Tài liệu Giáo trình sinh sản gia súc - chương 5 pdf

CHƯƠNG V KỸ THUẬT GÂY RỤNG TRỨNG VÀ CẤY TRUYỀN PHƠI CHO GIA SÚC Mục đích: Giới thiệu bước cấy truyền phôi kỹ thuật siêu noãn gây động dục nhân tạo cho gia súc Ngồi chương trình bày tóm tắt kỹ thuật khác ứng dụng sinh sản: xác định giới tính tinh trùng phôi, thụ tinh ống nghiệm Thời lượng giảng dạy: tiết I Khái niệm Cấy truyền phôi q trình đưa phơi từ gia súc sang gia súc khác (gia súc cho phôi sang gia súc nhận phôi) Phôi sống, phát triển bình thường sở trạng thái sinh lí sinh dục gia súc nhận phôi phù hợp với trạng thái sinh lí sinh dục gia súc cho phơi phù hợp với tuổi phôi (sự phù hợp gọi đồng pha) Cấy truyền phôi trình điều khiển sinh sản phát triển vật cách trực tiếp giai đoạn tiền phôi phơi Đây biện pháp tạo giống hồn chỉnh tổng hợp lúc thành tựu sinh học sinh sản di truyền đại 124 Hình 50 Đàn bò tạo từ kỹ thuật CTP II MỤC ĐÍCH, Ý NGHĨA VÀ LỢI ÍCH CỦA CẤY TRUYỀN PHÔI - Khai thác triệt để tiềm di truyền cá thể cao sản thông qua việc lấy phơi chúng Trên sở phổ biến nhanh gene tốt, quí thực tế - Nâng cao cường độ chọn lọc, làm tăng tiến di truyền hàng năm, thúc đẩy cơng tác giống nhanh, đạt mục đích - Nâng cao hiệu chọn lọc, đẩy mạnh công tác giống - Bảo quản phôi gọn nhẹ, vận chuyển dễ dàng, đồng thời kho bảo tồn quĩ gen - Hạn chế bệnh tật thú y, thông qua việc chọn lọc ni dưỡng gia súc, vơ trùng q trình xử lí cấy truyền phơi - Mang lại hiệu qủa kinh tế cao 125 III CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA CẤY TRUYỀN PHƠI Cơ sở lí luận 1.1 Cơ chế điều hịa chu kì sinh dục (Xem sơ đồTK-TD điều khiển chu kì động dục gia súc cái) 1.2 Đặc điểm phát triển phôi giai đoạn đầu Sau thụ tinh, phân chia phơi bắt đầu nhanh, phân chia theo cấp số nhân Qua giai đoạn phôi bào, phôi dâu, phôi nang, phôi vị phôi Trong q trình phân chia phơi, tế bào phơi khơng lớn lên kích thước, phơi bào nhỏ Ở bị qúa trình vừa phân chia vừa vận động tử cung Thời gian ống dẫn trứng khoảng 3-5 ngày Khi phôi vận động tử cung thời gian đầu (khoảng 6-10 ngày), trơi tự tử cung Dinh dưỡng thời gian cho q trình phát triển phơi từ trứng sữa tử cung Lợi dụng giai đoạn để 126 người ta thu hoạch phôi Qua ngày thứ 10 trở bắt đầu định cư vào sừng tử cung để phát triển Dinh dưỡng từ trở phụ thuộc vào thể mẹ Giai đoạn khơng lấy phơi Tóm lại: Từ vấn đề nêu rút nhận xét quan trọng đạo thực tiễn: - Có thể tiến hành gây siêu noãn để nâng cao sức sinh sản bị cao sản, thơng qua xử lí hợp lý kích tố sinh sản - Có thể thu gom hợp tử chúng chưa làm tổ - Có thể đưa hợp tử vào tử cung khác đồng pha sinh lý với trứng phù hợp yêu cầu phát triển trứng - phôi thai, thông qua làm tổ cầu nối thai Cơ sở thực tiễn 2.1 Hiện người chế tạo thành công loạt hormon sinh dục như: FSH, LH, Ostrogen, Progesteron, Prostaglanding Với hormon đó, người sử dụng để điều hịa chu kì sinh dục nhân tạo, qúa trình sinh lí sinh sản gia súc 2.2 Các nhà khoa học nghiên cứu phương pháp sản xuất dụng cụ thu lượm phôi xây dựng qui trình thu lượm, đánh giá phân loại phôi 2.3 Tạo môi trường ni cấy trứng hợp tử ngồi thể gia súc Phương pháp bảo tồn phôi đông lạnh 2.4 Đã có nhiều thể sinh vật đời từ phương pháp cấy truyền hợp tử thụ tinh ống nghiệm: Phương pháp cấy truyền hợp tử thụ tinh ống nghiệm không thành công gia súc mà thành cơng tương đối phổ biến người, đặc biệt số nước tư Mĩ [1, 2] 127 IV KĨ THUẬT CÔNG NGHỆ CẤY TRUYỀN PHƠI TRÊN BỊ Tổng qt kĩ thuật công nghệ cấy truyền phôi sau : Chọn cho phôi Cái cho phôi phải đạt yêu cầu sau: + Phải đặc cấp cấp kỉ lục (tùy theo mục đích sản xuất mà chọn cho phù hợp) + Chú ý chọn cần quan tâm đến tính trạng có hệ số di truyền cao + Các biểu mặt sinh lí sinh sản phải bình thường (chu kì sinh dục phải bình thường, biểu động dục phải điển hình, khả sinh đẻ phải tốt) + Lí lịch phải rõ ràng + Trước siêu b ài noãn phải theo dõi hai chu kì 128 Chọn nhận phơi + Khơng cần nái cao sản + Các biểu sinh lí, sinh sản phải bình thường + Khả sinh đẻ tốt + Có thể giống khác giống Kỹ thuật tạo chu kì động dục, gây siêu nỗn gia súc cho phơi, gây động dục pha nhận nhân tố ảnh hưởng 3.1 Kỹ thuật tạo chu kì động dục Nếu chương trình cấy phơi có nhiều bị cho phơi, cần phải gây động dục đồng pha bị Những bị cho phơi ngày 8-14 chu kỳ động dục nhóm lại với bắt đầu tiến hành gây rụng nhiều trứng Các phương pháp sau thường sử dụng: Chu kỳ tự nhiên: Phải nhận biết động dục tất bị cho phơi lựa chọn ngày 8-14 chu kỳ để đưa vào chương trình cấy phơi Tiêm prostaglandin: liều Phải nhận biết động dục tất bị cho phơi, loại bỏ ngày 3-4 của kỳ tiêm cho tất lại liều prostaglandin (PG) để gây động dục đồng pha Tiêm liều prostaglandin: 129 Tiêm tất bò cho liều PG ngày Sau 11 ngày tiêm PG lần Quan sát động dục 4-5 ngày Bắt đầu gây rụng nhiều trứng 10 ngày sau động dục