Phân tích, ứng dụng miraculin từ quả và khảo sát sự nảy mầm của hột cây thần kỳ (synsepalum dulcificum daniell)

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA - TRẦN TRÚC THANH PHÂN TÍCH, ỨNG DỤNG MIRACULIN TỪ QUẢ VÀ KHẢO SÁT SỰ NẢY MẦM CỦA HỘT CÂY THẦN KỲ (Synsepalum dulcificum Daniell) Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số ngành: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH - 2012 i LỜI CẢM ƠN *** Xin gửi lời cảm ơn trân trọng tới TS Huỳnh Ngọc Oanh TS Lê Thị Thủy Tiên giảng dạy tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ, đóng góp nhiều ý kiến q báu q trình tơi thực luận văn Lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Đức Lƣợng PGS.TS Nguyễn Thúy Hƣơng truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho suốt thời gian học Gửi lời cảm ơn chân thành đến em Phạm Thƣ Trang đồng hành, hỗ trợ khoảng thời gian làm luận văn Một lời cảm ơn riêng tới chị Nguyễn Kim Minh Tâm, Hồng Mỹ Dung chia với tơi suy nghĩ, khó khăn, vƣớng mắc lúc viết báo nhƣ làm luận văn sống Cảm ơn thầy, cô, chị, em môn Công nghệ Sinh học trƣờng Đại học Bách Khoa TP.HCM tạo điều kiện thời gian, phịng thí nghiệm, thiết bị máy móc, hóa chất cho tơi thực nội dung nghiên cứu luận văn Cảm ơn gia đình bạn bè Họ ln khích lệ, ủng hộ cách hay cách khác suốt thời gian qua Cuối cùng, xin kính chúc ba mẹ, quý thầy cô, anh chị bạn dồi sức khỏe, gặt hái thật nhiều thành công công việc sống Tp HCM, tháng 05 năm 2012 Trần Trúc Thanh ii TĨM TẮT Miraculin có đặc tính thay đổi vị giác từ chua thành Kết phân tích thành phần hóa học thịt bao gồm: glucosamine, chất khoáng, đƣờng, protein, vitamin Các hợp chất tự nhiên thịt đa dạng: flavonoid, polyphenol, saponin, Miraculin đƣợc tách chiết dung dịch NaCl 0,5M sau tủa phân đoạn với (NH4)2SO4 50% bão hòa, tinh sắc ký trao đổi ion sắc ký lọc gel Biogel P-30, kiểm tra điện di SDS-PAGE có trọng lƣợng phân tử khoảng 28 kDa Miraculin thu đƣợc làm biến đổi vị chua acid citric 0,02M thành vị tƣơng đƣơng với sucrose 0,5M Ứng dụng miraculin tạo sản phẩm Thần Kỳ: bột nguyên chất, bột Thần Kỳ phối trộn viên ngậm Thần Kỳ Các sản phẩm từ miraculin giữ đƣợc hoạt tính vịng tháng Hột Thần Kỳ có thành phần dự trữ gồm: lipid 41,05%, protein 11,85% glucid 18,15% Nhiệt độ ánh sáng ảnh hƣởng lên nảy mầm hột Tỷ lệ nảy mầm cao 93% nhiệt độ 25 ± 20C điều kiện sáng 5000± 200 lux với thời gian chiếu sáng ngày Các tác động lên vỏ kích thích nảy mầm hột Thần Kỳ: gây tổn thƣơng vỏ (90%), ngâm acid HCl 5% ( 80,4%), sốc nhiệt (90%) Xử lý hột với GA3 nồng độ 20mg/l rút ngắn thời gian nảy mầm giúp tăng tỷ lệ nảy mầm hột (98%) Hột đƣợc bảo quản nhiệt độ phòng 28 ± 2o nả tháng thứ ột khả nảy mầm hoàn toàn iii ABTRACT The taste-modifying protein, mirraculin, has unusual property of modifying a sour taste into a sweet taste The results showed that miracle fruit contains: glucosamine, sugar reducing agent, macro-mineral Miraculin was extracted from miracle fruit with 0,5M NaCl solution, was purified from the extracted solution by ammonium sulfate fractionation about 50% saturation, resin ion-exchange chromatography, and gel filtration chromatography using Biogel P-30 column The high purity of the miraculin obtained by SDS-Page showed a single band about 28 kDa Miraculin from Miracle fruit can be applied to produce