Ứng dụng của Protease

Ứng dụng PROTEASE KHÁI NIỆM PROTEASE Nhóm enzyme protease (peptide– hidrolase 3.4) xúc tác trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CO-NH-) phân tử protein, polypeptide đến sản phẩm cuối acid amine Nhiều proteaze có khả thủy phân liên kết este vận chuyển axit amin Company Logo CẤU TRÚC ENZYME PROTEASE MƠ HÌNH ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN TỬ PROTEIN Phân loại vị trí cắt liên kết xúc tác pH hoạt động PHÂN LOẠI Peptidase(protease) Exopeptidase Endopeptidase Amino Carboxypepti peptidase dase Serine Cystein Aspartic Matallo prinnaseote proteinase proteinase proteinase Exopeptidase • Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu N tự • Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu C chuỗi polypeptide Exopeptidase • Serin proteinase:là proteinase chứa nhóm –OH gốc serine trung tâm hoạt động • • Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trung tâm hoạt động • Aspartic proteinase:hầu hết aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin • Metallo proteinase: nhóm proteinase tìm thấy vi khuẩn, nấm mốc vi sinh vật bậc cao có Ser – His - Asp trung tâm hoạt động Serine protease - Nhóm protease - Có giới sinh vật: vsv cổ, virus, prokaryote, eukaryote - Gồm 280 gốc acid amin - M = 20.000 -27.000 Da - pH otp = – 11 Serine protease - nhóm nhỏ: + chymotrypsin: + subtilisin: His-Asp-Ser Asp-His-Ser + carboxypeptidase Y: Ser-Asp-His + Clp protease: Ser-His-Asp Dựa vào pH hoạt động * Protease acid: pH 2-4 có nhiều tế bào động vật, nấm men, thấy vi khuẩn * Protease trung tính: có pH 7-8 papain từ đu đủ, bromelain từ dứa * Protease kiềm: có pH 9-11 Nguồn thực vật Nguồn động vật Vi khuẩn : Bacillus subtilis… Xạ khuẩn : Streptomyces grieus… Nấm mốc : Aspergillus oryzae… Nguồn vi sinh vật Thu nhận serine thô Trùn quế Rửa Nước cất 0.02% natri azide Nghiền nhuyễn Nhiệt độ phịng Ủ 10 ngày Trích ly Ly tâm o C 10000 vòng / 30 phút Acetone ( : 2) Tủa protein Serine protease thơ ĐẶC TÍNH CỦA PROTEASE • Bền mơi trường axit (pH=2-6) • Bền với nhiệt • Để tăng hiệu tác dụng dùng phối hợp loại proteinase loại: vi khuẩn, nấm mốc, thực vật với tỷ lệ tổng cộng – 2% khối lượng protein cần thuỷ phân • Thủy phân giữ nguyên tính chất nguyên liệu vitamin, không sinh sản phẩm phụ, màu Chất ức chế Chất ức chế - Diisopropyl fluorophosphate (DPF) - Phenylmethylsulfony fluoride (PMSF) => Alkyl hóa khơng thuận nghịch gốc serine ... Clp protease: Ser-His-Asp Dựa vào pH hoạt động * Protease acid: pH 2-4 có nhiều tế bào động vật, nấm men, thấy vi khuẩn * Protease trung tính: có pH 7-8 papain từ đu đủ, bromelain từ dứa * Protease. .. amin Company Logo CẤU TRÚC ENZYME PROTEASE MƠ HÌNH ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN TỬ PROTEIN Phân loại vị trí cắt liên kết xúc tác pH hoạt động PHÂN LOẠI Peptidase (protease) Exopeptidase Endopeptidase... tâm hoạt động Serine protease - Nhóm protease - Có giới sinh vật: vsv cổ, virus, prokaryote, eukaryote - Gồm 280 gốc acid amin - M = 20.000 -27.000 Da - pH otp = – 11 Serine protease - nhóm nhỏ: