, muèi titan (IV), axit photphomolipdic c¸c phơng pháp thờng gặp khó khăn phân tích hàm lợng vitamin C hoa quả, dịch thờng có màu có chứa nhiều thành phần khử khác gây cản trở cho trình định lợng Để khắc phục số nhợc điểm đó, đề tài chọn thuốc thử 2,6 diclophenolindophenol để định lợng axit ascorbic Với cách đặt vấn đề nh nhiệm vụ đề tài gồm: - Xác định hàm lợng vitamin C nớc cam ép nguyên chất đóng hộp (nhập từ Ôxtrâylia) phơng pháp chuẩn độ oxy hoá- khử (phơng pháp phân tích thể tích) - Tìm điều kiện tối u cho phép định lợng phơng pháp đo quang - Thử điều kiện tối u đà chọn vào việc phân tích mẫu tự tạo - Phân tích hàm lợng vitamin C nớc cam ép nguyên chất đóng hộp số hoa có bán thị trờng thành phố Vinh - Kiểm tra, đánh giá phơng pháp điều kiện phân tích với trình thực kết thu đợc, hy vọng luận văn góp phần bổ sung, hoàn thiện phơng pháp phân tích vitamin C nhiều đối tợng khác nh nớc ép trái nguyên chất đóng hộp số hoa có bán thị trờng Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp phần I Tổng quan tài liệu I - Giíi thiƯu vỊ Vitamin C - Lỵc sư [1] Bệnh Scocbut chất gây bệnh đà đợc biÕt tõ nh÷ng thÕ kû XI XII Nhng tíi Holst nghiên cứu kỹ chế tác dụng nguyên nhân gây bệnh, Zilva tách đợc chất từ chanh, cam hiểu biết sử dụng chất có sở chắn Năm 1920 Đrumlnond đặt tên chất vitamin C Vài năm sau, Her - Bert Hirst Karrer tách đợc vitamin C từ thợng thận Năm 1933 Funk Reichstein, Haworth tổng hợp đợc vitamin C Ngày ngời ta biết vitamin C có tự nhiên dới dạng: khử (axit L Ascorbic) dạng oxy hoá (axit dehydroascorbic), dạng sau Cả hai dạng tan nớc, dễ bị phân huỷ tiếp xúc với chất oxy hóa bazơ So với vitamin khác vitamin C chất dạng phức hợp với Nucleotit Coenzym Hiện ngời ta điều chế vitamin C tổng hợp rẻ nhiều so với phơng pháp điều chế từ thực vật - Vai trò Vitamin C đời sống ngời [1, 2, 3] Vitamin C có vị trí đặc biƯt lÞch sư cđa häc thut vỊ vitamin Vitamin C tham gia vào trình oxy hoá - khử khác thể Nó xúc tác cho chuyển hóa nhiều hợp chất thơm thành dạng Phenol tơng ứng Ví dụ: Quá trình hydroxyl hoá triptophan thành hydroxytriptophan, phenylalanin chuyển thành tirozin Phản ứng chuyển amin hoá tirozin axit - xetoglutaric tạo nên sản phẩm axit para oxyphenylpiruvic thực víi sù tham gia cđa vitamin C Ngoµi vitamin C tham gia điều hoà tạo ADN từ ARN chuyển procolagen thành colagen Nhờ trình hyđroxyl hoá prolin tạo nên chất oxyprolin cần thiết cho tổng hợp colagen Chính có tác dụng làm cho vết thơng chóng liền sẹo vitamin C liên quan với hình thành hormon tuyến giáp tràng tuyến Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp thận Nó cần thiết cho thể để tăng sức đề kháng chống lại tợng choáng ngộ độc hoá chất nh độc tố vi trùng Ngêi ta cịng chøng minh r»ng vitamin C cã liªn quan tới trao đổi gluxit thể Vì bị bệnh hoại huyết trao đổi gluxit tim bị rối loạn phân giải glicogen glucoza tăng lên mạnh, đồng thời tăng tích luỹ axit lactic Hiện tợng biến nhanh chóng thêm vitamin C vào chất dinh dỡng Khi thiếu vitamin C thực phẩm ngời ta bị bệnh hoại huyết Vì bệnh hoại huyết phát triển từ từ nên việc chuẩn đoán trạng thái thiếu vitamin C khó khăn Bệnh thiếu vitamin C đợc đặc trng giảm tính chịu đựng thể bệnh nhiễm trùng khác Bệnh nhân chóng mệt hay đau đầu luôn trạng thái mộng mị, ăn ngon Sau nhịp đập tim bị rối loạn, thành mao quản trở nên mỏng manh dễ bị đứt, xảy trờng hợp chảy máu tự phát Khi bị bệnh thiếu vitamin C, trờng hợp có tác động nhẹ học gây tợng chảy máu quan bên Trong bệnh thiếu vitamin C kèm theo thay đổi đặc trng xơng răng: Răng tự phân hủy rụng nhanh Bệnh thiếu vitamin C đợc gọi bệnh scobut Những rối loạn việc tổng hợp chất colagen sở tợng Điều gây nên thay đổi bệnh lý thành mao quản mô chống đỡ Hàng thể cần lợng vitamin C nhiều loại vitamin khác Nhu cầu vitamin C thay đổi theo tuổi, khí hậu lao động Ngời lớn ngày cần khoảng 50 - 100mg Đối với phụ nữ có thai trẻ ngày cần 100 - 200mg Tóm lại vitamin C cần thiết thể ngời Tuy nhiên thể hoàn toàn tự tổng hợp đợc vitamin C, mà phải lấy từ nguồn thức ăn bên Vậy vitamin C thiên nhiên tồn đâu? - Các nguồn Vitamin C thiên nhiên [1, 2, 3, 4] Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp Vitamin C tồn thiên nhiên dới dạng phổ biến axit ascorbic (dạng khử); axit dehydroascorbic (dạng oxy hoá) ascorbigen (dạng kết hợp) Vitamin C có nhiều loại rau nh: Cam, chanh, dâu, ớt, rau cải, cà chua Còn loại hạt ngũ cốc trứng, thịt hầu nh vitamin C Hàm lợng vitamin C biến đổi nhiều phụ thuộc vào loài, vị trí trồng trọt yếu tố nh độ chiếu sáng, khí hậu Bình thờng lợng vitamin C giảm dần từ phía vỏ vào bên ruột vitamin C xuất hầu hết phận mầm gặp nhiều họ: đơn, thông, cải, gặp họ: cúc, trạch, tả .4 - Công thøc ho¸ häc: 4.1 - Axit L - Ascorbic - Công thức phân tử: - Công thức cấu tạo C6H8O6 O C C OH O C H HO hexuromic axit OH C C H CH2OH Tên thông thờng: Axit ascorbic; vitamin C; cevitamin axit; - Tên hoá học: L () Threo - 2, 3, 4, 5, Pentahydroxyl - hexanoic - axit - - Lactone 4.2 - Axit L - dehydroascorbic: Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá ln tèt nghiƯp - Axit L - dehydroascorbic cßn gäi vitamin C2 - Công thức phân tử: C6H606 - Công thức cấu tạo: O C C O O C H HO O C C H CH2OH - Đây dạng oxy hoá - Phơng pháp điều chế [5] Ngày ngời ta điều chế vitamin C đờng tổng hợp hoá học, phơng pháp rẻ nhiều so với phơng pháp điều chế vitamin C từ thực vật Nguyên liệu D - glucose Hydrogen hoá D - glucose (1) víi xóc t¸c Cu - Cr đợc D - sorbitol (2) Trong dung dịch nớc, D - sorbitol díi t¸c dơng cđa vi khn Acetobacter suboxydans t¹o L - sorbose (3) Ngng tơ (3) víi axeton với xúc tác axit sunfuric tạo diaxeton sorbose (4) Oxy hoá (4) kalipermanganat tạo (5); thuỷ phân (5) tạo axit ceto L - gulonic (6) Este hoá (6) methanol, sau cho tác dụng với natri methoxyd tạo (7) Thuỷ phân (7) dung dịch axit