Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong lá cây lược vàng ở tỉnh quảng nam

1 B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Đ I H C ĐÀ N NG Cơng trình đư c hoàn thành t i Đ I H C ĐÀ N NG Ngư i hư ng d n khoa h c: PGS TS PH M VĂN HAI TR N TH ÁNH H NG Ph n bi n 1: PGS TS LÊ T NGHIÊN C U CHI T TÁCH VÀ XÁC Đ NH THÀNH PH N HÓA H C TRONG THÂN VÀ LÁ CÂY LƯ C VÀNG T NH QU NG NAM Chuyên ngành: Hóa H u Cơ Mã s : 60 44 27 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C Đà N ng- Năm 2011 H I Ph n bi n 2: PGS TS LÊ TH LIÊN THANH Lu n văn s ñư c b o v t i H i ñ ng ch m lu n văn t t nghi p th c sĩ khoa h c h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày 24, 25, 26 tháng năm 2011 Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm thông tin- H c li u, Đ i h c Đà N ng - Thư viên trư ng Đ i h c sư ph m, Đ i h c Đà N ng M Đ U M c đích nghiên c u Đ t v n ñ Xác ñ nh thành ph n hóa h c thân Lư c vàng Vi t Nam n m vùng khí h u nhi t đ i gió mùa nên có Qu ng Nam ngu n th c v t vơ phong phú đa d ng sinh h c v i nhi u ñư c dùng làm dư c li u quý Nhi u h p ch t thiên nhiên tách ñư c Phân l p xác ñ nh c u trúc c a m t s c u t có thân Lư c vàng t thu c th hi n ho t tính ch a b nh r t đ c đáo Th ho t tính sinh h c c a d ch chi t t c u t ñã tách m t nh ng ñ nh hư ng ñ ngư i có th t ng h p tìm đư c nhi u lo i thu c m i Phương pháp nghiên c u Hi n nay, Y h c dân gian ñang quan tâm nhi u t i Lư c Nghiên c u lý thuy t vàng V m t th c v t h c, Lư c vàng có tên khoa h c Callisia Phương pháp chi t fragrans, h Thài Lài (Commelinaceace) G n ñây, thông tin Phương pháp xác ñ nh ch s v t lý hóa h c ñ i chúng, Lư c vàng ñư c xem m t “th n dư c” tr bách b nh m n nh t, d ng, ñau h ng, ñau răng, ñ n nh ng b nh nan y ung thư, ti u ñư ng… Trong ñó cho ñ n nay, th gi i, có chưa nhi u công b khoa h c v thành ph n hóa h c tác d ng sinh h c c a loài này, ch y u tài li u c a Liên bang Nga ñ c p v kinh nghi m s d ng Lư c vàng phòng ch a b nh T i Vi t Nam, m i có m t vài cơng trình nghiên c u sơ Phương pháp xác đ nh thành ph n hóa h c, ñ nh danh, tách phân l p, xác ñ nh c u trúc c u t b ng phương pháp s c ký khí ghép kh i ph (GC-MS) , s c ký c t (SKC), s c ký b n m ng (SKBM),1H-NMR, 13 C-NMR, DEPT, COSY, HMBC, HSQC Ý nghĩa khoa h c th c ti n c a ñ tài T nghiên c u trên, lu n văn ñã thu ñư c m t s k t qu b v th c v t V n đ chúng tơi ñ t nghiên c u hóa th c v t sâu v Lư c vàng ñ xác đ nh thành ph n hóa h c c a làm s v i nh ng đóng góp thi t th c sau: Cung c p thơng tin khoa h c v thành ph n, c u t o m t s h p ñ xu t s d ng thích h p h u hi u ñ ng th i giúp ngư i dân ch t ho t tính sinh h c có d ch chi t thân Lư c Vi t Nam Nh m góp ph n đóng vàng góp ph n nâng cao giá