Tách 5 hyđrôxy 7 metoxy 6,8 đimetyl flavanon từ hoa cây gioi

Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Mở đầu Nớc ta nằm vùng nhiệt đới gió mùa, thích hợp cho nhiều loại thực vật phát triển Thảm thực vật nớc ta phong phú, đa dạng, có nhiều loại dùng làm thuốc, lấy tinh dầu, công nghiệp nhiều loại có giá trị kinh tế cao Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học đóng vai trò hÕt søc quan träng ®êi sèng ngêi Chóng đợc dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, nguyên liệu cho công nghiệp thực phẩm, hơng liệu mỹ phẩm Ngày nay, thảo d Ngày nay, thảo dợc đóng vai trò vô quan trọng sản xuất dợc phẩm nh nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất dẫn đờng cho việc tìm kiếm biệt dợc Các số liệu cho thấy rằng, khoảng 60% loại thuốc đợc lu hành giai đoạn thử nghiệm lâm sàng cuối có nguồn gốc từ hợp chất thiên nhiên Tuy vậy, diện tích rừng bị suy giảm nhanh chóng, nguồn tài nguyên thực vật nớc ta đứng trớc nguy bị suy giảm nghiêm trọng số lợng tính đa dạng sinh học, nhiều loài đà trở nên khan hiếm, có nhiều làm thuốc Nhiều loài đà bị tuyệt chủng có nguy bị tuyệt chủng Việc nghiên cứu thành phần hoá học, hoạt tính sinh học cỏ nớc ta thập kỷ qua nhiệu hạn chế, cha đáp ứng đợc yêu cầu điều tra tài nguyên thiên nhiên nh đóng góp vào việc định hớng sử dụng, bảo tồn phát triển tài nguyên thực vật cách hợp lý Thảm thực vật rừng ma nhiệt đới khu vực Đông Nam á, có Việt Nam vùng đợc nhiều nhà khoa học nớc quan tâm nghiên cứu Trong số loại cho tinh dầu, họ Sim (Myrtaceae) nh: Tràm (Melaleuca leucadendra L.), bạch đàn (Eucaulyptus camdulensis), đinh hơng (Eugenia caryophylla Thunb.), chổi xể (Breackea frutescens L.), vối (Cleistocalyx operculatus) đợc nhiều nhà khoa học quan tâm, nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu đà công bố nhiều kết Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Cây gioi (Eugenia jambos L Alston hay Eugenia jambos L.) thuéc họ Sim, đà đợc tác giả Mỹ, Tây Ban Nha, Đài Loan công bố số chất tách từ hoa, bột gỗ Gioi Cho đến Việt nam công trình nghiên cứu thành phần hoá học Gioi Vì chọn đề tài nghiên cứu thành phần hoá học hoa Gioi Đối tợng nhiệm vụ nghiên cứu: số hợp chất từ dịch chiết hoa gioi Luận văn tốt nghiệp đại học Phân lập xác định cấu trúc Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Chơng I: Tổng quan tài liệu I.1 Vài nét thành phần hoá học chi Eugenia thc hä Sim Eugenia lµ mét chi lín nhất, giới có khoảng 600 loài, nớc ta cã 26 loµi Hoa cđa chóng mÉu  5, có nhiều nhị xếp thành nhiều hàng bầu dới có ô, ô cã nhiỊu no·n ®Ýnh theo lèi ®Ýnh no·n trung trơ, nhng sau có vài noÃn tạo hạt Những chi phần lớn hoang dại Eugenia aromaticum