Đề tài: Nghiên cứu nhân nhanh giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

PHẦN MỘT MỞ ĐẦU 1. 1 . ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với sự phát triển của xã hội, đời sống của con người ngày một được năng cao, nhu cầu làm đẹp cho cuộc sống cũng theo đó mà tăng mạnh mẽ. Hoa được coi là một trang sức không thể thiếu trong cuộc sống. Hoa luôn mang cho đời màu sắc rực rỡ, hương thơm ngọt ngào. Trong muôn vàn các loài hoa thì Loa Kèn là một loài hoa đẹp, đa dạng về chủng loại, phong phú về màu sắc, có hương thơm dịu dàng. Hiện nay, Hoa Loa Kèn rất được ưa chuộng trên thị trường thế giới cũng như ở Việt Nam. Loài hoa này được trồng phổ biến ở rất nhiều nước như Nhật Bản, Trung Quốc, Hà Lan, New Zealand, Canada… Sản xuất Hoa Loa Kèn đã đem lại nguồn doanh thu lớn cho các nước này, đồng thời nâng cao kim ngạch xuất khẩu của thế giới. Với vẻ đẹp thanh cao, hương thơm mát dịu, Hoa Loa Kèn được đông đảo người tiêu dùng Việt Nam yêu thích. Vào khoảng tháng 4 trên thị trường hoa tươi tràn ngập loại hoa này. Chúng xuất hiện từ hội trường, phòng họp, phòng làm việc của các công sở cho đến phòng khách của mọi gia đình. Không chỉ thế, Hoa Loa Kèn còn được cắm trang trí trong các buổi tiệc như sinh nhật, hội hè…Trước nhu cầu lớn mạnh như vậy nhưng thực tiễn sản xuất và kinh doanh Hoa Loa Kèn của nước ta còn nhiều yếu kém cả về năng xuất, sản lượng, cũng như chất lượng hoa. Lý do xuất phát của những hạn chế đó là khó khăn về chủng loại, số lượng, chất lượng giống cũng như kỹ thuật nhân giống. Hiện nay, ở nước ta, giống Hoa Loa Kèn trắng được trồng chủ yếu là giống Lilium longiflorum Hance. Giống này đã du nhập vào Việt Nam từ khá lâu, trải qua quá trình bảo quản củ giống kéo dài theo các năm, hiện đã bị thoái hoá nghiêm trọng về năng xuất và phẩm chất hoa. Mặt khác, giống này chỉ cho thu hoạch vụ chính vào cuối vụ xuân (trồng từ tháng 10 năm trước và thu hoạch vào tháng 4 năm sau). Thời gian thu hoạch ngắn, chỉ trong 2 3 tuần. Hiện nay có một số biện pháp sử lý cho ra hoa trái vụ vào dịp tết (khoảng tháng 2), tuy nhiên số lượng hoa thu được không nhiều. Do đó việc đáp ứng nhu cầu ngày một lớn mạnh của người tiêu dùng là rất hạn chế. Để giải quyết vấn đề khó khăn này chúng ta cần có những giải pháp làm phong phú thêm nguồn giống cho năng suất, phẩm chất hoa tốt đồng thời có thể cung cấp hoa vào nhiều dịp khác trong năm. Trong số rất nhiều giống Hoa Loa Kèn trắng hiện nay, Lilium formolongo là một giống hoa mới, có nhiều đặc tính quý, phù hợp cho sản xuất hoa ở quy mô công nghiệp. Giống hoa này có tính chịu nhiệt, có thể sinh trưởng và phát triển tốt trong điều kiện nhiệt độ cao từ 15 320C. Đặc tính này rất phù hợp với điều kiện khí hậu nóng ẩm của Việt Nam. Hơn nữa, giống cho thu hoạch hoa vào khoảng tháng 7 đến tháng 9. Điều này cho phép có thêm một vụ Hoa Loa Kèn mới nếu du nhập và phát triển giống hoa này ở nước ta. Như vậy chúng ta có thể giải quyết được khâu giống. Tuy nhiên, khó khăn vẫn còn lại trong khâu kỹ thuật nhân giống. Từ trước đến nay, Hoa Loa Kèn được nhân giống chủ yếu theo phương pháp truyền thống: nhân giống bằng củ bảo quản qua các năm. Kỹ thuật này tuy đơn giản, dễ làm và rể tiền nhưng cho hệ số nhân giống thấp. Hơn nữa cây được nhân giống vô tính theo phương pháp này dễ làm lây lan các bệnh virus thường gặp ở các chi Lilium. Cây bị nhiễm virus sẽ sinh trưởng, phát triển kém dẫn đến suy giảm năng suất và chất lượng. Theo khuyến cáo của nhà cung cấp giống, việc nhân giống Lilium formolongo được thực hiện bằng cách gieo hạt, khó đồng đều và không ổn định được tính di truyền của giống. Mặt khác, củ giống nhập nội có chi phí khá cao, nếu nhân giống vô tính bằng củ cho hệ số nhân giống thấp, dễ lây lan bệnh virus, thì sẽ lãng phí một lượng lớn vốn đầu tư ban đầu. Yêu cầu bức thiết đặt ra lúc này là tìm ra được phương pháp nhân nhanh nhằm tạo ra được lượng cây giống lớn trong một thời gian ngắn, đồng thời duy trì được những đặc tính quý của giống. Hiện nay, nuôi cấy mô tế bào thực vật, hay nhân giông vô tính in vitro đã được ứng dụng thành công trên rất nhiều đối tượng. Phương pháp này cho phép từ một lượng nhỏ giống ban đầu nhân nhanh với tốc độ cao, trong thời gian ngắn có thể cung cấp được một lượng cây giống lớn, đồng nhất, sạch bệnh, duy trì được đặc tính của giống. Trên cơ sở đó chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu nhân nhanh giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo bằng phương pháp nuôi cấy in vitro ” 1. 