đa số bị cho phơi Synchromate-B: Đặt SMB ngày 1, prostaglandin vào sáng ngày rút SMB vào chiều ngày Quan sát động dục ngày Đưa tất bò động dục vào chương trình cấy phơi 3.2 Kĩ thuật gây siêu noãn (rụng trứng nhiều) Nguyên tắc siêu nỗn đơn giản, làm cho nhiều nỗn xuất bình thường cách dùng kích dục tố thời điểm quan trọng nang noãn phát triển Sau đó, kiểm sốt thối hóa thể vàng, gây xuất noãn đồng loạt, thụ tinh nhiều noãn phát triển phơi giai đoạn sớm phần lớn bị đáp ứng tốt xử lý ngày 814 chu kỳ sinh dục Điều quan trọng phải sờ khám buồng trứng bị cho phơi ngày trước bắt đầu tiến hành gây rụng nhiều trứng để đảm bảo chắn có mặt thể vàng 130 số gia súc, có biểu tất triệu chứng động dục, không rụng trứng Hiện tượng phổ biến bò Bos indicus so với bò Bos taurus Gây rụng nhiều trứng gia súc dẫn đến không rụng trứng, tỷ lệ thu phôi chất lượng phôi Những sản phẩm để gây siêu noãn bao gồm: - Huyết ngựa chửa (PMSG) Thông thường người ta dùng liều PMSG 1.500 – 3.000 UI vào thời kỳ thể vàng chu kỳ (ngày thứ 10 – 12) Một liều PGF2α gây thối hóa thể vàng tiêm vào 2-3 ngày sau Bị động dục sau tiêm PGF2α ngày Như thế, bò động dục tử lúc tiêm PMSG khoảng ngày - FSH Có chứng cho thấy tiêm FSH làm tăng đáp ứng thú so với PMSG Qui trình thơng dụng tiêm FSH ngày mũi (cách 12 giờ) thời gian ngày (thường giảm liều dần) Thời gian bán rã FSH ước tính khoảng Trong nhiều năm qua, liều FSH 5, 5, 4, 4, 3, 3, mg sau mg PGF2α (có thể tiêm vào lân tiêm FSH thứ 6) để làm thối hóa thể vàng - hMG, human menopausal gonadotropin (kích tố từ phụ nữ mãn kinh) hMG có tác dụng FSH lẫn LH Gần người ta khẳng định liều tiêm 450600 UI hMG polyvinylpyrrolidone đủ để gây siêu nỗn [3] 131 Phối giống cho cho phơi Sau tiêm FSH PGF2α bình thường bị động dục vào ngày thứ 5, (kể từ lúc bắt đầu tiêm) Ta phối giống phương pháp thụ tinh nhân tạo bào thời điểm 9-24 kể từ lúc bắt đầu có biểu động dục Thu hoạch phôi 5.1 Thời gian thu hoạch phôi khoảng 5-9 ngày sau phối (tốt vào ngày thứ - 8) 5.2 Kỹ thuật thu hoạch phôi A Phương pháp thu hoạch phôi phẫu thuật (Rowson Newcomb, 1975) B Phương pháp thu hoạch phôi không phẫu thuật - Nguyên tắc: đưa dụng cụ dung dịch gội rửavào tử cung Đưa dụng cụ bào vị trí lấy phơi sau bơm dung dịch gội rửa vào hút dung dịch gội rửa Phơi ngồi theo dung dịch gội rửa ta thu lượm 132 - Phương pháp: a Cho gia súc nhịn ăn 24 trước gội rửa b Chuẩn bị dụng cụ: thuốc vô trùng, dung dịch gội rửa, catheter, dụng cụ xử lí bảo quản phôi sau lấy khỏi thể gia súc c Cố đinh gia súc gây tê lõm khum đuôi dung dịch Novacain 3% d Đưa Catheter qua âm hộ vào bị trí lấy phơi (gội rửa sừng một) đ Dùng dung dịch gội rửa đưa vào với dung lượng cho sừng tử cung từ 200-500 ml (có thể dùng box xanh bơm vào lấy ra) e Bơm khơng khí vào Catheter (lượng khơng khí tùy theo to nhỏ tử cung) + Ưu điểm: tiện lợi, dễ làm, đảm bảo an tồn cho gia súc + Nhược điểm: khơng biết số lượng xác phơi, lượng phơi lấy 133 tính được), mật độ tinh trùng q thấp, để an tồn khơng nên sử dụng Môi trường Modena, chưng ấm nhiệt độ tương đương nhiệt độ tinh dịch, rót (theo thành bình) vào lọ đựng tinh dịch Đồng thời mẫu tinh trùng bình khuấy nhẹ q trình rót mơi trường pha lỗng Lượng mơi trường rót vào phụ thuộc lượng tinh pha cần sử dụng, thường thường - lần lượng tinh dịch Bảo quản máy lạnh 150C Mặc dầu có khác biệt cá thể đực giống, tinh trùng thường sử dụng tuần chúng giữ khả sống hoạt lực chúng làm ấm Tinh trùng sử dụng mà chất lượng làm giảm số phôi thụ tinh Nếu bảo tồn máy lạnh mà không sử dụng, sức sống tinh trùng giảm dần Để tránh điều này, khuấy mẫu ngày lần Các hoá chất cân trộn lẫn với nước lọc để đạt tới 1000ml dung dịch Modena Dung dịch bảo quản 40C làm ấm lên sử dụng Không cần thiết phải lọc vô trùng 8- Vận chuyển để đói cho phơi Con cho phơi phải để đói ngày trước phẫu thuật, có thể, khơng cho lợn nái uống nước trước phẫu thuật 9- Di chuyển cho phôi sau phẫu thuật Sau phẫu thuật, cho phôi phải giữ chuồng Chỉ cho ăn nửa lượng thức ăn bình thường ngày sau phẫu thuật, điều chỉnh sau phụ thuộc vào hồi phục lợn nái Ngoài ra, loại kháng sinh phù hợp nên sử dụng để ngăn ngừa nhiễm khuẩn sau phẫu thuật Nếu lợn nái điều trị thuốc đưa tới lị mổ, phải đủ thời gian pháp luật cho phép Nếu cho phôi sử dụng lại để thu phôi, cần phải ý đến thể trạng điều chỉnh lượng thức ăn cho phù hợp Cần phải đặc biệt ý để lợn không bị béo Một phẫu thuật kết thúc, cần phải theo dõi dấu hiệu động dục Sau cho phôi trải qua phẫu thuật, hồi phục động dục bình thường, hay hồi phục sau thời gian dài Trong trường hợp đó, gây động dục trở lại cách đưa lợn nái đến tiếp xúc với lợn đực, hay cách tiêm eCG Khi tất phôi thu từ lợn nái, phôi nằm lại tử cung làm cho có chửa Chúng ta cần cảnh giác khả 10- Chuẩn bị nhận phôi Lợn nái mà phôi cấy vào gọi lợn