Miracle powder by mixing the juice with dry starch at suitable rate The minimum rate ½ change of taste, also has high economic value Miracle lozenges supplement xylitol melting in the mouth and taste was record in one hour Related products from miraculin remains taste-modifying activity in more than one month Seed components include: lipid: 41,05%, protein: 11,85% and glucid: 18,15% Temperature and light effects on germination of seeds The highest germination rate of 93% at a temperature of 25 ± 20C in bright conditions to 5000 ± 200 lux illumination time hours a day The impact on the shell beads improved seed germination as damaging shell (90%), soaked in 5% hydrochloric acid ( 80,4%), heat shock (90%) Handling of seeds with GA3 at 20 mg / l to shorten the time and increase the percentage germination of the seeds (98%) Seeds were stored at room temperature 28 ± 2°C to germinate above 50% in weeks and nability to germinate seeds in months 3rd iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii ABTRACT iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH x MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Cây Thần Kỳ 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại khoa học 1.1.3 Đặc điểm sinh học 1.2 Miraculin 1.2.1 Cấu tạo miraculin 1.2.2 Trình tự cDNA mã hóa miraculin 1.2.3 Mơ hình khơng gian miraculin 10 1.2.4 Tính chất chế tác dụng miraculin 12 1.2.5 Một số ứng dụng miraculin 16 1.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến hình thành phát triển hột có dầu 18 1.3.1 Sự hình thành phát triển hột 18 1.3.2 Thời kỳ miên trạng hột 18 1.3.3 Sự nảy mầm hột chứa dầu 19 1.4 Tình hình nghiên cứu Thần Kỳ 24 1.4.1 Trong nƣớc 24 1.4.2 Ngoài nƣớc 24 1.4.3 Tình hình trồng trọt phát triển Thần Kỳ Việt Nam 28 CHƢƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 29 v 2.1 Vật liệu – hóa chất – thiết bị 29 2.1.1 Vật liệu 29 2.1.2 Hóa chất 29 2.1.3 Thiết bị 30 2.2 Các phƣơng pháp phân tích 30 2.2.1 Xác định đƣờng tổng số hòa tan 30 2.2.2 Xác định đƣờng khử theo phƣơng pháp Bertrand 30 2.2.3 Xác định hàm lượng protein theo phương pháp Lowry 31 2.2.4 Xác định đạm tổng số theo phƣơng pháp Kjeldahl 31 2.2.5 Phƣơng pháp định lƣợng khoáng tổng số 32 2.2.6 Phƣơng pháp định lƣợng glucosamine 32 2.2.7 Phƣơng pháp định lƣợng vitamin C 33 2.2.8 Phƣơng pháp xác định độ ẩm thịt 33 2.2.9 Định lƣợng lipid máy Soxhlet 33 2.2.10 Định lƣợng tinh bột phƣơng pháp so màu 580nm 34 2.2.11 Phƣơng pháp phân tích hóa thực vật thịt 34 2.2.12 Phƣơng pháp sắc ký lọc gel 36 2.2.13 Phƣơng pháp điện di 37 2.2.14 Phƣơng pháp xác định độ hoạt động – độ miraculin 37 2.2.15 Phƣơng pháp đánh giá cảm quan 38 2.3 Nội dung nghiên cứu 38 2.3.1 Xác định thành phần có thịt tƣơi 39 2.3.2 Trích ly tinh miraculin 39 2.3.3 Ứng dụng miraculin 40 2.3.4 Khảo sát nảy mầm hột Thần Kỳ 42 2.4Xử lý số liệu 44 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 45 3.1 Hàm lƣợng thành phần thịt Thần Kỳ: 45 3.2 Trích ly tinh miraculin 47 3.2.1 Khảo sát phƣơng pháp ly trích miraculin 48 vi 3.2.2 Tinh thu nhận miraculin 50 3.3 Ứng dụng miraculin từ Thần Kỳ 55 3.3.1 Bột Thần Kỳ nguyên chất 56 3.3.2 Bột Thần Kỳ phối trộn 56 3.3.3 Viên ngậm Thần Kỳ 63 3.4 Khảo sát nảy mầm hột Thần Kỳ 65 3.4.1 Hình thái hột Thần Kỳ 65 3.4.2 Sự nảy mầm hột Thần Kỳ 66 3.4.3 Trọng lƣợng thành phần