hydrocloric nớc loại nhóm methyl natri, lacton hoá t¹o axit ascorbic (8): CHO CH2OH CH2OH CHOH CHOH C=O H2 HOCH A Suboxydans HOCH HOCH CHOH CHOH CHOH CHOH CH2OH CH2OH (1) CHOH H O HOCH H2)HH2O CH2OH (2) H3C Lê Thị Sen KMnO4 (3) CH3 H3C CH Líp: 41B2 Kho¸ ln tèt nghiƯp C H O C O H O O H H O O H2C H2C COOH CH2OH O O H O O C H C H3C CH3 H3C (4) CH3 (5) O COOH + H2O COOCH3 CH3OH + HCl C=O C HCl HOC C OH Sau ®ã CH3ONa HO - CH CH OH HO - CH CH2OH (6) O NaOC CHOH HOCH CH2OH (7) C H HO OH C CH CH2OH (8) - TÝnh chÊt cña vitamin C [3, 4] 6.1 - Lý tính Axit L - ascorbic(C6H8O6) kết tinh hình mÃnh, không màu, vị chua Nóng chảy nhiệt độ 190C đến 192°C, tan hoµn toµn H2O (1g 3ml níc, 50ml cồn) Không tan benzen; clorofoc; ete mỡ trạng thái khô, vững bền không khí, dạng dung dịch nhanh Lê Thị Sen Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp chóng bị phân huỷ có không khí, đặc biệt môi trờng kiềm Đây chất có hoạt tính quang học []D20 = + 23° (trong H2O) .6.2 - Ho¸ tÝnh VỊ ho¸ tính, hoá tính chức lacton, nhóm hydroxyl Song quan trọng hoá tính nhóm endiol Nhóm gây tính axit tính khư cđa axit ascorbic .6.2.1 - TÝnh axit Do hiƯu ứng liên hợp với nhóm cacbonyl nên nguyên tử hydro nhóm hydroxyl vị trí số trở nên linh động làm cho vitamin C có tính axit mạnh Vì vitamin C có tên axit ascorbic ↷ ↷ H O: O OH Do cã tÝnh axit mạnh nên axit ascorbic dễ tan dung dịch kiỊm cịng nh cacbonat kim lo¹i kiỊm øng dơng tÝnh chất này, ngời ta điều chế muối ascorbat natri để pha dung dịch tiêm có nồng độ cao trung tính Tác dụng với muối kim loại cho muối Nhiều dợc điển dùng thuốc thử sắt (II) sunfat sắt (III) clorua để định tính ascorbic Phơng trình ph¶n øng: CH2OH CH2OH HOCH HOCH O Fe² O O + + NaHCO3 O Sau + FeSO4 HO Lê Thị Sen OH O OH Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp 6.2.2 - Tính khử đặc tính Axit ascorbic Axit ascorbic nh tất endiol có tính chất khử mạnh bị oxy hoá phản ứng thuận nghịch thành axit dehydroascorbic Có thể dùng thuốc thử sau để oxi hoá: oxy, dung dịch iôt; 2,6 diclophenolindophenol; xanh metylen; kaliferixianua Tốc độ oxy hoá môi trờng phụ thuộc vào pH, pH cực đại 5,0; với phản ứng có bazơ, pH cực đại 11,5 Trong môi trờng kiềm phản ứng oxi hoá xảy nhanh môi trờng axit Các tác nhân xúc tác oxy hoá là: ánh sáng, nhiệt độ, chất kiềm, enzym vết đồng hay sắt Sự oxy hoá khử thuận nghịch axit ascorbic thành axit dehydroascorbic O O C C C OH [O] C=O O C H C [H] C=O C HO OH O H HO H C C H CH2OH CH2OH Axit ascorbic Axit dehidroascorbic Tính chất vô quan trọng tác dụng sinh học axit Trong thể, axit ascorbic cho hai nguyên tử hydro (là chất cho) để tạo thành axit dehydroascobic; dạng này, nhận hai nguyên tử hydro (là chất nhận) ®Ĩ trë l¹i axit ascorbic Nh vËy axit ascorbic tham gia vận chuyển hydro tức tham gia vào hệ enzym xúc tác trình oxy hoá khử xảy thể Lê Thị Sen 10 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp + Hỗn