Khảo sát điều kiện trích li dịch nấm thượng hoàng (phellinus nilgheriensis)

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: KHẢO SÁT ĐIỀU KIỆN TRÍCH LI TRONG DỊCH NẤM THƢỢNG HỒNG “PHELLINUS NILGHERIENSIS” Giáo viên hƣớng dẫn : Th.s Nguyễn Tân Thành Sinh viên thực : Nguyễn Thị Thu _ 1152043836 Hồ Thị Ngân Lớp : 52k2- CNTP Nghệ An, tháng năm 2016 _ 1152043877 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Thị Thu Mã số sinh viên:1152043836 Hồ Thị Ngân Mã số sinh viên: 1152043877 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Khóa: 52 Cán hƣớng dẫn: Th.S Nguyễn Tân Thành Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2016 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH - CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: : Nguyễn Thị Thu Mã số sinh viên:1152043836 Hồ Thị Ngân Mã số sinh viên: 1152043877 Ngành: Công nghệ thực phẩm Khóa: 52 Cán hƣớng dẫn: Th.S Nguyễn Hoa Du Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Nhận xét cán duyệt: …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2016 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) LỜI CẢM ƠN Đồ án đƣợc hoàn thành phịng Trung tâm phân tích chuyển giao công nghệ Thực phẩm -Môi trƣờng, trƣờng ĐH Vinh Để hồn thành đƣợc đồ án này, chúng tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy giáo – Th.S Nguyễn Tân Thành giao đề tài, hết lòng hƣớng dẫn, bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm q báu cho chúng tơi suốt q trình hồn thành đồ án Chúng tơi xin bày tỏ lịng biết ơn: - Các kỹ thuật viên Trung tâm, cô Ngô Thị Thủy Hà giúp đỡ tạo điều kiện sử dụng máy móc thiết bị nghiên cứu - Cô giáo – thầy cô giáo, anh chị nghiên cứu sinh, cao học 20 bạn hết lịng tạo điều kiện giúp đỡ chúng tơi hoàn thành đồ án Tuy nhiên, đồ án chắn cịn nhiều thiếu sót, mong q thầy bạn góp ý để đồ án đƣợc hồn thiện hơn, giúp chúng tơi học hỏi, rút kinh nghiệm cho công tác nghiên cứu sau Cuối cùng, lần xin đƣợc gửi đến tất ngƣời quan tâm, giúp đỡ chúng tơi hồn thành đồ án lời cảm ơn chân thành ! Vinh, tháng năm 2016 TÓM TẮT Mẫu nấm Phellinus Nilgheriensis đƣợc lấy từ rừng quốc gia Pù Mát huyện Con Cuông, tỉnh Nghệ An Mấu nấm sau đƣợc xử lí cơng đoạn (loại bỏ tạp chất, cắt nhỏ, xay nghiền) Đƣợc chiết với dung môi Cồn 960 theo phƣơng pháp: chiết Thƣờng, chiết Hồi Lƣu, chiết Siêu âm Chúng nghiên cứu khả tách chiết hoạt chất sinh học từ nấm Phellinus Nilgheriensis việc khảo nghiệm dung môi ( loại dung môi chiết với độ phân cực tăng dần là: ethanol, methanol,ethyl acetate, nƣớc); dải thời gian (3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11); dải nhiệt độ (30, 40, 50, 60, 70, 80, 90); dải tỉ lệ nguyên liệu/dung môi (1/45, 1/40, 1/35, 1/30, 1/25, 1/20, 1/15, 1/10) Sau q trình chiết chúng tơi tiến hành xác định số hiệu suất trính li hàm lƣợng phenolic có dịch chiết Dựa vào hiệu suất trích ly hàm lƣợng phenolic, chúng tơi lập kế hoạch tối ƣu hóa thực nghiệm cực trị xác định đƣợc giá trị tối ƣu hóa hàm mục tiêu hay nói cách khác tìm đƣợc chế độ trích li hoạt chất nấm Phellinus Nilgheriensis thích hợp Đối với hàm lƣợng phenolic xác định phƣơng pháp trắc quang MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN TÓM TẮT MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nhiệm vụ đồ án .10 Đối tƣợng nghiên cứu 10 Phạm vi phƣơng pháp nghiên cứu 10 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài nghiên cứu 10 PHẦN 1: TỔNG QUAN 12 1.1 NẤM THƢỢNG HOÀNG (PHELLINUS NILGHERIENSIS) 12 1.1.1 KHÁI QUÁT VỀ NẤM THƢỢNG HOÀNG (PHELLINUS NILGHERIENSIS) [1, 4, 7, 53,45, 28] .12 1.1.2 Vị trí phân loại [10, 11,50] .13 1.1.3 Tình