BÀI báo cáo GIỚI THIỆU GLYCOSID TRỢ TIM

MỞ ĐẦU Hợp chất thiên nhiên hay hợp chất tự nhiên là các chất hóa học có nguồn gốc từ thiên nhiên hoặc được con người tách ra từ các loại động, thực vật trong tự nhiên có hoạt tính sinh

BÀI BÁO CÁO GIỚI THIỆU GLYCOSID TRỢ TIM

GVHD: Võ Kim Thành

LỚP: 16CHP

NHÓM 1: Võ Thị Kiều My

Nguyễn Thị Kiều

Đoàn Thị Thanh Cúc

Nguyễn Thúy Xuân

Ngô Thị Kiều

Phạm Phú Cường

Mục lục:

A Khái quát về glycoside tim

I Định nghĩa

II Nguồn gốc

B Chiết tách glycoside từ cây Trúc đào

I Oleandrin

1.1 Tính chất vật lý 1.2 Tính chất hóa học

II Nerin

1.1 Tính chất vật lý 1.2 Tính chất hóa học

III Adynerin

IV Neriantin

C Kỹ thuật chiết tách

I Sơ đồ chiết tách

II Thuyết minh

III Tiến hành các phản ứng định tính

3.1 Phản ứng Liberman 3.2 Phản ứng Baljet 3.3 Phản ứng Legal 3.4 Phản úng Keller – Kiliani 3.5 Phản ứng Xanthydrod 3.6 Sắc ký lớp mỏng

IV Tác dụng dược lý và độc tính

4.1 Tác dụng dược lý 4.2 Độc tính

MỞ ĐẦU

Hợp chất thiên nhiên ( hay hợp chất tự nhiên) là các chất hóa học có nguồn gốc từ thiên nhiên hoặc được con người tách ra từ các loại động, thực vật trong tự nhiên có hoạt tính sinh học hoặc có tác dụng dược học dùng để làm thuốc Ngành hóa học chuyên nghiên cứu để chiết tách và chuyển hóa các hợp chất tự nhiên gọi là ngành hóa học các hợp chất thiên nhiên ( hay hoá học các hợp chất tự nhiên)

Đây là môn khoa học có ý nghĩa quan trọng không chỉ trong ngành hóa học mà còn trong y học Một trong số hợp chất thiên nhiên được biết đến rộng rãi trong y học là nhóm Glycosid trợ tim là một chất có tác dụng đặc hiệu đối với bệnh tim

Ngày nay với trình độ khoa học kỹ thuật tiên tiến, việc chiết xuất thành phần Glycosid trợ tim ở một số bộ phận của cây (ví dụ ở lá cây trúc đào, hành biển,…) và đã thực hiện đại trà trong phòng thí nghiệm hay các trung tâm nghiên cứu dược liệu nhằm đáp ứng nhu cầu sản xuất thuốc chữa bệnh tim cho con người

A KHÁI QUÁT VỀ GLYCOZIT TRỢ TIM

I Định nghĩa:

Glycozit trợ tim ( Glycosid) làhợp chất thiên nhiên mà cấu trúc hỗn hợp bao gồm 2 thành phần: Phần đường và Phần không đường (còn được gọi là Aglycon hoặc Genin) liên kết với nhau bằng liên kếtGlycosid

Những glycozit steroid có tác dụng đặc biệt lên tim, ở liều điều trị thì nó có tác dụng cường tim, làm chậm và điều hòa nhịp tim Nếu quá liều thì gây nôn làm chảy nước bọt, mờ mắt, yếu các cơ, loạn nhịp tim, giảm sức co bóp của tim và cuối cùng làm ngừng tim

II Nguồn gốc:

Glycozit trợ tim có trong hơn 45 loài thực vật chủ yếu thuộc các họ: Apocynaceae, Asclepiadaceae, Celastraceae, Cruciferae,…và trong một số côn trùng, ở trong cây glycozit trợ tim có ở các bộ phận: lá, hoa, vỏ thân, rễ, thân rễ, nhựa mủ,…

Cây sừng trâu Cây thông thiên

B CHIẾT TÁCH GLYCOSID TỪ CÂY TRÚC ĐÀO

Trong lá trúc đào người ta nghiên cứu thấy có 4 glycosid chủ yếu: Oleandrin, Nerin, Neriantin, Adynerin