nái nhận phôi hay nhận phôi Để thực cấy truyền phôi, chu kỳ động dục cho phôi nhận phơi phải Nói cách khác, chu kỳ động dục chúng phải đồng pha Trong chương này, mô tả chuẩn bị nhận phơi trước cấy phơi, chăm sóc nhận sau cấy phôi Khi sử dụng lợn hậu bị trước thành thục giới tính, nên sử dụng 153 gần tuổi thành thục giới tính tốt (6-7 tháng tuổi) Nừu lợn thành thục giới tính sử dụng, điều quan trọng để cấy phơi thành công chu kỳ động dục phải rõ ràng, chu kỳ động dục phải diễn đặn Các thiết bị hoá chất yêu cầu Sản phẩm Mục đích phương pháp sử dụng eCG: Gonadotropin thai ngựa Gây động dục cho phôi (eCG: trước coi gonadotropin huyết ngựa chửa PMSG) eCG: Gonadotropin thai người Gây động dục cho phơi 10.1- Quy trình chuẩn bị lợn nhận phơi Quy trình chuẩn bị lợn nhận phơi tóm tắt phần Đầu tiên, hình thành nên kế hoạch cấy phơi đồng thời với mục đích sử dụng phơi Sau lựa chọn nhận, xây dựng lịch gây động dục đồng pha, theo dõi dấu hiệu động dục nhận phôi, vận chuyển để đói nhận phơi 10.2- Kế hoạch cấy phơi Để hình thành kế hoạch cấy phơi, cần thiết phải tính tốn yếu tố thời gian phương pháp cấy phôi, số nhận phôi, mối quan tâm đến kiểm soát bệnh tật cần thiết phương pháp gây động dục 154 10.3- Các điểm quan tâm lựa chọn nhận phôi Khi lựa chọn nhận phôi, cần ý điểm sau Số lượng phôi việc sử dụng phôi Con nhận phôi cần phải thoả mãn tất yêu cầu kiểm sốt bệnh tật cho việc cấy phơi Con nhận phơi phải có sinh lý phù hợp để đẻ ni tuyến vú khơng có khuyết tật Con nhận phôi cần phải thoả mãn tất yêu cầu để gây động dục Con nhận phôi phải đủ khoẻ để thực phẫu thuật Con nhận phơi phải tiêm phịng số bệnh định (bệnh Aujeszky, bệnh viêm phổi Nhật Bản, bệnh nhiễm trùng parvovirus), bệnh gây sẩy thai hay thai gỗ lúc có chửa 10.4- Gây động dục đồng pha Để cấy truyền phôi thành công (nghĩa sau cấy phơi, phơi phát triển thành lợn con) Điều cần thiết phải gây động dục đồng pha cho phơi nhận phơi Tỷ lệ có chửa có khuynh hướng cao chu kỳ động dục nhận phôi sai lệch - ngày sau cho phôi (bảng 4) Tốt nên gây động dục nhận cho sai lệch ngày so với cho Trong mức độ động dục đồng pha thường tính dựa sở bắt đầu động dục (chịu đực), thời điểm rụng trứng liên quan đến cuối động dục, thời gian động dục giao động theo kỹ thuật gây động dục cá thể lợn Thời điểm rụng trứng khác chí chu kỳ động dục bắt đầu thời điểm, cho phơi nhận phôi phải theo dõi đến kết thúc động dục Khi cấy phôi giai đoạn đầu phát triển (giai đoạn hay tế bào), thường phải chọn đồng pha động dục hoàn toàn cho phôi nhận phôi Bảng 22 Gây động dục đồng pha chu kỳ động dục tỷ lệ có chửa tương ứng Mức độ động dục đồng pha * +2 +1 ±0 -1 -2 Đợt nghiên cứu 5% 47% 71% 78% 86% Tỷ lệ có chửa 155 Có chửa /cấy 1/22 14/30 22/31 28/36 18/21 Tỷ lệ có chửa 40% 55% 74% 72% Có chửa /cấy 2/5 22/40 46/62 36/50 *: +2: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày +1: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày ± 0: Con nhận bắt đầu động dục ngày với cho - 1: Con nhận bắt đầu động dục sau cho ngày - 2: Con nhận bắt đầu động dục trước cho ngày 10.5- Phương pháp gây động dục Nếu có ý định sử dụng nhận phơi động dục tự nhiên, cần phải ni số lượng lớn lợn nái theo dõi dộng dục cẩn thận Vì phương pháp khơng hiệu Có phương pháp gây động dục chủ yếu, liệt kê từ a đên e bảng Liều eCG tiêu chuẩn 1000iu/con cho phương pháp này, phản ứng buồng trứng với eCG dao động phụ thuộc vào yếu tố mùa vụ, loại eCG, số lơ sản xuất nó, khác biệt cá thể lợn nái, khác biệt giống v.v Khi lợn nái không phản ứng với eCG, liều tăng lên 1200iu hay 1500iu Mặt khác, xảy gây rụng trứng mức hay thể vàng u nang, phải giảm liều tiêm xuống 750, chí 500iu Mặc dù thực tế khơng địi hỏi phối giống trực tiếp hay dẫn tinh, phương pháp để gây động dục theo dõi động dục nhận phôi giống cho phôi Vấn đề mô tả trên, chúng tơi khơng mơ tả lặp lại Phương pháp gây động dục lợn a Tiêm eCG hCG cho lợn hậu bị trước thành thục giới tính b Tiêm PGF2 a hay dẫn xuất tương tự cho lợn có chửa (có chửa từ ngày 12-40) để gây xẩy thai sử dụng lần động dục sau c Sử dụng động dục sau cai sữa d Cho ăn progesterone tổng hợp 156 e Sử dụng chu kỳ động dục tự nhiên 10.6- Chăm sóc nhận phôi sau phẫu thuật cấy phôi Sau phẫu thuật cấy phôi, nhận phải nuôi chuồng sạch, tách khỏi lợn khác Lợn nái có chửa thường nhốt chuồng Ni nhốt riêng rẽ cho lứa đẻ nhiều so với nuôi thả nhà nhiều lợn khác Việc theo dõi có chửa thể trạng lợn nái dễ Khi khơng có điều kiện ni nhốt riêng rẽ lợn chuồng, lợn phải nhốt chung với lợn nhóm suốt trình có chửa Ngày sau phẫu thuật cho ăn thức ăn nửa bình thường Ngồi ra, nên tiêm loại kháng sinh thích hợp để tránh nhiễm trùng sau mổ Một phẫu thuật cấy phôi kết thúc, tiếp tục theo dõi dấu hiệu động dục Ở tuần thứ sau phẫu thuật, hay thời điểm thích hợp sau đó, nên kiểm