2 . MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU: 1. 2. 1 . Mục đích: Xây dựng được quy trình công nghệ nhân giống hoàn chỉnh cây Hoa Loa Kèn mới Lilium formolongo, đảm bảo cung cấp một lượng cây giống, củ giống lớn, đồng loạt, có chất lượng cao, phục vụ cho sản xuất. 1. 2. 2 . Yêu cầu: Xác định được điều kiện tối ưu trong từng bước nhân giống như sau:  Nghiên cứu khử trùng mẫu cấy để xác định nồng độ hoá chất, thời gian khử trùng tối ưu.  Nghiên cứu xác định môi trường thích hợp cho việc tái sinh chồi in vitro từ nuôi cấy mô vảy củ, mô lá và lát mỏng tế bào.  Nghiên cứu xác định môi trường thích hợp để nhân nhanh chồi in vitro cho hệ số nhân chồi cao và chất lượng chồi tốt nhất.  Nghiên cứu và xác định môi trường thích hợp để ra rễ, tạo cây hoàn chỉnh cho chồi in vitro.  Nghiên cứu giá thể thích hợp cho việc thích ứng cây in vitro ra vườn ươm.  Nghiên cứu thành phần môi trường thích hợp cho việc tạo cal từ mô lá.  Nghiên cứu quy trình tạo củ in vitro. PHẦN HAI TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2. 1 . GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY HOA LOA KÈN 2. 1. 1 . Nguồn gốc, vị trí, phân loại cây Hoa Loa Kèn 1) Nguồn gốc Cây Hoa Loa Kèn có nguồc gốc từ Trung Quốc, các đảo nhiệt đới ở phía Nam Nhật Bản, Nam Triều Tiên, Califolia (Mỹ) và một số nơi khác. Ngày nay, Hoa Loa Kèn được trồng rộng rãi ở khắp nơi trên thế giới từ các nước Châu Âu, Châu Úc, đến số nước Châu Á như : Nhật, Trung Quốc, Hàn Quốc… 2) Vị trí, phân loại Trong hệ thống phân loại thực vật, cây Hoa Loa Kèn được xếp vào nhóm một lá mầm: Monocotylendones, phân lớp hành: Liliidae, bộ hành: Liliales, họ hành: Liliaceae, chi Lilium. Các loài thuộc chi lilium là các cây có dạng thân thảo, hay thân dạng hành, có vảy. Thân thường mọc đơn, có lá dạng hình mũi mác, hình vạch, mọc xung quanh thân. Kích thước hoa lớn, mọc từ nách lá hay ở ngọn, có nhiều màu sắc, hương thơm khác nhau. Hoa có thể mọc riêng lẻ hay mọc thành từng cụm nhiều hoa. Hoa lưỡng tính, bao hoa gồm 6 mảnh dạng cánh, có 6 nhị, bầu hình trụ, đầu nhuỵ hình đầu chia 3 thuỳ, quả nang có 3 góc và 3 nang. Chi lilium có nhiều loài khác nhau với dạng hoa, màu sắc, hương thơm hết sức phong phú. Có hoa hình phễu như L.longiflorum, L.longifonum, L.candidum, L. wallichianum, hình chén như Limanrtagon với những cánh hoa nhỏ hẹp, hay dạng chuông L.camadense, hoặc nỏ điếu L.aunratum . Từ các loài có màu tinh khiết đến đủ các màu như vàng, hồng, đỏ, tím, sọc. Từ các loài có hương thơm ngát như L.anratum, L.Japonicum đến các loài có mùi thực sự khó chịu như L.martagon, L.pyreaicum … Ngoài ra còn có rất nhiều các giống được lai tạo thành công giữa các loài trong tự nhiên như: Aurelian, Backhause, Fiesta, Olypic, Preston... Các giống cây lai thường cho sức sinh trưởng và phát triển tốt, khả năng đề kháng cao với bệnh tật, đồng thời hình dáng, màu sắc và hương thơm của hoa phong phú. Theo các tác giả Russell Balge, Stanton Gill, Ethel Dutky,Wanda MacLachlan Suzanne Klick (năm 1996), thì lilium hiện nay có thể được phân loại theo 8 nhóm nhờ vào sự khác nhau về số lượng hoa trên thân cây, về hình dạng hay màu sắc hoa. Tuy nhiên, chỉ có hai nhóm Asiatic và Oriental được sử dụng chủ yếu để sản xuất hoa cắt và trong nghiên cứu. Asiatic bao gồm các giống hoa màu đỏ sẫm, cam, hồng, hồng đào, vàng tươi, cho đến màu kem, màu trắng, hay có sọc, cho thu hoạch hoa vào khoảng tháng 6, tháng 7. Nhóm Oriental thì bao gồm các màu trắng, đỏ thẫm, trắng có nhiều đốm đỏ hoặc hồng, thường thu hoạch muộn hơn nhóm Asiatic, khoảng tháng 8. Hiện nay đã có rất nhiều nghiên cứu lai tạo giống giữa hai nhóm hoa này cho ra hàng loạt giống lai với chất lượng hơn hẳn bố mẹ chúng.