tr s d ng c a Lư c vàng, nh m b o t n, phát tri n thu c m i góp m t ph n nh bé hi u bi t thêm v thành ph n hóa h c c a thu c dân gian này, ñ xu t th c hi n ñ tài: “Nghiên c u thành ph n hóa h c c a Lư c vàng (Callisia fragrans), t nh Qu ng Nam” ñ nh hư ng cho vi c quy ho ch khai thác sau Thăm dò ho t tính sinh h c c a ch t phân l p ñư c ñ ñ nh hư ng cho vi c ng d ng th c t B c c lu n văn 1.1.5 Callisia ornata (small) G C Tucker Lu n văn g m 68 trang, có b ng 11 hình Ph n m ñ u trang, k t lu n trang tài li u tham kh o trang 1.1.6 Callisia repens (Jacquin) Linnaeus1.1.6 Callisia repens (Jacquin) Linnaeus N i dung lu n văn chia làm chương: 1.1.7 Callisia rosea (Ventenat) D.R Hunt Chương 1: T ng quan 1.1.8 Callisia navicularis (Ortgies) D R Hunt Chương 2: Nh ng nghiên c u th c nghi m 1.1.9 Callisia Coleotrype Chương 3: K t qu th o lu n 1.1.10 Callisia Dichorisandra CHƯƠNG I: T NG QUAN 1.2 THÀNH PH N HÓA H C TRONG TH C V T CHI CALLISIA 1.1 KHÁI QUÁT V CÁC TH C V T CHI CALLISIA Trong chi Callisia nhà khoa h c ñã phân l p ñư c t lồi Cây Lư c vàng có tên khoa h c (Callisia fragrans) thu c chi Callisia fragrans flavonoit, glucosid, coumarin có ho t tính sinh Callisia thu c h Thài Lài (Commelinaceace) Trên th gi i h Thài lài có 40 chi 625 lồi s ng ch y u vùng nhi t ñ i, m t s s ng đ i nóng Cây phân b vùng c n nhi t đ i ơn bãi hoang, ñ t m, b nư c, m t s h c cao m t s h p ch t khác axit phenolic, ñư ng, axit amin, pectin, tanin Ngồi ra, cịn ch a nguyên t K, Ca, Mn, Co, Ni, Cu, Zn, Zr…[12, 13, 14, 15, 16, 27, 28] Nh ng nghiên c u v loài khác chi Callisia làm c nh [25, 26, 27] Vi t Nam theo th ng kê c a nhà th c v t h c h có 15 chi 47 lồi [2], theo Ph m Hồng H cơng b h cịn khiêm t n đư c ñ c p 1.3 V CÂY LƯ C VÀNG ( RIA VÀNG, LAN VÒI ) Commelinaceae g m 13 chi v i 60 lồi [3] Cịn theo cơng trình 1.3.1 Đ c m th c v t h c, phân b “Danh m c loài th c v t Vi t Nam” t p nhà khoa h c Cây Lư c vàng có ngu n g c thu c Trư ng Đ i h c qu c gia Hà n i Vi n Sinh thái Tài Nga, r i ñ n Vi t Nam (ñi m ñ n ñ u tiên t nh Thanh Hoá) Nay nguyên sinh v t ñã th ng kê h có 15 chi v i 58 lồi [1] phát tri n nhanh, r ng nhi u t nh thành khác c nư c Đ c ñi m m t s lồi thu c chi Callisia đư c cho th c v t có r t nhi u tác d ng ñi u tr b nh khác 1.1.1 Callisia fragrans (Lindl.) Woodson 1.1.2 Callisia cordifolia (Swartz) E S Anderson & Woodson Cây Lư c vàng có tên khoa h c Callisia fragrans thu c h 1.1.3 Callisia graminea (Small) G C Tucker Commelinaceace nhà khoa h c R.E Woodson xác ñ nh t năm 1.1.4 Callisia micrantha (Torrey) D R Hunt Mexico, ñư c di th c sang Liên bang 1942 T i Vi t Nam, ñư c Ti n sĩ Tr n Văn Ơn – B môn th c v t- Trư ng Đ i h c Dư c Hà N i xác ñ nh tên khoa h c 2.1.2 N i dung