tra có chưa PHỤ LỤC I Thụ tinh ống nghiệm (IVF) Sự hứa hẹn phôi tạo ống nghiệm Phôi tạo ống nghiệm (ON) đóng vai trị quan trọng hệ thống sản xuất sữa thịt Chọn lọc di truyền nhân giống đạt tối ưu thông qua chiến lược liên quan đến việc sử dụng phơi tạo ON Ngồi ra, phơi tạo ON có triển vọng tốt nâng cao tỷ lệ có chửa cho đàn có khả sinh sản thấp Tỷ lệ chọn lọc tính trạng số lượng tăng lên cách khai thác công nghệ phôi tạo ON để nâng cao xác cường độ chọn lọc để giảm khoảng cách hệ Các báo cáo cho thấy tế bào (TB) gốc phơi biệt hố thành TB trứng TB trứng có nguồn gốc từ TB tuỷ xương máu, có nghĩa tiến cơng nghệ tương lai kết hợp TB trứng từ số có tiềm di truyền cao Phơi tạo ON đóng vai trị quan trọng sơ đồ chọn lọc di truyền dựa nhận biết allen gen đặc hiệu Phơi theo dõi di truyền allen đặc hiệu chọn lọc di truyền thực trước có chửa Tinh trùng xác định giới tính cơng cụ khác người ta sử dụng thơng qua hệ thống tạo phơi ON tinh trùng phân loại giới tính dùng để thụ tinh với nhiều TB trứng ON so với dẫn tinh Chuyển nhân chuyển gen đối mặt với hạn chế kỹ thuật, luật pháp xã hội, công nghệ di truyền bổ sung phụ thuộc vào công nghệ tạo phôi ON để có thành cơng Lai tạo giống có quan tâm hệ thống sản xuất sữa Rutledge (2004) đưa số dẫn chứng tranh luận sơ đồ nhân giống cải thiện thông qua dùng phôi lai F1 (được tạo ON) cấy vào F1 Một chiến 157 lược loại bỏ việc ưu lai tăng kiểu hình F1 phối với đực đực lai Tạo phôi ON có hứa hẹn phương pháp vượt qua khả không sinh sản sai sót rụng trứng thụ tinh, chết phơi sớm nguyên nhân khác Giảm tỷ lệ có chửa bị sữa đưa đến việc tìm giải pháp giải khả không thụ tinh Cấy truyền phôi phôi tạo ON chứng minh làm tăng tỷ lệ có chửa bị sữa vắt sữa bị stres nhiệt, cải tiến hệ thống tạo phôi cấy phôi làm cho có lợi việc tăng khả thụ thai đàn nơi mà khả thụ thai thường nguyên nhân khác Tuy nhiên, với mức độ công nghệ cấy truyền phơi dường chưa tăng tỷ lệ có chửa bị vắt sữa khơng bị stress nhiệt Phơi tạo ON nguồn vật liệu phôi tiết kiệm, vượt qua tượng chết phôi sớm so với phơi tạo từ gây rụng trứng nhiều giá thành hạ tạo phơi TB trứng lị mổ [4] Thực trạng tạo phôi ống nghiệm chăn ni bị Sự hứa hẹn phơi tạo ON ngành chăn ni bị sữa bò thịt chưa tương xứng với việc sử dụng thực tế hệ thống chăn ni bị Trong năm 2003, theo Hiệp hội cấy truyền phôi giới, có 106.220 ca cấy phơi tạo ON toàn giới Đây số ấn tượng cho thấy có tăng năm trước Tuy nhiên, cho thấy tỷ lệ nhỏ hàng trăm triệu bị tồn giới nhận phơi tạo ON Có nhiều lý cho việc xâm nhập công nghệ tạo phơi ON vào ngành chăn ni bị, bao gồm nhiều lý không liên quan trực tiếp đến hiệu cơng nghệ Tuy nhiên, có giới hạn kỹ thuật quan trọng giá tăng, tỷ lệ phôi thai sống thấp thường sinh bị khuyết tật, điều làm giảm mong muốn sử dụng phôi tạo ON Cloning chủ đề hội nghị này, cịn có hậu khơng mong muốn nhiều sảy thai, khuyết tật bẩm sinh chết sau sinh Ngồi ra, cịn có quan tâm luật pháp xã hội với việc tạo gia súc cloning gia súc chuyển gen Những tiến khoa học việc nhận biết hứa hẹn IVF Hầu hết vấn đề kỹ thuật đơi với tạo phơi ON vượt qua nhờ hoạt động nghiên cứu Có nhiều điểm trình tạo phơi cấy phơi sửa đổi để thành công Những vấn đề hạn chế tạo phơi ON chiến lược vượt qua hạn chế bổ sung tác giả báo hội nghị này; không cố gắng để thảo luận suy nghĩ họ Tuy nhiên, theo cách giới thiệu có trình bày số vấn đề hạn chế kỹ thuật tạo phôi cấy phôi tạo ON Những tiến khoa học lĩnh vực dường làm cho phôi tạo ON trở thành phần quan trọng hệ thống chăn ni bị Một khía cạnh quan trọng thành công hệ thống tạo phôi ON nguyên liệu khởi đầu: trứng tinh trùng Trứng xem vật xác định khả phát triển phôi Nghiên cứu tập trung lên tác động môi trường trứng trứng 158 buồng trứng sau chúng đưa vào ni cấy Ngồi ra, có vấn đề bình thường phải nhấn mạnh: nguồn cung cấp Trong kỹ thuật thu TB trứng siêu âm qua âm đạo cho phép thu TB trứng không gây tổn thương từ gia súc có giá trị di truyền cao, chi phí cịn cao TB trứng lị mổ rẻ nhiều với trình độ cơng nghệ thường xuyên thu tỷ lệ phơi nang cao Có người cho TB trứng lấy từ có tiềm di truyền thấp chí Ruledge (1997) cho giá trị di truyền gia súc đưa đến lị mổ thấp so với bị trung bình đàn Trong tương lai, việc phát minh thẻ điện tử vĩnh cửu cho gia súc giúp nhận biết lò mổ liên hệ với số liệu sản xuất chúng để lựa chọn buồng trứng từ có khả di truyền cao với tính trạng sản xuất Nguồn tinh trùng sử dụng IVF quan trọng Chức tinh trùng nuôi cấy đặc biệt quan trọng với tinh trùng xác định giới tính khả di truyền bị giảm với kỹ thuật Nhìn chung lựa chọn đực để sản xuất phôi với khả phát triển cao đến giai đoạn phôi nang hay khả sống sau cấy Palma Sinowatz (2004) cho thấy khác biệt đực tỷ lệ tế bào trứng trở thành phôi nang tinh trùng chúng sử dụng IVF Một số khác biệt đực liên