PHẦN MỘT MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển xã hội, đời sống người ngày cao, nhu cầu làm đẹp cho sống theo mà tăng mạnh mẽ Hoa coi trang sức thiếu sống Hoa mang cho đời màu sắc rực rỡ, hương thơm ngào Trong muôn vàn lồi hoa Loa Kèn lồi hoa đẹp, đa dạng chủng loại, phong phú màu sắc, có hương thơm dịu dàng Hiện nay, Hoa Loa Kèn ưa chuộng thị trường giới Việt Nam Loài hoa trồng phổ biến nhiều nước Nhật Bản, Trung Quốc, Hà Lan, New Zealand, Canada… Sản xuất Hoa Loa Kèn đem lại nguồn doanh thu lớn cho nước này, đồng thời nâng cao kim ngạch xuất giới Với vẻ đẹp cao, hương thơm mát dịu, Hoa Loa Kèn đông đảo người tiêu dùng Việt Nam yêu thích Vào khoảng tháng thị trường hoa tươi tràn ngập loại hoa Chúng xuất từ hội trường, phòng họp, phòng làm việc cơng sở phịng khách gia đình Khơng thế, Hoa Loa Kèn cịn cắm trang trí buổi tiệc sinh nhật, hội hè…Trước nhu cầu lớn mạnh thực tiễn sản xuất kinh doanh Hoa Loa Kèn nước ta nhiều yếu xuất, sản lượng, chất lượng hoa Lý xuất phát hạn chế -1- khó khăn chủng loại, số lượng, chất lượng giống kỹ thuật nhân giống Hiện nay, nước ta, giống Hoa Loa Kèn trắng trồng chủ yếu giống Lilium longiflorum Hance Giống du nhập vào Việt Nam từ lâu, trải qua trình bảo quản củ giống kéo dài theo năm, bị thoái hoá nghiêm trọng xuất phẩm chất hoa Mặt khác, giống cho thu hoạch vụ vào cuối vụ xuân (trồng từ tháng 10 năm trước thu hoạch vào tháng năm sau) Thời gian thu hoạch ngắn, - tuần Hiện có số biện pháp sử lý cho hoa trái vụ vào dịp tết (khoảng tháng 2), nhiên số lượng hoa thu không nhiều Do việc đáp ứng nhu cầu ngày lớn mạnh người tiêu dùng hạn chế Để giải vấn đề khó khăn cần có giải pháp làm phong phú thêm nguồn giống cho suất, phẩm chất hoa tốt đồng thời cung cấp hoa vào nhiều dịp khác năm Trong số nhiều giống Hoa Loa Kèn trắng nay, Lilium formolongo giống hoa mới, có nhiều đặc tính quý, phù hợp cho sản xuất hoa quy mơ cơng nghiệp Giống hoa có tính chịu nhiệt, sinh trưởng phát triển tốt điều kiện nhiệt độ cao từ 15 - 32 0C Đặc tính phù hợp với điều kiện khí hậu nóng ẩm Việt Nam Hơn nữa, giống cho thu hoạch hoa vào khoảng tháng đến tháng Điều cho phép có thêm vụ Hoa Loa Kèn du nhập phát triển giống hoa nước ta Như giải khâu giống Tuy nhiên, khó khăn lại khâu kỹ thuật nhân giống Từ trước đến nay, Hoa Loa Kèn nhân giống chủ yếu theo phương pháp truyền thống: nhân giống củ bảo quản qua năm Kỹ thuật -2- đơn giản, dễ làm rể tiền cho hệ số nhân giống thấp Hơn nhân giống vô tính theo phương pháp dễ làm lây lan bệnh virus thường gặp chi Lilium Cây bị nhiễm virus sinh trưởng, phát triển dẫn đến suy giảm suất chất lượng Theo khuyến cáo nhà cung cấp giống, việc nhân giống Lilium formolongo thực cách gieo hạt, khó đồng khơng ổn định tính di truyền giống Mặt khác, củ giống nhập nội có chi phí cao, nhân giống vơ tính củ cho hệ số nhân giống thấp, dễ lây lan bệnh virus, lãng phí lượng lớn vốn đầu tư ban đầu Yêu cầu thiết đặt lúc tìm phương pháp nhân nhanh nhằm tạo lượng giống lớn thời gian ngắn, đồng thời trì đặc tính q giống Hiện nay, nuôi cấy mô - tế bào thực vật, hay nhân giơng vơ tính in vitro ứng dụng thành công nhiều đối tượng Phương pháp cho phép từ lượng nhỏ giống ban đầu nhân nhanh với tốc độ cao, thời gian ngắn cung cấp lượng giống lớn, đồng nhất, bệnh, trì đặc tính giống Trên sở chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu nhân nhanh giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo phương pháp nuôi cấy in vitro ” -3- MỤC ĐÍCH VÀ U CẦU: Mục đích: Xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống hồn chỉnh Hoa Loa Kèn Lilium formolongo, đảm bảo cung cấp lượng giống, củ giống lớn, đồng loạt, có chất lượng cao, phục vụ cho sản xuất 2 Yêu cầu: Xác định điều kiện tối ưu bước nhân giống sau: + Nghiên cứu khử trùng mẫu cấy để xác định nồng độ hoá chất, thời gian khử trùng tối ưu + Nghiên cứu xác định mơi trường thích hợp cho việc tái sinh chồi in vitro từ nuôi cấy mô vảy củ, mô lát mỏng tế bào + Nghiên cứu xác định mơi trường thích hợp để nhân nhanh chồi in vitro cho hệ số nhân chồi cao chất lượng chồi tốt + Nghiên cứu xác định mơi trường thích hợp để rễ, tạo hoàn chỉnh cho chồi in vitro + Nghiên cứu giá thể thích hợp cho việc thích ứng in vitro vườn ươm + Nghiên cứu thành phần môi trường thích hợp cho việc tạo cal từ + Nghiên cứu quy trình tạo củ in vitro mơ -4- PHẦN HAI TỔNG QUAN TÀI LIỆU GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY HOA LOA KÈN 1 Nguồn gốc, vị trí, phân loại Hoa Loa Kèn 1) Nguồn gốc Cây Hoa Loa Kèn có nguồc gốc từ Trung Quốc, đảo nhiệt đới phía Nam Nhật Bản, Nam Triều Tiên, Califolia (Mỹ) số nơi khác Ngày nay, Hoa Loa Kèn trồng rộng rãi khắp nơi giới từ nước Châu Âu, Châu Úc, đến số nước Châu Á : Nhật, Trung Quốc, Hàn Quốc… 2) Vị trí, phân loại Trong hệ thống phân loại thực vật, Hoa Loa Kèn xếp vào nhóm mầm: Monocotylendones, phân lớp hành: Liliidae, hành: Liliales, họ hành: Liliaceae, chi Lilium Các loài thuộc chi lilium có dạng thân thảo, hay thân dạng hành, có vảy Thân thường mọc đơn, có dạng hình mũi mác, hình vạch, mọc xung quanh thân Kích thước hoa lớn, mọc từ nách hay ngọn, có nhiều màu sắc, hương thơm khác Hoa mọc riêng lẻ hay mọc thành cụm nhiều hoa Hoa lưỡng tính, bao hoa gồm mảnh dạng cánh, -5- có nhị, bầu hình trụ, đầu nhuỵ hình đầu chia thuỳ, nang có góc nang Chi lilium có nhiều lồi khác với dạng hoa, màu sắc, hương thơm phong phú Có hoa hình phễu L.longiflorum, L.longifonum, L.candidum, L wallichianum, hình chén Limanrtagon với cánh hoa nhỏ hẹp, hay dạng chuông L.camadense, nỏ điếu L.aunratum Từ lồi có màu tinh khiết đến đủ màu vàng, hồng, đỏ, tím, sọc Từ lồi có hương thơm ngát L.anratum, L.Japonicum đến lồi có mùi thực khó chịu L.martagon, L.pyreaicum … Ngồi cịn có nhiều giống lai tạo thành cơng lồi tự nhiên như: Aurelian, Backhause, Fiesta, Olypic, Preston Các giống lai thường cho sức sinh trưởng phát triển tốt, khả đề kháng cao với bệnh tật, đồng thời hình dáng, màu sắc hương thơm hoa phong phú Theo tác giả Russell Balge, Stanton Gill, Ethel Dutky,Wanda MacLachlan & Suzanne Klick (năm 1996), lilium phân loại theo nhóm nhờ vào khác số lượng hoa thân cây, hình dạng hay màu sắc hoa Tuy nhiên, có hai nhóm Asiatic Oriental sử dụng chủ yếu để sản xuất hoa cắt nghiên cứu Asiatic bao gồm giống hoa màu đỏ sẫm, cam, hồng, hồng đào, vàng tươi, màu kem, màu trắng, hay có sọc, cho thu hoạch hoa vào khoảng tháng 6, tháng Nhóm Oriental bao gồm màu trắng, đỏ thẫm, trắng có nhiều đốm đỏ hồng, thường thu hoạch muộn nhóm Asiatic, khoảng tháng Hiện có nhiều nghiên cứu lai tạo giống hai nhóm hoa cho hàng loạt giống lai với chất lượng hẳn bố mẹ chúng 2 Giá trị kinh tế giá trị sử dụng: -6- Hoa tươi sản phẩm hàng hố đặc biệt ngành nơng nghiệp Hiện trồng hoa trở thành ngành sản xuất phát triển khắp giới Trong có Hoa Loa Kèn đóng góp phần khơng nhỏ Với ưu phong phú hình dáng, màu sắc, hương thơm Hoa Loa Kèn có giá trị cao sản xuất mặt tinh thần Hoa có đặc điểm to, độ bền hoa lâu, đặc biệt loài Hoa Loa Kèn trắng, với màu trắng tinh khiết, hương thơm dịu dàng tượng trưng cho vẻ đẹp cao trang nhã Hoa sử dụng ngày hội lớn, ngày lễ, ngày tết, trang trí hội trường, cơng viên hay văn phịng, phịng khách trang trọng Trong gia đình, hoa làm cho sống tươi đẹp, tràn trề sức sống Ngoài Hoa Loa Kèn dùng làm quà tặng trang trọng dịp sinh nhật, 8/3, hay ngày lễ valentin… Bên cạnh giá trị làm phong phú tinh thần lồi Hoa Loa Kèn cịn dùng để tách chiết tinh chế tinh dầu thơm phục vụ cho số ngành công nghiệp mỹ phẩm, nước hoa, bánh kẹo…Đối với y học, lồi có giá trị định Lồi hoa Bách hợp L brownii F.Ebrown có tác dụng chữa bệnh, dùng làm thuốc Với giá trị lớn vậy, Hoa Loa Kèn hứa hẹn mang lại nguồn doanh thu lớn cho ngành sản xuất, kinh doanh loại hoa Hiện nay, thị trường Việt Nam, loài Hoa Loa Kèn bán với giá phổ biến 10.000 - 15.000đ/cành (Theo điều tra Thời báo kinh tế) Như đầu tư vốn vào phát triển kinh doanh mặt hàng mang lại cho nhà sản xuất lợi nhuận cao Trên giới nhu cầu loại hoa lớn, xuất thị trường nước nguồn thu lãi khổng lồ -7- Sinh truởng phát triển Hoa Loa Kèn: Ở Việt nam, giống Hoa Loa Kèn phổ biến Lilium longiflorum Hance Giống sinh truởng phát triển tốt đất giàu hữu cơ, trung tính (pH = 6,5 - 7,0), thoát nước tốt để tránh thối củ, thối rễ Nhiệt độ thích hợp cho sinh trưởng, phát triển 16 - 17 oC, nhiệt độ thích hợp cho hoa 21 - 23oC Thời vụ chúng phụ thuộc vào giống khí hậu vùng Lilium longiflorum trồng đồng bằng, thời gian trồng vào đầu tháng 10 năm trước thu hoạch tháng 3, tháng năm sau Ở miền núi, trồng vào đầu thu (tháng 7), cho thu hoạch vào cuối xuân (tháng 1) , trồng vào tháng thu hoạch vào cuối tháng 6, tháng Hiện nay, người ta sử dụng số biện pháp xử lý củ giống hoa trái vụ vào dịp tết dương lịch, tết Nguyên Đán, 8/3… Như vậy, thấy rõ Hoa Loa Kèn xuất vào số thời vụ định năm Nếu có thêm giống làm phong phú thêm mùa vụ mà lại cho chất lượng hoa tốt điều đáng quý Do nhập nội giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo nêu Theo tài liệu nhà cung cấp, giống hoa loa kèn chịu nhiệt Lilium formolongo sinh trưởng, phát triển tốt đất nhiều mùn, có độ thống, tơi xốp, có pH = 5,5 - 6,5, điều kiện nhiệt độ từ 10 - 32 OC Nếu nhiệt độ ≤ 5OC làm ảnh hưởng đến chất lượng hoa, chí làm chết