nghiên c u Xác ñ nh hàm lư ng nư c m u Lư c vàng Callisia fragrans (Lindl.) Woodson Ngoài ra, dân gian g i b ng tên khác như: Lan vòi, Lan rũ, Đ a lan vòi, Ria vàng, Vàng ria mép, … tươi Thu nh n d ch chi t c n chi t c a Lư c vàng v i 1.3.2 Đ c ñi m sinh thái [10], [25], [27] dung mơi có đ 1.3.2.1 D ng metanol Cây Lư c vàng th o nhi u năm, thân m ng nư c, có th dài t i 1m, phân nhánh t thân g c vịi vươn ngồi 1.3.2.2 Lá Lá Lư c vàng m c t p trung ng n thân, r i rác phía dư i, d ng mác thuôn, dài 18 – 25 cm, r ng 3,5 – cm, cu ng có gân rõ, ơm thân, có lơng m n thư ng có s c tía phân c c tăng d n: n- hexan, etyl axetat, Kh o sát đ nh tính l p ch t có c n chi t c a Lư c vàng Th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh ñ i v i m t s c n chi t Phân l p xác ñ nh c u trúc hóa h c b ng phương pháp ph hi n ñ i (IR, EI-MS, HR-MS, 1D 2D-NMR, ) m t s 1.3.2.3 C m hoa Hoa m c thành c m – hoa d ng xim phát hoa hình chuỳ dài t i 60cm , m i c p xim đư c ơm b i b c d ng cưa (3 h p ch t s ch t c n chi t 2.1.3 Phương pháp nghiên c u răng) dài 10 – 15cm Lá ñài su t, màu tr ng, khô xác, d ng Phương pháp thu hái x lý m u nghiên c u mác, dài – mm Cánh hoa bóng, su t, màu tr ng, m ng, có 2.Phương pháp ngâm chi t ñ thu nh n d ch chi t, sau d ng tr ng h p Nh Ra hoa vào mùa xn đu i dung mơi b ng thi t b c t quay 1.3.3 50 0C) ñ thu nh n c n chi t ng d ng c a Lư c vàng Phương pháp hóa h c thích h p đ nh tính l p ch t t 1.3.4 Tình hình nghiên c u v Lư c vàng 1.3.4.1 Tình hình nghiên c u Lư c vàng th gi i 1.3.4.2 Tình hình nghiên c u Lư c vàng Vi t Nam CHƯƠNG II: TH C NGHI M 2.1 Đ I TƯ NG, N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN Lư c vàng Phương pháp s c ký như: s c ký c t(CC), s c ký l p m ng (TLC) phương pháp k t tinh phân ño n ñ phân l p ch t t d ch chi t Phương pháp v t lý hi n ñ i ñ xác ñ nh c u trúc như: Ph C U h ng ngo i (IR), Ph kh i va ch m electron (EI-MS), ph kh i lư ng 2.1.1 Đ i tư ng nghiên c u - Đ i tư ng nghiên c u: Lá Lư c vàng tr ng áp su t gi m, nhi t ñ th p (< t nh Qu ng Nam phân gi i cao (FT-ICR-MS), ph c ng hư ng t h t nhân: 1H- NMR, 13C- NMR, DEPT, ph 1D 2D-NMR, … 10 2.2 D NG C , HOÁ CH T VÀ THI T B NGHIÊN C U 2.3.2 Xác ñ nh hàm lư ng nư c m u Lư c vàng tươi 2.2.1 D ng c 2.3.3 Kh o sát đ nh tính l p ch t c a thân Lư c vàng 2.2.2 Hóa ch t c n chi t 2.2.3 Thi t b nghiên c u 2.3.3.1 Đ nh tính h p ch t sterol 2.3 TH C HI N NGHIÊN C U 2.3.3.2 Đ nh tính ancaloid 2.3.1 Phương pháp x lý m u chi t tách 2.3.3.3 Đ nh tính flavonoid 2.3.1.1 Thu hái s lý m u nghiên c u 2.3.3.4 Đ nh tính coumarin 2.3.1.2 Ngâm chi t m u nghiên c u 2.3.3.5 Đ nh tính glycosid tim Sơ đ 2.1: Sơ ñ ngâm chi t m u Lư c vàng (Callisia 2.3.3.6 Đ nh tính saponin 2.4 TH