quan đến tế bào tinh trùng phản ứng với yếu tố hoạt hố mơi trường ni cấy Tuy nhiên có gen di truyền qua đực (và cái) mà gen xác định thành cơng phát triển phôi Một tương đồng gen phát triển phôi trước làm tổ (ped) biết kiểm sốt tỷ lệ phát triển phơi chuột nhận biết bị Dường có nhiều gen đa hình kiểm sốt sinh trưởng, gen gây chết đột ngột (apoptosis), biểu gen q trình kích hoạt làm bất hoạt gen (epigenetic) lúc phát triển, gen ảnh hưởng đến chức nuôi cấy, xác định kháng stress phôi, ảnh hưởng đến khả sống phôi sau cấy cho nhận Phôi tạo ON biểu khuyết tật nhiễm sắc thể, hình thái, biểu gen, trao đổi chất tăng apoptosis Những khuyết tật phơi có nguồn gốc từ tế bào trứng rối loạn chức rối loạn sử dụng hệ thống nuôi cấy Cả hai nguyên nhân xuất khác biệt lớn phát triển phôi nang phơi có nguồn gốc tế bào trứng khác chứng cho thấy đưa phôi tạo ON vào ống dẫn trứng làm tăng tỷ lệ phát triển khả chịu đựng đông lạnh phôi Loại bỏ rối loạn thông qua thao tác tế bào trứng, tiêu lựa chọn tế bào trứng tăng lên, cải thiện kỹ thuật ni cấy quy trình lựa chọn phôi để cấy làm tăng nhu cầu thương mại phôi tạo ON Theo Gabor Vajta (tài liệu chưa công bố), phát triển công cụ cho phôi học không theo kịp với tăng nhu cầu sử dụng phôi cho nông nghiệp, y học công nghệ sinh học Một lĩnh vực mà cơng nghệ áp dụng hệ thống sản xuất phôi lĩnh vực bảo quản lạnh Có chiến lược cải thiện khả sống phôi tạo ON sau bảo quản lạnh: thay đổi trao đổi chất phôi để ngăn cản thay đổi sinh lý tế bào làm tăng khả mẫn cảm với tổn thương lạnh, sử dụng 159 nguyên tắc vật lý để phát triển kỹ thuật phương pháp thuỷ tinh hoá kéo dài cọng rạ để tránh tổn thương lạnh Một lĩnh vực nghiên cứu cần thiết khơng có hội nghị này, lây truyền bệnh tật phơi tạo ON Một tổng kết gần khả lây truyền vi rút sử dụng phôi tạo ON cho thấy nguy thấp, chưa hiểu hồn tồn được, chưa có phương pháp loại bỏ nguy Chính thân nhận yếu tố hạn chế quy trình cấy phơi McMilan (1998) thu thập trường hợp dựa phân tích thống kê số liệu nơi cấy truyền phôi sử dụng để tạo song thai, có khác biệt lớn số nhận khả chúng hỗ trợ cho phát triển phôi cấy Như vậy, cải thiện khả thụ thai nhận lĩnh vực nghiên cứu quan trọng Đạt mục đích địi hỏi nghiên cứu tượng sinh lý có chửa trì chửa Có nhiều việc phải làm lĩnh vực chưa rõ xảy khả chết phơi bị sữa cao sản Hầu hết nghiên cứu thời điểm chết phôi thực trước tăng nhiều sản lượng sữa giảm khả thụ tinh mà tượng gần nhận biết quần thể bò sữa Vấn đề quan trọng khác cần quan tâm nhận cần có chu kỳ kỹ thuật viên cấy phôi cần biết thời điểm chu kỳ rụng trứng Kỹ thuật xác định thời điểm cấy phôi sở xác định thời điểm dẫn tinh, áp dụng cho bò sữa bò thịt để vượt qua vấn đề phát động dục gây động dục cho khơng có chu kỳ Những tiến công nghệ phôi nhanh đánh giá khả phát triển phơi xác Người kỹ thuật viên cấy phơi cần có thời gian thực tế dài để nhận biết phôi phù hợp để cấy, nghĩa phơi có khả có chửa phát triển bình thường đến lúc sinh Những tiến cơng nghệ tạo phơi ON địi hỏi biện pháp xác để đánh giá khả phát triển phôi sau cấy khơng biết thay đổi quy trình tạo phơi ON cải thiện hay giảm khả phơi khơng thể biết làm thay đổi Hầu hết đánh giá khả phôi thường dựa tiêu hình thái chưa đủ chúng khơng cho phép phân biệt phơi có hình thái tốt tốt có khả phát triển sau cấy so với phôi tốt tốt khơng có khả phát triển sau cấy Các phương pháp khác đánh giá phôi tạo ON tỷ lệ phân chia, tỷ lệ phôi nang, số tế bào phôi nang, nuôi phôi so với tỷ lệ khối tế bào bên tỷ lệ apoptosis giá trị không chắn việc đánh giá khả sống phôi sau cấy Tất nhiên sản lượng phôi nang số đo quan trọng cố gắng cải thiện sản lượng phơi cấy tạo ra, chưa cung cấp nhiều thông tin khả phôi nang có chửa Tương tự, khơng có chứng trực tiếp cho thấy số tế bào phôi nang, tỷ lệ nuôi phôi so với tỷ 160 lệ khối tế bào bên tỷ lệ apoptosis có liên quan với khả sống phôi sau cấy Cần phải có nhiều thí nghiệm để xác định khả phôi cách cấy phôi cho nhận Hiện nay, phơi tạo ON cấy phần thiết kế thí nghiệm Một nghiên cứu PubMed 18 tháng (1-1-2004 đến 30-6-2005) có liên quan đến 13 báo phơi tạo ON hay cloning tế bào soma cấy cho nhận Tiến hành thí nghiệm cấy phơi khơng phải cơng việc bình thường nhiều ca cấy phơi địi hỏi cần phải có kết luận đầy đủ ảnh hưởng việc điều trị / tiêm đến tỷ lệ có chửa Nnhững nước bị cái, tiến hành thí nghiệm cấy phơi để thay đổi quy trình sản xuất phơi khơng thực tế Khó khăn việc thực thí nghiệm cấy phơi làm tăng tầm quan trọng việc phát triển phôi ON Nghiên cứu để đạt tối ưu công nghệ tạo phôi ống nghiệm làm đa dạng nguồn tài trợ Hiện nay, công nghệ dựa vào tạo phôi ON dường ảnh hưởng đến chiến lược nhân giống gia súc với mức tương tự thụ tinh nhân tạo Đưa triển vọng này, có nhu cầu cấp bách đầu tư bền vững có phối hợp nghiên cứu để