Cô lập và phân tích các hoạt chất từ dược liệu ích mẫu leonurus heterophyllus sw

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HUỲNH THỊ MAI TRANG CÔ LẬP VÀ PHÂN TÍCH CÁC HOẠT CHẤT TỪ DƯỢC LIỆU ÍCH MẪU Leonurus heterophyllus Sw Chun ngành : Cơng nghệ hóa học Mã số: 605275 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 01 năm 2013 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học : PGS TS PHẠM THÀNH QUÂN TS HÀ DIỆU LY Cán chấm nhận xét : TS LÊ THỊ HỒNG NHAN Cán chấm nhận xét : TS NGUYỄN THỊ LAN PHI Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 16 tháng 01 năm 2013 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: PGS TS NGUYỄN NGỌC HẠNH TS LÊ THỊ HỒNG NHAN TS NGUYỄN THỊ LAN PHI TS HUỲNH KHÁNH DUY PGS TS PHẠM THÀNH QUÂN Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT Độc lập - TựNAM - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: HUỲNH THỊ MAI TRANG Ngày, tháng, năm sinh: 23 – 01 -1984 Chuyên ngành: Cơng nghệ hóa học MSHV: 10050139 Nơi sinh: TP HCM Mã số : 605275 I TÊN ĐỀ TÀI: Cô lập phân tích hoạt chất từ dược liệu ích mẫu Leonurus heterophyllus Sw NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Thiết lập sắc ký đồ vân tay dược liệu ích mẫu cao hexan - Cô lập chất đánh dấu cao hexan - Xác định cấu trúc chất đánh dấu - Xây dựng liệu cho chất đánh dấu - Thiết lập chuẩn đối chiếu chất đánh dấu cô lập theo tiêu chuẩn ISO34 ISO13528 - Ứng dụng chất đối chiếu đánh dấu để xác định hàm lượng chất cao ich mẫu có mặt thị trường II NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 06 – 02 - 2012 III NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 30 – 11 - 2012 IV CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: PGS.TS PHẠM THÀNH QUÂN TS HÀ DIỆU LY CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Tp HCM, ngày tháng năm 20 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO TRƯỞNG KHOA iv LỜI CÁM ƠN Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc chân thành đến PGS TS PHẠM THÀNH QUÂN TS HÀ DIỆU LY hƣớng dẫn tận tình giúp đỡ suốt trình thực luận văn Xin gửi lời cám ơn đến quý thầy cô, anh chị Bộ môn Dƣợc liệu - Khoa Dƣợc – Đại học Y Dƣợc Tp HCM giúp đỡ nhiệt tình trình tìm hiểu định danh dƣợc liệu ích mẫu Xin cám ơn anh chị, bạn Khoa Thiết lập chất chuẩn chất đối chiếu – Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp HCM động viên, giúp đỡ suốt trình thực luận văn Xin gửi lời cám ơn chân thành đến Ban lãnh đạo, anh chị Khoa Kiểm nghiệm Mỹ phẩm, Khoa Kiểm nghiệm dạng Bào chế, Khoa Vật lý đo lƣờng Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp HCM cộng tác tạo điều kiện cho thực luận văn Tp Hồ Chí Minh, tháng 01 năm 2013 Huỳnh Thị Mai Trang v TÓM TẮT Đề tài “ Cơ lập phân tích hoạt chất từ dƣợc liệu ích mẫu Leonurus heterophyllus Sw.” lập thiết lập quy trình đánh giá hai chất đối chiếu hispanon leoheteronin B Đây hai chất chƣa có Dƣợc điển Việt Nam nhƣ Dƣợc điển khác Việc thiết lập quy trình đánh giá hai chất góp phần phục vụ cho công tác kiểm tra chất lƣợng sản phẩm chứa ích mẫu lƣu hành thị trƣờng SUMMARY Two lapdan diterpenoid lactones are hispanone and leoheteronin B were