Merr Et Perry (đinh hơng) thuốc quý có nụ dùng làm thuốc, làm gia vị, làm nguyên liệu cất lấy tinh dầu có tác dụng diệt khuẩn, sâu bọ mạnh Thờng tinh dầu đinh hơng đợc dùng nha khoa làm thuốc tê diệt tuỷ Trong công nghiệp, đinh hơng đợc dùng để chiÕt xt lÊy eugenol, tõ eugenol ngêi ta b¸n tỉng hợp chất thơm vanilin Muốn vậy, ngời ta cất cuống (chứa % tinh dầu có hàm lợng 8095% eugenol) Quả đinh hơng (antofle) chứa tinh dầu, hàm lỵng eugenol thÊp, Ýt sư dơng ë níc ta cha có đinh hơng, ngời ta dùng hơng nhu trắng làm nguyên liệu cất tinh dầu chứa eugenol Nụ đinh hơng chøa tõ 10  12% níc,  6% chÊt vô cơ, nhiều gluxit, 10% lipit, 13%tanin Năm 1948 - 1949, Meijer Schmid dà chiết đợc từ cao ete đinh hơng mọc hoang dại chất chromon: Eugenin, eugenitin số dẫn xuất xêtôn gäi lµ eugenon (trimetoxy 2, 4, benzoylaxenton) Ngêi ta cho rằng, hoạt chất đinh hơng tinh dầu chiếm tới 15 20% Đây nguồn nguyên liệu thực vật chứa hàm lợng tinh dầu vào loại cao Tinh dầu đinh hơng nặng nớc (1,043 1,068), nhng bắt đầu chng cất, có lợng tinh dầu nhẹ nớc bốc sang trớc Trong tinh dầu, thành phần chủ yếu 80 85% eugenol (allygaiacol) kèm theo 23 % axetyl eugenol, hợp chất cacbon, có chất sesquitecpen caryophyllen, mét Ýt dÉn xt xeton (metylamylxeton) ¶nh hëng tíi mïi tinh dầu vàcác este Cây vối (Cleistocalyx operculatus (Roxb) Merr et Perry (Eugenia operculatus Roxb.); (Syzygium nervosum ), thuéc họ sim (Myrtaceae) Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Phân bố: Mọc hoang đợc trồng hầu khắp tỉnh nớc ta, chủ yếu để lấy nụ nấu nớc uống Còn thấy nớc nhiệt đới châu á, Trung Quốc Mô tả cây: Cây nhỡ, cao 6m, có hơn, cành non tròn hay hình cạnh, nhẵn Lá có cuống dài dai, cứng, hình trøng réng, dµi  20 cm, réng 510cm Hai mặt có đốm nâu, cuống 1,5cm Hoa gần nh không cuống, nhỏ màu lục trắng nhạt, hợp thành hoa tự hình tháp toả kẽ đà rụng Quả hình cầu, hay hình trứng, đờng kính 12 mm, xù xì Toàn cành non, nụ, vỏ có mùi thơm dễ chịu đặc biệt vối [18] Các nhà khoa học Trung Quốc đà nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu lá, tinh dầu nụ vối vùng Quảng Đông, Quảng Tây Vân Nam Lá vối chứa 0,08% tinh dầu (mẫu lấy Quảng Châu) với 20 thành phần sau:  - pinen (0,85%)  - pinen (1,8%)  -mircen (1,8%) (Z) -  - ocimen (53,18%) (E)-  - ocimen (4,50%) 2,5,5-trimetyl-1,6-heptadien (0,9%) 3,4- ®imetyl-2,4,6-octatrien (1,27%) carvylaxetat (1,28%) terpinylaxetat (0,15%) geraniol (1,03%) (Z)-caryophyllen (3,62%) aromadendren (0,55%) humulen (1,05%) - muurolen (0,36%) - guaien (0,66%) -guaien (0,47%) nerolidol (2,16%) Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học octahyđro-3,6,8,8-tetrametyl- 3a,7-metanazulen (4,19%) -cadiol (0,54%) Từ nụ hoa, tác giả đà tách đợc 0,18% tinh dầu với 24 thành phần sau (mẫu lấy Quảng Châu): - pinen (4,7%) - pinen (1,8%)  - myrcen (7,25%) (Z)- - ocimen (36,39%) (E)-  -ocimen (8,35%) 2,7-dimetyl-1,6-octadien (1,1%) linalool (0,75%) 3,4-®imetyl-2,4,6-octatrien (1,4%) fenchen (0,4%) metyl salixilat (0,1%) geranyl axetat (0,57%) terppyl axetat (0,57%) geraniol (2,28%) cis- 1,3-®imetyl-8-izopropyl-bicyclo[4,4,0]-deca-1,4-dien (1,47%) humulen (2,47%) - muurolen (2,10%) cis- caryophyllen (3,46%) - guaien (1,01%) alloaromadendren (2,06%) - cadinen (2,01%) nerolidol (0,38%) farnesol (0,32%) Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Tác giả Hoàng Văn Lựu [1] đà nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu vối địa phơng khác Nghệ An nh thành phần hoá học tinh dầu nụ non, nụ già, hoa vối phơng pháp GC GC/ MS Kết bảng sau: Bảng I 2:Thành phần hoá học tinh dầu vối Vinh - Nghệ An Thành phần hoá học Tỷ lệ (%) Thành phần hoá häc Tû lÖ (%) - pinen 3,7 - gurjunen VÕt sabinen VÕt - caryophyllen 14,5 - pinen 0,6 - humullen 2,7 myrcen 24,6 allo-aromadendren 0,3 p-cymen vÕt germacren D 0,4 limonen 0,3 - selinen 0,1 (Z)-  -ocimen 32,1 leden 1,0 (E)- - ocimen 9,4 - muurolen VÕt terpinolen vÕt -cadinen 0,3 linalool 0,5 calamenen vÕt perillen vÕt - cadinen 0,6 allo-ocimen 1,0 (Z)-nerolidol 0,2 neryl axetat 0,2 caryophyllen oxit 2,9 geranyl axetat 0,7 Hợp chất cha xác định 3,8 - copaen vết Các kết thành phần myrcen (24,6%); (Z)- ocimen (32,1%); (E)- - ocimen (9,4%) - caryophyllen (14,5%) chiếm khoảng 80% tinh dầu Các axetat nh neryl axetat geranyl axetat đóng góp cho mùi thơm dễ chịu tinh dầu vối Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Bảng I.4: Thành phần hoá học tinh dầu nụ vối non già CÊu tư %FID vèi non %FID vèi giµ - thujen vÕt vÕt -- pinen 3,2 2,4 Camphen vÕt vÕt - pinen - myrcen p-cymen Limonen (Z)- - ocimen (E)- - ocimen Linalool Perillen neo-allocimen - terpineol neryl acetat geranyl acetat - coaen - gurumen - caryophyllen 0,3 35,1 vÕt 0,2 34,6 13,3 0,1 vÕt 1,4 vÕt vÕt 0,2 vÕt vÕt 4,6 0,2 38,0 vÕt vÕt 32,5 12,3 0,5 0,1 0,5 0,3 vÕt 0,1 0,2 0,2 4,2 CÊu tö %FID %FID trong vốinon vối già bergamoten - gurumen - humulen allo aromadendren germacren D - selinen ledren muurolen - cadinen calamen - cadinen epiglobuol (E)-nerolidol caryophyllenoxit globulol NI cembren ? (MW=272) NI C¸c chÊt kh¸c 1,2 2,0 1,0 0,6 vÕt vÕt 0,3 0,4 1,0 vÕt vÕt vÕt 0,3 0,1 0,4 0,5 vÕt 0,5 0,3 0,1 vÕt 0,1 vÕt vÕt vÕt vÕt 0,1 0,2 1,2 0,1 0,1 0,3 0,2 0,7 0,2 3,5 Bảng I.5: Thành phần hoá học tinh dÇu hoa vèi cđa Vinh - NghƯ An TT CÊu tö %FID - thujen 0,1 - pinen 1,8 Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Ho¸ häc Camphen vÕt Sabinen 