cải tiến công nghệ tạo phôi ON để loại bỏ không hiệu vấn đề hạn chế tác động đến công nghệ Cho dến nay, khơng có mức đầu tư tài lớn tổ chức cho nghiên cứu cơng nghệ phơi Cũng khơng có cố gắng nhà khoa học liên quan đến lĩnh vực nghiên cứu công ty tài trợ giá trị nghiên cứu phôi Cần phải nhận thức nghiên cứu công nghệ phôi lĩnh vực quan trọng nghiên cứu nông nghiệp cần phải ưu tiên tổ chức khoa học nhà khoa học nghiên cứu gắn với cơng nghệ phơi / II Các test chẩn đốn Progesterone sữa bò ứng dụng chúng lĩnh vực sinh sản bò sữa Hàm lượng Progesterone sữa huyết có mối liên hệ chặt chẽ với động thái chu kỳ sinh sản thể trạng bị Vì thế, thân hormone phương pháp phát nghiên cứu nhiều năm lĩnh vực sinh sản bò Gần đây, kỹ thuật miễn dịch phóng xạ (RIA) có nhiều ưu việt dùng phịng thí nghiệm để định lượng progesterone Phương pháp xác có nhiều trở ngại ứng dụng rộng rãi thị trường Đó là: giá thành, người thực cần đào tạo kỹ việc xử lý chất thải độc hại phản ứng Tuy nhiên, kỹ thuật giải vướng mắc trên, ví dụ test Open/Alert/BoviPro 21 việc kiểm tra nồng độ progesterone thực nhanh chóng dễ dàng trang trại với chi phí thấp 1- Tóm tắt chu kỳ hoạt động progesterone Progesterone hormone thể vàng buồng trứng tiết Hàm lượng tăng / giảm phụ thuộc vào phát triển / thối hóa thể vàng Tóm tắt q trình phát triển thể vàng: có vài nang trứng phát triển buồng trứng; gần đến lúc 161 bò động dục, có nang phát triển trội chín Việc tăng tiết Luteinizing hormone từ tuyến yên làm cho nang trứng vỡ giải phóng tế bào trứng (rụng trứng) Sau trứng rụng, nang rỗng máu lấp đầy Sau 4-8 ngày, tế bào thể vàng có máu phát triển lấp đầy tạo nên thể vàng Thể vàng tiết progesterone để từ vào máu sữa Nếu bị có chửa, thể vàng trì buồng trứng, tiếp tục tiết progesterone có tác dụng an thai Nếu bị khơng chửa, thể vàng thối hóa ngừng sản xuất progesterone Điều giúp cho bị tiếp tục có chu kỳ động dục mới, cách chu kỳ trước khoảng 21 ngày Điều quan trọng cần lưu ý lượng progesterone máu sữa tăng chậm sau rụng trứng Trong phần lớn trường hợp, lượng progesterone thấp tăng chậm vòng 4-6 ngày sau trứng rụng Hàm lượng progesterone đạt cao khoảng ngày thứ 10 đến 17 chu kỳ động dục Ở bị khơng chửa, lượng progesterone giảm đáng kể từ ngày thứ 18 19 Vào thời điểm này, estrogen bắt đầu tăng bò bắt đầu chu kỳ 2- Các định ứng dụng progesterone sữa Vài ứng dụng hàm lượng progesterone sữa: 2.1 Chẩn đốn khơng có chửa Đã có nhiều nghiên cứu cho thấy việc chẩn đốn có thai sớm progesterone xác khoảng 80% Nguyên nhân: khác độ dài chu kỳ động dục bò, nhầm lẫn phát động dục, bệnh tử cung (bọc mủ tử cung), hoạt động khác thường buồng trứng (u nang thể vàng nang trứng) phôi chết sớm Tóm lại, việc sử dụng progesterone để chẩn đốn có thai chưa đủ mà cần phải kết hợp với việc khám thai 40 ngày (hoặc muộn hơn) sau phối giống Tuy nhiên, với loạt mẫu lấy vào ngày (ngày phối tinh) ngày thứ 21 24, việc chẩn đoán sớm khơng có chửa đạt đến độ xác 95-100% Do vậy, progesterone vốn coi công cụ để chẩn đốn có thai sớm nên sử dụng cho mục đích chẩn đốn khơng có thai từ xác định tình trạng có thai hay không gia súc Việc sớm xác định chửa tránh bỏ lỡ hội phối giống 2.2 Xác nhận động dục Trong nhiều trường hợp, bị biểu dấu hiệu động dục không rõ ràng dẫn đến việc định phối giống sai Trên thực tế, có khoảng 5% bị có biểu động dục mang thai Progesterone sữa dùng để xác định biểu bò mà ta quan sát có phù hợp hay khơng với bị gần động dục Nếu mẫu sữa kiểm tra cho thấy hàm lượng progesterone cao bị khơng động dục cần theo dõi cẩn thận kiểm tra lại mẫu lấy vào thời điểm muộn Rất nhiều báo cáo chứng minh vào thời điểm phối tinh có tới 15-20% bị sữa khơng động dục số trang trại, tỷ lệ phát động dục sai cao tới 50% Do vậy, đàn bị khơng sinh sản, biểu tỷ lệ có chửa thấp có bị phối giống lặp lại nhiều cần phải xem xét lại độ xác cơng tác phát động dục Việc tiến hành đơn giản cách giữ lại mẫu sữa vào thời điểm bò đưa để phối tinh khoảng tuần tháng sau 162 Nếu nhiều 10% số bò phối tinh vào thời điểm có hàm lượng progesterone cao chứng minh việc phát động dục khơng xác 2.3 Bị có vấn đề sinh sản Đó khơng có biểu chu kỳ mang thai thời gian dài sau đẻ số đàn, bị bị xếp vào loại có vấn đề sinh sản 100 ngày sau đẻ mà không phối giống Ngun nhân có nhiều số đàn nguyên nhân đơn giản bò bị bỏ lỡ động dục chúng bị xếp vào nhóm có vấn đề sinh sản Tuy nhiên, bò bị mắc bệnh tử cung buồng trứng chẩn đoán điều trị nhanh chóng giảm thời gian chi phí phối giống sau đẻ Progesterone sữa dùng để chẩn đoán rối loạn tử cung (viêm tử cung) cho bò ứng dụng để phân biệt trường hợp thể vàng hình thành u nang Nhiều nghiên cứu trước cho thấy việc khám qua trực tràng phát 65-75% trường hợp bò bị u nang buồng trứng Do vậy, qua xác nhận kết chẩn đốn, định liệu pháp điều trị Sau