Góp phần nghiên cứu cây hoàng đằng (fibraurea tinctoria lour) thuộc họ tiết dê (menispermaceae) mọc hoang ở một số vùng ở nghệ an

Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Lời cảm ơn Đề tài: "Góp phần nghiên cứu Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria.Lour) thuéc hä TiÕt dª (Menispermaceae) mäc hoang mét số vùng Nghệ An" đợc thực từ tháng 10/2003 - 4/2004 Trong suốt trình thực đề tài đà nhận đợc nhiều giúp đỡ thầy giáo, nhân dân địa phơng nơi nghiên cứu đề tài Trớc tiên xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Tiến sỹ Hoàng Văn Mại, ngời thầy tận tình hớng dẫn giúp đỡ suốt trình hoàn thiện luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Thạc sỹ Phan Xuân Thiệu, ngời đà giúp đỡ tận tình trình nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy cô giáo, cán phụ tá phòng thí nghiệm Sinh lý - Hoá sinh - Đại học Vinh giúp đỡ bạn bè nh nhân dân địa phơng nơi thu mẫu vật Tôi xin chân thành cảm ơn ! Sinh viên Trần Đức Lơng Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Mở đầu Từ xa xa, ngời đà biết đà tìm cho thức ăn vị thuốc từ cỏ tập phân bịêt độc Nguyên liệu làm thuốc từ thực vật phong phú đa dạng Chúng đà đợc ngời nghiên cứu sử dụng từ xa đến Trong thời kỳ tân dợc cha phát triển nguồn thuốc chữa bệnh Mặc dù tiến hoá học thời gian gần cho phép phân lập đợc hoạt chất dạng tinh khiết, tổng hợp hoàn toàn điều chế hoạt chất nhân tạo với số lợng lớn bớc tiến vợt bậc, nhng hoạt chất từ cỏ giữ đợc tầm quan trọng với nhiều lý khác Alkaloid nhóm hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên quan trọng nhiều mặt Đặc biệt lÜnh vùc y häc, chóng cung cÊp nhiỊu lo¹i thc có giá trị chữa bệnh cao Do loài ngời đà biết khai thác sử dụng chúng, đà phát đợc 6000 hợp chất alkaloid khác Sự phân bố hợp chất alkaloid giới thực vật tơng đối rộng rÃi, với 4000 loài có chứa loại hợp chất này[1] Trong alkaloid tồn nhiều phận khác Cây Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour) thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae) loài thực vật có chứa alkaloid đợc sử dụng rộng rÃi Theo "Dợc liệu" nhà xuất Y học - 1983 dợc phẩm từ Hoàng đằng có công dụng chữa đau mắt, mụn nhọt, sốt nóng, kiết lị ngộ độc thức ăn [5] Các nghiên cứu từ trớc đến đối tợng Hoàng đằng cho thấy công dụng mà có đợc hợp chất alkaloid palmatin - thành phần hoạt chất - tạo Các nghiên cứu hàm lợng alkaloid toàn phần theo palmatin tính trung bình nguyên liệu - 3% [4] Tuy nhiên cha thấy nghiên cứu cụ thể biến động hàm lợng alkaloid phận cây, đặc biệt nghiên cứu đối tợng Hoàng đằng mọc hoang Nghệ An - nơi có phân bố cao [1] Cây Hoàng đằng mọc hoang số vùng Nghệ An từ lâu đà đợc nhân dân địa phơng sử dụng làm thuốc làm nguyên liệu nhuộm Gần Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Nghệ An, tợng thu mua nguyên liệu Hoàng đằng để xuất khẩu, chế biến với số lợng lớn diễn phổ biến Để tìm hiểu số đặc điểm thực vật, đánh giá chất lợng alkaloid Hoàng đằng điều kiện sinh cảnh Nghệ An nghiên cứu đề tài: "Góp phần nghiên cứu Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour) thuéc hä TiÕt dª (Menispermaceae) mäc hoang số vùng Nghệ An" Trên sở số liệu thu đợc đề xuất phơng pháp khai thác hợp lý, góp phần bảo vệ nguồn tài nguyên Do thời gian hoàn thành luận văn có hạn nên không tránh khỏi thiếu sót, mong có góp ý, bổ sung thầy cô giáo, bạn đọc để có hoàn thiện nghiên cứu sau Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Chơng I Tổng quan 1.1 Họ Tiết dê loài Fibraurea tinctoria Lour 1.1.1 Đặc điểm thực vật phân bố họ Tiết dê Là bụi leo hay thân quấn gỗ nhỏ mọc đứng cắt ngang thấy tuỷ rộng, rễ đắng Lá có cuống, mọc so le, kèm thờng đơn, chét hay thuỳ có gân hình chân vịt Cụm hoa sim, chuỳ, bó nhỏ hoa mọc kẽ hay phát sinh từ chỗ già, hoa nhỏ, có màu không rõ rệt, đơn tính khác gốc, đều, không Hoa đực: Lá đài thành hàng, hợp nhỏ hơn, cánh hoa thờng nhỏ đài, bé tý không có, rời liền, thờng có nhị không có, có mọc đối diện với cánh hoa rời liền nhau, bao phấn ngắn Hoa cái: Có hay nhị lép, - noÃn mét hay nhiỊu, rêi nhau, kh«ng cng hay cã cng, nóm nhơy ë ngän, nguyªn hay th no·n, chẳng giảm xuống 1do bị teo dính vào đờng hàn bụng, noÃn hình hạch, có vết sẹo vòi gần gần gốc phát triển lệch tâm, không cuống hay có cuống, vỏ mỏng hay gần dày, vỏ ít, vỏ nhiều nhị giắn nh xơng nháp, có u nhỏ hay có cạnh lồi; hạt nhiều cong thành hình móng ngựa có nội nhũ, phôi nhiều cong với rễ mầm nhỏ hạt dẹt mầm nửa hình trụ [16], [9] Về phân bố: Họ Tiết dê giới có khoảng 70 chi 450 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới, nhiệt đới, có loài vùng ôn đới bán cầu Bắc Nam (theo Takhtajan 1966) Đây họ lớn phËn bè réng ë ViƯt Nam hä TiÕt dª cã 18 chi khoảng 29 loài phân bố rộng rÃi loại hình rừng nhiệt đới nhiệt đới nớc ta Có nhiều loài dùng làm thuốc nên đợc gây trồng rộng rÃi nhân dân từ đồng đến núi cao Trong loài phổ biến có nhiều loài đặc hữu Bắc nh Tinospora capillpes G., pridania petelotii G., Gần đặc hữu Việt Nam có Tinomiscium Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng tonkinensis G, Tinospora thorelli G Thành phần đặc hữu Đông Dơng có: Cocculus sarmentocus D., [3] Họ Tiết dê có 70 chi có 30 chi có alkaloid với số loại alkaloid tìm đợc 172 chất khác [6] Nhiều loài họ đà đợc nghiên cứu kỹ lỡng mặt hoá học Tập trung nhiều vào loài có chứa alkaloid thuộc nhóm izoquinolin nh bình vôi (Stephania rotunda), Vàng đắng (Coscinium fenestratum G.) Cây