fragrans) HO T TÍNH KHÁNG VI SINH V T KI M Đ NH 2.5 PHÂN L P VÀ TINH CH CÁC CH T M u Lư c vàng khô nghi n nh (1,2 kg) 2.5.1 Phân l p tinh ch ch t t c n chi t n-hexan Đ phân l p ch t t d ch chi t n-hexan c a Lư c Chi t 5×5l n-hexan Ki t đu i dung mơi vàng, s d ng phương pháp s c ký c t L y 18,4g c n chi t n-hexan cho lên c t có khóa nút th y C n n-hexan (HLVH)(18,4g ) C n EtOAc (HLVE)(45,3g) C n MeOH (HLVM) (109,6g) Bã I Chi t 5×5l EtOAc Ki t đu i d/ mơi tinh đ u cu i c t ñã ñư c nh i t silicagen n ñ nh L n lư t r a gi i c t b ng h dung môi n-hexan:etyl axetat v i t l etyl axetat tăng d n t 0% ñ n 100% D ch r a ñư c thu l i phân ño n khác nhau, theo dõi trình r a gi i b ng s c ký l p Chi t 5×5l MeOH Ki t đu i d/ mơi m ng (SKLM) Các phân ño n gi ng ñư c g p l i v i Bã II ñem c t ñu i dung môi Các phân ño n có c u t đư c tinh ch b ng phương pháp k t tinh l i ki m tra ñ tinh t b ng s c ký l p Lo i b Bã III m ng, đo nhi t đ nóng ch y Trong q trình ti n hành phân l p s c ký c t c a c n n-hexan thu ñư c nh ng ch t sau: 11 12 2.5.1.1 H p ch t HLVH1 (h n h p triterpenoid) R a gi i c t b ng h dung môi n- hexan:etyl axetat 50:1 thu ñư c l axeton thu đư c tinh th khơng màu, nóng ch y 155 – 1570C, [α]25D có ch a d ch khơng màu, th b n m ng ch y v i h dung mơi đ nh c u trúc c a HLVH3 H:E = 8:1 Soi thi t b ñèn UV đ xác đ nh ch t có th Sau đó, phun thu c th Vanilin + H2SO4 s y 100 0C th y xu t hi n v t trịn màu h ng có Rf = 0,6 2.5.2 Phân l p tinh ch ch t t c n chi t etyl axetat Làm tương t m c 2.5.1, l y 25g c n etyl axetat thơ đem tách c t silicagen R a gi i c t b ng h dung mơi cloroform: Đ bay h t dung mơi thu đư c ch t r n vơ đ nh hình màu tr ng, k t tinh l i metanol thu đư c tinh th hình kim (3mg), có metanol có t l tăng d n t – 100%, d ch r a gi i thoát t c t thu nh ng kho ng cách nh (5- 10 ml/ phân ño n) Ki m tra c n thu ñư c b ng s c ký l p m ng hi n màu thu c th b ng Vanilin– nhi t đ nóng ch y 160 – 163 C Do lư ng ch t thu ñư c ít, ch ghi ñư c ph = - 430 (c=0,05; CHCl3), Rf = 0,52 Sau ti n hành đo ph ñ xác H, 13C- NMR c a HLVH1 Trên s s li u ph NMR, ch t HLVH1 đư c d đốn h n h p c a triterpen 2.5.1.2 H p ch t HLVH2 (β-sitosterol) Ti p t c r a gi i b ng h dung môi n- hexan:etyl axetat 30:1 thu ñư c kh i ch t r n màu tr ng, hình kim, có kh i lư ng 72,3mg, H2SO4 10%, sau phân đo n gi ng ñư c d n l i r i ñem c t lo i dung mơi, thu đư c nh ng ch t sau: 2.5.2.1 H p ch t HLVE2 Ti p t c r a gi i c t b ng h dung mơi cloroform: metanol 9:1, thu đư c ch t r n màu tr ng kí hi u HLVE2 có Rf = 0,5 h cloroform: metanol = 7:1, kh i lư ng 26 mg Ít tan metanol, hi u xu t 6,03x10-3% Tan t t cloroform, metanol có nhi t clorofom s ch, tan t t h dung môi cloroform : metanol / đ nóng