điều trị, kiểm tra xem bị có phản ứng theo chiều hướng mong muốn hay khơng 2.4 Các chương trình cấy truyền phơi Các chương trình cấy truyền phơi địi hỏi phải kiểm tra cho nhận cách thường xuyên Việc gây động dục đồng pha thành cơng rõ ràng bước sống cịn để đạt thành cơng quy trình cấy truyền phơi Đã có nhiều nghiên cứu độ xác việc xác định thể vàng phát triển qua khám trực tràng đạt 75-80% Như vậy, việc sử dụng test chẩn đốn progesterone cách có chọn lọc bị cho kết khám thể vàng khơng rõ ràng cải thiện hiệu cấy truyền phôi nhiều tình trạng sinh sản bị chuẩn bị cho cấy truyền phôi xác định 2.5 Tinh có giá thành cao Do việc phát động dục nhầm lẫn, ngồi việc quan sát biểu động dục bị, người ta đưa việc định lượng progesterone sữa vào quy trình xác định động dục Việc kiểm tra tiến hành trước phối tinh không tránh lãng phí tinh có giá thành cao mà cịn ngăn chặn sẩy thai 2.6 Bò sữa cao sản Chúng ta biết stress gây suất sữa cao chậm trễ có liên quan đến lượng thức ăn khô ăn vào ảnh hưởng đến chu kỳ động dục bò sữa Hơn nữa, cân lượng âm hoạt động hormone giai đoạn đầu sau đẻ làm giảm mật độ biểu động dục Như vậy, để có bị động dục phối giống thành cơng thách thức chăn ni bị sữa Do biểu bên ngồi động dục bị sữa cao sản khơng rõ dễ gây nhầm lẫn, định lượng progesterone sữa giúp phân biệt hoạt động động dục chúng so với bị khơng có hoạt động động dục 2.7 Trợ giúp chương trình phối giống thời điểm bị stress khí hậu 163 Các stress với mơi trường có tác động lớn đến hiệu sinh sản Đặc biệt, stress nhiệt nguyên nhân dẫn đến việc giảm nghiêm trọng tỷ lệ có chửa, tăng tỷ lệ chết phôi sớm, giảm độ dài cường độ biểu động dục làm giảm thể trọng bê sinh Ngày người ta sử dụng progesterone sữa để trợ giúp cho chương trình phối giống điều kiện gia súc bị stress mơi trường 3- Tóm tắt Nhờ vào ưu điểm cơng nghệ sinh học chẩn đốn miễn dịch, hệ thống định lượng progesterone sữa huyết sản xuất bán rộng rãi thị trường Giá trị hệ thống phụ thuộc vào hiểu biết người sử dụng hoạt động progesterone chu kỳ động dục bình thường bị sữa Các hệ thống khơng thể dùng để xác định xác thời điểm cần tiến hành phối giống, chúng dùng để chẩn đoán thai cách đáng tin cậy Tuy nhiên, sử dụng cách hợp lý xem xét đến hạn chế quy trình hệ thống định lượng hormone thực có giá trị quản lý sinh sản III Xác đinh giới tính thú có vú Giới thiệu Năm 1936, viện sĩ Axtaurop (ở Liên Xô cũ) tạo dịng tồn tồn đực Việc điều chỉnh tỷ lệ đực có ý nghĩa lớn thực tiễn Như ni bị thịt cần nhiều bê đực, ni bị sữa cần nhiều bê cái, nuôi gà đẻ cần nhiều gà mái, nuôi gà thịt lại cần nhiều gà trống Hai chế chung đinh giới tính lồi có xương sống: mơi trường lồi bị sát, gen lúc thụ tinh chim thú có vú Qua năm trung tâm Beltsville Sperm Sexing Technology cho thấy sản xuất đời sau chọn lọc trước giới tính thỏ, heo bị Trong thời gian dài, chọn lọc trước giới tính mục tiêu chăn ni bị sữa thú cho thịt để tăng đáp ứng chọn lọc, giảm chi phí kiểm tra đời sau đực tạo nên đời với đặc tính di truyền mong muốn Kỹ thuật áp dụng để phân biệt giới tính phôi PCR với đoạn mồi chuyên biệt cho nhiễm sắc thể Y Gần thành công việc tách biệt tinh trùng X Y máy đểm tế bào tốc độ cao mở hướng kiểm soát sinh sản thú cosvus Mặc dù kỹ thuật cịn vấn đề cần giải (hồn thiện khả thụ tinh phản ứng acrosome), hướng tiền chọn lọc giới đời sau Yếu tố ảnh hưởng đến tỉ lệ đực Những câu chuyện phương cách ảnh hưởng đến giới tính phơi đề cập đến thay đổi thức ăn Thí dụ, thức ăn làm tăng khả sinh thức ăn chua sinh đực Ở heo, Toriumi ctv (1993) báo cáo ảnh hưởng phần nhiều Ca/P (2.15% Ca 1.28% P) lên tỉ lệ đực/cái, nái ăn phần bình thường phần nhiều Ca/P có tỉ lệ đực/cái ổ đẻ 0.89 1.32 Trên lý thuyết dịch 164 hoàn sản xuất số lượng tinh trùng X tinh trùng Y có số thú đực nhiều yếu tố sinh lý môi trường, chẳng hạn số ổ, tuổi mẹ, dinh dưỡng, thời điểm phối giống, stress lứa mẹ Từ năm 1985, giáo sư người Pháp Josept Stowkowski ý đến mối quan hệ biến dưỡng khoáng chất phân phối giới tính Theo ơng, muốn có gia súc thức ăn phải nhạt, thiếu muối, hoạt động tuyến thượng thận gia tăng Chúng tiết nhiều kích tố thượng thận, làm cho chất kali (K) bị loại khỏi mô tế bào, tức tạo môi trường axit mạnh Với 20 năm thử nghiệm lồi bị sát, ơng nhận thấy ăn nhiều chất Na, Ca, K hầu hết sinh đực Stowkowski nhận thấy rằng, biến thái nịng nọc tùy thuộc vào mơi trường ni chúng Môi trường giàu K cho nhiều đực, giàu Ca Mg nịng nọc nhiều Ở mơi trường ni trung tính, tỷ lệ đực Thử nghiệm chuột cống, ông nhận thấy ăn nhiều K khơng có Ca, chuột mẹ đẻ nhiều chuột đực; ngược lại, chúng đẻ nhiều chuột Giáo sư Lefèvre Argentina nghiên cứu phần thức ăn gần 2.600 bị 130 trại Ơng nhận thấy, tùy theo hàm lượng khoáng chất đất phân bón, loại cỏ mà bị mẹ ăn định việc sinh bê đực hay bê nhiều Nếu thức ăn