Cây hoa có chu kỳ sinh trưởng phát triển trải qua tháng tính từ gieo hạt đến thu hoạch Hạt gieo từ tháng 12 đến tháng năm sau -8- trồng đến tháng 5, cho thu hoạch hoa từ tháng đến tháng Nếu gieo hạt để trồng vào tháng hoa chậm Với đặc tính trên, Hoa Loa Kèn Lilium forrmolongo thích hợp với điều kiện khí hậu đất đai Việt Nam Nó phát triển chiếm ưu tình hình sản xuất hoa Khơng thế, cịn làm phong phú thêm mùa vụ để đáp ứng nhu cầu hoa ngày cao thị trường 2 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT, KINH DOANH HOA LOA KÈN TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM Tình hình sản xuất, kinh doanh Hoa Loa Kèn giới Hiện nay, giới, thị trường hoa sôi động, đặc biệt Hoa Loa Kèn Hoa Loa Kèn trồng phổ biến nhiều nước Hà Lan, Italia, Nhật bản, Trung Quốc… Thị trường hoa lớn phải kể đến Hà Lan Hoa Loa Kèn đứng thứ tổng số 10 loại hoa cắt sản xuất nhiều với doanh thu đạt 237 triệu guilder (Vereniging van Bloemenveillingen, 1993) Hàng năm, Hà Lan xuất hàng trăm triệu hoa cắt chậu Hoa Loa Kèn sang thị trường tiêu thụ 80 nước giới Ở Nhật Bản, diện tích trồng loại hoa có củ 1.558 hecta, cho tổng doanh thu hàng năm 33.047 triệu yên Nhật, riêng diện tích trồng Hoa Loa Kèn lên tới 508 hecta Hàng năm nước sản xuất 67 triệu củ giống, 157 triệu hoa cắt cho doanh thu 15.068 triệu yên Nhật(1991) -9- Ở Italia, Diện tích trồng hoa, năm 1996, 8000 hecta, riêng Hoa Loa Kèn chiếm từ 280 đến 300 hecta mang lại cho nước 71 triệu đôla Vào năm 1995, tổng giá trị sản lượng hoa giới đạt 20 tỷ đô la Trong Nhật Bản đứng đầu với 3,731 tỷ đôla, Hà Lan đạt 3,558 tỷ đô la, Mỹ đạt 3,270 tỷ đô la Từ năm 1999 đến năm 2003, tỉ lệ hoa cắt giới tăng - 9% so với năm trước đó, đem lại nguồn lợi nhuận 35 tỉ đơla Trong đó, tập trung nhiều nước Hungari, Trung Quốc, Nhật Bản, Hà Lan… Tình hình sản xuất, kinh doanh Hoa Loa Kèn Việt Nam: Ở Việt Nam, thị trường hoa nói chung Hoa Loa Kèn nói riêng ngày sơi động Để đáp ứng đủ nhu cầu tiêu thụ hoa nước xuất nước ngồi, nước ta có đầu tư định diện tích kinh phí cho phát triển vùng trồng hoa Năm 1993, theo điều tra Nguyễn Xuân Linh, Viện phó Viện di tuyền nơng nghiệp, tổng diện tích trồng hoa Việt Nam 1558 hecta Hiện nay, diện tích tăng lên khoảng 4.000 hecta tập trung chủ yếu Hà Nội, Lâm Đồng, Hải Phịng, TP Hồ Chí Minh Vĩnh Phúc, với sản lượng tỷ cành/năm, đem lại thu nhập trung bình đạt khoảng 130 triệu đồng/hecta (Theo Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn) Mỗi năm nước ta xuất hoa cảnh ước đạt triệu USD Như vậy, thấy rõ việc sản xuất kinh doanh hoa nước ta có chiều hướng tăng, ít, chưa có qui mơ hàng hố chưa thành ngành cơng nghiệp trồng hoa Vùng chuyên canh hoa lớn nước phải nói đến Đà Lạt với 590 hecta với sản lượng hoa năm 2002 300 triệu cành/năm Hiện nay, Đà Lạt có 1.000 hộ trồng hoa nhà kính, nhà lưới theo cơng nghệ mới, có hộ - 10 - CT 1,5 0,25 2.53 5,60 8,27 ++ CT 2,0 0,25 1,53 4,00 6,07 ++ CT 2,5 0,25 1,27 2,87 5,00 + CT 3,0 0,25 1.2 +++ Tốt (chồi to, mập, to, xanh đậm) 2,73 4,33 + ++ Trung bình (chồi nhỏ, trung bình, xanh nhạt) + Kém (chồi nhỏ, nhỏ, màu vàng, mọng nước, chồi dị dạng) Biểu đồ 1: ảnh hưởng BA α NAA đến hệ số nhân chồi in vitro  Nhận xét: sau tuần theo dõi, nhận thấy rằng: + Tất mẫu đưa vào nhân nhanh có khả tạo chồi, mơi trường khơng có bổ sung chất chất điều tiết sinh trưởng công thức đối đối chứng Tuy nhiên hệ số nhân chồi công thức đạt 2,87, ỉư công thức có phối hợp Auxin (α NAA) cytokinin (BA) hệ số nhân chồi đạt: 4,33 - 9,33 - 46 - + Khi sử dụng nồng độ α NAA = 0,25ppm BA thay đổi từ - 3ppm, thấy hệ số nhân đạt cao nồng độ BA = 1ppm, 9,33 Đây công thức cho chất lượng chồi tốt nhất: chồi sinh trưởng tốt, chiều cao ≥ 3,5cm, to, xanh đậm, hẳn công thức đối chứng công thức khác + Khi nồng độ BA tăng dần hệ số nhân giảm dần, đồng thời chất lượng chồi nồng độ BA = 3ppm chồi đạt kích thước ≤ 2cm, nhỏ, xanh nhạt có tượng biến dạng: chồi khơng có đỉnh sinh trưởng Như cách phối hợp hợp lý tỷ lệ BA α NAA ta hồn tồn chủ động điều khiển q trình nhân nhanh theo ý muốn để tạo lượng chồi cần thiết chồi có chất lượng tốt 4.2.2 Thí nghiệm 2: Nghiên cứu tạo rễ cho chồi in vitro Muốn tạo thành hoàn chỉnh để đưa mơi trường tự nhiên điều kiện cần thiết phải có rễ Các chồi hình thành giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu giai đoạn nhân nhanh có chất lượng tốt chưa có rễ Do q