ch y 136 – 1380C Trên b n m ng v i h dung môi H : E = 1:1 Đi u ch ng t h p ch t HLVE2 h p ch t g m ph n: 4: 1, sau phun thu c th s y th y màu tím ñen Rf = 0,65 ph n có ch a nh ng g c phân c c (các nhóm hidroxy-OH) m t Sau ti n hành đo ph ñ xác ñ nh c u trúc c a HLVH2 ph n g m chu i ankyl m ch dài không phân c c 2.5.1.3 H p ch t HLVH3 (stigmasterol) Ti p t c r a gi i c t b ng h dung môi n- hexan:etyl axetat theo t l 5:1 thu ñư c kh i ch t r n vơ đ nh hình Tinh ch l i kh i ch t c t silicagen c h t 0,040 – 0,063 mm, dùng h dung môi r a gi i n- hexan: etyl axetat theo t l 5:1 thu đư c dung d ch khơng màu Ch m d ch h ch y b n m ng n- hexan: etyl axetat = 2:1 th y xu t hi n v t tròn màu xanh lơ Đem k t tinh l i L y mg ch t HLVE2, 15 ml metanol vào bình c u 50ml có nút nhám N29, thêm vào 2ml pyridin, ml anhydrid axetic (Ac2O) khu y ñ u nhi t đ phịng, ph n ng th c hi n qua ñêm Sau k t thúc ph n ng, (ki m tra s c ký l p m ng v i h dung môi nhexan/etylaxetat theo t l 5:1), thêm vào 10ml nư c, l c ñ u trung hồ b ng HCl (pH=7), sau chi t 3x20 ml CHCl3, làm khan 14 13 d ch chi t c t lo i dung môi thu đư c c n tinh th hình kim, khơng màu, kh i lư ng 3,4 mg, ký hi u Peracetyl-HLVE2 L y 20 mg ch t HLVE2 vào bình c u đáy trịn (50 ml), thêm Hồ tan m u ch t r n vào nư c r i cho tác d ng v i dung d ch AgNO3 n u th y xu t hi n k t t a tr ng ch ng t m u ch t r n có g c clorua (Cl − ) ml dung d ch axit HCl 1N 10 ml metanol, ph n ng ñư c ñun Cl − + Ag + → AgCl ↓ tr ng h i lưu 18 gi Sau ph n ng k t thúc (ki m tra b ng SKLM), đ Thí nghi m (xác đ nh s có m t c a anion NO3-): ngu i, chi t v i 3×20 ml n-hexan D ch chi t đư c r a b ng nư c Hoà tan m u ch t r n vào nư c, cho thêm vài ml dung d ch ñ n pH = 7, sau làm khan b ng Na2SO4 l c, đu i h t dung môi HCl m t ñ ng nh vào r i ñun nóng nh N u dung d ch chuy n cho s n ph m metyleste c a axit béo ch t 2-hydroxyhexacosanoic sang màu xanh lam có khí khơng màu hố nâu khơng khí axít (ký hi u s n ph m HLVE2.1) Ph n nư c l i ñư c ki m ch ng t m u ch t r n có g c nitrat (NO3 - ) hố b ng NH4OH đ n pH = 10, chi t b ng dietylete làm khan 3Cu + 8H+ + 2NO3- → 3Cu2+ + 2NO + 4H2O b ng Na2SO4, c t lo i dung môi thu c n ch a aminoancol m ch dài Thí nghi m (xác đ nh s có m t c a anion SO42-): 2.5.2.2 H p ch t HLVE1 Ti p t c r a gi i c t b ng h dung mơi cloroform/metanol v i Hồ tan m u ch t r n vào nư c r i cho vài ml dung d ch BaCl2 n u th y có k t t a, ch ng t m u ch t r n có g c sunfat t l 7:1, thu ñư c kh i ch t r n vơ đ nh hình màu tr ng, Rf = 0,45; (SO4 2-) kh i lư ng 31 mg, hi u xu t 2,58x10-3 %, nóng ch y 273 – 275 0C Ti n hành ghi ph ch t HLVE1 ñ xác ñ nh c u trúc c a HLVE1 Ba2+ + SO42- → BaSO4 ↓ tr ng Thí nghi m (xác đ nh s có m t c a cation