0,2 - pinen 2,9 - myrcen 32,3 p-cymen 0,1 Limonen 2,4 (Z)- - ocimen 29,1 10 (E)- - ocimen 12,0 11 Terpinolen 0,1 12 Linalool 0,7 13 Perillen vÕt 14 neo-allocimen 0,9 15 Terpinen-4-ol vÕt 16 - terpineol 0,1 17 neryl acetat vÕt 18 Geranyl acetat 0,2 19 - copanen vÕt 20 - gurumen vÕt 21 - caryophyllen 5m3 22 Begamoten hc - gurunen 1,5 23 - humulen 1,1 24 allo- aromadendren 0,3 Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học 25 germadren D 0,4 26 - celinen 0,8 27 Ledrenen vÕt 28 Muurolen vÕt 29 - cadinen 0,1 30 Calamen vÕt 31 - cadinen 0,4 32 Epiglobulol 0,1 33 (Z)-nerolidol 0,3 34 caryophyllen oxit 1,8 35 Globulol 0,2 36 cembren (mW=272) 0,5 37 chất khác 4,2 Cây Gioi: Thực vật học Cây Gioi có tên khoa học Eugenia jambos (L.) Alston, đợc trồng rải rác mọc hoang vùng nớc ta Một số vùng giới trồng loại gioi nh: Trung Quốc, ấn Độ, Iraq, Guatemala, nớc vùng Đông Nam Ngày nay, thảo d Gioi thân gỗ, cao 10m, cành hẹp hay vuông Lá thuôn giáo, dài, nhọn đỉnh, phiến có tuyến mờ suốt có mùi thơm Hoa màu trắng lục, tập trung thành cụm đầu cành; nhánh tận có hoa Nụ hình cầu Đài có bốn thuỳ, tràng có bốn cánh rời, lõm mặt Nhị nhiều, bao phấn hình trái xoan thuôn Bầu hạ, có hốc lõm đỉnh, vòi cong dài nhị Quả mọng gần hình cầu, mang đài dài tồn có hạt Công dụng gioi: Cho ®Õn nay, ë níc ta, gioi ®ỵc trång ®Ĩ lÊy ăn Guatemala, thổ dân đà dùng làm thuốc nhuận tràng chữa cảm Luận văn tốt nghiệp đại học Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học cúm Ngày nay, thảo d gioi có tính kháng viêm mạnh nên đợc dùng y học dân tộc Guatemala Thành phần hoá học gioi: Các tác giả Karla Slowing, Monica Sollhuber, Emilia Carrterro Angel Villar [4] đà lấy gioi miền Trung Tây Guatemala tách dịch chiết cột LH20 cho hai phân đoạn chứa Flavonol Từ phân đoạn nhiều hơn, phơng pháp sắc ký đẩy chớp nhoáng silicagel cho hai hợp chất, sau thuỷ phân axit, phơng pháp phổ UV metanol, thêm CH3ONa, CH3COONa, AlCl3 + HCl để phát dịch chuyển bath-chromic hypsochromic, phổ 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-NMR COSY, 13C-NMR DEPT, 1H-13C COSY,đà chứng minh đợc cấu trúc Flavonol lµ quercetin (3,3’, 4’,5,7- pentahydroxy flavonol - C15H10O7) vµ myricetin (3,3, 4,5,5, 7- hexahydroxy flavone) Gốc đờng glycozit Rhamnoza xyloza Quả gioi có mùi thơm hoa hồng P.L Lee, G.Swords G.L.K Hunter đà nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu Eugenia jambos L trång ë miÒn nam Florida (Mü) B»ng phơng pháp GC/MS, đà nhận diện đợc 17 chất sau[3]: Rỵu izo butylic Hexanal Rỵu butylic Rỵu izoamylic 3-hydroxy-2-butanol Hexanol Cis-hexen-1-ol Trans-3-hexen-1-ol Cis-linalool 10 Trans-linalool 11 Linalool 12 Geraniol 13 Rỵu benzylic 14 Rỵu 2-phenyl