hình trồng nấm Thƣợng hoàng Thế giới Việt Nam .13 1.1.3.1 Tình hình trồng nấm Thƣợng hồng Thế giới [36, 45, 49,51] 13 1.1.3.2 Tình hình trồng nấm Thƣợng Hồng Việt Nam [38, 11, 10] 14 1.1.4 Thành phần hóa học nấm Thƣợng hồng [36,5,13] .14 1.1.5 Giá trị dƣợc liệu tác dụng sinh học nấm Thƣợng Hoàng[1, 53, 5, 47, 4, 1] 15 1.1.5.1 Giá trị dƣợc liệu [6, 45, 7] 15 1.1.5.2 Tác dụng sinh học nấm thƣợng hoàng sức khỏe [6, 12, 13, 49, 51, 54] .15 1.2 Tổng quan phenolic 17 1.2.1 Giới thiệu hợp chất phenolic thực vật[6, 8, 9, 28, 21, 55] 17 1.2.2 Phân loại hợp chất phenolic [51, 53] .17 1.2.3 Các hợp chất phenolic nấm [9, 12,13, 34] 19 1.2.4 Hoạt tính sinh học phenolic [5, 6] 20 PHẦN 2.TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP 23 2.1 Tổng quan phƣơng pháp trích li [5, 8, 9, 55] .23 2.1.1 Giới thiệu chung trích li [5] .23 2.1.1.1 Định nghĩa 23 2.1.1.2 Cơ chế q trình trích li [5, 6] 23 2.1.1.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến hàm lƣợng phenolic [9, 11] 23 2.1.1.4 Những biến đổi ngun liệu q trình trích li [9, 54] .25 2.1.1.5 Một số phƣơng pháp trích li [2, 50] 26 2.1.2.Dung mơi trích li 30 2.1.2.1 Tiêu chí chọn dung mơi 30 2.1.2.2 Phân loại dung môi 31 2.1.2.3 Độ phân cực dung môi 31 2.2 Tổng quan Phƣơng pháp trắc quang xác định hàm lƣợng hợp chấtphenolic.[3] 32 2.2.1 Nguyên tắc: 32 2.2.2 Đánh giá kết phân tích 33 2.2.2.1 Phƣơng pháp xử lý kết phân tích 33 2.2.2.2 Phƣơng pháp thống kê xử lý đƣờng chuẩn 35 PHẦN ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu .36 3.1.1 Nấm Thƣợng Hoàng ( Phellinus Nilgheriensis) [1, 10, 24, 28] 36 3.1.2 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 36 3.1.2.1 Dụng cụ, thiết bị 36 3.1.2.2 Hóa chất 37 3.1.3 Pha chế dung dịch 38 3.1.3.1.Thuốc thử Folin – Ciocalteu [41] 38 3.1.3.2 Thuốc thử Folin – Ciocalteu 10% .38 3.1.3.3 Dung dịch Na2CO3 7,5% .39 3.2 Quy trình cơng nghệ trích li hoạt chất sinh học từ nấm Thƣợng hoàng đƣợc nghiên cứu đề tài 40 3.2.1 Sơ đồ quy trình cơng nghệ .40 3.2.2 Thuyết minh quy trình cơng nghệ 40 3.2.3 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 42 3.2.3.1 Thí nghiệm .43 3.2.3.2 Thí nghiệm .44 3.2.3.3.Thí nghiệm .45 3.2.3.4.Thí nghiệm 46 3.2.3.5 Thí nghiệm .48 3.3 Phƣơng pháp phân tích 49 3.3.1 Xác định độ ẩm: Phƣơng pháp sấy đến khối lƣợng không đổi 49 3.3.2 Xác định hàm lƣợng cellulose nguyên liệu 50 3.3.3 Xác định hàm lƣợng phenollic nguyên liệu phƣơng pháp quang phổ 51 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 52 4.1 Nghiên cứu số thành phần nấm Thƣợng Hoàng .52 4.2 Xác định tổng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hoàng 52 4.2.1 Xây dựng phƣơng trình đƣờng chuẩn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ axit gallic .52 4.2.1.1 Đƣờng chuẩn ethanol 52 4.1.2 Đƣờng chuẩn nƣớc 55 4.2 Kết xác định hàm lƣợng phenolic trong dịch chiết nấm Thƣợng hoàng phƣơng pháp trắc quang 57 4.2.1 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết thƣờng 57 4.2.2 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết siêu âm 60 4.2.3 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm phƣơng pháp chiết hồi lƣu 62 4.2.4 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm etanol 64 4.2.5 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm etyl acetate 67 4.2.6 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm methanol .69 4.2.7 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm nƣớc 71 4.2.8 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát nhiệt độ .74 4.2.9.Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát thời gian 74 4.2.10 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 75 4.3 Kết nghiên cứu phƣơng và chế độ trích ly .76 4.