isolated and established working reference standards from Leonurus heterophyllus Sw These two substances are not included in the Pharmacopoeia of Vietnam as well as other Pharmacopoeia The establishment of two substances will contribute for the quality control of herbal drugs vi LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Huỳnh Thị Mai Trang vii MỤC LỤC Trang DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 2.1 Tổng quan ích mẫu 2.1.1 Đặc điểm thực vật 2.1.2 Mô tả 2.1.3 Phân bố sinh thái 2.1.4 Công dụng – Tác dụng dƣợc lý 2.1.5 Đặc điểm dƣợc liệu 2.1.6 Thành phần hóa học 2.1.7 Hoạt tính sinh học 12 2.1.8 Một số sản phẩm chứa ích mẫu thị trƣờng 12 2.2 Tổng quan chất đối chiếu 13 2.2.1 Khái niệm chất đối chiếu 13 2.2.2 Phân loại chất đối chiếu 13 2.2.3 Mục đích sử dụng 14 2.2.4 Cách sử dụng bảo quản 14 2.2.5 Hoạt động thiết lập chất đối chiếu nƣớc quốc tế 15 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 viii 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu 18 3.1.1 Trang thiết bị 18 3.1.2 Dung mơi hóa chất 18 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 3.2.1 Chiết xuất, phân lập, tinh chế 19 3.2.2 Xác định cấu trúc 19 3.2.3 Xây dựng tiêu chuẩn phƣơng pháp đánh giá chất đối chiếu 20 3.2.4 Xác định độ tinh khiết 20 3.2.5 Thẩm định quy trình phân tích 20 3.2.6 Đánh giá chất đối chiếu 22 3.2.7 Thiết lập chất đối chiếu 23 3.3 Ứng dụng chất đối chiếu thiết lập để xác định hàm lƣợng hispanon leoheteronin B cao khơ ích mẫu 25 KẾT QUẢ - NHẬN XÉT 26 4.1 Chiết xuất, phân lập, tinh chế 26 4.1.1 Chiết xuất 26 4.1.2 Thiết lập sắc ký đồ vân tay cao hexan 26 4.1.3 Phân lập, tinh chế 32 4.2 Xác định cấu trúc 33 4.3 Xây dựng tiêu chuẩn phƣơng pháp đánh giá chất đối chiếu 36 4.4 Xác định độ tinh khiết 36 4.5 Thẩm định quy trình phân tích 38 4.5.1 Tính tƣơng thích hệ thống 38 4.5.2 Tính đặc hiệu 39 ix 4.5.3 Độ lặp lại phƣơng pháp 41 4.5.4 Tính tuyến tính, hệ số tƣơng quan R2, phƣơng trình hồi quy 41 4.5.5 Độ phƣơng pháp 43 4.6 Đánh giá chất đối chiếu 44 4.7 Thiết lập chất đối chiếu 44 4.7.1 Đánh giá độ đồng q trình đóng lọ 44 4.7.2 Xác định giá trị ấn định 45 4.8 Tính hàm lƣợng hispanon leoheteronin B cao khơ ích mẫu OPC 47 KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC x DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACRS: Asian Chemical Reference Standard, Chất đối chiếu nƣớc Asian br: broad, rộng CCĐC: Chất chuẩn đối chiếu d: doublet, mũi đôi GLP: Good Laboratory Practice, Thực hành tốt phòng kiểm nghiệm HPLC : High Performance Liquid Chromatography, Sắc ký lỏng hiệu cao IR: Infra Red, hồng ngoại ISO/IEC: International Standard Organization/ International Electrotechnical Commission m: multiplet, mũi đa MeOH : methanol N: Số đĩa lý thuyết NMR: Nuclear Magnetic Resonance, Cộng hƣởng từ hạt nhân PDA : Photo Diode Array, Đầu dò dãy Iod quang PTN: Phịng thí nghiệm RP: Reversed Phase, pha đảo RSD : Relative standard deviation, độ lệch chuẩn tƣơng đối s: singlet, mũi đơn sept: septet, mũi bảy SKBM: Sắc kí mỏng SKC: Sắc kí cột 41 Kết luận: Phương pháp phân tích có tính đặc hiệu với leoheteronin B hispanon 4.5.3 Độ lặp lại phƣơng pháp Từ dung dịch gốc, pha nồng độ tương ứng 80 %, 100%, 120% nồng độ đo Mỗi nồng độ thực mẫu Kết trình bày bảng 4.11 Bảng 4.11: Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp Hispanon Mức nồng độ chuẩn đo 80% 100% 120% TB (%) Nồng độ (g/ml) Diện tích pic 20,55 1026595 20,55 1026919 20,55 Leoheteronin B Nồng độ (g/ml) Diện tích pic 20,24 1021893 20,24 1019616 1027232 20,24 1023058 25,69 1284592 25,33 1282317 25,69 1283632 25,33 1281613 25,69 1284591 25,33 1283699 30,83 1556707 30,36 1540122 30,83 1556127 30,36 1541679 30,83 1560704 30,36 1542545 RSD 0,03 0,04 0,16 0,08 RSD 0,17 0,08 0,08 0,11 Nhận xét: RSD ≤ 2,0 % đạt yêu cầu độ xác 4.5.4 Tính tuyến tính, hệ số tƣơng quan R2, phƣơng trình hồi quy Từ dung dịch gốc, pha nồng độ tương ứng 25%, 60 %, 80%, 100%, 130%, nồng độ đo Tiến hành sắc ký với điều kiện chọn Xây dựng đường biểu diễn tương quan diện tích theo nồng độ Kết trình bày bảng 4.12 42 Bảng 4.12: Kết khảo sát khoảng tuyến tính Hispanon Leoheteronin B STT Nồng độ (µg/ml) Diện tích Nồng độ (µg/ml) Diện tích 6,42 315912 6,33 312302 16,06 801081 15,81 791576 20,55 1026595 20,24 1021522 25,69 1297256 25,30 1284541 32,12 1624655 31,63 1600159 Hình 4.13: Hình biểu diễn mối tương quan diện tích theo nồng độ Phương trình hồi quy hispanon: yâ = 50978x (hệ số hồi quy b = 15017 khơng có ý nghĩa) (Phụ lục 10) R2 = 0,9999 Giới hạn LOD= 0,016 g / ml Phương trình hồi quy leoheteronin B: yâ = 51038x (hệ số hồi quy b = 11707 khơng có ý nghĩa) (Phụ lục 11) R2 = Giới hạn LOD= 0,013 g / ml 43 4.5.5 Độ phương pháp Kết độ trình bày bảng 4.13 Bảng 4.13: Kết khảo sát độ phương pháp Hispanon Mức nồng độ % đo 80% 100% 120% TB (%) Diện tích pic Leoheteronin B Nồng độ Nồng (g/ml) Tỷ lệ độ đo hồi tính từ (g/ml) phương phục % trình hồi quy 1026595 20,55 20,13 1026919 20,55 20,14 1027232 20,55 1284592 Diện tích pic Nồng độ (g/ml) Tỷ lệ Nồng tính từ độ đo hồi phương (g/ml) trình hồi phục % quy 1021893 20,24 20,24 1019616 20,24 20,24 20,15 1023058 20,24 20,24 25,69 25,19 1282317 25,33 25,33 1283632 25,69 25,18 1281613 25,33 25,33 1284591 25,69 25,19 1283699 25,33 25,33 1556707 30,83 30,53 1540122 30,36 30,36 1556127 30,83 30,52 1541679 30,36 30,36 1560704 30,83 30,61 1542545 30,36 30,36 102,03 101,99 100,90 101,64 101,52 101,19 100,92 101,21 Yêu cầu: 98,0 -102,0 % Vậy độ phương pháp đạt yêu cầu Kết luận: Kết thẩm định quy trình phân tích cho thấy với điều kiện sắc ký khảo sát, phương pháp đạt tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, độ lặp lại, tính tuyến tính, độ đúng, áp dụng để đánh giá độ tinh khiết chất đối chiếu 44 4.6 Đánh giá chất đối chiếu Kết đánh giá trình bày bảng 4.14 Bảng 4.14: Kết đánh giá hispanon leoheteronin B Chỉ tiêu Tính chất Định tính - IR - UV Hispanon Leoheteronin B Bột kết tinh màu trắng Bột kết tinh màu trắng Dao động C=O liên hợp 1654 Dao động C=O liên hợp 1654 cm1 cm-1, C=C 1600 cm-1, C-O , C=O vòng lacton 1747cm-1, C-O 1257cm-1 1203cm-1 Phổ mẫu thử có max 252 nm Phổ mẫu thử có max 228 252 nm Xem bảng 4.6 liệu phổ Xem bảng 4.6 liệu phổ - 1H – NMR, 13 C - NMR Điểm chảy 58,65 0C (DSC) Độ tinh khiết (HPLC) 96,75 % tính chế phẩm nguyên trạng 135,22 0C 