Phân tích hàm lượng cyclamate bằng phương pháp săc ký lỏng cao áp

Trường ĐH Nơng Lâm TP.HCM Bộ mơn Cơng nghệ Hóa học SEMINAR MƠN: HĨA PHÂN TÍCH DỤNG CỤ ĐỀ TÀI: PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG CYCLAMATE BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP SINH VIÊN THỰC HIỆN • • • • • • • • • Vy Thanh Diễm 18139023 Võ Hồng Diệp 18139025 Âu Thị Huyền Diệu 18139028 Nguyễn Minh Anh 18139005 Lại Ngọc Dung 18139030 Nguyễn Châu Anh 18139004 Võ Thị Thanh Kiều 18139077 Nguyễn Thanh Hằng 18139046 Hồ Thị Thùy Linh 18139081 NỘI DUNG CHÍNH Tổng quan Cyclamate (khái niệm, cấu tạo, tính chất, ứng dụng) Phương pháp sắc kí lỏng cao áp Thực nghiệm Quy trình phân tích Đánh giá quy trình CYCLAMATE (Chất tạo ngọt) Phụ gia thực phẩm dùng để tạo vị Không sinh lượng chất dinh dưỡng Là muối Na Ca acid cyclamic CẤU TẠO VÀ TÍNH CHẤT C6H12NNaO3S Có độ gấp 30 – 50 lần đường saccarozơ Tan nhiều nước, không tan benzene, chloroform ethanol diethyl ether Là tinh thể màu trắng, không mùi Bền với nhiệt độ bị phân hủy nhiệt độ cao 280-500 độ C ỨNG DỤNG Chất số quốc gia sử dụng chế biến thực phẩm Làm chất tạo c Tí ự hc c Sử dụng với lượng vừa đủ dùng để đánh lừa cảm giác bệnh nhân tiểu đường bệnh nhân béo phì cần ăn kiêng ẢNH HƯỞNG Tại Việt Nam, đường cyclamate có thành phần aspartame Một chất làm nhân tạo, bị Bộ Y tế Tiê u cấm sử dụng chế biến thực phẩm cự c Cyclamate nguyên nhân gây nhiều bệnh nguy hiểm, có ung thư tiểu đường Khi vào thể, chất tạo không sinh lượng, không mang lại giá trị dinh dưỡng mà cịn tích luỹ gây độc cho gan, thận PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG CAO ÁP THỰC NGHIỆM Thiết bị - dụng cụ  Thiết bị HPLC, gồm phận sau đây:  Máy sắc kí lỏng hiệu cao, gồm có bơm, bơm mẫu, máy đo quang phổ tử ngoại (UV) (khả hoạt động bước sóng 314 nm, tốt detector mảng diot), có máy ghi và/hoặc máy tích phân cho phép đo chiều cao peak điện tích peak  Cột pha đảo o Pha tĩnh cột pha đảo C18 cỡ hạt 5mm; o Chiều dài 250mm; o Đường kính 4mm; o Cột bảo vệ, C18 pha đảo (tùy chọn thường khuyến nghị đặc biệt cho tất mẫu dạng rắn) • Các tiêu chí tính cột phân tích thích hợp độ phân dải peak cyclamate Khi đo detector mảng diot đo bước sóng thứ hai thấy có • • • • • • • • • • nhiễu, cần phải chọn điều kiện sắc ký khác để xác định cyclamate: Thiết bị siêu âm Bộ lọc màng, kích thước lỗ thích hợp, ví dụ: 0,45 mm Bộ lọc, có giá đỡ màng lọc pha động khử khí dung dịch ổn định Bộ đồng hóa Nồi cách thủy, trì nhiệt độ 600oC Máy li tâm, có khả tạo gia tốc li tâm nhỏ đáy ống 1400g Ống li tâm, tốt thủy tinh, có dung tích thích hợp, ví dụ: 50ml, đậy kín Phễu chiết, có dung tích thích hợp, ví dụ: 50ml 100ml Giấy lọc gấp nếp, loại nhanh trung bình Bộ lọc tách pha (tùy chọn) Thuốc thử • • • • • • • • Metanol n-heptan Dầu nhẹ Natri sulfat Dung dịch natri cacbonat Dung dịch natri hypoclorit  Axit sulfuric Dung dịch chuẩn natri cyclamate Thuốc thử • • • • • Dung dịch Carrez I: Hòa tan nước 15g kali hexaxyanoferrat (II) (K4[Fe(CN)6].3H2O) 99% phần khối lượng thêm nước đến 100ml Dung dịch Carrez II: Hòa tan nước 30g kẽm sulfat (ZnSO4.7H2O) có độ tinh khiết 99,5% phần khối lượng thêm nước đến 100ml Pha động: Trộn 80 phần thể tích metanol với 20 phần thể tích nước, lọc qua lọc màng thích hợp, ví dụ: có cỡ lỗ 0,45mm khử khí phút thiết bị siêu âm Tỷ lệ metanol với nước pha động điều chỉnh đơi chút để đạt kết phù hợp với cột sử dụng, cần Dung dịch ổn định cho HPLC Xenluloza 4.QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Lấy mẫu bảo quản mẫu Chuẩn bị dung dịch chạy HPLC Phân tích Xử lý mẫu hệ thống HPLC Nhận biết 4.QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Lấy mẫu ngẫu nhiên thị trường thực LẤY MẪU VÀ BẢO QUẢN MẪU phẩm bảo quản mẫu theo