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng phenolic .76 4.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic 77 4.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic 78 4.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic 79 3.3.4 Khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ ngun liệu / dung mơi trích li (g/ml) .81 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .83 TÀI LIỆU THAM KHẢO 85 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày nay, xã hội ngày phát triển, điều kiện sống nhu cầu ngƣời ngày cao, kéo theo bệnh tật hiểm nghèo xuất ngày nhiều làm tuổi thọ ngƣời giảm xuống nguyên nhân ngƣời mắc phải nhiều bệnh hiểm nghèo nhƣ ung thƣ, tim mạch, dị ứng Theo nghiên cứu nhà khoa học nƣớc Thƣợng Hoàng đƣợc xem nhƣ loại tiên dƣợc, chữa đƣợc bách bệnh, giúp ngƣời trƣờng thọ Chúng chứa tới 120 chất, bao gồm hợp chất hữu cơ, nguyên tố vi lƣợng vitamin Thƣợng Hồng có tác dụng đặc biệt triệu chứng suy giảm miễn dịch, căng thẳng thần kinh suy sụp tinh thần, giải độc kém, ngủ, triệu chứng hệ tim mạch, ăn không ngon, bệnh béo phì, da xấu nhiều nếp nhăn [17](Garcı’a-Lafuente et al, 2009; Guillamo’n et al, 2010; Puttaraju et al, 2006) Thƣợng Hồng có tác dụng việc ngăn ngừa bệnh AIDS làm chậm trình phát bệnh bệnh nhân mắc phải bệnh Họ sử dụng phƣơng pháp bào chế thông thƣờng ngâm rƣợu, cắt lát nấu lấy nƣớc, nghiền bột để uống, bào chế thành viên nang, viên hồn thuốc tiêm Ở Nhật Bản, ngƣời ta sử dụng nấm nhƣ nguồn thực phẩm dƣợc phẩm hàng đầu, họ có sức khỏe tốt tuổi thọ cao Không dùng đơn dạng nấm tƣơi mà Nhật nấm đƣợc sản xuất thành nhiều dạng sản phẩm nhƣ: nƣớc tƣơng, bột nấm, nƣớc chao, súp nấm, thực phẩm chức bổ, loại, thuốc, trà để điều trị số bệnh nhƣ: viêm phế quản mãn tính, bệnh tim mạch, viêm gan cấp mãn tính,viêm khớp, viêm phổi Việc điều trị loại thuốc, hóa chất trị liệu cịn đắt tiền so mức thu nhập ngƣời Việt Nam (chƣa kể đến tác dụng phụ) Trong nấm Thƣợng Hồng với giá thành tƣơng đối rẻ có hiệu cao việc điều trị làm thuyên giảm số bệnh nhƣ: ung thƣ, đái đƣờng, vấn đề tim mạch, hô hấp( Hoạt động chống ung thư số basidiomycetes, đặc biệt Phellinus linteus Ikekawa et al Ung thư jpn J Res 1968; 59:155-157) Chính lý nhƣ mà đề xuất đề tài “Khảo sát điều kiện trích li dịch nấm Thượng Hồng(Phellinus Nilgheriensis)” nhằm góp phần đa dạng chế phẩm thuốc từ nấm, hạn chế phần bệnh tật hiểm nghèo ngày tràn lan Nhiệm vụ đồ án Trong khóa luận này, chúng tơi có nhiệm vụ sau: - Giới thiệu nấm Thƣợng Hoàng, phƣơng pháp nghiên cứu - Lý thuyết chung hợp chất phenolic - Khảo sát nguyên liệu, yếu tố ảnh hƣởng đến trình chiết hoạt chất sinh học nhƣ: dung môi, nhiệt độ, thời gian, tỉ lệ nguyên liệu/dung môi - Xác định tổng hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hồng - Tìm chế độ thích hợp cho q trình trích ly hoạt chất sinh học từ nấm Thƣợng Hoàng - Xác định tổng hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hoàng Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu nấm Thƣợng Hoàng (Phellinus Nilgheriensis) đƣợc lấy rừng quốc gia Pù Mát huyện Con Cng, tỉnh Nghệ An Nấm Thƣợng Hồng (hay cịn gọi Hoàng Sơn) tên loài gần chi Phellinus, họ Hymenochaetaceae… Đây loài nấm mọc nhiều năm lớp thụ tầng năm sau chồng lên lớp thụ tầng năm trƣớc Nấm thƣờng mọc vùng rừng sâu núi cao hiểm trở, khu rừng nguyên sinh, tuổi nấm có đến vài chục năm Phạm vi phƣơng pháp nghiên cứu Đề tài tập trung nghiên cứu vấn đề khả tách chiết hoạt chất sinh học từ nấm Thƣợng Hồng dựa vào việc tìm hiểu phân tích cơng trình nghiên