100,00 % tính chế phẩm nguyên trạng 4.7 Thiết lập chất đối chiếu: 4.7.1 Đánh giá độ đồng trình đóng lọ Số lọ lấy kiểm tra đồng nhất: Leoheteronin B: 100 mg, đóng 20 lọ, lấy lọ Hispanon: 300 mg, đóng 60 lọ, lấy lọ Kết đánh giá độ đồng trình bày bảng 4.15, 4.16 Bảng 4.15: Độ tinh khiết leoheteronin B q trình đóng lọ STT Lọ số Lần (%) Lần (%) 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 Nhận xét: lọ leoheteronin B đồng q trình đóng 45 Bảng 4.16: Độ tinh khiết hispanon q trình đóng lọ STT Lọ số Lần (%) Lần (%) 10 13 17 18 96,71 96,63 96,58 96,6 96,23 96,31 96,59 96,73 96,25 96,31 96,78 96,43 96,27 96,54 96,74 96,74 Bảng 4.17: Phân tích phương sai yếu tố theo Anova cho hispanon Giữa nhóm Trong nhóm Tổng bình phương 0,006 0,581 Bậc tự 14 Tổng cộng 0,586 15 Nguồn sai số Bình phương trung bình 0,006 0,041 Ftn Ftc 0,154 4,600 Nhận xét: Ftn = 0,154 < Ftc = 4,600 Vậy lọ hispanon đồng q trình đóng Kết luận: hispanon leoheteronin B đồng q trình đóng lọ nên tiến hành để xác định giá trị ấn định 4.7.2 Xác định giá trị ấn định - Đánh giá chất chuẩn thơng qua liên phịng thí nghiệm Leoheteronin B Bảng 4.18: Kết xác định độ tinh khiết liên phòng leoheteronin B STT PTN1 PTN2 PTN3 TB 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 100,00 46 Giá trị ấn định leoheteronin B 100,00 % Hispanon Bảng 4.19: Kết xác định độ tinh khiết liên phòng hispanon STT TB PTN1 96,75 96,60 96,75 96,31 96,58 96,78 96,63 PTN2 96,63 96,99 96,59 96,53 96,23 96,28 96,54 PTN3 96,71 96,77 96,78 96,73 96,77 96,73 96,75 Bảng 4.20: Kết đánh giá liên phịng thí nghiệm hispanon Nguồn sai số Tổng bình phương Bậc tự Bình phương trung bình Giữa nhóm Trong nhóm Tổng cộng 0,129 0,538 0,667 15 17 0,065 0,036 Ftn Ftc 1,802 3,682 Nhận xét: Ftn = 1,802 < Ftc = 3,682 - Kết luận: kết trung bình phịng thí nghiệm khác khơng có ý nghĩa, quy trình phân tích có độ lặp lại cao, hàm lượng chất phân tích khơng phụ thuộc vào phịng thí nghiệm tham gia đánh giá - Xác định giá trị ấn định Bảng 4.21: Kết xác định giá trị ấn định hispanon Số lần lặp Xo -  Xo +  TB Độ lệch s X* S* x*(0) 96,64 0,012 96,68 0,125 x*(1) 96,54 96,90 96,68 0,011 96,68 0,120 x*(2) 96,50 96,85 96,68 0.011 96,68 0,120 Vậy giá trị ấn định hispanon: 96,68 % x*(3) 96,50 96,85 96,68 0,011 96,68 0,120 47 Độ không đảm bảo đo u < 0,3Sx  ết luận: giá trị ấn định hispanon leoheteronin B ≥ 95,0 % đạt yêu cầu hàm lượng chất đối chiếu dược liệu Xác định hàm lƣợng hispanon leoheteronin B cao khơ ích mẫu 4.8 Điều kiện sắc ký - Cột C8 (150 x 4,6 mm x 5m) - Detector PDA bước sóng 254 nm - Tốc độ dịng 1,0 ml / phút - Thể tích tiêm 20 l - Pha động: MeOH : H3PO4 0,1 % pH 3,0 theo chương trình (bảng 4.3) - Thời gian (phút) MeOH H3PO4 0-20 63  70 37  30 20-35 70  100 30  35-50 100  63  37 50-60 63 37 Dung dịch chuẩn 1: chuẩn bị mẫu hispanon có nồng độ khoảng 0,025 mg/ml methanol - Dung dịch chuẩn 2:chuẩn bị mẫu leoheteronin B có nồng độ khoảng 0,025 mg/ml methanol - Dung dịch cao khơ OPC: cân 5,0 g cao hịa tan 20 ml nước, chiết lỏng – lỏng với n-hexan ( x 30 ml ), cô thu hồi dung mơi, hịa tan cắn 100 ml methanol, hút ml dung dịch pha loãng đến 20 ml methanol, lọc qua màng