BÀI báo cáo GIỚI THIỆU GLYCOSID TRỢ TIM

BÀI BÁO CÁO GIỚI THIỆU GLYCOSID TRỢ TIM GVHD: Võ Kim Thành LỚP: 16CHP NHÓM 1: Võ Thị Kiều My Nguyễn Thị Kiều Đoàn Thị Thanh Cúc Nguyễn Thúy Xuân Ngô Thị Kiều Phạm Phú Cường Mục lục: A Khái quát glycoside tim I Định nghĩa II Nguồn gốc B Chiết tách glycoside từ Trúc đào I Oleandrin 1.1 Tính chất vật lý 1.2 Tính chất hóa học II Nerin 1.1 Tính chất vật lý 1.2 Tính chất hóa học III Adynerin IV Neriantin C Kỹ thuật chiết tách Sơ đồ chiết tách Thuyết minh Tiến hành phản ứng định tính 3.1 Phản ứng Liberman 3.2 Phản ứng Baljet 3.3 Phản ứng Legal 3.4 Phản úng Keller – Kiliani 3.5 Phản ứng Xanthydrod 3.6 Sắc ký lớp mỏng IV Tác dụng dược lý độc tính 4.1 Tác dụng dược lý 4.2 Độc tính I II III MỞ ĐẦU Hợp chất thiên nhiên ( hay hợp chất tự nhiên) chất hóa học có nguồn gốc từ thiên nhiên người tách từ loại động, thực vật tự nhiên có hoạt tính sinh học có tác dụng dược học dùng để làm thuốc Ngành hóa học chuyên nghiên cứu để chiết tách chuyển hóa hợp chất tự nhiên gọi ngành hóa học hợp chất thiên nhiên ( hay hoá học hợp chất tự nhiên) Đây mơn khoa học có ý nghĩa quan trọng khơng ngành hóa học mà cịn y học Một số hợp chất thiên nhiên biết đến rộng rãi y học nhóm Glycosid trợ tim chất có tác dụng đặc hiệu bệnh tim Ngày với trình độ khoa học kỹ thuật tiên tiến, việc chiết xuất thành phần Glycosid trợ tim số phận (ví dụ trúc đào, hành biển,…) thực đại trà phịng thí nghiệm hay trung tâm nghiên cứu dược liệu nhằm đáp ứng nhu cầu sản xuất thuốc chữa bệnh tim cho người A KHÁI QUÁT VỀ GLYCOZIT TRỢ TIM I Định nghĩa: Glycozit trợ tim ( Glycosid) hợp chất thiên nhiên mà cấu trúc hỗn hợp bao gồm thành phần: Phần đường Phần khơng đường (cịn gọi Aglycon Genin) liên kết với liên kết Glycosid Những glycozit steroid có tác dụng đặc biệt lên tim, liều điều trị có tác dụng cường tim, làm chậm điều hòa nhịp tim Nếu liều gây nơn làm chảy nước bọt, mờ mắt, yếu cơ, loạn nhịp tim, giảm sức co bóp tim cuối làm ngừng tim II Nguồn gốc: Glycozit trợ tim có 45 lồi thực vật chủ yếu thuộc họ: Apocynaceae, Asclepiadaceae, Celastraceae, Cruciferae,…và số côn trùng, glycozit trợ tim có phận: lá, hoa, vỏ thân, rễ, thân rễ, nhựa mủ,… Cây sừng trâu Cây thông thiên B CHIẾT TÁCH GLYCOSID TỪ CÂY TRÚC ĐÀO Trong trúc đào người ta nghiên cứu thấy có glycosid chủ yếu: Oleandrin, Nerin, Neriantin, Adynerin I Oleandrin: Còn gọi Neriolin (Liên Xô cũ) hay Folinerin (theo Schering) Oleandrosid 1.1 Tính chất vật lý: - Là glycosid khơng màu, có tinh thể hình kim, vị đắng - Nhiệt độ nóng chảy: 245 – 250 C 1.2 Tính chất hóa học: - Cơng thức ngun tử: C32H48O9 - Trọng lượng phân tử là: 576,70 - Thủy phân acid (dùng HCl 0.1N nồi cách thủy giờ) Sẽ cho phản ứng Oleandrigenin (hay 16 acetyl gitoxigenin) chất đặc biệt