hợp axit axetic axit metaphotphoric: Hoà tan 15,0000g axit HPO3 lắc với 40ml axit axetic băng 200ml nớc cất Pha loÃng thành 500ml, lọc vào bình có nút mài để tủ lạnh + Dung dịch đệm pH = 4,0: Hoµ tan 300,00g Natriaxetat 700ml níc vµ 1000ml axit axetic băng + Dung dịch 2,6 - diclophenolindophenol: Hoà tan 25,0mg mi Natri cđa 2,6 - diclophenolindophenol níc nóng, lọc pha loảng với nớc cất thành 200ml + Dung dịch axit metaphotphoric: Hoà tan lạnh 60,00g HPO3 900ml nớc cất, pha loảng thành 1000ml bảo quản tủ lạnh + Dung dịch axit ascorbic chuẩn: Hoµ tan 100,0 mg axit ascorbic tinh khiÕt HPO3 6% pha loÃng thành 100ml Hút 25ml dung dịch pha loảng HPO3 6% thành 1000ml III Xác định hàm lợng vitamin C phơng pháp chuẩn độ oxy hoá-khử Nguyên tắc phơng pháp Khi chuẩn độ oxy hoá axit ascorbic 2,6 - diclophenolindophenol môi trờng axit, axit ascorbic bị oxy hoá thành axit dehydroascorbic chất màu bị khử thuận nghịch thành dạng không màu Sự kết thúc định lợng đợc báo hiƯu b»ng sù xt hiƯn mµu hång, chøng tá sù có mặt lợng có thừa chất màu không bị khử áp dụng phơng pháp để định lợng axit ascorbic nớc cam ép đóng hộp nhập từ Ôxtrâylia Đây mẫu có chứa thành phần cản trở có tính khử với chất màu 2,6 diclophenolindophenol đa số hợp chất thuộc loại sunfhydryl Vì để định lợng tiến hành đồng thời thí nghiệm song song TN1: chuẩn độ CuSO4 để xác định axit ascorbic chất khử khác nói chung Lê Thị Sen 28 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp TN2: chuẩn độ có mặt CuSO4 để xác định chất khử chất sunfhydryl điều kiện vitamin C bị phá huỷ hết có mặt CuSO4 Sự chênh lệch kết cho ta lợng dung dịch chuẩn độ tiêu thụ tơng ứng với hàm lợng axit ascorbic có mẫu Chuẩn bị dung dịch phân tích Lấy xác 50ml dung dịch nớc cam ép đóng hộp (nhập từ Ôxtrâylia có hàm lợng 80,0 mg/1 chai lít) cho vào bình định mức 100ml thêm hỗn hợp axit axetic axit metaphotphoric vạch Lắc đều, lọc thu dịch lọc vitamin C phân tích Khi hàm lợng vitamin C ml dung dịch 0,02mg/1ml Cách tiến hành TN1: Dùng pipet lấy vào bình nón dung tích 50ml, 10ml dịch lọc tiến hành chuẩn ®é b»ng dung dÞch 2,6 - diclophenolindophenol 0,001N tõ microburet cho tíi xt hiƯn mµu hång bỊn phút đợc V1(ml) TN2: Dùng pipet lấy vào bình nón dung tích 50ml, 10ml dịch lọc thêm vào 1ml dung dịch CuSO4 1%, đun 10 phút nồi cách thuỷ sôi để phá huỷ hết vitamin C Để nguội chuẩn độ dung dịch 2,6 - diclophenolindophenol 0,001N cho tíi xt hiƯn mµu hång bỊn đợc V2(ml) Chuẩn độ lần ta thu đợc kết qu¶ sau B¶ng 1: TT V1(ml) V2(ml) V1- V2 (ml) 2,46 2,49 2,52 0,40 0,39 0,37 2,06 2,10 2,15 m(mg/l) vitamin C 0,0181 0,0185 0,0189 m 0,0185 Từ số liệu thu đợc ta tính đợc hàm lợng vitamin C (mg/ml) theo c«ng thøc sau: m = (V1 V2 ) x0,088 V Trong đó: 0,088 số mg axit ascorbic øng víi 1ml dung dÞch 2,6 diclophenolindophenol 0,001N Lê Thị Sen 29 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp V: Số ml dịch lọc để chuẩn độ V = 10ml Xử lý kết thảo luận Kết thu đợc xử lý theo phơng pháp toán thống kê thu đợc kết bảng sau: Bảng 2: Hàm lợng cần Hàm lợng xác xác định (mg/ml) định đợc (mg/ml) Hàm lợng Độ tin cËy X ε (mg/ml) q% = ε 100 X 0,0181 0,0185 0,02 t TN = X −a SX |tTN(-2,309)| < 0,0185 9,9 x 10-4 5,35 0,0189 |tp,k (4,30)| vËy sai số ngẫu nhiên IV Xác định hàm lợng vitamin C phơng pháp đo quang Nguyên tắc phơng pháp Nguyên tắc phơng pháp dựa theo dõi trình làm màu 2,6 - diclophenolindophenol dung dịch axit ascorbic chuẩn dịch chiết Để định lợng axit ascorbic dịch quả, mẫu mà dịch chiết có màu có xuất tạp chất có tính khử Tuy nhiên tạp chất khử phản ứng với 2,6 - diclophenolindophenol chậm axit ascorbic ta loại trừ ảnh hởng chúng cách chiết lợng thừa 2,6 diclophenolindophenol cha bị khử môi trờng phản ứng axit xylen Theo cách làm này, ta ngăn trở tiếp xúc dạng oxy hoá thừa chất màu với chất tác dụng chậm trừ axit ascorbic Đo mật độ quang lợng thừa chất màu xylen Từ tính đợc hàm lợng axit ascorbic có mẫu dựa vào đờng cong chuẩn xây dựng với dung dịch axit ascorbic chuẩn biểu thị phụ thuộc tuyến tính mật độ quang lợng chất màu thừa với nồng độ axit ascorbic chuẩn Xác định điều kiện tối u, xây dựng đờng chuẩn Lê Thị Sen 30 Lớp: 41B2 Khoá ln tèt nghiƯp 2.1 Chän bíc sãng tèi u a Cách tiến hành Hút 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn đà pha trên, cho vào bình định mức 25ml, thêm 5ml dung dịch đệm axetat, 2ml dung dịch chất màu 2,6 diclophenolindophenol thêm nớc cất vạch Sự xuất màu hồng dung dịch chứng tỏ có mặt lợng thừa chất màu không bị khử môi trờng axit Chuyển toàn dung dịch vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang ë c¸c bíc sãng kh¸c (λ = 470-710nm) ta thu đợc bảng sau Bảng 3: Khảo sát phụ thc cđa A vµo λ MÉu sè Vdd (ml) Vdd(ml) Axit ascorbic 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 chÊt mµu 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 λ (nm) A 430 470 490 520 540 580 600 710 0,248 0,323 0,331 0,291 0,177 0,105 0,049 0,007 b: NhËn xÐt Giá trị mật độ quang cao ổn định bớc sóng = 490nm Do chọn bớc sóng để đo mật độ quang máy so màu trình thực nghiệm 2.2 Khảo sát pH tối u a Cách tiến hành: Lê Thị Sen 31 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp Chúng tiến hành định lợng vitamin C môi trờng axít, môi trờng axit vitamin C bền vững môi trờng kiềm Khảo sát ảnh hởng pH đến giá trị mật độ quang cách: lấy bình định mức 25ml cho vào bình 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào 2ml dung dịch chất màu, dùng dung dịch đệm điều chỉnh pH khác axit HCl bazơ NaOH, thêm nớc cất vào bình vạch Cho vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu ta thu đợc kết sau: Bảng 4: Khảo sát phụ thuộc A vào pH: MÉu sè Vdd (ml) Vdd(ml) Axit ascorbic 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 chất màu 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 Đệm A pH = pH = pH = pH = pH = pH = 0,290 0,321 0,327 0,331 0,295 0,291 b Nhận xét: Giá trị mật độ quang bền ổn định dung dịch có pH = Khi dùng dung dịch đệm axit mạnh axit yếu dẫn đến giảm mật độ quang Do trình thực nghiệm chọn pH = 2.3 Khảo sát dung lợng đệm cần thiết: a Cách tiến hành: Lấy bình định mức 25ml, cho vào bình 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào bình từ 2-6 ml dung dịch đệm axetat pH = 2ml chất màu Dùng nớc cất thêm vào bình vạch Cho vào phễu Lê Thị Sen 32 Líp: 41B2 Kho¸ ln tèt nghiƯp chiÕt dung tÝch 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu ta thu đợc kÕt qu¶ sau: B¶ng 5: MÉu sè Vdd (ml) Vdd(ml) Vdd(ml) ®Ưm Axit ascorbic 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 chÊt mµu 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 PH = 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 A 0,276 0,292 0,310 0,331 0,302 b Nhận xét: Giá trị mật độ quang ổn định đạt cực đại lợng dung dịch đệm 5ml Do lợng dung dịch đệm thích hợp dùng trình thực nghiệm 5ml ứng với 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn 2.4 Khảo sát lợng thuốc thử thích hợp: a Cách tiến hành: Cho vào bình định mức 25ml, bình 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào 5ml dung dịch đệm axetat pH = 4, lần lợt thêm dung dịch chất màu với thể tích khác định mức đến vạch nớc cất Cho vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu ta thu đợc kết sau: Bảng 6: Mẫu số Lê Thị Sen Vdd (ml) Vdd(ml) Vdd(ml) đệm Axit ascorbic 5,00 5,00 5,00 chất màu 0,50 1,00 1,50 pH = 5,00 5,00 5,00 33 A 0,000 0,082 0,164 Líp: 41B2 Kho¸ ln tèt nghiƯp 5,00 5,00 2,00 2,50 5,00 5,00 0,331 0,651 b Nhận xét: Lợng thuốc thử d giá trị mật độ quang cao Tuy nhiên lợng thuốc thử d nhiều dẫn đến sai số lớn, trình thực nghiệm chọn lợng thuốc thử thích hợp 2ml 2.5 Khảo sát lợng dung môi thích hợp a Cách tiến hành: Lấy bình định mức 25ml, cho vào bình 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào bình 5ml dung dịch đệm, 2ml chất màu, thêm nớc cất vạch Cho vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào phểu từ đến 12 ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu ta thu đợc kết sau: B¶ng 7: MÉu sè Vdd (ml) Vdd(ml) Axit ascorbic 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 chÊt mµu 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 V(ml) xylen A 6,00 8,00 10,00 11,00 12,00 0,318 0,329 0,331 0,330 0,322 b Nhận xét: Giá trị mật độ quang đạt cực đại lợng dung môi 10ml Do lợng dung môi thích hợp dùng để chiết lợng thừa chất màu trình thực nghiệm chọn 10ml Lê Thị Sen 34 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp 2.5 Khảo sát thời gian ảnh hởng đến mật độ quang a Cách tiến hành: Cho vào bình định mức 25ml, 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào 5ml dung dịch đệm axetat pH = 4; 2ml dung dịch chất màu Dùng nớc cất thêm vào bình vạch Chuyển dung dịch bình vào phễu chiết dung tích 