bình vôi đà đợc nghiên cứu nhiều nớc ta cho thấy củ bình vôi có chứa L - tetrahydropalmatin với hàm lợng từ 0,21% - 3,55% tuỳ vùng thu hái [1] Ngoài nghiên cứu gần xác định thêm nhiều hợp chất có củ bình vôi (Ngô Thị Tâm - 1992, Phạm Thanh Kỳ - 1999, Nguyễn Thị Hoài An 1993) nh cepharanthin, stepharin, stepholidin Các nghiên cứu khác Vàng đắng cho thấy hàm lợng alkaloid berberin từ 1,5 - 3% 1.1.2 Loài Fibraurea tintoria L Hoàng đằng có tên khác Nam hoàng liên, Thích hoàng liên, Kham kham (Tày), Pàngpùi (Thái) thuộc chi Fibraurea họ Tiết dê Là dây gỗ leo to, gỗ vàng Lá mọc so le có phiến xoan, đáy cắt ngang, đầu nhọn, không lông, gắn phiến Chùm tụ tán nách lá, hoa có đài, cánh hoa, hoa đực có tiểu nhị, có phù vòng dới bao phấn Hoa có tâm bì Quả nhân cứng - Phân bố: Hoàng đằng mọc hoang khắp vùng núi nớc ta từ Lạng Sơn Nam Bộ, phân bố phong phú vùng núi từ Nghệ An trở vào [1], [12] Thành phần hoá học: hoạt chất Hoàng đằng alkaloid thành phần palmatin hàm lợng từ - 3%, có jatrorizin columbamin R1O N R2O + OCH3 Palmatin: R1 = R2 = -CH3 Jatrorizin: R1 = -H, R2 = -CH3 Columbamin: R1 = -CH3, R2 = -H OCH3 Kho¸ ln tèt nghiƯp  Trần Đức Lơng Palmatin dạng clorid có tác dụng ức chế với tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) liên cầu khuẩn (Streptococcus), loài vi khuẩn khác (lị, thơng hàn ) không thấy có kết qủa rõ rệt [1] Do nguyên liệu từ Hoàng đằng dùng làm thuốc chữa đau mắt, sốt rét, lị, bệnh gan, viêm ruột, ỉa chảy dùng làm thuốc bổ đắng [5] Ta dùng palmatin để điều chế l- tetrahydropalmatin (rotundin) chất có tác dụng an thần [1] 1.2 Vài nét chung alkaloid 1.2.1 Khái niệm lợc sử nghiên cứu alkaloid Đà từ lâu nhà khoa học đà tìm thấy hợp chất tự nhiên, hợp chất thờng axít chất trung tính Đến năm 1806 dợc sĩ Friedrich Wlihelm Sertiiner phân lập đợc mét chÊt tõ nhùa thc phiƯn cã tÝnh kiỊm vµ gây ngủ mạnh ông đặt tên morphin Năm 1810 Gomes chiết đợc chất kết tinh từ vỏ Canhkina đặt tên cinchonin Sau P.J.Delletier J.B.Caventon chiết đợc hai chất có tính kiềm từ hạt loài thuộc chi Strychnos đặt tên Strychnin Brucin Đến năm 1819 dợc sĩ Wilhelm Messner đề nghị xếp chất có tính kiềm lấy từ thực vật thành nhóm riêng ông đề nghị gọi tên alkaloid ngời ta ghi nhận Messner ngời đa khái niệm alkaloid có định nghĩa: alkaloid hợp chất hữu có chứa nitơ, có phản ứng kiềm chiết đợc từ thực vật Ngoài tính kiềm, alkaloid có đặc tính khác nh có hoạt tính sinh học mạnh, có tác dụng với số thuốc thử chung alkaloid Sau Pôlônôski đà định nghĩa: Alkaloid hợp chất hữu chứa nitơ, đa số có nhân dị vòng, có phản ứng kiềm, thờng gặp thực vật động vật, thờng có dợc tính mạnh có phản ứng hoá học với số thuốc thử chung alkaloid [1] Tuy nhiên số chất đợc xếp