hột Thần Kỳ 67 3.4.4 Thời gian bão hòa nƣớc hột 69 3.4.5 Các yếu tố ảnh hƣởng đến nảy mầm hột 70 3.4.6 Khảo sát biện pháp xử lý kích thích hột nảy mầm 73 KẾT LUẬN 80 ĐỀ NGHỊ 82 TÀI LIỆU THAM KHẢO 83 vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DGs : Electron-dense granules GPCRs : G-protein coupled receptors GA3 : Acid gibberellic TAG : triacylglycerol ABA : abscisic acid BR : brassinosteroid NAA : 1-naphthalene acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine SDS-PAGE : Sodium dodecyl sulphate- electrophoresis cs : cộng DNP : 2,4-Dinitrophenol C6H4N2O5 polyacrylamide gel viii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần amino acid miraculin Bảng 2.1 Danh mục hóa chất 29 Bảng 2.2 Danh mục thiết bị máy móc sử dụng 30 Bảng Kết tủa phân đoạn với (NH4)2SO4 38 Bảng 2.4 Tỷ lệ khảo sát miraculin : tinh bột 41 Bảng 3.1 Kết tóm tắt hàm lƣợng thành phần sinh hóa thịt quả46 Bảng 3.2 Thành phần hóa thực vật Thần Kỳ 47 Bảng 3.3 Kết phƣơng pháp trích ly miraculin 48 Bảng 3.4 Nồng độ protein nồng độ đƣờng qua phân đoạn…………………49 Bảng 3.5 Hàm lƣợng chất sau tách chiết miraculin 51 Bảng 3.6 Hàm lƣợng chất qua sắc ký trao đổi ion 51 Bảng 3.7 Bảng kết đƣờng tổng số hòa tan, đƣờng khử protein mẫu bột 59 Bảng 3.8 Thành phần ống bột Thần Kỳ (0.4g) 60 Bảng Kết hàm lƣợng protein, đƣờng tổng số hòa tan đƣờng khử mẫu bột trƣớc sau bảo quản 61 Bảng 3.10 Thành phần viên ngậm Thần Kỳ (0.5g) 64 Bảng 3.11 Trọng lƣợng 100 hột Thần Kỳ 68 Bảng 3.12 Thành phần sinh hóa hột Thần Kỳ 69 Bảng 3.13 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên nảy mầm hột sau 21 ngày gieo giá thể ẩm 70 Bảng 3.14 Ảnh hƣởng thời gian chiếu sáng đến tỷ lệ nảy mầm sau 21 ngày gieo giá thể ẩm 71 Bảng 3.15 Tỷ lệ nảy mầm hột đƣợc xử lý với HCl sau 21 ngày gieo giá thể74 Bảng 3.16 Các biện pháp xử lý ảnh hƣởng đến tỷ lệ nảy mầm hột 75 Bảng 3.17 Ảnh hƣởng GA3 lên tỷ lệ nảy mầm hột Thần Kỳ 76 Bảng 3.18 Tỷ lệ phần trăm hột nảy mầm tuần bảo quản nhiệt độ phòng (28 ± 2oC) 77 ix Bảng 3.19 Tỷ lệ nảy mầm hột qua tháng bảo quản 78 Phụ lục Phụ lục Kết cảm quan độ thay đổi vị giác xử lý thống kê Bảng 10 Kết cảm quan độ thay đổi vị giác Mẫu M1 Mẫu M1 M2 M3 M4 Điểm Điểm 3 0 0 1 3 4 3 4 3 3 1 3 1 3 0.8 1.8 2.7 3.5 M2 M3 M4 Trung bình Trung 0.3 1.2 2.5 3.5 bình Xử lý số liệu bảng 10 phương pháp thống kê thu kết bảng 11 Phụ lục Bảng 11 Kết xử lý thống kê đánh giá cường độ thay đổi vị giác mẫu bột Thần Kỳ Groups Count Sum Average Variance M1 20 11 0.55 0.260526 M2 20 29 1.45 0.576316 M3 20 50 2.5 0.789474 M4 20 70 3.5 0.473684 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups 98.1 Within Groups 39.9 76 Total 138 79 MS F P-value F crit 32.7 62.28571 1.98E-20 2.724944 0.525 Bảng 12 Kết cảm quan độ bột Thần Kỳ Mẫu M1 M2 M3 M4 Mẫu M1 M2 M3 M4 Điềm 1 2 Điểm 1 1 3 0 1 2 2 0 3 0 0 0 0 2 2 1 2 0.4 1.1 1.7 2.7 0.4 1.9 2.9 3.0 Trung bình Trung bình Phụ lục Xử lý số liệu bảng 12 phương pháp thống kê thu kết bảng 13 Bảng 13 Kết xử lý Anova độ mẫu bột Thần Kỳ từ bảng 12 Groups Count Sum Average Variance M1 20 0.4 0.252632 M2 20 20 0.736842 M3 20 36 1.8 0.694737 M4 20 57 2.85 1.186842 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS df MS 67.4375 22.479 54.55 76 0.7178 121.9875 F 31.318 P-value F crit 3E-13 2.7249 79 Bảng 14 Tỉ lệ số người yêu thích mẫu bột Mẫu số Số người yêu