Cleandrosa - Nhưng dùng dung dịch 0.5N HCl thủy phân nồi cách thủy tạo Dianhydrogitoxigenin - Nếu dùng dung dịch kiềm nhẹ để thủy phân thu gốc Desaxtyloleandrin II Nerin: Còn gọi Neriosid 2.1 Tính chất vật lý: - Khơng có tinh thể, bột vơ định hình, màu vàng, vị đắng - Tan nước rượu, không tan ether ethylic ether dầu hỏa, chloroform, benzen, acetat ethyl 2.2 Tính chất hóa học: - Khơng phải ngun chất mà hỗn hợp glycoside trợ tim - Dung dịch lỏng, nước dễ tạo bọt, đun tới 160 – 170 C phân giải - Thủy phân dung dịch HCl, đun sôi đến 37 – 39% chất genin vơ định hình III Adynerin: - Là glycosid có tinh thể - Độ nóng chảy: 219 – 220C - Không tan nước benzen, tan cồn cao nhiệt độ 97C, chloroform, khó tan cồn methylic - Trong cơng thức có nối kép C8 C9, khơng có tác dụng trợ tim IV Neriantin: - Là glycosid có tinh thể vơ định hình - Vị đắng, tan nước cồn, khơng có tác dụng trợ tim - Cơng thức cấu tạo chưa xác định rõ rang, phân tử có nối kép vị trí chưa xác định - Tuy hàm lượng nhiều hoạt tính sinh vật thấp khơng có nhóm OH C14 nên khơng có ý nghĩa thực tế C KĨ THUẬT CHIẾT TÁCH Trong glycosid có oleandrin có chất glycoside giúp trợ tim Vì vậy, ta tiến hành chiết tách phần oleadrin trúc đào I Sơ đồ chiết tách: Lá trúc đào - Phơi khô - Đem xay thô – 5mm 5kg bột Ngâm với 50 ml cồn 25% 24 Dịch chiết Gạn, ép bã Dung dịch nước ancol Thêm ½ lít dung dịch chì acetat 30% Dung dịch nước Lọc Dung dịch nước Dịch lọc - Thêm chì acetat 30% - Lọc kết tủa - Thêm lít dung dịch Na2SO4 15% - Quấy đều, lọc Để yên đêm, gạn Dịch lọc Dung dịch nước Lọc, rửa cặn với lít cồn 25% - Thêm lít dung dịch Na2SO4 15% - Quấy đều, lọc Dịch lọc - Thêm lít dung dịch Na2SO4 15% - Quấy đều, lọc Dịch lọc - Cho bốc áp suất giảm - Nhiệt độ 50 – 55C Dịch lọc Để nguội Glycoside thô Thêm 200ml cồn 70% Đun - Để tủ lạnh vài ngày Oleandrin tinh chế - Lọc lấy tinh thể, kết tinh vài lần DdThuyết Glycoside II Thuyết minh: - Chiết: Lá khô đem xay thô (2 – 5mm) Ngâm 5kg bột với 50 lít cồn 25 24 Gạn chừng 25 – 27 lít, ép bã lấy thêm 18 – 20 lít - Loại tạp: Dồn dịch chiết lại thêm ½ lít dung dịch chì acetat 30% Sau thử xem hết tạp chất chưa cách lọc thêm vào dịch lọc chì acetat, cịn tủa phải thêm chì acetat Để yên đêm, gạn lấy nước trong, phần khơng gạn lọc, rửa cặn với lít cồn 25 Dồn nước lại rót dần vào lít dd Na2SO4 15%, quấy đều, lọc, thử xem hết Pb(CH3COOH)2 chưa, phải thêm dd Na2SO4 - Bốc dung môi: Cho dịch lọc vào nồi, bốc áp suất giảm, nhiệt độ từ 50 – 55 C Cất cịn 1/6 thể tích ban đầu nghĩa cịn khoảng lít, để nguội Glycosid thơ đọng lại đáy nồi (khoảng 48 – 50g) - Tinh chế: Cho glycoside thơ vào bình, thêm 200ml cồn 70, đặt vào nước nóng cho tan hết, cho vào tủ lạnh vài ngày Lọc lấy tinh thể, kết tinh lại vài lần, thu – 6g oleandrin tinh chế III Tiến hành phản ứng định tính: 3.1 Phản ứng Liberman: - Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 1ml anhydride acetic, lắc cắn Nghiêng ống 45, cho từ từ theo thành ống 0,5ml sulfuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Ở mặt tiếp xúc lớp chất lỏng xuất vịng màu tím đỏ Lớp chất lỏng phía có màu hồng, lớp có màu xanh 3.2 - Phản ứng Baljet: Pha thuốc thử Baljet: Cho vào ống nghiệm to phần dd acid picric 1% phần dd NaOH 10%, lắc - Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử Baljet pha xuất màu đỏ da cam So sánh màu sắc với chứng ống khơng có cắn glycoside tim thấy ống thử có màu đỏ cam đậm ống chứng 3.3 - Phản ứng Legal: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Nhỏ giọt thuốc thử Natri Nitroprussiat 0,5% giọt dd NaOH 10% Lắc xuất màu đỏ cam - So sánh màu sắc với ống chứng ống khơng có cắn glycoside tim thấy ống thử có màu đỏ cam đậm ống chứng Chú ý: Các phản ứng vòng lacton cho màu sắc không bền nên cần quan sát màu sau nhỏ thuốc thử 3.4 - Phản ứng Keller – Kiliani: Cho vào ống nghiệm chứa cắn glycoside tim 0,5ml ethanol 90% Lắc cho tan hết cắn Thêm vài giọt dd sắt (III) clorid 5% pha acid acetic Lắc đều, Nghiêng ống 45 Cho từ từ theo thành ống 0,5ml acid sulphuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng ống Ở mặt tiếp xúc lớp chất lỏng xuất vịng màu tím đỏ - Lắc nhẹ, lớp chất lỏng phía có màu xanh 3.5 - Phản ứng Xanthydrol: Cho vào ống nghiệm chứa cắn glycoside tim 0,5ml thuốc thử Xanthydrol Đun ống nghiệm nồi cách thủy sôi phút, xuất màu đỏ 3.6 - Sắc ký lớp mỏng: Dịch chấm sắc ký: Cho vào ống nghiệm có chứa cắn glycoside tim giọt CHCl3 – EtOH (1:1), lắc nhẹ để hòa tan cắn dịch chấm sắc ký - Lấy 1mg tinh thể Neriolin chuẩn hóa tan 0,5ml CHCl3 – EtOH (1:1), lắc nhẹ dd Neriolin chuẩn để chấm sắc ký - Bản mỏng sắc ký: Bản mỏng tráng sẵn Silicagel GF254 (Merck), hoạt hóa 110C giờ, bảo quản bình hút ẩm để chấm sắc ký - Dùng mao quản chấm riêng biệt dịch chấm sắc ký dd Neriolin chuẩn lên mỏng Silicagel kích thước 2x10cm - Hệ dung môi khai triễn: CHCl3 – n-BuOH (9:0,5) - Bình sắc ký bão hịa dung mơi khai triễn - Sau khai triễn sắc ký, quan sát vết đèn tử ngoại bước song 254nm 366nm, sau phun thuốc thử vanillin 1% H2SO4 Kết quả: Sắc ký đồ dịch chiết cắn glycoside tim từ Trúc đào có vết tương ứng với vết Neriolin chuẩn với Rf = 0,75 có màu xanh đen bước sóng 254nm IV Tác dụng dược lý độc tính: 4.1 Tác dụng dược lý: - Lá trúc đào chứa nhiều loại glycosid Đã chứng minh tác dụng trợ tim 16-anhydrodigitalinum verum monoacetat, odorosid D, K, odorobiosid K, monoacetat odorotriosid G, odorobiosid G odorosid H Hàm lượng thấp glycosid ngăn cản việc đưa chúng vào thử lâm sàng Hoạt chất oleandrin trúc đào hấp thụ tốt uống, khác với Digitalis tích lũy, có tác dụng kích thích tim lợi niệu rõ rệt Nerifolin tác dụng yếu nhiều Các flavonol glycosid có tác dụng độ thấm thành mạch lợi tiểu Trên lâm sàng, cornerin có tác dụng rối loạn tim, đặc biệt cải thiện chức tim Vỏ có glycosid độc, rosaginin - Trúc đào có hoạt tính ức chế sinh trưởng dòng tế bào ung thư người, với liều có tác dụng ED50 xê dịch từ 0,008 đến 2,13 microgam/ml, tùy thuộc vào dòng tế bào Cao cồn trúc đào (lá, thân, rễ) có tác dụng kháng siêu vi khuẩn thí nghiệm xác định nồng độ tối thiểu ức chế phát triển siêu vi khuẩn, tác dụng chống ung thư thử nghiệm xác định nồng độ thấp diệt tế bào tầng phát triển nhanh lấy từ thận khỉ nuôi cấy gây nhiễm với siêu vi khuẩn bệnh herpes typ - Một phân đoạn polysaccharid thô, thu tủa từ cao nước trúc đào cồn, có hoạt tính cao thử nghiệm thực bào bạch cầu hạt in vitro, với nồng độ từ 10-6 đến 10-2 mg/ml Phân đoạn cho nhiều polysaccharid với trọng lượng phân tử tương ứng từ 17.000 đến 12.000 D, xác định phương pháp lọc đông sắc ký trao đổi ion Từ dịch thẩm tách, thu hỗn hợp polysaccharid tủa cồn, sắc ký đông Hỗn hợp gồm ba polysaccharid có trọng lượng phân tử tương ứng: 3.000; 5.500 12.000 D Chúng chứa acid galacturonic với rhamnose, arabinose, xylose, galactose glucose Hỗn hợp polysaccharid có hoạt tính cao thử nghiệm miễn dịch học vê thực bào bạch cầu hạt, yếu tố hoại tử u, chuyển dạng tế bào lympho - Glycosid toàn phần (thuốc neriolin) sản xuất từ trúc đào Việt Nam dạng thuốc uống, áp dụng điều trị cho bệnh nhân suy tim, có tác dụng trợ tim tốt, làm đỡ triệu chứng khó thở bệnh nhân suy tim sau 2-3 (tác dụng rõ rệt) So với digitalin, neriolin (oleandrin) có ưu điểm sau: o Hấp thụ nhanh qua máy tiêu hóa nên khơng bị men acid máy tiêu hóa phá hủy o Tích lũy o Làm tiểu nhiều 4.2 Độc tính: - Độc tính trúc đào biết từ lâu Tại châu Âu, người ta kể trường hợp lính vùng đảo Corse (một đảo thuộc miền Nam nước Pháp) bị ngộ độc chết ăn chả dùng cành trúc đào xiên vào thịt nướng Có người ngộ độc nặng uống nước đựng chai nút thân trúc đào, hay uống nước suối có rễ trúc đào mọc gần Nhân dân tỉnh Nice dùng bột vỏ thân bột gỗ trúc đào để đánh bã chuột  ... biết đến rộng rãi y học nhóm Glycosid trợ tim chất có tác dụng đặc hiệu bệnh tim Ngày với trình độ khoa học kỹ thuật tiên tiến, việc chiết xuất thành phần Glycosid trợ tim số phận (ví dụ trúc đào,... dược liệu nhằm đáp ứng nhu cầu sản xuất thuốc chữa bệnh tim cho người A KHÁI QUÁT VỀ GLYCOZIT TRỢ TIM I Định nghĩa: Glycozit trợ tim ( Glycosid) hợp chất thiên nhiên mà cấu trúc hỗn hợp bao gồm... co bóp tim cuối làm ngừng tim II Nguồn gốc: Glycozit trợ tim có 45 loài thực vật chủ yếu thuộc họ: Apocynaceae, Asclepiadaceae, Celastraceae, Cruciferae,…và số côn trùng, glycozit trợ tim có