vào alkaloid nhng nitơ không dị vòng mà mạch nhánh ngời ta gọi alkaloid nhân dị Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng vòng nh: ephedrin, capsaicin, colchicin Cũng cần lu ý số alkaloid phản ứng kiềm nh colchicin lấy từ hạt tỏi độc, ricinin lấy từ hạt thân dầu, theobronin hạt cacao có alkaloid có phản ứng axit yếu nh arecaidin guvacin hạt cau (Areca catechu) 1.2.2 Trạng thái tự nhiên phân bố 1.2.2.1 Phân bố alkaloid tự nhiên Trong tự nhiên alkaloid phân bố thực vật động vật nhng chủ yếu thực vật Trong mầm đà tìm thấy khoảng 500 alkaloit, hai mầm đà tìm thấy 3600 chất thực vật hạt kín Angiospermae phân bố alkaloid cã tÝnh nh¶y vät [7] Cromwell (1955) íc tÝnh alkaloid phân bố khoảng phần tổng số hä thùc vËt cã hoa Mét íc tÝnh kh¸c (Hegnaner 1963) cho r»ng alkaloid cã tõ 12 – 20% tổng số có nhựa Còn Willanam Schubert (1955) cho 300 họ ngành hạt kÝn th× 1/3 hä cã chøa alkaloid NhiỊu tỉng kÕt cho thấy đại đa số có chứa alkaloid mầm Chỉ số mầm ngành hạt trần có chứa alkaloid Theo thống kê thân thảo bụi có nhiều alkaloid gỗ Cây năm sau có nhiều alkaloid lâu năm (Levin 1976) Alkaloid loài sống nớc ngoại trừ họ Sen (Theo Mc.Nair 1943) Ngày nhà khoa học đà thống kê đợc khoảng 6000 alkaloid từ 5000 loài, hầu hết thực vật bậc cao chiếm khoảng 15 20% tổng số loài c©y tËp trung ë mét sè hä nh Graminaceae (34), Liliaecae (201), Ranunculaceae (267), Menispermaceae (172), Apocynaceae (800), Papaveraceae (383), Asteraceae (130) [1], [7] Trong mét sè nghiªn cøu ngêi ta nhận thấy loài thực vật thuộc họ hay họ có quan hệ gần gũi thêng cã c¸c alkaloid gièng Ngay cïng mét loài nòi khác có thành phần hoá học khác Những năm gần có nhiều tài liệu đề cập đến vấn đề gọi nòi hoá học (Chemical race) Từ nòi hoá học để Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng loài nhng có vài đặc điểm khác so với nòi mặt hoá học Hiện tợng thể rõ ràng số loài chứa alkaloid Sự phân bố địa d nguyên nhân tạo nòi hoá học khác Các nghiên cứu tổng quan McNair (1935) Levin (1976) quan hệ alkaloid với yếu tố địa d cho thấy rõ yếu tố ảnh hởng lớn hình thành alkaloid Cũng cần lu ý có trờng hợp loài họ thực vật mà chứa alkaloid hoàn toàn khác cấu tróc ho¸ häc ë thùc vËt bËc thÊp cã sù phân bố alkaloit tha thớt nhiều, tìm thấy nấm cửa loả mạch (Clariceps purpurea), nấm Amanita phalloides Không thực vật mà động vật đà tìm thấy alkaloid với số lợng ngày tăng 1.2.2.2 Phân bố Alkaloid tổ chức Trong c©y alkaloid thêng tËp trung ë mét sè bé phËn định Alkaloid tập trung hạt nh mà tiền, cà phê, tỏi độc nh ớt, hồ tiêu, thuốc phiện, nh Beladon, coca, thuốc lá, chè, hoa nh cà độc dợc, thân nh ma hoàng, lựu, hoàng đằng, củ nh ô đầu, bình vôi, bách Nói chung alkaloid tập trung chủ yếu