cứu có nhà nghiên cứu nƣớc liên quan đến nấm Thƣợng Hồng Ngồi ra, nghiên cứu cịn dựa vào hiểu biết thị trƣờng nấm Thƣợng Hoàng Việt nam giới với tƣ liệu, tài liệu bổ ích nấm Thƣợng Hồng sách báo, kiến thức học trƣờng Đại Học Vinh phƣơng tiện thông tin đại chúng Đề tài nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp tổng hợp, thống kê, phân tích nhận xét từ số liệu liệu thu thập đƣợc Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài nghiên cứu - Ý nghĩa khoa học: kế thừa phát triển kết nghiên cứu khoa học việc tách chiết hoạt chất nấm Thƣợng Hoàng 10 etanol 0,17039 [0,001814708-0,002070757] [0,054441232-0,062123] 30 C 0,089274 [0,000863105-0,001203884] [0,025893159-0,036117] 400C 0,106006667 [0,001059403-0,001382704] [0,031782076-0,041481] 500C 0,130746667 [0,001349637-0,001647096] [0,040489104-0,049413] 600C 0,152826667 [0,001608666-0,001883061] [0,048259969-0,056492] 700C 0,192006667 [0,002068301-0,002301771] [0,06204903-0,069053] 800C 0,22092 [0,002407494-0,002610763] [0,072224827-0,078323] 900C 0,223569 [0,002607853-0,003652113] [0,07578221-0,0799532] 3h 0,124056667 [0,001271154-0,001575601] [0,038134617-0,047268] 4h 0,129483333 [0,001334816-0,001633595] [0,040044485-0,049008] 5h 0,132366667 [0,001368642-0,001664408] [0,041059249-0,049932] 6h 0,152503333 [0,001604872-0,001879606] [0,048146174-0,11613] 7h 0,15931 8h 0,173106667 [0,001846578-0,00209979] 9h 0,24444 10h 0,338843333 [0,003790897-0,003870989] [0,048146174-0,11613] 11h 0,343997640 [0,003564329-0,003942653] [0,045892113-0,135117] 1/45 0,356713829 [0,003614785-0,003784996] [0,108736645-0,125833] 1/40 0,365521172 [0,003614457-0,00371026] 1/35 0,30077 1/30 0,188683333 [0,002029314-0,002266255] [0,060879412-0,067988] 1/25 0,342843333 [0,003837823-0,003913737] [0,115134688-0,117412] 1/20 0,13476 [0,001396719-0,001689986] [0,041901562-0,0507] 1/15 0,22034 [0,00240069-0,002604565] 1/10 0,385426667 [0,004337384-0,004368818] [0,130121523-0,131065] [0,001684724-0,000269325] [0,00808-0,050541722] [0,055397339-0,062994] [0,002683416-0,002862117] [0,080502487-0,085864] [0,108433725-0,111308] [0,003344245-0,003464106] [0,100327343-0,103923] [0,072020701-0,078137] 4.3 Kết nghiên cứu phƣơng và chế độ trích ly 4.3.1 Khảo sát ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng phenolic Chúng tiến hành khảo sát loại phƣơng pháp chiết khác thu đƣợc kết sau: Bảng 4.12 Ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng phenolic 76 Phƣơng pháp chiết H/l phenolic (mg/g) Thƣờng 0.3186712 Siêu âm 0.3247313 Hồi lƣu 0.3284106 Hình 4.12 Biểu đồ thể ảnh hƣởng phƣơng pháp chiết tới hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Hàm lƣợng phenolic tăng dần tƣơng ứng với cách chiết: chiết thƣờng, chiết siêu âm, chiết hồi lƣu Nhƣ khả thu hồi hàm lƣợng phenolic phƣơng pháp chiết hồi lƣu lớn Mặt khác phƣơng pháp chiết hồi lƣu dễ thực Với kết nhƣ vậy, sử dụng phƣơng pháp chiết hồi lƣu cho khảo sát 4.3.2 Khảo sát ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic Chúng tiến hành khảo sát loại dung mơi từ phân cực đến phân cực mạnh: ethylacetate, ethanol 96%, methanolvà nƣớc Qua nghiên cứu đƣa kết sau: 77 Bảng 4.13 Ảnh hƣởng dung môi tới hàm lƣợng phenolic Dung môi Hàm lƣợng phenolic Ethylacetate 0,292336252 Methanol 0,4761745 Nƣớc 1,382393398 Etanol 0,584484436 Hình 4.13 Biểu đồ thể ảnh hƣởng dung môi lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Hàm lƣợng chất phenolic thu hồi tăng dần tƣơng ứng với dung môi: etanol, ethylacetate, metanol, nƣớc Nhƣ khả khả thu hồi phenolic nƣớc lớn Nƣớc dung môi rẻ tiền dễ kiếm thân thiện với môi trƣờng 4.