giàu K, có nhiều bê đực Từ đó, người ta đề phần thức ăn chăn ni bị mẹ sau: Muốn có nhiều bê đực để lấy thịt, cần thêm K, NaCl (muối ăn), loại bớt thực vật giàu kim loại kiềm thổ (C, Mg) cỏ Lurerne Để có nhiều bị sữa thêm vào thức ăn sinh tố D, Ca, Mg Steroid sinh dục ảnh hưởng đến định giới tính vài lồi cá tác động mức lồi gia cầm Riêng lồi có vú, khơng có chứng cớ cho thấy ảnh hưởng steroid sinh dục làm trung gian cho biệt hóa đặc điểm sinh dục thứ cấp Hoàn cảnh thụ tinh, điều kiện sống thể làm thay đổi tỷ lệ đực Nhiều tác giả cho thời gian, thời điểm phối giống có ảnh hưởng đến tỷ lệ số đực/cái cua phôi Cơ chế tạo thuận lợi ức chế vận chuyển tinh trùng X Y, chọn lọc tinh trùng lúc thụ tinh, chết phôi liên qua đến giới tính Thí dụ: Tinh trùng thỏ để 12 cho thụ tinh tỷ lệ đực tăng lên lần Lợn nái động đực 12 cho thụ tinh tỷ lệ đực tăng gấp rưỡi Lợn nái ăn uống đầy đủ số lợn lứa đẻ 1,5 lần số lợn đực Một số phương pháp tách tinh trùng: Qua nghiên cứu tính chất hai loại tinh trùng, nhà khoa học đề phương pháp để tách chúng sau: - Phương pháp điện ly điện phân: Khi cho tinh dịch vào điện trường tinh trùng Y bị hút cực âm, tinh trùng X cực dương Người ta hứng lấy hai loại bơm vào tử cung người phụ nữ vào thời điểm thích hợp, đạt tỷ lệ thành cơng 8090% Phương pháp phức tạp, khó áp dụng, dẫn đến dị dạng bẩm sinh thai nhi - Phương pháp ly tâm: Dựa vào tính chất hai loại tinh trùng (tinh trùng Y bé, đầu tròn, trọng lượng riêng 1,07 (linh trưởng); tinh trùng X to, đầu bầu dục, trọng lượng 165 riêng 1,17), người ta tách chúng phương pháp ly tâm Gần đây, nhóm bác sĩ Nhật làm theo phương pháp Tỷ lệ thành công cao - Tách tính trùng dựa tốc độ thời gian tồn lệch loại tinh trùng Bác sĩ sản khoa Laudrum B Shetles Đại học Colombia (Mỹ) nghiên cứu tinh trùng người tìm tính chất sau: Tinh trùng Y di chuyển nhanh chết sớm; tinh trùng X di chuyển chậm sống dai Bác sĩ Ericson (Mỹ) làm thí nghiệm: cho tinh trùng người chạy qua chất anbumin bò Tinh trùng Y chạy nhanh hơn, hứng lấy, bơm vào tử cung phụ nữ Kết gần 100% trường hợp có thai trai theo ý muốn Cịn muốn sinh gái hứng tinh trùng X tỷ lệ thành công cao Phương pháp phức tạp lại khơng tự nhiên nên dùng Các phương pháp phức tạp, phải sử dụng kỹ thuật cao, khơng tự nhiên, khó phổ cập, nước ta nước phát triển Hơn nữa, chúng dễ gây tình trạng thai khơng bình thường Xác định giới tính phơi trước định vị Phương pháp thường dùng thương mại để xác định giới tính phơi lấy mẫu sinh thiết (một số nhỏ tế bào lấy từ phôi ngày tuổi) xét nghiệm nhiễm sắc thể Y cách nhân AND với đoạn mồi phù hợp cho đoạn gen SRY nhiễm sắc thể Y đoạn đánh dấu đa hình ngẫu nhiên UcdO43 Tiến trình áp dụng thành cơng nhiều lồi, bao gồm bò (Cotinot ctv, 1991), trâu (Rao Totey, 1999), cừu dê (Rao Totey, 1992) lợn (Kawarasaki ctv, 2000) Độ xác lên đến 98% Tỷ lê đậu thai (50-70%) phôi tươi xác định giới tính thấp bình thưởng khoảng 5%, tỷ lệ đậu thai 50% phơi đơng lạnh xác định giới tính Tuy nhiên, tiến trình địi hỏi phải mở màng bảo vệ phôi lấy vài tế bào để xác đinh AND Phơi khơng phát triển tốt sau bị lây vài tế bào vỡ màng đưa đến nhiễm trùng Hơn nữa, phương pháp PCR địi hỏi phải điện di, lây nhiễm AND lần xét nghiệm nên chẩn đoán lầm [5-7] TÀI LIỆU THAM KHẢO Giao, H.K., Công nghệ Cấy truyền phôi Gia súc 2003, Hà Nội: NXB Khoa học Kỹ thuật Giao, H.K., et al., Công nghệ Cấy truyền phơi Bị 1997, Hà Nội: NXBNơng nghiệp Joe, B and W.F John, Applied Animal Reproduction 1996? Hansen, P.J., The prospects of invitro fertiliazation technique in cattle Theriogenology, 2006 65: p 119-125 Ian, G., Controlled reproduction in Pigs Vol Cab International 1997 166 Thưởng, N.V., Cẩm nang Chăn nuôi Gia súc - Gia cầm Những vấn đề chung cẩm nang chăn nuôi lợn, ed H.C.n.V Nam Vol Tập I 2000, Hà Nội: NXB Nông nghiệp 642 Dân, T.T., Công nghệ sinh học chăn nuôi gia súc 2005: NXB Nơng nghiệp 127 CÂU HỎI ƠN TẬP Khái niệm mục đích phương pháp cấy truyền phơi cho gia súc? Đặc điểm phát triển phôi giai đoạn đầu ứng dụng kỹ thuật cấy truyền phơi cho gia súc? Trình bày sơ đồ bước công nghệ cấy truyền phôi? Kỹ thuật tạo chu kỳ động dục? (Gợi ý: Đọc thêm phần tài liệu tham khảo) 167 ... progestin tổng hợp Altrenogest (17-a-allyl-estratiene- 4-9 -1 1, 17-b-ol-3-one, hay allyl-trenbolone, RU-2267, REGU-MATE; Roussel-Uclaf, Hoechst UK Ltd.) cho ăn lần / ngày thời gian định Chất progestin tổng... lợn chuyển 4 8 -5 6 gen thông qua vi tiêm ADN vào tiền nhân Ngày - Kiểm soát dịch Ngày 5- 6 bệnh chương trình khơng có mầm bệnh đặc biệt (SPF) 4 -5 ngày Giai đoạn phát triển phôi thu Giai nhân đoạn... pha * +2 +1 ±0 -1 -2 Đợt nghiên cứu 5% 47% 71% 78% 86% Tỷ lệ có chửa 155 Có chửa /cấy 1/22 14/30 22/31 28/36 18/21 Tỷ lệ có chửa 40% 55 % 74% 72% Có chửa /cấy 2 /5 22/40 46/62 36 /50 *: +2: Con