quy định ghi nhãn sản phẩm cân cân 898,00mg 898,00mg natri natri cyclymate, cyclymate, chính xác xác đến đến 0,10mg 0,10mg cho cho vào vào bình bình định định mức mức 200ml 200ml và pha pha loãng loãng bằng nước nước đến đến vạch vạch Dùng Dùng pipet pipet lấy lấy 0,25ml; 0,25ml; 1ml; 1ml; 2,5ml; 2,5ml; 5ml, 5ml, 10ml, 10ml, 20ml 20ml dung dung dịch dịch này cho cho vào vào bình bình định định mức100ml mức100ml và pha pha loãng loãng đến đến vạch vạch nồng nồng độ độ natri natri cyclymate cyclymate của các dung dung dịch dịch này là 10ppm, 10ppm, 40ppm, 40ppm, 100ppm, 100ppm, 200ppm, 200ppm, 400ppm, 400ppm, 800ppm 800ppm Chạy HPLC lấy 20ml dung dịch mẫu cho vào phễu chiết thêm 1ml axit sunfuaric 50%, 10ml n-heptan 2,5ml dung dịch natri hypoclorit (1,7% hoạt động) lắc mạnh phút để tách pha, gạt bỏ lớp nước phía làm khô nước n-heptan 1g natri sunfat khan lọc qua giấy lọc Các sản phẩm dạng lỏng sản phẩm tạo dung dịch trong (ví dụ: nước trong, nước muối dưa chuột lọc, kẹo cứng ) Sản phẩm nửa rắn (ví dụ: sản phẩm sữa, tráng miệng, cream sấy phun, nước đục, mứt, mứt Chất béo dạng nhũ XỬ LÍ tương sản MẪU tương (ví dụ: phẩm chứa nhũ mayonnaise ) cam ) Socola sản phẩm liên quan Các loại mẫu xử lý theo quy trình phân tích TCVN 8472:2010 Phân tích hệ thống HPLC Điều kiện làm việc: cột pha đảo C18 , cỡ hạt 5µm, chiều dài 250mm, đường kính 4mm, detector DAD, bước sóng phát 314nm, tốc độ dòng pha động 1,5 ml/phút, dung mơi pha động MeOH: H2O=90:10, thể tích tiêm 20ml Khảo sát khoản tuyến tính xây dựng đường chuẩn; khoản tuyến tính detector khảo sát qua dung dịch chuẩn cyclymate (đã tạo dẫn xuất) có nồng độ 40, 80, 100, 200, 400, 600, 800, 1000, 2000, 4000ppm, điều kiện sắc ký Đường chuẩn cyclamate xác định xây dựng sở khảo sát khoảng tuyến tính Đánh giá phương pháp qua giới hạn phát hiện, độ lặp lại độ thu hồi Áp dụng quy trình phân tích để xác định hàm lượng cyclamate số sản phẩm Nhận biết so sánh thời gian lưu chất phân tích dung dịch mẫu với thời gian lưu chất chuẩn bơm đồng thời dung dịch chuẩn dung dịch mẫu thử thêm dung dịch chuẩn vào dung dịch mẫu thử ghi lại đường hấp thụ dải bước sóng có liên quan Đánh giá quy trình phân Nhận xét tích hàm lượng sodium cyclamate ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH Thử nghiệm mẫu trắng - mẫu tương tự mẫu thử khơng có cyclamate Đánh giá giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Thử nghiệm mẫu thử - mẫu nhà sản xuất khảo sát công bố Đánh giá quy trình phân tích hàm lượng sodium cyclamate Xác định độ lặp lại phương pháp Xác định độ phương pháp Nhận xét - Hàm lượng cyclamate cho phép sử dụng: 7mg/kg thể trọng - Hiện Châu Á có Nhật Malaysia cấm sử dụng cyclamate thực phẩm, Mỹ, Anh số nước khác +Nếu sử dụng cyclamate Theo nghiên cứu cho thấy với hàm lượng chất chuyển hóa đánh lừa cảm giác thèm cyclamate thể thành bệnh nhân tiểu cyclohexylamine gây đường ung thư + Sản xuất thực phẩm cho người ăn kiêng cấm sử dụng - Nhưng có khoảng 55 quốc gia khác, cyclamate phép đưa vào sử dụng - Nước ta cấm sử dụng cyclamate thời gian dài phép đưa vào dùng với liều lượng quy định THANKS FOR WATCHING ... công bố Đánh giá quy trình phân tích hàm lượng sodium cyclamate Xác định độ lặp lại phương pháp Xác định độ phương pháp Nhận xét - Hàm lượng cyclamate cho phép sử dụng: 7mg/kg thể trọng - Hiện Châu... 181390 04 Võ Thị Thanh Kiều 18139 077 Nguyễn Thanh Hằng 18139 046 Hồ Thị Thùy Linh 18139081 NỘI DUNG CHÍNH Tổng quan Cyclamate (khái niệm, cấu tạo, tính chất, ứng dụng) ? ?Phương pháp sắc kí lỏng cao áp. .. 2000, 40 00ppm, điều kiện sắc ký Đường chuẩn cyclamate xác định xây dựng sở khảo sát khoảng tuyến tính Đánh giá phương pháp qua giới hạn phát hiện, độ lặp lại độ thu hồi Áp dụng quy trình phân tích