thích Tỉ lệ (%) M1 0 M2 M3 20 M4 15 75 Phụ lục Phụ lục Hàm lượng protein, đường tổng, đường khử mẫu bột Thần Kỳ Hàm lượng protein mẫu bột Thần Kỳ Bảng 15 Hàm lượng protein mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) Mẫu Lần Lần Lần TB OD 0,078 0,084 0,077 0,080 Nồng độ pro (µg/ml) 0,12 0,14 0,12 0,13 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 6,0E-04 6,8E-04 5,8E-04 6,3E-04 Hàm lượng protein (mg) 2,40E-02 2,70E-02 2,30E-02 2,5E-02 Bảng 16 Hàm lượng protein mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) Mẫu Lần Lần Lần TB OD 0,185 0,19 0,195 0,19 Nồng độ pro (µg/ml) 0,40 0,41 0,43 0.41 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 8,07E-04 8,34E-04 8,61E-04 8,34E-04 Hàm lượng protein (mg) 3,2E-02 3,3E-02 3,4E-02 3,3E-02 Bảng 17 Hàm lượng protein mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) Mẫu OD Nồng độ pro (µg/ml) Nhân hệ số pha lỗng (mg/ml) Hàm lượng protein (mg) Lần 0,19 4,17E-01 8,34E-04 3,3E-02 Lần 0,192 4,22E-01 8,45E-04 3,4E-02 Lần 0,25 5,78E-01 1,16E-03 4,6E-02 TB 0,211 4,72E-01 9,45E-04 3,8E-02 Bảng 18 Hàm lượng protein mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) Mẫu Lần Lần Lần TB OD 0,085 0,084 0,087 0,085 Nồng độ pro (µg/ml) 136,4E-6 133,7E-6 141,7E-6 137,3E-6 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 1,4E-3 1,3E-3 1,4E-3 1,4E-3 Hàm lượng protein (mg) 5,5E-2 5,3E-2 5,7E-2 5,5E-2 Phụ lục Hàm lượng đường tổng số hòa tan mẫu bột Thần Kỳ Bảng 19 Hàm lượng đường tổng mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,127 0,111 0,120 0,119 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 0,013 0,011 0,012 0,012 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,64 0,56 0,60 0,60 Hàm lượng đường (mg) 25,45 22,55 24,18 24,06 Bảng 20.Hàm lượng đường tổng mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,158 0,159 0,155 0,157 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 0,016 0,016 0,015 0,015 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,78 0,78 0,76 0,77 Hàm lượng đường (mg) 31,09 31,27 30,55 30,97 Bảng 21 Hàm lượng đường tổng mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,228 0,219 0,250 0,232 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 0,022 0,021 0,024 0,022 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 2,19 2,11 2,39 2,23 Hàm lượng đường (mg) 87,64 84,36 95,64 89,21 Bảng 22 Hàm lượng đường tổng mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,205 0,201 0,225 0,210 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 19,82 19,45 21,64 20,30 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,40 0,39 0,43 4,06 Hàm lượng đường (mg) 79,27 77,82 86,55 162,42 Phụ lục Hàm lượng đường khử mẫu bột Thần Kỳ Bảng 23 Hàm lượng đường khử mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 180 160 240 193,33 0,275 0,3 0,275 0,283 1,35 1,6 1,35 1,433 Hàm lượng đường khử (%) 0,27 0,32 0,27 0,287 Bảng 24 Hàm lượng đường khử mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 130 200 210 165 0,3 0,3 0,225 0,3 1,3 0,525 1,65 Hàm lượng đường khử (%) 0,26 0,4 0,105 0,33 Bảng 25 Hàm lượng đường khử mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 210 190 250 216,667 0,325 0,275 0,25 0,283 2,625 1,425 1,25 1,767 Hàm lượng đường khử (%) 0,525 0,285 0,25 0,353 Bảng 26 Hàm lượng đường khử mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 230 150 250 190 0,3 0,35 0,225 0,325 2,3 2,25 0,625 2,275 Hàm lượng đường khử (%) 0,46 0,45 0,125 0,455 Phụ lục Phụ lục Hàm lượng protein, đường khử, đường tổng mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản 15 ngày Hàm lượng protein mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản 15 ngày Bảng 27 Hàm lượng protein mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau 15 ngày Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,21 0,201 0,191 0,201 Nồng độ protein (mg/ml) Hàm lượng protein (mg) 4,71E-04 4,47E-04 4,20E-04 4,47E-04 2,35E-02 2,23E-02 2,10E-02 2,23E-02 Bảng 28 Hàm lượng protein mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau 15 ngày Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,263 0,305 0,273 0,274 Nồng độ protein (mg/ml) Hàm lượng protein (mg) 6,12E-04 7,25E-04 6,39E-04 6,42E-04 3,06E-02 3,62E-02 3,20E-02 3,21E-02 Bảng 29 Hàm lượng protein mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau 15 ngày Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,259 0,267 0,334 0,287 Nồng độ protein (mg/ml) Hàm lượng protein (mg) 6,02E-04 6,23E-04 8,02E-04 6,76E-04 3,01E-02 3,11E-02 4,01E-02 3,38E-02 Bảng 30 Hàm lượng protein mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) sau 15 ngày Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,456 0,412 0,438 0,435 Nồng độ protein (mg/ml) Hàm lượng protein (mg) 1,13E-03 1,01E-03 1,08E-03 1,07E-03 5,64E-03 5,05E-03 5,40E-03 5,36E-03 Phụ lục Hàm lượng đường tổng số hòa tan mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản 15 ngày Bảng 31 Hàm lượng đường tổng mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau 15 ngày Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,291 0,215 0,257 0,25 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 27,64 20,73 24,55 24,30 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,14 0,10 0,12 0,12 Hàm lượng đường (mg) 27,54 20,63 24,55 24,030 Bảng 32 Hàm lượng đường tổng mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau 15 ngày Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,293 0,369 0,353 0,338 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 27,82 34,73 33,27 31,94 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,14 0,17 0,17 0,16 Hàm lượng đường (mg) 27,82 32,73 32,27 30,94 Bảng 33 Hàm lượng đường tổng mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau 15 ngày Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,178 0,173 0,168 0,173 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 17,36 16,91 16,45 16,91 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,35 0,34 0,33 0,34 Hàm lượng đường (mg) 69,45 67,64 65,82 67,64 Bảng 34 Hàm lượng đường tổng mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) sau 15 ngày Mẫu Lần Lần Lần TB OD (490 nm) 0,198 0,201 0,225 0,208 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 19,18 19,45 21,64 20,09 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,38 0,39 0,43 4,02 Hàm lượng đường (mg) 76,73 77,82 86,55 160,73 Phụ lục Hàm lượng đường khử mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản 15 ngày Bảng 35 Hàm lượng đường khử mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau 15 ngày Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 180 160 240 193,33 