K+): Hoà tan m u ch t r n vào nư c r i cho vài ml dung d ch 2.5.3 Phân l p ch t t d ch metanol H p ch t HLVM1 (H n h p mu i KNO3 KCl) H p ch t HLVM1 (kh i lư ng 54 g, hi u xu t 4,5%) thu ñư c t c n chi t metanol Chúng tơi ti n hành kh o sát m t s thí nghi m ñ xác ñ nh công th c phân t c a h p ch t vô s h ng s v t lý (đi m nóng ch y > 330 0C, đ t khơng cháy) tài li u cơng b v thành ph n hóa h c c a Lư c vàng [10b] Thí nghi m (xác đ nh s có m t c a anion Cl-): Natri cobantinitrit Na3[Co(NO2)6 ] n u th y xu t hi n k t t a màu vàng, ch ng t m u ch t r n có ion kali (K +) Na3[Co(NO2)6 ] + 2K+ → K2Na[Co(NO2)6 ] ↓ vàng + 2Na+ 15 16 ñ n CHƯƠNG III K T QU màu ñ nh t NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 3.1 XÁC Đ NH Đ NH TÍNH CÁC NHĨM CH T VÀ TH H2SO4 ñ c + + NaOH ñ c HO T TÍNH SINH H C D CH CHI T CÂY LƯ C H ng nh t Vàng + + + + - + - - - - VÀNG (CALLISIA FRAGRANS ) 3.1.1 Xác ñ nh l p ch t thân Lư c vàng Xanh FeCl3 5% th m Khi ti n hành ngâm chi t m u thư ng s d ng nh ng dung mơi h u có đ phân c c tăng d n, v y s thu ñư c c n Coumarin chi t có đ phân c c khác Vi c chi t m u Lư c vàng ñư c th c hi n theo sơ ñ 2.1, k t qu thu ñư c c n hexan (HLVH) 18,4g chi m 1,53%; c n etyl axetat (HLVE) 45,3g chi m 3,77 %; Glycosid tim Ph n ng t o k t FeCl3 + H2SO4 + CH3COOH c n metanol (HLVM) 109,6g chi m 9,13% so v i m u khơ nghiên c u ban đ u Saponin Ph n ng t o b t * K t qu phân tích đ nh tính nhóm ch t B t b n NaOH (-) Ph n ng âm tính vàng Sterol rõ (++) Ph n ng dương tính rõ B ng 3.1: K t qu đ nh tính nhóm ch t Lư c Vàng nâu Ghi chú: (+) Ph n ng dương tính Lư c vàng (Callisia fragrans) đư c nêu b ng 3.1 STT Nhóm ch t Thu c th Có k t t a Hi n tư ng HLVH HLVE Lieberman- Màu xanh Bourchard vàng K t qu : *) Trong c n hexan HLVH có sterol flavonoit ++ ++ *) Trong c n etyl axetat HLVE có flavonoit, sterol, coumarin Ancaloid Dragendorff Vàng da cam - - *) C c n ñ u khơng có ancaloit glucosid tim Như v y, Lư c vàng có sterol, flavonoid, coumarin, khơng có ancaloid glucosid tim Flavonoid Zn(Mg) HCl + Dung d ch nh t màu + + 18 17 Tôi nh n th y r ng: Nghiên c u c a Vi n dư c li u cho th y 3.1.2 Th ho t tính sinh h c c n chi t c a Lư c vàng K t qu th ho t tính sinh h c c a c n chi t Lư c vàng đư c trình bày vàng có tác d ng kháng khu n ñ i v i Staphylococcus aureus , b ng 3.2 B ng 3.2: K t qu th ho t tính kháng vi sinh v t ki m ñ nh nghiên c u c a tơi l i khơng có tác d ng, có th s d ng ph n cao chi t t Lư c vàng c n chi t Lư c vàng (Callisia fragrans) Qu ng Nam, Vi n dư c li u s d ng cao chi t c thân Lư c vàng \ Vi khu n Vi khu n Gr(-) Gr(+) N mm c nơi khác Đi u ch ng t r ng tùy theo ñi u ki n th ng thành ph n hóa h c c ch t i thi u (MIC :µg/ml) µ N ng đ ch ng vi