I Oleandrin: Còn gọi là Neriolin (Liên Xô cũ) hay Folinerin (theo

Schering) hoặc Oleandrosid

1.1 Tính chất vật lý:

- Là 1 glycosid không màu, có tinh thể hình kim, vị rất đắng

- Nhiệt độ nóng chảy: 245 – 250 C

1.2 Tính chất hóa học:

- Công thức nguyên tử: C32H48O9

- Trọng lượng phân tử là: 576,70

- Thủy phân acid (dùng HCl 0.1N trên nồi cách thủy 2 giờ) Sẽ cho phản ứng là Oleandrigenin (hay 16 acetyl gitoxigenin) và một chất đặc biệt là Cleandrosa

- Nhưng nếu dùng dung dịch 0.5N HCl thủy phân trong 4 giờ trên nồi cách thủy tạo ra Dianhydrogitoxigenin

- Nếu dùng dung dịch kiềm nhẹ để thủy phân sẽ thu được gốc Desaxtyloleandrin

II Nerin: Còn được gọi là Neriosid

2.1 Tính chất vật lý:

- Không có tinh thể, bột vô định hình, màu vàng, vị đắng

- Tan trong nước và rượu, không tan trong ether ethylic và ether dầu hỏa, chloroform, benzen, acetat ethyl

2.2 Tính chất hóa học:

- Không phải là 1 nguyên chất mà là 1 hỗn hợp các glycoside trợ tim

- Dung dịch lỏng, trong nước dễ tạo bọt, đun tới 160 – 170 C thì

phân giải

- Thủy phân bằng dung dịch HCl, đun sôi đến 37 – 39% chất genin

vô định hình

III Adynerin:

- Là 1 glycosid có tinh thể

- Độ nóng chảy: 219 – 220C

- Không tan trong nước và benzen, tan trong cồn cao nhiệt độ 97C,

chloroform, khó tan trong cồn methylic

- Trong công thức có 1 nối kép giữa C8 và C9, do đó không có tác dụng trợ tim

IV Neriantin:

- Là 1 glycosid có tinh thể hoặc vô định hình

- Vị đắng, tan trong nước và cồn, không có tác dụng trợ tim

- Công thức cấu tạo chưa được xác định rõ rang, trong phân tử có 2 nối kép nhưng vị trí chưa xác định

- Tuy hàm lượng nhiều nhưng hoạt tính sinh vật rất thấp vì không có nhóm

OH ở C14 nên không có ý nghĩa thực tế

C KĨ THUẬT CHIẾT TÁCH

Trong 4 glycosid trên chỉ có oleandrin có chất glycoside giúp trợ tim Vì vậy, ta

sẽ tiến hành chiết tách phần oleadrin trên cây trúc đào

I Sơ đồ chiết tách:

- Phơi khô

- Đem xay thô 2 – 5mm Ngâm với 50 ml cồn 25% trong 24 giờ Gạn, ép bã

Thêm ½ lít dung dịch chì acetat 30%

Lọc

- Thêm 1 ít chì acetat 30%

- Lọc kết tủa

- Thêm 2 lít dung

Để yên trong 1 đêm, gạn dịch Na 2 SO 4 15%

- Quấy đều, lọc

Lọc, rửa cặn với 2 lít cồn 25% - Thêm 2 lít dung dịch

Na 2 SO 4 15%

- Quấy đều, lọc

- Thêm 2 lít dung dịch Na 2 SO 4 15%

- Quấy đều, lọc

- Cho bốc hơi ở áp suất giảm

- Nhiệt độ 50 – 55  C Để nguội Thêm 200ml cồn 70% Đun

- Để trong tủ lạnh vài ngày

- Lọc lấy tinh thể, kết tinh vài lần Thuyết

Lá trúc đào

5kg bột lá Dịch chiết Dung dịch nước ancol Dung dịch nước

Dung dịch nước Dịch lọc

Dịch lọc Dung dịch nước

Dịch lọc

Dịch lọc Dịch lọc Glycoside thô

Dd Glycoside Oleandrin tinh chế

II Thuyết minh:

- Chiết: Lá khô đem xay thô (2 – 5mm) Ngâm 5kg bột lá với 50 lít cồn 25

trong 24 giờ Gạn được chừng 25 – 27 lít, ép bã lấy thêm được 18 – 20 lít nữa

- Loại tạp: Dồn các dịch chiết lại rồi thêm ½ lít dung dịch chì acetat 30%

Sau đó thử xem đã hết tạp chất chưa bằng cách lọc 1 ít và thêm vào dịch lọc

1 ít chì acetat, nếu còn tủa thì phải thêm chì acetat nữa Để yên trong 1 đêm, gạn lấy nước trong, phần không gạn được thì lọc, rửa cặn với 2 lít cồn 25 Dồn các nước trong lại và rót dần vào đấy 2 lít dd Na2SO4 15%, quấy đều, lọc, thử xem đã hết Pb(CH3COOH)2 chưa, nếu còn phải thêm dd Na2SO4.