lọc 0,45 m - Tiến hành tiêm vào hệ thống dung dịch trắng, dung dịch chuẩn dung dịch thử Khảo sát tính tương thích tính hàm lượng chất theo cơng thức 48 %A= Dt Dc Trong đó: x mc xFxC% mt Dt, Dc diện tích đỉnh pic mẫu thử; mẫu chuẩn mt, mc khối lượng mẫu thử, mẫu chuẩn C% hàm lượng chuẩn F độ pha lỗng mẫu thử  Tính tương thích hệ thống Bảng 4.22 Kết tính tương thích hệ thống cao khơ ích mẫu Tên chất Số đĩa lý thuyết Hệ số đối xứng Hispanon 21287 1,08 Leoheteronin B 9834 1,07 Độ phân giải 40 Nhận xét: Tính tương thích hệ thống đạt yêu cầu số đĩa lý thuyết khơng 5000, hệ số đối xứng khơng 1,2  Hàm lượng hispanon leoheteronin B trình bày bảng 4.23 Bảng 4.23: Kết định lượng hispanon leoheteronin B cao khơ ích mẫu OPC Mẫu Cao khô OPC Hàm lượng Hàm lượng Leoheteronin B (%) Hispanon (%) 0,56 0,97 49  Kết khảo sát độ lặp Bảng 4.24: Khảo sát độ lặp cao khơ ích mẫu STT RSD (%) Diện tích đỉnh hispanon 2596948 2596930 2579486 2596948 2596930 2579486 Diện tích đỉnh leoheteronin B 714657 717178 714870 714657 717178 714870 0,35 0,17 Nhận xét: RSD ≤ 2,0 % đạt yêu cầu độ lặp  Xác định tỷ lệ phục hồi phương pháp: Thêm vào mẫu thử lượng hoạt chất (10 %, 20 %, 30%) so với hoạt chất có sẵn Tiến hành định lượng theo phương pháp phân tích (Phụ lục 12, 13) Bảng 4.25: Kết tỷ lệ phục hồi cao khơ ích mẫu Mức thêm chuẩn so với nồng độ đo 10% 20% 30% TB (%) Hispanon Leoheteronin B 101,97 99,07 99,95 101,43 100,68 101,47 101,83 100,08 102,24 100,97 101,42 100,42 102,00 101,31 100,45 102,03 101,75 101,09 101,64 101,35 Nhận xét: kết khoảng 98,0 % - 102,0 % đạt yêu cầu độ 50 KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ Nhận xét chung - Về ý nghĩa thực tiễn đề tài: Chúng khảo sát thiết lập sắc ký đồ vân tay cao hexan dược liệu ích mẫu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Đây phương pháp phổ biến sử dụng rộng rãi phòng thí nghiệm Chúng tơi thiết lập hai chất đánh dấu làm chất đối chiếu Đây chất đối chiếu chưa có Việt Nam chưa có chuyên luận Dược điển Việt Nam Dược điển khác Hiện nay, phương pháp kiểm tra dược liệu chế phẩm đông dược dược liệu chủ yếu phương pháp vi phẫu dược liệu sắc ký mỏng Tuy nhiên, phương pháp định tính mặt thực vật hoạt chất cũ thị trường dược liệu ngày đa dạng phức tạp Việc thiết lập chất đối chiếu sắc ký đồ vân tay phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao góp phần nâng cao hiệu kiểm tra chất lượng dược liệu ích mẫu chế phẩm chứa ích mẫu thị trường - Về phương pháp sử dụng đề tài: Trong q trình lập tinh chế, chúng tơi có sử dụng phương pháp sắc ký lỏng điều chế kết hợp với sắc ký cột Sắc ký cột phương pháp thường dùng việc phân lập hợp chất Ưu điểm phương pháp đơn giản, dể thực Tuy nhiên, hợp chất phức tạp đòi hỏi độ tinh khiết cao phải tiến hành sắc ký cột nhiều lần kết hợp sắc ký mỏng Việc làm địi hỏi nhiều thời gian xảy tình trạng thất mẫu Hơn nữa, đề tài khảo sát điều kiện để thiết lập sắc ký đồ vân tay phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Do đó, chúng tơi sử dụng điều kiện có để kết hợp với phương pháp sắc ký lỏng điều chế nhằm tiết kiệm thời gian cô lập nhiều chất có độ tinh khiết cao lúc 51 Kết luận Qua thời gian thực hiện, đề tài luận văn đạt kết sau - Thiết lập sắc ký đồ vân tay cao hexan dược liệu ích mẫu - Cô lập tinh chế hợp chất labdan diterpen từ phân đoạn hexan cao ích mẫu phương pháp kết hợp sắc ký cổ điển sắc ký lỏng cao áp điều chế - Bằng phương pháp phổ nghiệm so sánh với tài liệu tham khảo, xác định hợp chất hispanon leoheteronin B với độ tinh khiết ≥ 95,0 % - Đã tinh khiết 550 mg hispanon 250 mg leoheteronin B - Xây dựng thẩm định quy trình đánh giá hispanon leoheteronin B làm chất chuẩn dược liệu Xác định độ tinh khiết phương pháp HPLC so sánh với DSC đạt yêu cầu chất chuẩn đối chiếu từ dược liệu với độ tinh khiết đạt 96,68 với độ không đảm bảo đo u cho hispanon 100 % tinh khiết cho leoheteronin B - Ứng dụng quy trình đánh giá xây dựng để định tính, định lượng hispanon leoheteronin B cao khơ ích mẫu Hƣớng nghiên cứu tiếp - Tiến hành chiết ích mẫu với lượng lớn để phân lập lượng chất đối chiếu nhiều (khoảng g) - Khảo sát phân đoạn khác cao hexan, cao ethyl acetat, cao ethanol… ích mẫu nhằm lập, tinh chế hợp chất làm chuẩn đối chiếu từ dược liệu phục vụ cho công tác kiểm tra, giám sát chế phẩm ích mẫu thị trường - Thử hoạt tính sinh học chất phân lập 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Tiến Bân (2005), Danh mục lồi thực vật Việt Nam (III), NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội, 319 Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn, Viện Dược liệu (2006), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Tập 1, NXB Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội, 1039 Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam 4, 795 – 796 Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, NXB Y học, Tp Hồ Chí Minh, 600 Võ Văn Chi (2007), Sách tra cứu tên cỏ Việt Nam, NXBGD, 325 Phạm Hồng Hộ (2006), Cây có vị thuốc Việt Nam, NXB Trẻ, Thành phố Hồ Chí Minh, 481 Đỗ Tất Lợi (1995), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kỹ thuật, 47 – 48 Hoàng Thị Tuyết Nhung (2012), “Nghiên cứu chiết xuất tinh chế Conessin, Kaempferol, Nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu kiểm nghiệm thuốc”, Luận án tiến sĩ dược học, Đại học Dược Hà Nội Phan Minh Giang, Phan Tống Sơn (2009), “Nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào diterpenoid dảy lapdan từ thuốc ích mẫu (Leonurus heterophyllus Sweet, Lamiaceae)”, Tạp chí dược học, 13-15 10 Cục quản lý Dược (2010), Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc - Ban hành kèm theo Quyết định số 229/QĐ-QLD ngày 12 tháng 08 năm 2010 53 Tiếng Anh 11 Boalino D M., McLean S., Reynolds W F., Tinto W F (2004), Labdane diterpenoid of Leonurus sibiricus, J Nat Prod., 67(4), 714-717 12 Cai X.-H., Che C.-T., Lam C.-K., Mak T C W., Wu L.-J (2006), A new labdane diterpenoid from Leonurus heterophyllus, J Asian Nat Prod Res., 8(7), 599-603 13 Chang J M., Shen C C., Huang Y L., Shieh B J., Chen C C (2010), Two new glycosides from Leonurus japonicus, J Asian Nat Prod Res., 12(9), 740-744 14 David M Bliesner (2006), Validating chromatographic methods - A practical guide, NXB Wiley-Intersciencs, Canada 15 Hersel U., Steck M., Seifert K (2000), A new route to 2,7- and 7functionalized labdanes, Eur J Org Chem., 1609-1615 16 Lee.C.M, Jian L.M Shang, HS, Po M (1991), J Bristish of Pharmacology, 1719-24 17 Malakov P Y., Papanov G Y., Tomova K N., Rodriguez B., Torre M C D l (1998), An abietane diterpenoid from Leonurus marrubiastrum, Phytochemistry, 48(3), 557-559 18 Moon H T , Jin Q., Shin J E., Choi E J., Han H K., Kim Y S., Woo E R (2010), Bis-spirolabdane-Type Diterpenoids from Leonurus sibiricus, J Nat Prod.,73 (2), 123-126 19 Morita H., Gonda A., Takeya K., Itokawa H (1996), Cycloleonuripeptides A, B and C, three new proline-rich cyclic nonapeptides from Leonurus heterophyllus, Bioorg Med Chem Lett., 6(7), 767-770 20 Morita H., Gonda A., Takeya K., Itokawa H., Iitaka Y (1997), Cycloleonuripeptide D, a new proline-rich cyclic decapeptide from Leonurus heterophyllus, Tetrahedron, 53(5), 1617-1626 54 21 Morita H., Iizuka T., Gonda A., Itokawa H., Takeya K (2006), Cycloleonuripeptides E and F, cyclic nonapeptides from Leonurus heterophyllus, J Nat Prod., 69(5), 839-841 22 Papanov G., Malakov P., Tomova K (1998), 19-Hydroxygaleopsin, a labdane diterpenoid from Leonurus cardiaca, Phytochemistry, 47(1), 139-141 23 Phan M G., Phan T S., Matsunami K., Otsuka H (2005), New labdanetype diterpenoids from Leonurus heterophyllus Sw., Chem Pharm Bull, 53(8), 938-941 24 Phan M G., Phan T S., Matsunami K., Otsuka H (2005), New bisspirolabdane-type diterpenoids from Leonurus heterophyllus Sw., Chem Pharm Bull, 53(11), 1475-1479 25 Satoh M., Satoh Y., Isobe K., Fujimoto Y (2002), Studies on the Constituents of Leonurus sibiricus L., Chem Pharm Bull., 51(3), 341-342 26 Seo H K., Kim J S., Kang S S (2010), Labdane diterpenes and flavonoids from Leonurus japonicus, Helv Chim Acta, 93, 2045-2051 27 Tasdemir D., Sticher O (1997), Further labdane diterpenoids isolated from Leonurus persicus, J Nat Prod.,60, 874-879 28 Tran M H, Tran C L., Bui T V., To D C, Byung S M (2011), Labdane – type diterpenoids from Leonurus heterophyllus and their cholinesterase inhibitory activity, Phytotherapy Res, 25, 611 – 614 29 Wu H., Froczek F R., Ferreira D., Burandt C L., Jr, Zjawiony J K (2011), Labdane diterpenoids from Leonurus sibiricus, J Nat Prod.,74 (4), 831-836 30 Yuhong L., Miwa K., Yoshiyasu F (2012), Spirocyclic nortriterpenoids with NGF-potentiating activity from the fruits of Leonurus heterophyllu,s J Nat Prod, 2012, 1353-1358 55 Trang web 31 http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/215 32 http://idqc.info/ ... TÊN ĐỀ TÀI: Cơ lập phân tích hoạt chất từ dược liệu ích mẫu Leonurus heterophyllus Sw NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Thiết lập sắc ký đồ vân tay dược liệu ích mẫu cao hexan - Cô lập chất đánh dấu cao... cho chất đối chiếu lập phục vụ cho công tác kiểm tra chất lượng sản phẩm có chứa ích mẫu lưu hành thị trường, luận văn thực đề tài “ Cơ lập phân tích hoạt chất từ dược liệu ích mẫu Leonurus heterophyllus. .. TẮT Đề tài “ Cơ lập phân tích hoạt chất từ dƣợc liệu ích mẫu Leonurus heterophyllus Sw. ” cô lập thiết lập quy trình đánh giá hai chất đối chiếu hispanon leoheteronin B Đây hai chất chƣa có Dƣợc