0,275 0,29 0,275 0,280 1,35 1,44 1,35 1,380 Hàm lượng đường khử (%) 0,27 0,288 0,27 0,276 Bảng 36 Hàm lượng đường khử mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau 15 ngày Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 130 200 210 165 0,275 0,285 0,275 0,28 0,975 1,7 1,575 1,3375 Hàm lượng đường khử (%) 0,195 0,34 0,315 0,268 Bảng 37 Hàm lượng đường khử mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau 15 ngày Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 210 190 250 216,667 0,275 0,275 0,245 0,265 1,575 1,349 1,125 1,350 Hàm lượng đường khử (%) 0,315 0,2698 0,225 0,270 Bảng 38 Hàm lượng đường khử mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) sau 15 ngày Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 230 150 250 190 0,3 0,3 0,225 0,3 2,254 1,35 0,625 1,802 Hàm lượng đường khử (%) 0,4508 0,27 0,125 0,36 Phụ lục Phụ lục Hàm lượng protein, đường tổng, đường khử sau tháng bảo quản Hàm lượng protein sau tháng bảo quản Bảng 39.Hàm lượng protein mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau tháng Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,110 0,130 0,115 0,118 Nồng độ protein (mg/ml) 2,03E-04 2,57E-04 2,17E-04 2,25E-04 Hàm lượng protein (mg/1g) 1,02E-02 1,28E-02 1,08E-02 1,12E-02 Bảng 40 Hàm lượng protein mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau tháng Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,26 0,263 0,259 0,26 Nồng độ protein (mg/ml) 6,04E-04 6,12E-04 6,02E-04 6,04E-04 Hàm lượng protein (mg/1g) 3,02E-02 3,06E-02 3,01E-02 3,02E-02 Bảng 41 Hàm lượng protein mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau tháng Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,275 0,275 0,276 0,275 Nồng độ protein (mg/ml) 6,44E-04 6,44E-04 6,47E-04 6,44E-04 Hàm lượng protein (mg/1g) 3,22E-02 3,22E-02 3,24E-02 3,22E-02 Bảng 42 Hàm lượng protein mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) sau tháng Số lần đo Lần Lần Lần Trung bình OD 0,499 0,409 0,419 0,442 Nồng độ protein (mg/ml) 1,24E-03 1,00E-03 1,03E-03 1,09E-03 Hàm lượng protein (mg/1g) 6,22E-03 5,01E-03 5,15E-03 5,46E-03 Phụ lục Hàm lượng đường tổng số hòa tan mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản 30 ngày Bảng 43 Hàm lượng đường tổng mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau tháng Mẫu OD (490 nm) Lần Lần Lần TB 0,604 0,784 0,602 0,663 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 56,09 72,45 55,91 61,48 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,11 0,14 0,11 0,12 Hàm lượng đường (mg) 22,44 28,98 22,36 24,59 Bảng 44 Hàm lượng đường tổng mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau tháng Mẫu OD (490 nm) Lần Lần Lần TB 0,930 0,888 0,874 0,897 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 85,73 81,91 80,64 82,76 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,17 0,16 0,16 0,17 Hàm lượng đường (mg) 34,29 32,76 32,25 33,10 Bảng 45 Hàm lượng đường tổng mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau tháng Mẫu Lần Lần Lần TB (490 nm) Nồng độ đường tổng (mg/ml) Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) Hàm lượng đường (mg) 0,280 26,64 0,27 53,27 0,323 30,55 0,31 61,09 0,319 30,18 0,30 60,36 0,307 29,12 0,29 58,24 OD Bảng 46 Hàm lượng đường tổng mẫu M4 (tỉ lệ 2:1) sau tháng Mẫu OD (490 nm) Lần Lần