- Bốc hơi dung môi: Cho dịch lọc vào nồi, bốc hơi ở áp suất giảm, nhiệt độ từ

50 – 55 C Cất cho đến khi còn 1/6 thể tích ban đầu nghĩa là còn khoảng 8 lít, để nguội Glycosid thô sẽ đọng lại ở đáy nồi (khoảng 48 – 50g)

- Tinh chế: Cho glycoside thô vào bình, thêm 200ml cồn 70, đặt vào nước nóng cho tan hết, rồi cho vào tủ lạnh trong vài ngày Lọc lấy tinh thể, kết tinh lại 1 vài lần, sẽ thu được 5 – 6g oleandrin tinh chế

III Tiến hành các phản ứng định tính:

3.1 Phản ứng Liberman:

- Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 1ml anhydride acetic, lắc đều cắn Nghiêng ống 45, cho từ từ theo thành ống 0,5ml sulfuric đặc, tránh

xáo trộn chất lỏng trong ống Ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng sẽ xuất hiện 1 vòng màu tím đỏ Lớp chất lỏng phía dưới có màu hồng, lớp trên có màu xanh lá

3.2 Phản ứng Baljet:

- Pha thuốc thử Baljet: Cho vào ống nghiệm to 1 phần dd acid picric 1% và 9 phần dd NaOH 10%, lắc đều

- Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc đều cho tan hết cắn Nhỏ từng giọt thuốc thử Baljet mới pha cho đến khi xuất

hiện màu đỏ da cam So sánh màu sắc với ổng chứng là ống không có cắn glycoside tim thấy ống thử có màu đỏ cam đậm hơn ống chứng

3.3 Phản ứng Legal:

- Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc đều cho tan hết cắn Nhỏ 1 giọt thuốc thử Natri Nitroprussiat 0,5% và 2 giọt

dd NaOH 10% Lắc đều sẽ xuất hiện màu đỏ cam

- So sánh màu sắc với ống chứng là ống không có cắn glycoside tim thấy ống thử có màu đỏ cam đậm hơn ống chứng

Chú ý: Các phản ứng của vòng lacton cho màu sắc không bền nên cần quan sát

màu ngay sau khi nhỏ thuốc thử

3.4 Phản ứng Keller – Kiliani:

- Cho vào ống nghiệm chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc đều cho tan hết cắn Thêm vài giọt dd sắt (III) clorid 5% pha trong acid acetic Lắc đều, Nghiêng ống 45 Cho từ từ theo thành ống 0,5ml acid sulphuric

đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống Ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng

sẽ xuất hiện 1 vòng màu tím đỏ

- Lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía trên sẽ có màu xanh lá

3.5 Phản ứng Xanthydrol:

- Cho vào ống nghiệm chứa cắn glycoside tim 0,5ml thuốc thử Xanthydrol Đun ống nghiệm trong nồi cách thủy sôi 3 phút, sẽ xuất hiện màu đỏ

3.6 Sắc ký lớp mỏng:

- Dịch chấm sắc ký: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim ở trên 2 giọt CHCl3 – EtOH (1:1), lắc nhẹ để hòa tan cắn được dịch chấm sắc ký

- Lấy 1mg tinh thể Neriolin chuẩn hóa tan trong 0,5ml CHCl3 – EtOH (1:1), lắc nhẹ được dd Neriolin chuẩn để chấm sắc ký

- Bản mỏng sắc ký: Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 (Merck), hoạt hóa ở

110C trong 1 giờ, bảo quản trong bình hút ẩm để chấm sắc ký

- Dùng mao quản chấm riêng biệt dịch chấm sắc ký và dd Neriolin chuẩn lên bản mỏng Silicagel kích thước 2x10cm

- Hệ dung môi khai triễn: CHCl3 – n-BuOH (9:0,5)

- Bình sắc ký đã được bão hòa dung môi khai triễn

- Sau khi khai triễn sắc ký, quan sát các vết bằng đèn tử ngoại ở bước song 254nm và 366nm, sau đó phun thuốc thử vanillin 1% H2SO4