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic Chúng tiến hành khảo sát chiết với dung môi nƣớc điểm nhiệt độ dải nhiệt 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 0C điều kiện Sau lọc xác định hàm lƣợng chất khơ thí nghiệm Qua nghiên cứu thu đƣợc bảng kết sau: 78 Bảng 4.14 Ảnh hƣởng nhiệt độ tới hàm lƣợng phenolic Nhiệt độ 0C Hàm lƣợng phenolic 30 0,312304406 40 0,368449898 50 0,451463532 60 0,525551691 70 0,657017907 80 0,754034919 90 0,784633178 Hình 4.14 Biểu đồ thể ảnh hƣởng nhiệt độ lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Qua biểu đồ ta thấy nhiệt độ tăng hàm lƣợng phenollic dịch chiết tăng dần đều, nhƣng đến khoảng nhiệt độ 80-90(0C) hàm lƣợng phenollic tăng khơng đáng kể Nhƣ vậy, ta thấy nhiệt độ ảnh hƣởng nhiều đến khả trích li dịch chiết nấm Thƣợng Hồng, khả trích li dịch khoảng 40 – 80 (0 C) tốt 4.3.3 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic Chúng khảo sát dải thời gian 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 (h) trình trích li nấm, thí nghiệm tiến hành điều kiện Sau lọc, xác định hàm lƣợng chất khô thu đƣợc bảng kết sau đây: 79 Bảng 4.15 Ảnh hƣởng thời gian tới hàm lƣợng phenolic Thời gian (h) Hàm lƣợng phenolic 0,429015625 0,44722449 0,456899348 0,524466764 0,547306139 0,593600054 0,832954914 10 1,149719821 11 1,153347831 Hình 4.15 Biểu đồ thể ảnh hƣởng thời gian lên hàm lƣợng phenolic Nhận xét: Nhìn vào kết nghiên cứu ta nhận thấy hàm lƣợng phenollic thu hồi tăng dần tƣơng ứng với mốc thời gian 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11(h) Đặc biệt khoảng từ – 10 (h) khoảng biến thiên hàm lƣợng phenollic lớn nhất, hay nói cách khác điểm thời gian mà thu đƣợc hàm lƣợng phenollic nhiều Còn từ khoảng thời gian 10 – 11(h) hàm lƣợng phenollic tăng chậm Từ đừng điểm kháo sát 11(h) 80 3.3.4 Khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ nguyên liệu / dung mơi trích li (g/ml) Chúng tơi tiến hành khảo sát dải tỉ lệ 1/45, 1/40, 1/35, 1/30, 1/25, 1/20, 1/15, 1/10 (g/ml) điều kiện Qua ngiên cứu thu đƣợc bảng kết sau: Bảng 3.4 Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu/ dung môi đến hiệu suất trích li Tỉ lệ ngun liệu/dung mơi Hàm lƣợng phenolic (1/45) 1,54276334 (1/40) 1,465671965 (1/35) 0,851639133 (1/30) 0,645866655 (1/25) 0,581570794 (1/20) 0,542418379 (1/15) 0,501392508 (1/10) 0,435342497 Hình 3.4.Biểu đồ thể ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu/dung mơi đến hiệu suất trích li Nhận xét: Hàm lƣợng phenollic tăng dần theo chiều giảm tỉ lệ Hay nói cách khác điều kiện chiết, với lƣợng ngun liệu 10g tăng thể tích dung mơi hàm lƣợng chất khơ thu hồi tăng dần Qua nghiên cứu nhận thấy 81 khoảng 1/30 (g/ml) đến 1/40 (g/ml) có hàm lƣợng phenollic biến thiên mạnh Do chúng tơi lựa chọn khoảng tỉ lệ để nghiên cứu vùng tối ƣu cho quy trình trích li dịch chiết nấm Thƣợng Hồng ( Phellinus Nilghesiensis)  Từ kết khảo sát đƣa đƣợc quy trình trích li với thơng số lựa chọn: Nguyên liệu Làm Т°C = 80°C T = 10(h) Tỉ lệ NL/DM= 1/40 Cắt nhỏ Ф = 1.5cm Nghiền Ф = 1mm Trích li Dung mơi Hỗn hợp dịch + bã Lọc Cặn,bã Dịch lọc Dung mơi Cơ quay Т°C=50°C Sấy Bột nấm Т°C=60°C Hình 3.6 Quy trình trích li hoạt chất từ nấm Thượng Hồng Phellinus Linteus dung môi nước 82 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Căn vào nhiệm vụ đề tài, dựa kết nghiên cứu, rút kết luận sau: Đã xác định đƣợc số thành phần có nấm nhƣ: độ ẩm, hàm lƣợng cellulose Khả trích li phƣơng pháp chiết, dung mơi, nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi khác Đã nghiên cứu đƣợc khả hòa tan hợp chất phenolic có nấm Thƣợng Hồng lấy rừng quốc gia Pù