tổ chức sinh trởng hoạt động nhất, tổ chức nội bì ngoại bì túi nhựa mủ Mặc dù alkaloid tập trung chủ yếu tổ chức sinh trởng hoạt động mạnh nhng nồng độ alkaloid cao tế bào non tổ chức mà tế bào hoá không bào, tế bào già mà không bào có nhiều alkaloid Hàm lợng alkaloid thờng thấp, từ số trờng hợp nh canhkina hàm lợng alkaloid đạt 10%, nhựa thuốc phiện có 20 30% Bình thờng dợc liệu chứa 1- 3% alkaloid đợc coi hàm lợng cao Trong cây, alkaloid có trạng thái tự (alkaloid bazơ) mà thờng tồn dạng muối với axit hữu nh malat, oxalat, acetat có dạng muối axit vô cơ, chúng tan dịch tế bào số alkaloid kết hợp với tanin với acid hay với đờng [1] Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Điều đáng ý hàm lợng alkaloid phụ thuộc nhiều vào yếu tố khí hậu, ánh sáng, chất đất, phân bón, giống thời kỳ sinh trởng [13] Sự biến đổi hàm lợng alkaloid tổ chức trình sinh trởng đáng kể Nói chung hàm lợng alkaloid tăng nhanh giai đoạn phát triển tế bào hoá không bào, giảm dần giai đoạn già cỗi (Sinden ea al, 1973), tợng thể rõ ràng Điều cuối đáng lu ý thay đổi có tính chu kú cđa mét sè loµi chøa alkaloid, chu kú vài tuần, vài tháng Trờng hợp dừa cạn (Catharanthus roseus L.) thí dụ [13] Tóm lại hàm lợng phân bố alkaloid biến động lớn Điều cho thấy cần thiết phải xác định thời điểm thu hái nguyên liệu hiệu cao 1.2.3 Cấu tạo hoá học phân loại alkaloid Xét mặt hoá học alkaloid amino bậc 1, bậc hay bậc amoni hydrat bậc Hầu hết alkaloid có nitơ tham gia vào nhân dị vòng, nhng có alkaloid mà nitơ vòng Ngày ngời ta thờng diễn tả alkaloid đợc tạo nên từ acid amin nitơ nằm nhân dị vòng alkaloid thật gọi chất tạo từ acid anim, nitơ mạch thẳng Protoalkaloid cònPseudoalkaloid chất đợc tạo ngng tụ amoniac với hợp chất nitơ ví dụ nh isoprenoid Alkaloid thờng đợc phân loại thuỳ theo cấu trúc nhân: 1.2.3.1 Alkaloid nhân dị vòng Những alkaloid thuộc nhóm có nitơ nẳm vạch thẳng, gọi protoalkaloid ví dụ nh hordenin (C10H15NO) mầm Mạch nha, mescalin (C11H17NO3) Lophophora williamsii, ephedrin (C10H15NO) Ma hoàng, conchicin (C22H23NO6) hạt tỏi độc, Capsaicin ớt Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng 1.2.3.2 Alkaloid có nhân dị vòng Các alkaloid loại cã mét vßng hay nhiỊu vßng, ngêi ta chia làm nhiều nhóm, ta nêu nhóm chính: Những alkaloid dẫn xuất nhân pyrol pyrolidin Những alkaloid dẫn xuất nhân piridin piperidin Những alkaloid dẫn xuất nhân tropan Những alkaloid dẫn xuất nhân quinolin Những alkaloid dẫn xuất nhân izoquinolin Nhóm có nhiều alkaloid đợc sử dụng điều trị Có thể chia làm phân nhóm: - CÊu tróc Tetralydvoisoquinolin - CÊu tróc Benzoquinolin - CÊu tróc Protoberberin - CÊu tróc Aporphin - CÊu tróc Morphinan - CÊu tróc Benzophenanthridin - CÊu tróc