trình tạo rễ cho chồi in vitro khơng thể thiếu Nhằm tìm mơi trường rễ tối ưu cho chồi Hoa Loa Kèn, chúng tơi tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng Auxin (α NAA) than hoạt tính đến dự hình thành rễ chất lượng rễ chồi in vitro Nguyên liệu cho thí nghiệm chồi thu sau thí nghiệm tạo vật liệu khởi đầu thí nghiệm nhân nhanh đạt tiêu chuẩn chiều cao ≥ 3,5cm có - trở lên - 47 - a Thí nghiệm 2.1: Nghiên cứu ảnh hưởng α NAA đến khả rễ chồi in vitro: Trong môi trường nuối cấy, sử dụng Auxin với hàm lượng thấp có tác dụng khích thích mẫu cấy hình thành rễ Ngược lại, hàm lượng auxin cao lại kìm hãm phát sinh hình thái bình thường kích thích hình thành mô sẹo (theo Rhojwani Razdan, 1983) Để tiến hành nghiên cứu tạo rễ cho chồi Hoa Loa Kèn Lilium formolomgo, chúng tơi tiến hành thí nghiệm mơi trường có bổ sung α NAA chất điển hình nhóm auxin với nồng độ khác từ 0,1 - 0,5ppm Kết thu bảng CT ĐC α-NAA (ppm) Tuần % Số rễ rễ TB/cây 57.14 Tuần % Số rễ rễ TB/cây 85.71 2.26 Nhận xét + 0,1 76.19 3.42 100 6.47 ++ 0,25 85.71 3.67 100 11.67 +++ 0,5 52.38 1.05 100 5.43 ++ Bảng 6: ảnh hưởng α NAA đến hình thành rễ chồi in vitro +++ Tốt (rễ to, mập, dài) ++ Trung bình (rễ nhỏ, dài) + Kém (rễ xốp, mọc thành búi) - 48 - 12 10 Tuần Tuần 4 ĐC CT CT CT Biểu đồ 2: ảnh hưởng α-NAA đến rễ chồi in vitro  Nhận xét: theo dõi thí nghiệm sau tuần ni cấy, chúng tơi nhận thấy: + α-NAA có ảnh hưởng rõ rệt đến hình thành rễ chồi Hoa Loa Kèn Các cơng thức có bổ sung α-NAA cho tỷ lệ rễ đạt 100% sau tuần nuôi cấy, tỷ lệ công thức đối chứng đạt 85.71% + Số rễ trung bình/mẫu tăng cơng thức có bôt sung αNAA, dao động từ 5,43 - 11,67 Khi cơng thức đối chứng cho số rễ trung bình thấp: 2,26 + Nồng độ α-NAA = 0,25ppm tỏ tối ưu cho hình thành rễ chồi in vitro Số rễ trung bình đạt sau tuần nuôi cấy lên tới 11,67 Theo quan sát công thức cho chất lượng chồi tốt nhất: rễ to, dài, nhiều lông hút Kết lần chứng minh α-NAA chất thuộc nhóm auxin có tác dụng định đến phân hoá mầm rễ mẫu cấy - 49 - b Thí nghiệm 2.2: Nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính( Cht) đến khả rễ chồi in vitro: Than hoạt tính sử dụng rộng rãi nghiên cứu tạo rễ cho chồi in vitro Đã có nhiều tác giả nghiên cứu khẳng định điều Từ năm 1963, Jacquens Homes sử dụng than hoạt tính để kích thích rễ ni cấy địa lan Than hoạt tính nồng độ 0,8g/l rút ngắn thời gian rễ chuối từ 15 xuống 10 ngày (Nguyễn Quang Thạch cộng sự, 1994) Than hoạt tính nồng độ 1g/l có tác dụng kích thích rễ tập trung, cho chất lượng rễ tốt dứa (Nguyễn Thị Nhẫn, 1995) Để nghiên cứu vai trị than hoạt tính mơi trường tạo rễ Hoa Loa Kèn Lilium formolomgo, tiến hành bổ than hoạt tính vào mơt trường tạo rễ cho chồi in vitro với hai nồng độ 0,5 1g/l Kết sau tuần nuôi cấy trình bày bảng Bảng 7: ảnh hưởng than hoạt tính đến khả rễ chồi in vitro CT Cht (g/l) Tuần Số rễ % rễ TB/cây 57.14 Số rễ % rễ TB/cây 85.71 2.26 Nhận xét ĐC 0,5 76.19 1.66 100 3.05 +++ 1,0 76.19 1.95 100 4.33 +++ +++ Tốt (rễ to, mập, dài) ++ Trung bình (rễ nhỏ, dài) - 50 - + + Kém (rễ xốp, mọc thành búi) Biểu đồ 3: ảnh hưởng than hoạt tính đến rễ Chồi in vitro  Nhận xét: + Sau tuần nuôi cấy, cơng thức có sổ sung Cht đạt tỷ lệ rễ 100%, công thức tỷ lệ 5,71% + Hàm lượng Cht = 1g/l tỏ có ưu với số chồi trung bình/mẫu = 4,44, cịn hàm lượng Cht = 0,5g/l số chồi trung bình 3,05 + Theo quan sát chúng tôi, tác dụng Cht không cho số lượng rễ nhiều chất lượng rễ tốt, rễ to, khoẻ Như thấy rễ chồi Hoa Loa Kèn nghiên cứu tương đối thuận lợi cần bổ xung lượng than hoạt tính mà khơng cần chất điều tiết sinh trưởng (Auxin) tạo chồi với rễ phát triển tốt, chất lượng cao c Thí nghiệm 2.3: Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp α NAA than hoạt tính (Cht) đến khả rễ chồi in vitro: - 51 - Năm 1998, Nguyễn Thị Phương Thảo bổ sung 0,3g/l than hoạt tính vào mơi trường rễ có tác dụng cải thiện rễ Hoa Loa Kèn màu Chúng tiến hành sử dụng tổ hợp α NAA than hoạt tính đến khả tạo rễ cho chồi in vitro Kết trình bày bảng Bảng 8: ảnh hưởng tổ hợp α-NAA than hoạt tính đến rễ chồi in vitro Tuần Số rễ % TB/câ rễ y 57.14 Tuần Số rễ % TB/câ rễ y 85.71 2.26 α-NAA (ppm) Cht (g/l) 0 0,1 0,5 66.67 1.38 100 3.71 + 0,25 0,5 80.95 1.62 100 5.71 +++ 0,5 0,5 52.35 1.43 100 4.0 + 0,1 47.62 0.86 100 3.81 + 11 0,25 66.67 1.43 100 4.95 ++ 12 71.43 1.62 100 4.76 ++ CT ĐC 10 0,5 Nhận xét +  Nhận xét: + Sự