Mát loại dung mơi có độ phân cực tăng dần so sánh với khả hòa tan hợp chất phenolic có loại nấm khác mẫu thực vật khác, từ rút kết luận rằng: Tùy thành phần hợp chất phenoic có loại nấm nói riêng, hay loại thực vật nói chung mà khả hịa tan hợp chất phenolic loại dung môi khác khác Tuy nhiên từ kết nghiên cứu ta thấy nhìn chung hợp chất phenoic tan nhiều trong dung môi phân cực nhƣ: Nƣớc, methanol, etyl acetate Đã xây dựng đƣợc phƣơng trình đƣờng chuẩn biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ hợp chất phenolic, theo chất chuẩn axit gallic, dùng thuốc thử Folin- Ciocalteu Đã đánh giá đƣợc đƣợc tính khả thi phƣơng pháp xác định hàm lƣợng phenolic tổng theo phƣơng pháp tả tiêu chuẩn Tổ chức quốc tế (ISO) 14.502-1:2005 [29] Kết cho phép áp dụng phƣơng pháp để xác định tổng hàm lƣợng phenolic mẫu nấm với độ xác cao Đề nghị: Do giới hạn mặt thời gian, điều kiện trang thiết bị nhƣ điều kiện kinh tế nên thí nghiệm chƣa đƣợc thực hồn chỉnh Để hồn thiện quy trình nghiên cứu chúng tơi có số đề nghị sau: 83 + Định lƣợng hàm lƣợng cacbohydrat, tạp chất khơng hịa tan ngun liệu + Nghiên cứu ảnh hƣởng PH lên hiệu suất trích li + Tạo sản phẩm chức từ bột nấm Thƣợng Hoàng ( Phellinus Nilghesiensis) + Khảo sát lƣợng mẫu lớn để có kết tốt + Thiết kế bao bì để tránh hƣ hỏng sản phẩm 84 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Đinh Xuân Linh, Thân Đức Nhã, Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn, (2008), Kỹ thuật trồng chế biến nấm ăn nấm dược liệu, Hà Nội Hồ Viết Q (2002) Cơ sở hóa học phân tích đại - tập II – Các phương pháp phân tích lý – hóa, NXBĐHSP Lê Ngọc Tú, Bùi Đức Hợi, Lƣu Duẩn, Ngô Hữu Hợp, Đặng Thị Thu, Nguyễn Trọng Cần (2001) Hóa thực Phẩm, NXBKHKT BS Nguyễn Bá Nhuận, (2007), Tasly Lingzhi300 với chiến chống ung thư Nguyễn Thị Minh Tú (2009), Quy trình tách chiết hoạt chất sinh học từ nấm linh chi (Ganoderma lucidum), Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 47(1) 45-53 Nguyễn Thị Chính (2005), Báo cáo tổng kết Khoa học Kỹ thuật “Phát triển công nghệ sản xuất nấm dược liệu phục vụ tăng cường sức khỏe” Đề tài hợp tác nghiên cứu khoa học nghị định thƣ phủ Việt Nam-Hàn Quốc Nguyễn Thƣợng Dong (2007), Nấm Linh chi, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội Nguyễn Tuấn Anh, Trần Thu Hƣơng, Nguyễn Thị Phƣơng Hà (2007), Khảo sát điều kiện chiết hợp chất có hoạt tính sinh học nấm linh chi (Ganoderma lucidum Karst.) Tuyển tập công trình - Hội nghị khoa học cơng nghệ Hố học Hữu toàn quốc lần thứ 4, 284-288 Trần Thị Văn Thi, Nguyễn Thị Hoài, Lê Trung Hiếu, (2012), Chiết xuất, xác định hàm lƣợng khảo sát tác dụng dƣợc lý phân đoạn polysaccharid từ nấm linh chi ni trồng Thừa Thiên Huế, Tạp chí dƣợc học, số 443, 18-22 85 10 Trần Tuấn Kha (2013), Nghiên cứu thành phần loài đặc điểm phân bố nấm làm dƣợc liệu mọc gỗ vƣờn Quốc gia Ba Vì, Tạp chí Nơng nghiệp phát triển nông thôn, kỳ 1+2, 183-187 11 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam, tập, NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ Hà Nội 12 Trịnh Thanh Tâm, Nguyễn Quốc Cƣờng, Từ Phan Nam Phƣơng, Đống Thị Anh Đào, (2011), Nghiên cứu ảnh hƣởng điều kiện sấy đối lƣu đến thành phần dinh dƣỡng bột nấm mèo Auricularia auricula-judae, Tạp chí Khoa học Công nghệ, 49(6A), 176-182 13 Vũ Kim Thoa, Bùi Thị Hƣơng, Nguyễn Thùy Châu, (2001), Nghiên cứu công nghệ sản xuất nấm linh chi sinh khối, Kết nghiên cứu KH-CN Viện Công nghệ sau thu hoạch, 48-56 Tài liệu tiếng anh 14 Ali Khoddami, Meredith Thomas H Roberts (2013)Review: Techniques for Analysis of Plant Phenolic Compounds, Molecules, 18, 2328-2375 15 L.M