etylic 15 Andehyt xinamic 16 Rỵu3-phenyl-1-propanol 17 Rợu xinamic Điều đáng ý thành phần hoá học tinh dầu gioi este Thành phần 12 rợu, đó, cis-hexen-1-ol thành phần có hàm lợng cao nhất, sau hexanal, anđehit xinamic có dạng vết Mùi thơm hoa hồng gioi hai chất cis vµ trans-linalool Mét sè nhµ khoa häc Trung Quèc đà nghiên cứu thành phần hoá học bột gỗ gioi, xác đinh đợc chất có hàm lợng cao lµ[5]: Etoxy etyl axetat CH3-COO-CH2-CH2-OC2H5 39,16% 3-Hexenol CH3-CH2-CH=CH2-CH2-CH2-OH 9,3% Linalool (CH3)2-C=CH-CH2-CH2-C(CH3)-CH=CH2 OH Rỵu xinamic C6H5 - CH=CH-CH2-OH Và 19 chất khác có hàm lợng thấp dạng vết Luận văn tốt nghiệp đại học 10 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Tác giả Nguyễn Quang Tuệ [2] đà nghiên cứu thành phần hoá học tinh dầu phận khác Gioi Nghệ An Hà Tĩnh Bảng 1: Thành phần hoá học tinh dầu gioi STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Thành phần % FID MÉu l¸ MÉu l¸ 1,1 15,5 1,8 18,8 0,7 0,4 5,3 11,1 0,3 0,4 0,5 0,4 0,1 0,5 0,9 0,5 26,5 14,0 26,5 14,5 1,5 1,8 0,6 0,5 0,2 0,1 0,8 0,6 2,6 2,2 2,8 11,3 0,2 0,4 0,5 1,8 Tªn chÊt -thujen  - pinen Camphen  - pinen Myrcen -phellandren - terpinene p – cymen -ocimen -terpinen Linalool Campho Boneol terpinen – - ol  - terpineol -caryophyllen -humulen trans- nerolidol Thành phần hoá học tinh dầu gioi nhận diện đợc 18 chất, chủ yếu tecpen rợu không no Các chất có hàm lợng lớn là: -pinen -pinen -ocimen -terpinen -carophyllen linalool -terpinol trans-nerolidol Bảng 2: Thành phần hoá học tinh dầu gỗ Gioi Luận văn tốt nghiệp đại học 11 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học STT Tªn chÊt -pinen -pinen -carophyllen -humulen Nerolidol Terpinol Thành phần % 0,4 1,0 9,8 7,1 16,4 1,3 Bảng 3: Thành phần hoá học tinh dầu hoa Gioi STT Tên chất Thành phần % 2,1 -pinen 4,6 -ocimen 8,3 -carophyllen 11,8 -terpinen KÕt qu¶ cho thÊy -pinen ë mÉu hoa thÊp (2,1%), thÊp h¬n nhiều so với mẫu (trung bình 17%); -ocimen (4,6%) -terpinen (11,3%) thấp so với bình quân 19%; riêng -caryophyllen (8,3%) có hàm lợng trung bình cao (7,3%) Nhìn chung, thành phần tinh dầu hoa nói chung thấp Điều cho thấy khả bay tinh dầu hoa gioi lớn so với Để lấy mẫu tinh dầu gioi nên lấy thành phần tốt so với hoa Dựa vào sắc đồ phổ phân tích mẫu gỗ hoa đà nhận diện đợc chất gần giống với mẫu Thành phần hoá học dịch chiết ete dầu hoả hoa gioi Dịch chiết có hai flavonoit chiếm hàm lợng cao 8-hydroxy, 6metoxy flavanon (14,5%) 5,7-dimetoxy flavanon (9,59%), phần lại axit béo nh: axit 9,12-octadecadienoic, metyl este (8,31%) axit hexadecanoic, metyl este (8,20%) Các terpenoit chiếm tỷ lệ thấp, chất có hàm lợng tơng đối cao caryophyllen (7,83%) Thành phần hoá học dịch chiết metanol hoa gioi Thành phần dịch chiết metanol hoa gioi flavonoit gồm hỵp chÊt: 8-hydroxy, 6-metoxy flavanon (19,84%), 5,7-dihydroxy flavanon (16,65%), 6,8-dihydroxy, 5-metyl flavanon (4,45%), 6,8-dihydroxy, 5-metyl flavanon (3,64%), 5-hydroxy, 7-metoxy, 6,8-dimetyl flavanon (1,8%) Ngoài Luận văn tốt nghiệp đại học 12 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học ra, xác định đợc ancaloit xetone: phenyl 2-phenylpyaolo [1,5-a] pyridin-3-yl Thành phần hoá học dịch chiết ete dầu hoả vỏ gioi Thành phần dịch chiết ete dầu hoả vỏ gioi chủ yếu axit béo, thành phần là: axit 9,12-octadecadienoic (23,53%), axit 9octadecenoic (15,39%) axit n- hexandecanoic (13,67%) Thành phần hoá học dịch chiết metanol gỗ gioi Thành phần dịch chiết metanol gỗ gioi steroit testosteron (13,88%), đồng phân testosteron (25,56%), guaion (7,11%) đồng phân guaion (10,53%) Luận văn tốt nghiệp đại học 13 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Chơng II Thực nghiệm ảnh gioi II.1 Hoá chất - dụng cụ - thiết bị máy móc: II.1.1 Hoá chất: - Mêtanôl: 1000ml - Cloroform: 3000ml - Silicagel: 300g II.1.2 Dông cô - thiết bị máy móc Luận văn tốt nghiệp đại học 14 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học - Bình cầu có nút nhám dung tích lít: cái; dung tích 0,5 lit: - Bình tam giác có nút nhám ( Dung tích 500ml) : bình - Phễu : - Bình tam giác nhỏ ( Dung tÝch 50ml ) : 15 c¸i - Cèc thủ tinh : c¸i - Lä thủ tinh nhá: 15 - ống sinh hàn chng cất nút nhám: - Cột sắc ký thuỷ tinh, kích thớc 602,5 cm( Dùng để chạy cột tách phân đoạn chất) :1 - Xy ranh tiêm : - Đũa thuỷ tinh: - Bông : gói - Bếp điện: II.2 Phơng pháp thực nghiệm: Hoa Gioi đợc lấy phờng Lê Mao, thành phố Vinh, tỉnh Nghệ an vào tháng 3-2003 Để khô không khí tuần cân đợc lợng 300 g ngâm 500 ml metanol tinh khiết bình cầu dung tích lít, thời gian tháng Sau lọc lấy dung dịch chng cất chân không loại dung môi đợc cặn chiết thô màu vàng nâu Cặn chiết thô đợc tách cột silicagel 254 ( Merck) - Đầu tiên dùng đũa thuỷ tinh cho vào đáy cột - Trộn Silicagel với Cloroform theo tû lƯ 1:2 råi dïng ®ịa thủ tinh khuấy sau rót vào đầu cột - Mở khoá để dung môi chảy khỏi cột, Silicagel lắng xuống tạo thành lớp cột - Thấm mẫu chất vào đầu cột, trộn cặn chiết thô víi Silicagel theo tØ lƯ 1:1, dïng ®ịa thủ tinh trộn đều, sau cho vaòi phía lớp Silicagel cột - Dùng đũa thuỷ tinh cho vào phía cột ( để ta rót dung môi pha tĩnh vào tránh làm xói mòn pha tĩnh ) Hệ dung môi rửa giải cloroform; cloroform: metanol với tỷ lệ lần lợt 98:2, 95:5, 90:10 Luận văn tốt nghiệp đại học 15 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học - Sau cho dung môi Cloroform tinh khiết vào cột, trình chạy cột