Lần TB 0,903 0,909 0,795 0,869 Nồng độ đường tổng (mg/ml) 83,27 83,82 73,45 80,18 Nhân hệ số pha loãng (mg/ml) 0,83 0,84 0,73 0,80 Hàm lượng đường (mg) 166,55 167,64 146,91 160,36 Phụ lục Hàm lượng đường khử mẫu bột Thần Kỳ sau bảo quản tháng Bảng 47 Hàm lượng đường khử mẫu M1 (tỉ lệ 1:3) sau tháng Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 180 160 240 193,33 0,275 0,27 0,275 0,273 1,26 1,264 1,35 1,291 Hàm lượng đường khử (%) 0,252 0,2528 0,27 0,258 Bảng 48 Hàm lượng đường khử mẫu M2 (tỉ lệ 1:2) sau tháng Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 130 200 210 165 0,3 0,3 0,225 0,3 1,3 1,1 0,525 1,2 Hàm lượng đường khử (%) 0,26 0,22 0,105 0,240 Bảng 49 Hàm lượng đường khử mẫu M3 (tỉ lệ 1:1) sau tháng Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) Thể tích KMnO4(ml) Đường khử (mg) 230 150 250 190 0,275 0,285 0,275 0,28 1,725 1,275 1,875 1,5 Hàm lượng đường khử (%) 0,345 0,255 0,375 0,3 Bảng 50 Hàm lượng đường khử mẫu M4(tỉ lệ 2:1) sau tháng Số lần Lần Lần Lần Trung bình Thể tích dịch sau lọc (ml) 230 150 250 190 Thể tích KMnO4(ml) 0,275 0,285 0,275 0,28 Đường khử (mg) 1,725 1,275 1,875 1,5 Hàm lượng đường khử (%) 0,345 0,255 0,375 0,3 Phụ lục Phụ lục Kết cảm quan mẫu bột Thần Kỳ trước sau bảo quản Bảng 51 Kết cảm quan mẫu bột Thần Kỳ trước sau bảo quản Tổng điểm (số điểm/25 điểm) Nhóm Nhóm Mẫu Trước bảo quản Sau 15 ngày Sau tháng M1 5 M2 13 13 10 M3 18 15 16 M4 20 19 17 M1 4 M2 15 13 15 M3 17 15 14 M4 20 20 17 Phụ lục Phụ lục 10 Sự nảy mầm hột Thần Kỳ Trọng lượng hột sau tuần bảo quản Bảng 52 Trọng lượng hột nhiệt độ 28 ± 2oC sau tuần bảo quản Tuần bảo quản Trọng lượng hột (g) tuần 0,274 ± 0,0101 tuần 0,2353 ± 0,0118 tuần 0,2349 ± 0,0108 tuần 0,1747 ± 0,0062 Sấy 45 oC 0,1641 ± 0,042 Sự hấp thu nước sau tuần tuần bảo quản Bảng 53 Sự hấp thu nước hột sau tuần bảo quản Các thời điểm Trọng lượng trung bình hột hấp thu nước thời điểm khác (g) hấp thu nước 0,2754 ± 0,0101 Sau 0,2794 ± 0,0088 Sau 0,2844 ± 0,0071 Sau 0,2880 ± 0,0068 Sau 0,2912 ± 0,0067 Sau 0,2934±0,0056 Sau 0,2963 ± 0,0082 Sau 0,2970 ± 0,0076 Sau 0,2979 ± 0,0083 Sau 0,2987 ± 0,0093 Sau 10 0,2988 ± 0,0092 Phụ lục Bảng 54 Sự hấp thu nước hột sau tuần bảo quản Các thời điểm Trọng lượng trung bình hột hấp thu nước thời điểm khác (g) hấp thu nước 0,1749 ± 0,0058 Sau 0,2061 ± 0,0073 Sau 0,2199 ± 0,0091 Sau 0,2297 ± 0,0069 Sau 0,2409 ± 0,0048 Sau 0,2513 ± 0,0159 Sau 0,2569 ± 0,0141 Sau 0,2586 ± 0,0129 Sau 0,2601 ± 0,0124 Sau 0,2609 ± 0,0117 Sau 10 0,2610 ± 0,0128 Ảnh hưởng vỏ hột lên nẩy mầm Bảng 55 Ảnh hưởng vỏ hột lên nảy mầm Nghiệm thức Tỷ lệ nảy mầm (%) Hột bóc vỏ 95,49 ± 1,02b Hột khơng bóc vỏ 91,85 ± 1,33a ... Thần Kỳ từ ứng dụng cho nghiên cứu phát triển loại trồng nƣớc ta Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn tiến hành thực đề tài: ? ?Phân tích, ứng dụng miraculin từ khảo sát nảy mầm hột Thần Kỳ (Synsepalum dulcificum. .. Thần Kỳ Nội dung thực đề tài: - Xác định thành phần Thần Kỳ - Ly trích tinh miraculin từ Thần Kỳ - Tạo dạng bột viên ngậm Thần Kỳ - Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến nảy mầm hột Thần Kỳ - Khảo sát. .. sát nảy mầm hột 39 Quả Thần Kỳ đƣợc tách phần thịt hột Thịt Thần Kỳ đƣợc đông khô để giữ nguyên hoạt chất miraculin Bột đông khô từ thịt Thần Kỳ đƣợc bảo quản -4oC sử dụng cho thí nghiệm Hột Thần