Emetin Nh÷ng alkaloid dẫn xuất quinolizidin Những alkaloid dẫn xuất nhân Indol Đây nhóm quan trọng Alkaloid nhóm có giá trị sử dụng cao Có thể chia thành phân nhóm - Cấu trúc Indolalkylamin - CÊu tróc Physostigmin - CÊu tróc Eergolin - CÊu tróc Strychnin - C¸c alkaloid ë chi Catharanthus Những alkaloid dẫn xuất nhân imidazol Những alkaloid dẫn xuất nhân Purin 10 Những alkaloid dẫn xuất nhân quinazolin 11 Những alkaloid dẫn xuất Acridin 12 Những alkaloid dẫn xuất nhân Pirolizidin 10 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Dới lớp bần tầng phát sinh bần lục bì có lớp tế bào nhuộm màu đỏ nhạt Tiếp theo lớp tế bào mô mềm vỏ gồm tế bào màng mỏng có hình gần tròn, hình trứng hay hình chữ nhật, bắt màu đỏ với cacmin Rải rác tế bào mô cứng màng dày, khoang rộng có nhiều vân rõ, nhuộm màu xanh Có tinh thể canxi oxalat hình lập phơng, hình chữ nhật hay hình thoi nằm gần tế bào mô cứng Phía tế bào mô cứng tập trung tạo thành vòng mô cứng liên tục uốn lợn theo bó libe, gỗ điều khác so với vòng mô cứng rễ Đây tế bào màng dày khoang rộng rải rác có tinh thể canxi oxalat Libe gỗ xếp thành bó riêng biệt, đầu bó vòng mô cứng phân nhánh cách tia ruột hẹp, nhuộm màu đỏ với cacmin, rải rác có tế bào mô cứng bắt màu xanh Bó gỗ gồm nhiều mạch gỗ to, nhuộm màu xanh phân cách tia ruột, rải rác có tế bào mô cứng Giữa thân mô mềm ruột gồm tế bào tròn hay nhiều cạnh bắt màu đỏ, rải rác lại có tế bào mô cứng với tinh thể canxi oxalat bắt màu xanh Hình 3: ảnh chụp vi phẩu thân Hoàng đằng - Fibraurea tinctoria L 3.1.2.3 Giải phẫu 3.1.2.3.1 Cấu tạo cuống gân 20 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Cuống gân phân biệt mặt mặt dới rõ ràng, mặt phẳng lõm, mặt dới lồi Xét từ vào cuống hay gân gồm số phần nh sau: Ngoài biểu bì (gồm có biểu bì biểu bì dới): gồm lớp tế bào hình chữ nhật xếp sít màng dày màng màng bên, chúng nhuộm màu xanh với thuốc nhuộm Bên biểu bì phủ lớp cutin Biểu bì phía dới tầng cutin mỏng có nhiều tế bào lỗ khí Nằm dới lớp biểu bì tế bào mô cứng xếp sít từ 3-5 tế bào làm thành cụm, cụm cách bắt màu xanh với thuốc nhuộm Mặt dới cuống có số lợng mô cứng nhiều Tiếp theo tế bào mô mềm nhuộm màu đỏ nhạt với cacmin tế bào tròn hay đa giác nhiều cạnh xếp sát chừa lại khoảng gian bào nhỏ Trong có bó mạch dẫn xếp theo hình vòng cung Chính bó to nhất, hai bên bó nhỏ Trong bó mạch dẫn phần gỗ nằm phía nhuộm màu xanh, phần libe nằm phía dới nhuộm màu đỏ nhạt Bao quanh bó mạch dẫn vòng mô cứng gồm 4-5 lớp tế bào có vách dày nhuộm màu xanh đậm Rải rác tế bào mô cứng tinh thể canxi oxalat hình lập phơng Hình 4: ảnh chụp vi phẫu gân F.tinctoria L 3.1.2.3.2 Cấu tạo phiến 21 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Trên tiêu hiển