diễn thấy cột xuất phân đoạn với màu sắc khác nhau: màu vàng, vàng đỏ, xanh đậm, đỏ nâu ảnh Quá trình rửa giải thu đợc phân đoạn có màu sắc khác nhau: + Phân đoạn 1: chất lỏng dạng dầu có màu vàng nhạt + Phân đoạn 2: Dung dịch có màu vàng đậm + Phân đoạn 3: Dung dịch có màu xanh đậm + Phân đoạn 4: Dung dịch có màu vàng đỏ nâu + Phân đoạn 5: Dung dịch có màu đỏ nâu nhạt Phân đoạn sau cho bay dung môi thu đợc bột màu vàng dễ tan metanol, etanol KÕt tinh l¹i metanol thu đợc tinh thể màu vàng nhạt A tinh thể màu đỏ B Luận văn tốt nghiệp đại học 16 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Chơng III Kết thảo luận Cấu trúc hợp chất dạng tinh thể B đợc xác định phơng pháp phổ: Phổ khối lợng EI MS đợc ghi máy HP 5989 B MS Viện hoá học Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ Quốc gia, với lợng bắn phá 70 eV Phổ 1H NMR đợc đo máy BRUKER500 MHz, Phổ 13C NMR đợc đo máy BRUKER 125 MHz Viện hoá học Trung tâm Khoa học tự nhiên Công nghệ Quốc gia Phổ khối lợng: M+= 298, tơng ứng với công thức phân tử C18H18O4 m/z= 221 ( M+- C6H5) Phân hoá Retro Diels-Alder ( phân cắt liên kết 1-2 3-4 cho ion C10H10O4+ , m/z=194 C8H8+, m/z= 104) m/z= 166(C10H10O4+- CO) Phổ cộng hởng từ hạt nhân proton 1H-NMR: TÝn hiƯu céng hëng (multiplet) tõ 7,242 ®Õn 7,634 ppm proton thơm vòng benzen B Nhóm OH phenolic ë C5, cã tÝnh axit cao cho tÝn hiƯu céng hëng ë13,597 ppm proton cđa nhãm CH3 cho c¸c tÝn hiƯu céng hëng( singlet) ë 2,152 ppm proton cđa nhãm metoxy cho tÝn hiƯu singlet ë 3,664 ppm TÝn hiƯu céng hëng cđa c¸c proton cđa hai nhãm CH vµ CH 5,380 –5,541 ppm 2,826-3,064 ppm Các số liệu phổ phù hợp với cấu trúc hợp chất B là: 5-hydroxy-7-metoxy6,8-dimetyl flavanon Luận văn tốt nghiệp đại học 17 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học CH3 CH3O O CH3 HO Luận văn tốt nghiệp đại học O 18 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Luận văn tốt nghiệp đại học 19 Niên khoá: 2000 - 2004 Sinhviên: Ngô Thị Thuý Trờng Đại học Vinh Khoa Hoá học Luận văn tốt nghiệp đại học 20 Niên khoá: 2000 - 2004 ... % FID MÉu l¸ MÉu l¸ 1,1 15, 5 1,8 18,8 0 ,7 0,4 5, 3 11,1 0,3 0,4 0 ,5 0,4 0,1 0 ,5 0,9 0 ,5 26 ,5 14,0 26 ,5 14 ,5 1 ,5 1,8 0,6 0 ,5 0,2 0,1 0,8 0,6 2,6 2,2 2,8 11,3 0,2 0,4 0 ,5 1,8 Tªn chÊt -thujen ... (7, 83%) Thành phần hoá học dịch chiết metanol hoa gioi Thành phần dịch chiết metanol hoa gioi flavonoit gåm hỵp chÊt: 8-hydroxy, 6 -metoxy flavanon (19,84%), 5, 7- dihydroxy flavanon (16, 65% ), 6,8- dihydroxy,... 5, 7- dihydroxy flavanon (16, 65% ), 6,8- dihydroxy, 5- metyl flavanon (4, 45% ), 6,8- dihydroxy, 5- metyl flavanon (3,64%), 5- hydroxy, 7- metoxy, 6,8- dimetyl flavanon (1,8%) Ngoài Luận văn tốt nghiệp đại