125ml Sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu Sau đo giá trị mật độ quang ë c¸c mèc thêi gian kh¸c ta thu đợc kết bảng sau: Bảng 8: Khảo sát phụ thuộc A vào thời gian đo Vdd (ml) Vdd(ml) Thêi gian ®o Axit ascorbic 5,00 chÊt mµu 2,00 (phót) 0,329 5,00 2,00 0,331 5,00 2,00 10 0,331 5,00 2,00 20 0,331 5,00 2,00 30 0,331 5,00 2,00 40 0,331 5,00 2,00 50 0,331 5,00 2,00 60 0,330 MÉu sè A b NhËn xÐt: Trong kho¶ng thêi gian từ 5-50 phút mát giá trị mật độ quang Nh màu môi trờng xylen bền Lê Thị Sen 35 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp vững, không cần đo vội vàng, quan trọng lắc liên tục từ thể tích nh tiến hành chiết lợng thừa chất màu vào lớp xylen 2.6 Xây dựng đờng chuẩn a Cách tiến hành: Cho vào bình định mức 25ml lần lợt từ 1-12ml dung dịch axit ascorbic chuẩn, thêm vào bình 5ml dung dịch đệm axetat pH = 4; 2ml dung dịch chất màu, định mức đến vạch nớc cất Cho vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quang máy so màu ta thu đợc kết bảng sau: Bảng 9: Khảo sát phụ thuộc A vào hàm lợng dung dÞch chuÈn MÉu sè Vdd (ml) Vdd (ml) Hàm lợng Axit ascorbic 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 8,00 10,00 12,00 ChÊt mµu 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 (mg)axit ascorbic 0,0250 0,0500 0,0750 0,1000 0,1250 0,1500 0,2000 0,2500 0,3000 A 0,390 0,375 0,361 0,345 0,331 0,317 0,289 0,260 0,228 b Nhận xét: Khi hàm lợng ascorbic lớn 0,25mg giá trị mật độ A 0,400 quang không thuân theo định luật Bughe-Lambe-Bia 0,45 Từ giá trị 0,4 đợc bảng ta xây dựng đồ thị biĨu thÞ sù phơ thc thu 0,350 0,35 cđa mËt độ quang vào hàm lợng axit ascorbic nh sau: 0,3 0,300 0,25 East 0,2 0,250 0,15 0,1 0,200 Lê Thị Sen 0,05 36 0,05 0,10 0,15 0,03 0,08 0,13 0,20 0,2 0,25 0,30 0,3 Líp: 41B2 C Kho¸ ln tốt nghiệp Xác định hàm lợng vitamin C mẫu tự tạo phơng pháp đo quang Để có sở chắn, khoa học để áp dụng phơng pháp phân tích điều kiện tối u đà chọn Trớc phân tích hàm lợng vitamin C mẫu nớc ép trái đóng hộp hoa quả, thử nghiệm xác định hàm lợng vitamin C mẫu tự tạo 3.1 Chuẩn bị mẫu: Cân xác cân phân tích 25,0 mg axit ascorbic tinh khiÕt vµ hoµ tan HPO3 6%, pha lo·ng thành 1000ml Dung dịch thu đợc có hàm lợng vitamin C 0,025 mg/ml 3.2 Cách tiến hành: Hút 5ml dung dịch axit ascorbic chuẩn đà pha cho vào bình định mức 25ml Thêm 5ml dung dịch đệm axetat pH = 4; 2ml dung dịch chất màu, định mức đến vạch nớc cất Cho vào phễu chiết dung tích 125ml, sau cho vào 10ml xylen, đậy phễu chiết lắc phần chất màu thừa không bị khử vào lớp xylen Để yên cho tớng phân lớp, tiến hành chiết Chuyển lớp xylen vào bình định mức 25ml định mức đến vạch xylen Tiến hành đo mật độ quangổ bớc sóng = 490nm Ta thu đợc kết bảng sau: Bảng 10: Lê Thị Sen 37 Lớp: 41B2 Khoá luận tốt nghiệp TT Hàm lợng xác định Hàm lợng Độ tin cậy đợc (mg/ml) X 24,92 10-3 ε 100 X 24,94 10-3 q% = t(TN) |t(TN)(-0,333)| 24,92 10-3 0,035.10-3 0,14