khu n thư ng g p, cao chi t c a thân Lư c Lư c vàng có th thay đ i N m men 3.2 PHÂN L P VÀ NH N D NG CÁC CH T T D CH S Kí E P S B As F.O S C.an CHI T K t qu ñã phân l p ñư c h p ch t h u thu c nhóm ch t T hi u co aerugin Au Subtill p xys b steroit, glicosid m t lư ng l n mu i vô T m u li osa reu is Nig poru re v m ican 3.2.1 H p ch t vô (HLVM1) s er ce s Sau ngâm chi t m u Lư c vàng l n lư t b ng n- isi hexan etyl axetat, d ch chi t metanol c a sau đu i ki t dung ae mơi, t a đư c r a nhi u l n b ng metanol l nh (T ~ 00C), c n thu HLVH (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) ñư c k t tinh l i metanol nóng thu đư c nh ng tinh th s ch HLVE (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) hình kim khơng màu, có kh i lư ng 54g (4,5% so v i m u nghiên HLVM (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) c u ban ñ u), tan t t metanol nư c đ t khơng (-) cháy Nó có ñi m ch y 333 – 334 0C, nhi t nóng ch y c a h n h p Trong m u thơ có MIC ( n ng ñ c ch t i thi u ) ≤ v i KNO3 chu n khơng thay đ i Khi nung h p ch t nhi t đ 200 µg/ml có ho t tính 350 0C th i gian dài, s thu ñư c m t h p ch t có m Ghi chú: (+) Ph n ng dương tính nóng ch y cao (-) Ph n ng âm tính Nh n xét: Các m u th đ u khơng bi u hi n ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh 441 0C s n ph m nitrit kali (KNO2) ñư c t o thành KNO3 b phân h y Qua vi c kh o sát m t s thí nghi m đ xác đ nh công th c phân t c a h p ch t vơ m c 2.5.3.1, chúng tơi xác ñ nh ñư c thành ph n HLVM1 có 20 19 ch a ion kali (K + ), anion nitrat (NO3 - ), khơng có ch a anion clorua sunphat (Cl − , SO42-) Do v y, b ng cách so sánh h ng s v t lý c a v i KNO3 chu n cách làm có th kh ng ñ nh h p ch t thu ñư c HLVM1 kali nirat (KNO3) 3.2.2 H p ch t HLVH2 (β-sitosterol) T k t qu phân tích thành ph n hố h c, tính ch t v t lý, tính ch t quang ph d a s so sánh s li u ph c a ch t HLVH2 v i ph c a ch t β-sitosterol chu n, k t h p v i vi c 3.2.4 H p ch t HLVE2 (Calliceramide) xác ñ nh ñi m ch y c a h n h p c a HLVH2 v i β-sitosterol không Qua vi c phân tích s li u ph c a HLVE2, s n đ i, có th cho phép quy k t ch t HLVH2 ñã phân l p ñư c t ph m acyl hóa th y phân axít metanol c a nó, k t h p so Lư c vàng 24R-stigmasta-5-en-3-β-ol hay β-sitosterol, c u trúc sánh s li u ph c a HLVH2 sau: 24, 25, 26], ñã ch ng t r ng ch t HLVE2 m t cerebrosid có cơng H 13C-NMR c a cerebrozit tương t [23, th c phân t : C42H85NO5 (M=683) đư c hình thành b i axit 2hydroxyhexacosanoic 2-amino-hexadeca-1,3,4-triol v i c u trúc hóa h c (2S, 3S, 4R)-2-(2’R-hydroxyhexacosanoyl)-amino- hexadeca-1,3,4-triol chúng tơi đ t tên Calliceramide, v i công th c c u t o hình 3.9, s li u ph c a HLVE2 ñư c nêu b ng 3.5 3.2.3 H p ch t HLVH3 (Stigmasterol) T k t qu phân tích thành ph n hố h c, tính ch t v t lý, tính ch t quang ph nh t d a s so sánh s li u ph c a ch t HLVH3 v i ph c a ch t stigmasterol hoàn tồn có th cho phép quy k t ch t HLVH3 ñã phân l p ñư c t Lư c vàng stigmasterol c u trúc c a HLVH3 là: S n ph m acyl hóa Peracetyl HLVE2 t o thành theo ph n ng dư i ñây: 22 21 T s li u ph cho th y ch t HLVE1 phân l p ñư c t lư c vàng 3-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-sitosterol v i c u trúc hóa h c sau: Peracetyl HLVE2 Cịn s n ph m HLVE2.1 HLVE2.2 ñư c hình thành theo ph n ng th y phân axít metanol c a theo phương trình ph n ng sau: 3-O-(β-D-glucopyranosyl)-β-sitosterol β β 23 24 K T LU N L n ñ u tiên Lư c vàng tr ng Qu ng Nam ñư c thu hái, KI N NGH Sau q trình th c hi n đ tài này, tơi có m t s ki n ngh sau: xác ñ nh tên khoa h c Callisia fragrans Đã xác l p ñư c qui trình ngâm chi t thích h p cho vi c phân Tùy ñi u ki n th ng t ng vùng khác nên m t l p ch t Lư c vàng ñã phân tích đ nh tính s ch t có Lư c vàng khác v y c n ph i th c l p ch t có là: sterol, coumarin, flavonoid hi n thí nghi m Đã phân l p, đo h ng s v t lý, ph (IR, MS, 1D 2D- nhi u vùng khác ñ có th tìm đư c ch t m i có nhi u ng d ng th c t NMR) cho ch t xác ñ nh đư c c u trúc hóa h c c a ch t Ti p t c nghiên c u h p ch t có thân Lư c Chúng g m: β-sitosterol (HLVH2), stigmasterol (HLVH3), 3- vàng b ng dung mơi có đ phân c c khác tương t O-β-D-glucopyranosyl-β-sitosterol Lư c vàng đ có th so sánh đư c thành ph n gi a thân (HLVE1), calliceramide (HLVE2) ch t vô KNO3 (HLVM1) v i hàm lư ng r t cao (kho ng 4,5% so v i m u khô) H p ch t calliceramide (HLVE2) l n ñ u tiên phân l p ñư c t Lư c vàng, có th m t ch t m i Đã th ho t tính kháng vi sinh v t ki m đ nh cho d ch chi t n- nh m ph c v t t cho nghiên c u sau Ti p t c th ho t tính kháng vi sinh v t ki m ñ nh cho d ch chi t metanol (HLVM) ñ tìm k t qu H p ch t calliceramide (HLVE2) l n ñ u tiên phân l p hexan (HLVH) d ch chi t etyl axetat (HLVE) ñ u cho k t ñư c t Lư c vàng, có th m t ch t m i c n ñư c ti p t c qu âm tính nghiên c u đ bi t ng dông c th  ... hình nghiên c u v Lư c vàng 1.3.4.1 Tình hình nghiên c u Lư c vàng th gi i 1.3.4.2 Tình hình nghiên c u Lư c vàng Vi t Nam CHƯƠNG II: TH C NGHI M 2.1 Đ I TƯ NG, N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN... ng nghiên c u v loài khác chi Callisia làm c nh [25, 26, 27] Vi t Nam theo th ng kê c a nhà th c v t h c h có 15 chi 47 loài [2], theo Ph m Hoàng H cơng b h cịn khiêm t n ñư c ñ c p 1.3 V CÂY... phân b “Danh m c loài th c v t Vi t Nam? ?? t p nhà khoa h c Cây Lư c vàng có ngu n g c thu c Trư ng Đ i h c qu c gia Hà n i Vi n Sinh thái Tài Nga, r i ñ n Vi t Nam (ñi m ñ n ñ u tiên t nh Thanh