Cheung, Peter C.K Cheung * Mushroom extracts with antioxidant activity against lipid peroxidation Food Chemistry 89 (2005) 403–409 16 Zhu T., Kim S.H., Chen C.Y (2008), A medicinal mushroom: Phellinus linteus, Curr Med Chem.,15, 1330-1335 17 Rathee S., Rathee D., Rathee D., Vikash K., Rathee P (2012), Mushrooms as therapeutic agents, Rev Bras Farmacogn Braz J Pharmacogn., 22, 459-574 18 Vojdani A., Erde J (2006), Regulatory T cells, a potent immunoregulatory target for CAM researchers: modulating allergic and infectious disease pathology (II), Evid Based Complement Alternat Med., 3, 209-215 86 19 Ramberg J.E, Nelson E.D., Sinnott R.A (2010) Immunomodulatory dietary polysacchari des: a systematic review of the literature, Nutr J 5475 20 Donatini B (2010), Basics on mycotherapy: preliminary concepts on the medicinal use of mycelia, Phytotherapie, 8,191-197 21 Lull C., Wichers H.J., Savelkoul H.R.I (2005), Antiinflammatory and immunomodul ating properties of fungal metabolites, Media Inflam., 2, 63-80 22 Lee I.K., Yun B.S (2007), Highly oxygenated and unsaturated metabolites providing a diversity of hispidin class antioxidants in the medicinal mushrooms Inonotus and Phellinus,Bioorg Med Chem.,15, 3309-14 23 Lee I.K., Yun B.S (2011), Styrylpyrone-class compounds from medicinal fungi Phellinus and Inonotus spp., and their medicinal importance, J Antibiot 64, 349-59 24 Jung J.Y., Lee I.K., Seok S.J., Lee H.J., Kim Y.H., Yun B.S (2008), Antioxidant polyphenols from the mycelia culture of the medicinal fungi Inonotus xeranticus and Phellinus lintrus, J Appl Microbiol., 104, 18241832 25 Min B.S., Yun B.S., Lee H.K., Jung H.J., Jung H.A., Choi J.S (2006), Two novel furan derivatives from Phellinus linteus with anti-complement activity, Bioorg Med Chem Lett., 16, 3255-7 26 Lee Y.S., Kang Y.H., Jung J.Y., Kang I.J., Han S.N., Chung J.S (2008), Inhibitory constituents of aldose reductase in the fruiting body of Phellinus linteus,Biol Pharm Bull., 31, 765-8 27 Lee Y.S., Jang Y.H., Jung J.Y., Lee S., Ohuchi K., Shin K.H (2008) Protein glycation inhibitors from the fruiting body of Phellinus linteus Biol Pharm Bull., (1), 1968-72 28 Nagatsu A., Itoh S., Tanaka R., Kato S., Haruna M., Kishimoto, (2004), Identification of novel substituted 87 fused aromatic compounds, meshimakobnol A and B, from natural Phellinus linteus fruit body, Tetrahedron Lett., 45, 5931-3 29 Koji ma K., Ohno T., Inoue M., Mizukami H., Nagatsu A.(2008) Phellifuropyranone A: a new furopyranone compound isolated from fruit bodies of wild Phellinus linteus Chem Pharm Bull., 56, 173-175 30 Zheng Y.B., Lu C.H., Shen Y.M ( 2012), New abscisic acid-related metabolites fromPhellinusvaninii, J Asian Nat Prod Res., 14(7) 613617 31 Song A.R., Sun X.L., Kong C., Zhao C., Qin D., Huang F., Yang S (2014), Discovery of a new sesquiterpenoid from Phellinus ignarius with antiviral activity against influenza virus, Arch Virol., 159(4) 753-760 32 Jeon T.I., Jung C.H., Cho J.Y., Park D.K., Moon J.H ( 2013), Identification of an anticancer compound against HT-29 cells from Phellinus linteus grown on germinated brown rice, Asian Pac J Trop Biomed., 3(10) 785-789 33 Chen Y.C., Chang H.Y., Deng J.S., Chen J.J., Huang S.S., Lin I.H., Kuo W.L., Chao W., Huang G.J (2013), Hispolon from Phellinus linteus induces G0/G1 cell cycle arrest and apoptosis in NB4 human leukaemia cells, Am J Chin Med., 41(6) 1439-1457 34 Kubo M., Liu Y., Ishida M., Harada K., Fukuyama Y ( 2014), A new spiroindene pigment from the medicinal fungus Phellinus ribis, Chem Pharm Bull , 62(1) 122-124 35 He J.B., Feng T., Zhang S., Dong Z.J., Li Z.H., Zhu H.J., Liu J.K ( 2014), Seven new drimane-type sesquiterpenoids from cultures of fungus Phellinus tuberculosus, Nat Prod Bioprospect., 4, 21-25 36 Huang S.C., Kuo P.C., Hwang T.L., Chan Y.Y., Chen C.H., Wu T.S.,(2013), Three novel sesquiterpenes from the mycelium of Phellinus linteus, Tetrahedron Letters, 54(26), 3332-3335 37 Hsieha P.W., Wub J.B., Wu C.H., Chemistry and biology of Phellinus linteus (2013), BioMedicine, 3, 106-113 88 38 Park,H.K.,Ko,H.G.,Kim,S.H.,Park, W.M.,2004.