bổ sung kết hợp auxin Cht môi trường tạo rễ cho chồi in vitro cho tỷ lệ rễ đật 100% sau tuần nuôi cấy Đồng thời chất lượng rễ hầu hết công thức tốt, rễ to, khoẻ đảm bảo cho phát triển tốt ngồi mơt trường tự nhiên - 52 - + Công thức tỏ ưu nồng độ α NAA = 0,5ppm, kết hợp với Cht cho số rễ trung bình/chồi cao, 5,71 với hàm lượng Cht = 0,5g/l 4,95 với hàm lượng Cht = 1g/l   Nhận xét chung qua ba thí nghiệm tạo rễ cho chồi Hoa Loa Kèn : Việc tạo rễ từ chồi in vitro Hoa Loa Kèn chúng tơi sử dụng α-NAA nồng độ thấp: 0,25 ppm Cht hàm lượng 0,1 hay 1g/l riêng rẽ kết hợp với cho chất lượng rễ đạt tiêu chuẩn: to, dài, khoẻ 4.2.3 Thí nghiệm 3: Nghiên cứu giá thể thích ứng in vitro ngồi vườn ươm Kết thúc q trình tạo hồn chỉnh, in vitro lúc đạt tiêu chuẩn chiều cao(≥ 3,5cm), số (từ - trở lên), có rễ tốt (có ≥ - chiếc)sẽ đưa trồng vườn ươm Đây giai đoạn định khả ứng dụng đề tài vào thực tiễn sản xuất Trước trồng đồng ruộng sản xuất, in vitro vốn sống môi trường nhân tạo, thuận lợi hoàn toàn dinh dưỡng, nhiệt độ, ánh sáng, độ ẩm Muốn in vitro tồn sinh trưởng tốt ngồi mơi trường tự nhiên việc thích ứng chúng quan trọng Do tiến hành thí nghiệm tìm giá thể thích hợp để thích ứng in vitro Giá thể thích hợp cho in vitro giá thể cho tỷ lệ sống cao nhất, sinh trưởng, phát triển tốt Để nghiên cứu vấn đề này, tiến hành trồng cây nên giá thể với vật liệu trấu hun đất Kết theo dõi sau tuần trình bày bảng Bảng 9: ảnh hưởng giá thể đến khả thích ứng in vitro (sau tuần theo dõi) - 53 - CT Giá thể Tỷ lệ sống (%) Trấu hun 100 Đất 66,67 Trấu hun + đất = 1:1 98,67  Nhận xét: + Giá thể khác có ảnh hưởng định đến tỷ lệ sống in vitro đưa từ ống nghiệm ngồi mơi trường tự nhiên Qua kết nhận thấy giá thể trấu hun thích hợp cho Hoa Loa Kèn con, với tỷ lệ sống đạt 100% Giá thể trấu đất kế hợp theo tỷ lệ 1:1 cho tỷ lệ sống trung bình 86,67% Cịn giá thể đất cho tỷ lệ sống thấp nhất, 66,67% + Sở dĩ giá thể trấu hun cho tỷ lệ sống cao trấu có độ xốp, thống, đễ nước, thích hợp để trì rễ cịn non chồi in vitro + Chất lượng đạt cao cơng thức giá thể này, có thời gian phục hồi thích nghi nhanh, sinh trưởng tốt Cây in vitro sau trồng giá thể tốt trấu hun khoảng tuần đưa trồng điều kiện sản xuất 4.2.4 Thí nghiệm 4: Theo dõi đánh giá sinh trưởng phát triển in vitro 4.2.4 Theo dõi sinh trưởng phát triển in vitro sau tháng trồng - 54 - Cây Hoa Loa Kèn in vitro sau trồng thích nghi vườn ươm, chúng tơi tiến hành chuyển trồng điều kiện sản xuất Nền đất trồng chuẩn bị sẵn theo tỷ lệ đất + trấu hun + phân chuồng theo tỷ lệ 1:1:1/2 Đánh giá sinh trưởng phát tiển in vitro sau tuần trồng thu kết bảng10 Bảng 10: Kết theo dõi sinh trưởng phát triển in vitro sau tuần trồng Chiều cao (cm) Số (chiếc) 16,03 14,13 Nhận xét   Nhận xét: Cây in vitro sau hai tháng trồng có tỷ lệ sống 100%, sinh trưởng phát triển tốt, có chiều cao trung bình = 16,03cm, số trung bình/cây = 14,13 Bộ có màu xanh đậm, bóng 4.2.4 Đáng giá chất lượng Hoa Loa Kèn in vitro Song song với việc nhập củ giống Hoa Loa Kèn Lilium formolongo để tạo nguộn vật liệu ban đầu cung cấp cho nghiên cứu tái sinh qua nuôi cấy mơ - tế bào thực vật chúng tơi nhập nội lượng giống ươm từ hạt Cây giống chúng tơi nhập vè gồm dịng A, B C Chúng tiến hành trồng khảo nghiệm từ tháng năm 2003 Đến nay, sinh trưởng, phát triển tốt, thân mập mạp, cao khoảng 130 – 160cm, có to, xanh đậm Đặc biệt có tính chịu nhiệt, sinh trưởng phát triển điều kiện nhiệt độ cao từ 15 – 32OC cho hoa mùa hè Hiện có số hoa sớm, hoa trắng, cánh hoa dày, đế hoa thẳng đứng Chăc chắn - 55 - khoảng thời gian tới hoa đồng loạt vào khoảng tháng đến tháng Những đăc điểm hồn tồn phù hợp với khuyến cáo nhà cung cấp Nhằm đánh giá chất luợng sản phẩm trình tái sinh qua nuôi cấy mô - tế bào thực vật, tiến hành so sánh in vitro với ươm từ hạt giống nhà sản xuất giống cung cấp Cây ươm từ hạt Bảng 11: kết theo dõi sinh trưởng phát triển Giống ươm từ hạt sau tuần trồng Dòng Chỉ tiêu Chiều cao (cm) Số (chiếc) A B C 17.40 17,10 12,60 16,10 14,60 11,80 4.