Kết quả: Sắc ký đồ dịch chiết cắn glycoside tim từ lá Trúc đào có vết tương ứng với

vết Neriolin chuẩn với Rf = 0,75 có màu xanh đen ở bước sóng 254nm

IV Tác dụng dược lý và độc tính:

4.1 Tác dụng dược lý:

- Lá trúc đào chứa nhiều loại glycosid Đã chứng minh tác dụng trợ tim của 16-anhydrodigitalinum verum monoacetat, odorosid D, K, odorobiosid K, monoacetat của odorotriosid G, odorobiosid G và odorosid H Hàm lượng thấp của những glycosid này ngăn cản việc đưa chúng vào thử lâm sàng Hoạt chất chính oleandrin của lá trúc đào hấp thụ tốt khi uống, và khác với Digitalis là ít tích lũy, có tác dụng kích thích tim và lợi niệu rõ rệt Nerifolin tác dụng yếu hơn nhiều Các flavonol glycosid có tác dụng đối với độ thấm thành mạch và lợi tiểu Trên lâm sàng, cornerin có tác dụng đối với các rối loạn về tim, đặc biệt cải thiện chức năng của cơ tim Vỏ có 1 glycosid độc, rosaginin

- Trúc đào có hoạt tính ức chế sự sinh trưởng đối với các dòng tế bào ung thư người, với liều có tác dụng ED50 xê dịch từ 0,008 đến 2,13 microgam/ml, tùy thuộc vào dòng tế bào Cao cồn trúc đào (lá, thân, rễ) có tác dụng kháng siêu vi khuẩn trong thí nghiệm xác định nồng độ tối thiểu ức chế sự phát triển của siêu vi khuẩn, và tác dụng chống ung thư trong thử nghiệm xác định nồng độ thấp nhất diệt các tế bào một tầng phát triển nhanh lấy từ thận khỉ được nuôi cấy và gây nhiễm với siêu vi khuẩn bệnh herpes typ 1

- Một phân đoạn polysaccharid thô, thu được do tủa từ cao nước trúc đào bằng cồn, đã có hoạt tính rất cao trong thử nghiệm về thực bào bạch cầu

hạt in vitro, với những nồng độ từ 10-6 đến 10-2 mg/ml Phân đoạn này cho nhiều polysaccharid với trọng lượng phân tử tương ứng từ 17.000 đến

12.000 D, xác định bằng phương pháp lọc đông và sắc ký trao đổi ion Từ dịch thẩm tách, đã thu được một hỗn hợp polysaccharid do tủa bằng cồn, tiếp theo bởi sắc ký đông Hỗn hợp này gồm ba polysaccharid có trọng lượng phân tử tương ứng: 3.000; 5.500 và 12.000 D Chúng đều chứa acid galacturonic cùng với rhamnose, arabinose, xylose, galactose và glucose Hỗn hợp polysaccharid này có hoạt tính rất cao trong các thử nghiệm miễn dịch học vê thực bào bạch cầu hạt, về yếu tố hoại tử u, và về sự chuyển dạng của tế bào lympho

- Glycosid toàn phần (thuốc neriolin) sản xuất từ lá trúc đào ở Việt Nam dưới dạng thuốc uống, được áp dụng điều trị cho bệnh nhân suy tim, đã có tác dụng trợ tim tốt, làm đỡ triệu chứng khó thở ở bệnh nhân suy tim sau 2-3 giờ (tác dụng rõ rệt) So với digitalin, neriolin (oleandrin) có những ưu điểm sau:

o Hấp thụ nhanh khi qua bộ máy tiêu hóa nên không bị các men và acid của bộ máy tiêu hóa phá hủy

o Tích lũy rất ít

o Làm đi tiểu nhiều

4.2 Độc tính:

- Độc tính của lá trúc đào đã được biết từ lâu Tại châu Âu, người ta kể những trường hợp lính vùng đảo Corse (một đảo thuộc miền Nam nước Pháp) đã bị ngộ độc chết do ăn chả dùng cành cây trúc đào xiên vào thịt nướng Có những người đã ngộ độc nặng do uống nước đựng trong chai nút bằng thân

cây trúc đào, hay do uống nước suối có rễ cây trúc đào mọc ở gần Nhân dân tỉnh Nice đã dùng bột vỏ thân và bột gỗ trúc đào để đánh bã chuột