“Molecularidentificationof Asian isolatesofmedicinalmush room Hericiumerinaceum by phylogeneticanalys isofnuclear ITS rDNA” J Microbiol Biotechnology 14, pp.816–821 39 Sheng-QuanHuang,Jin-WeiLi,ZhouWang,Hua-XinPan,Jiang-XuChenand Zheng-Xiang Ning (2010), “Optimization of Alkaline Extractionof Polysaccharides from Ganoderma lucidum andTheir Effect onImmuneFunction in Mice”, Molecules 40 Wilfred Vermerris, Ralph Nicholson Phenolic Compound Biochemistry Springer Pages 1,2; 41 Yilin W., (2010), “Method for extractingHericium erinaceus polysaccharide”, CN 103044563 A 42 Aishah M.S, Wan Rosli W.I, (2013), Effect of different drying techniques on the nutritional values of oyster mushroom (Pleurotus sajor-caju), Sains Malaysiana, 42(7), 937-941 43 Diego F Rojas Vahos, Paola A Zapata Ocampo, Ana M Palacio Barrera, Sandra P Ospina Alvarez, Lucía Atehortúa (2013), Basidiomycetes mushroom biotechnology for the development of functional products: The effect of drying processes on biological activity The open conference proceedings journal, 4, 93-98 44 Jo W S., Park S D., Park S C., Chang Z Q., Seo G S., Uhm J Y., Jung H.Y (2009), Changes in quality of Phellinus gilvus mushroom by different drying methods, Mycoscience50: 70-73 45 Lee, M J., Seog, E J., Lee, J H (2007) Physicochemical properties of Chaga (Inonotus obliquus) mushroom powder as influenced by drying methods Journal of Food Science and Nutrition, 12, 40–45 46 Ma L S, Chen H X., Zhu W C., Wang Z S (2013), Effect of different drying methods on physicochemical properties and antioxidant activities of polysaccharides extracted from mushroom Inonotus obliquus, Food Research International, 50(2) 633–640 89 47 Tulek Y, (2011), Drying kinetics of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus) in a convective hot air dryer, Journal agriculture science techology 13, 655-664 48 MichelDuubois,K.A.Gilles,J.K.Hamilton,P.A.ReberandFredSmith,“Color imetric Method forDetermination ofSugars and RelatedSubstances” Trang Web 49 www.namthuonghoang 50 http://www.tailieu.vn 51 website Trung Tâm Nghiên Cứu Khoa Học Nông Vận www.khoahocchonhanong.com 52 http://vi.wikipedia.org/wiki/Dung_m%C3%B4i 53 Namlinhchinonglam.vn 54 http://tieuluanduoclieu.blogspot.ro/2012/09/cac-phuong-phap-chiet-xuatduoc-lieu_28.html 55 http://www.slideshare.net/letngoc90/lun-vn-nghin-cu-chit-tch-xc-nhthnh-phn-ha-hc-hoa-atiso-do 90 ... chiết nấm methanol .69 4.2.7 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm nƣớc 71 4.2.8 Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát nhiệt độ .74 4.2.9.Hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm khảo sát. .. basidiomycetes, đặc biệt Phellinus linteus Ikekawa et al Ung thư jpn J Res 1968; 59:155-157) Chính lý nhƣ mà đề xuất đề tài ? ?Khảo sát điều kiện trích li dịch nấm Thượng Hồng(Phellinus Nilgheriensis)? ?? nhằm... hợp cho q trình trích ly hoạt chất sinh học từ nấm Thƣợng Hoàng - Xác định tổng hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm Thƣợng Hoàng Đối tƣợng nghiên cứu Mẫu nấm Thƣợng Hoàng (Phellinus Nilgheriensis)