vi ta thấy phiến lớp biểu bì gồm lớp tế bào, phía có tầng cutin Biểu bì dới tầng cutin hơn, lỗ khí có số lợng nhiều Tiếp theo lớp biểu bì tế bào mô cứng nhộm màu xanh làm nhiệm vụ nâng đỡ Mặt phiến chúng tạo thành tia ăn sâu vào thịt lá, rải rác có tinh thể canxi oxalat hình lập phơng Phía phần thịt tế bào mô mềm nhuộm màu đỏ nhạt, chúng đà đợc đồng hoá trở thành hai dạng tế bào khác nhau: Mặt phía tế bào mô dậu có dạng hình chữ nhật, chứa nhiều lục lạp, bao gồm 4-5 lớp tế xếp vuông góc với tế bào biểu bì Tiếp theo tế bào mô xốp, tế bào tròn hay nhiều cạnh, không đều, chúng xếp tha để hở nhiều khoảng trống chứa khí Tế bào mô xốp chứa lục lạp tế bào mô dậu Phía dới sát với biểu bì có 1-2 lớp tế bào hình chữ nhật xếp ngang, sát mô dậu dới Trong phần mô mềm piến rải rác có tế bào chứa tinh thể canxi oxalat Hình 5: ảnh chụp vi phẫu phiến F tinctoria L Nh xét mặt giải phẫu thực vật cấu tạo rễ, thân, Hoàng đằng - Fibraurea tinctoria L mäc hoang ë NghƯ An cịng tu©n theo thể 22 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng thức cấu tạo chung rễ, thân, hai mầm sống điều kiện nhiệt đới Tuy nhiên với đặc điểm gỗ leo có kích thớc lớn mà có số đặc điểm sai khác chi tiết Chẳng hạn rễ, thân, Hoàng đằng có phát triển mạnh mẽ cơng mô tạo thành vòng tròn liên tục rễ, vòng uốn lợn thân khe ăn sâu Có lẽ đặc ®iĨm thÝch nghi cđa c©y ®iỊu kiƯn leo qn Một đặc điểm bật hạn chế tế bào mô mềm cấu tạo thân 3.2 Nghiên cứu alkaloid 3.2.1 Kết định tính 3.2.1.1 Soi tia UV Quan sát cắt ngang rễ,thân phơi khô dới ánh sáng đèn tử ngoại bớc sóng 365 nm thấy có tợng phát quang màu vàng tơi 3.2.1.2 Phản ứng tạo màu với thuốc thử H2SO4 đặc nớc clor (TT) Kết xuất vòng màu đỏ hai lớp dung dịch: thuốc thử mẫu thử Tiến hành phản ứng định tính với thuốc thử tạo màu phận khác ta thu đợc kết bảng Bảng 1: Phản ứng tạo màu với H2SO4 đ (TT) phận Hoàng đằng Bộ phận định Đoạn Đoạn Đoạn tính thân rễ gốc Mẫu 1m Đoạn thân 2m Đoạn Đoạn Đoạn Đoạn thân thân thân ngän 3m 5m 8m KI (l =5m) + + + + Mê nh¹t - KII (l = 12m) + + + + + + KIII (l=8m) + + + + Mờ nhạt - Lá - - - - - - Qua b¶ng cho thÊy ph¶n øng cho kÕt qu¶ dơng tính phận rễ, gốc, thân 1m, thân 2m (KI, KII, KIII) 23 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Đối với mẫu KI, KIII đoạn thân 3m cho kết màu đỏ nhạt, đến đoạn thân 5m cho kết âm tính Với mẫu KII đoạn thân 3m đến 5m cho kết dơng tính, đoạn thân 8m không thấy vòng màu đỏ xuất phản ứng âm tính mẫu nghiên cứu K I, KII, KIII Điều chứng tỏ thân non, hàm lợng alkaloid bé 3.2.1.3 Phản ứng tạo tủa với axit HNO3 32% cồn Khi đem dịch chiết nguyên liệu mẫu nghiên cứu phản ứng với thc thư HNO3 32%, díi kÝnh hiĨn vi ta thÊy xuất tinh thể hình kim màu vàng tơi Tiến hành