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO CAL TỪ MÔ LÁ: Một hai sở tế bào học quan trọng nuôi cấy mô tế bào tượng phân hố phản phân hóa Từ tế báo phơi sinh ban đầu chun hố thành tế bào đảm nhiệm chức khác gọi q trình phân hố Trong số trường hợp, tế bào chun hố chuyển hố trở lại thành tế bào phơi sinh, q trình phản phân hố Hiện tượng tạo cal tế bào q trình phản phân hoá Cal - 56 - khối tế bào phôi sinh từ tế bào lại phân hố theo định hướng Thơng thường, nguồn cal sử dụng để phục vụ công tác chọn tạo giống kỹ thuật đại chuyển gen, dung hợp tế bào, đột biến…Chúng tiến hành nghiên cứu hệ thống tái sinh qua cal hoa loa kèn Sử dụng mô làm vật liệu nuôi cấy sử dụng thành công số đối tượng hoa cúc, thuốc lá, khoai tây Đối với hoa loa kèn việc sử dụng mơ khơng tạo cal mà cịn vật liệu khởi đầu có ý nghĩa cho hệ số nhân cao Chúng sử dụng mô non để làm nguồn ngun liệu cho thí nghiệm Các mơ cắt thành đoạn theo chiều ngang với độ dài 1cm, gây tổn thương phần mép cấy vào môi trường chuẩn bị sắn Chất điệu tiết sinh trưởng để cảm ứng tạo cal BA kết hợp với α NAA 2,4D 4.3.1.1 Thí nghiệm 1: ảnh hưởng tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng BA α NAA đến khả tạo cal từ mô Chúng tiến hành thí nghiệm với nồng độ α NAA BA tăng dần từ - 5ppm Kết sau 10 tuần ni cấy trình bày bảng 10 Bảng 10: ảnh hưởng tổ hợp BA đến khả tạo cal từ mô lá: CT Chất ĐTST (ppm) Chi tiêu theo dõi % mẫu chết 100 % mẫu % mẫu Hệ số tạo cal tái sinh tái sinh 0 0,1 23,80 28,57 BA α NAA ĐC CT 1 - 57 - 71,43 7,13 CT 2 0,1 38,10 52,38 42,86 5,17 CT 3 0,1 57,14 33,33 23,80 3,22 CT 4 0,1 61,90 23,80 19,05 2,57 CT 5 0,1 85,71 14,29 14,29 1,67  Nhận xét: Sử dụng 0,1ppm α NAA kết hợp với BA nồng độ thay đổi có ảnh hưởng khác đến q trình phát sinh hình thái mơ Chúng chết, tạo cal, tạo chồi vừa tạo cal vừa tạo chồi + Khi kết hợp 0,1 α NAA với nồng độ BA thấp tỏ hiệu với việc tạo chồi trực tiếp từ mô Khi BA = 1ppm, tỷ lệ tái sinh đạt 71,43%, với hệ số tái sinh đạt cao 6,71 Ở nồng độ có tạo thành mơ sẹo với tỷ lệ không cao đạt 28,57%, tỷ lệ mẫu chết thấp (23,8%) + Nồng độ thích hợp cho việc tạo cal α NAA = 0,1ppm BA = 2ppm Công thức cho tỷ lệ tạo cal cao 52,38% Tỷ lệ tạo chồi nộng độ giảm xuống 61,90%, hệ số tái sinh giảm, 4,95 + Khi sử dụng 0,1ppm α NAA với nồng độ BA tăng cao (>3ppm) gây ức chế phát sinh hình thái mẫu làm mẫu chết Lượng mẫu tạo cal tái sinh giảm rõ rệt, lượng mẫu chết tăng cao.Tỷ lệ tạo cal giảm từ 23,8 đến 14,29, tỷ lệ tạo chồi giảm từ 19,05 xuống 14,29 tương ứng với nồng độ BA 5ppm Trong tỷ lệ mẫu chết tăng từ 57,14% đến 85,71% với nồng độ BA tương tự + Cal hình thành tác dụng tổ hợp α NAA BA có màu xanh khối đặc - 58 - Như kết luận viếc sử dụng tổ hợp chất điều tiết sinh trưởng α NAA BA tạo cal từ mơ đồng thời sử dụng chất điều tiết sinh trưởng để tạo chồi cho ni cấy in vitro 4.3.1.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng 2,4 D đến khả tạo cal từ mơ Thí nghiệm chúng tơi tiến hành với nòng độ 2,4D tăng dần từ – 5ppm Kết sau 10 tuần nuôi sấy trình bày bảng 11 Bảng 11: ảnh hưởng 2,4D đến khả tạo cal từ mô % mẫu chêt 100 Chỉ tiêu theo dõi % mẫu % mẫu tạo cal tái sinh 0 CT 1 19,04 23,81 0 CT 2 28,57 38,10 0 CT 3 38,10 61,90 0 CT 4 66,67 33,33 0 CT 5 100 0 CT 2,4D(ppm) ĐC Hệ số tái sinh  Nhận xét: Sử dụng 2,4D tỏ hiệu việc tạo cal từ mô Với nồng độ 2,4D khác cho tỷ lệ tạo cal khác Công thức đối chứng không sử dụnh 2,4D tỷ lệ mẫu chết 100% + Với nồng độ 2,4D = 1ppm có tượng tạo cal với tỷ lệ thấp, đạt 28,81% + Nồng độ 2,4D = 3ppm cho tỷ lệ mẫu tạo cal cao 61,9% - 59 - + Khi nồng độ 2,4D tăng lên ức chế trình phát sinh hình thái mẫu cấy, tỷ lệ tao cal giảm đi, tỷ lệ mẫu chết tăng Ở nồng độ 2,4D cao (= 5ppm) 100% mẫu chết + Cal tạo tác động 2,4D có màu vàng, có dạng khối sùi xốp   Qua hai thí nghiệm tạo cal từ mơ lá, chúng tơi nhận thấy việc sử dùng 2,4D kết hợp α NAA BA tạo cal Mặt khác phối hợp hợp lý tỷ lệ α NAA BA cịn tái sinh chồi trực tiếp từ mô hay qua cal - 60 - ... THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 3.2.1 Đối tượng nghiên cứu: Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo 3.2.2 Vật liệu nghiên cứu: củ giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo nhập từ Côn Minh, Trung... tiêu dùng xuất CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CÂY HOA LOA KÈN Các phương pháp nhân giống Hoa Loa Kèn: Kỹ thuật nhân giống Hoa Loa Kèn đồng ruộng (in vivo ): - 11 - a Nhân giống hạt: Cây sau hoa đậu Quả già,... giống Hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo phương pháp nuôi cấy in vitro ” -3- MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU: Mục đích: Xây dựng quy trình cơng nghệ nhân giống hoàn chỉnh Hoa Loa Kèn Lilium formolongo,