nghiên cứu phận khác mẫu KI, KII, KIII ta thu đợc kết bảng Bảng Phản ứng tạo tủa với HNO3 32% phận F.tinctoria L Bộ phận định Đoạn Đoạn tính rễ gốc Mẫu Đoạn Đoạn Đoạn Đoạn Đoạn Đoạn thân thân thân thân th©n ngän 1m 2m 3m 5m 8m KI l =5m + + + + Ýt - KII l = 12m + + + + + + KIII l=8m + + + + Ýt rÊt Ýt L¸ - - - - - - Bảng cho thấy phản ứng tạo tủa ®Ịu x¶y víi mÉu K I, KII, KIII đoạn rễ, gốc, thân 1m, thân m Đối với KI đoạn thân 3m có tủa đến thân m không tìm thấy tủa Mẫu KIII thân 3m 5m xuất Với mẫu K II phản ứng tạo tủa xảy với tất mẫu thử thu từ rễ đến thân 5m, đoạn thân 8m không tìm thấy tủa Tuy nhiên phần phần lá, ba mẫu KI, KII, KIII không tìm thấy tủa 24 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng So sánh kÕt qu¶ ë hai b¶ng sè liƯu ta nhËn thÊy ăn khớp phản ứng tạo màu tạo tủa định tính alkaloid Kết cho thấy phần không tìm thấy alkaloid, phần thân non ít, phần thân già rễ có phản ứng dơng tính Từ kết định tính cho phép ta xác định đợc nên định lợng phần phần không định lợng đợc phơng pháp cân 3.2.1.4 Sắc ký lớp mỏng Tiến hành sắc ký lớp mỏng với Silicagen G, màu thuốc thử Dragendorff Trên sắc ký đồ ta phát đợc vết màu vàng da cam đậm (Rf = 0,172) a1, a2: Dịch chiết alkaloid Hoàng đằng a1 a2 Hình Sắc ký đồ phát alkaloid dịch chiết Hoàng đằng So sánh với vết Palmatin sắc ký đồ dung dịch đối chiÕu cho thÊy vÕt nµy cã cïng mµu vµ cïng Rf với vết thử 3.2.2 Kết định lợng 25 Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng - Đối với mẫu nguyên liệu để nguyên lớp vỏ, phận rửa sạch, tán nhỏ, tiến hành định lợng thu đợc kết nh bảng Bảng Hàm lợng alkaloid phận khác Hoàng đằng Bộ phận định lợng Mẫu Đoạn rễ nhánh (%) Đoạn rễ tận gốc (%) Đoạn gốc (%) Đoạn Đoạn Đoạn thân 1m thân 3m thân 5m (%) (%) (%) KI (l = 5m) 1,57 2,31 1,93 0,50 0,28 - KII (l = 12m) 2,24 2,70 2,33 1,87 1,25 0,92 KIII (l = 8m) 1,96 2,45 2,05 1,40 O,91 - - Đối với mẫu nguyên liệu đà cạo lớp bần sót lại lớp biểu bì, sau tán bột định lợng cho ta hàm lợng alkaloid phận theo bảng sau: Bảng Hàm lợng alkaloid phận khác Hoàng đằng Bộ phận định lợng Mẫu Đoạn rễ nhánh (%) Đoạn rễ tận gốc (%) Đoạn gốc (%) Đoạn Đoạn Đoạn thân 1m th©n 3m th©n 5m (%) (%) (%) KI (l = 5m) 1,69 2,54 2,15 0,53 0,28 - KII (l = 12m) 2,55 3,15 3,02 2,31 1,47 1,32 KIII (l = 8m) 2,13 2,68 2,40 1,55 0,96 - So s¸nh kÕt qu¶ ë hai b¶ng sè liƯu ta nhËn thÊy cạo bỏ lớp bần hàm lợng alkaloid nguyên liệu tăng lên đáng kể Điều chứng tỏ lớp bần phía chứa alkaloid ®ã 26 ... phần nghiên cứu Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour) thuộc họ TiÕt dª (Menispermaceae) mäc hoang mét sè vïng ë NghƯ An" Trên sở số liệu thu đợc đề xuất phơng pháp khai thác hợp lý, góp phần bảo... khác Cây Hoàng đằng (Fibraurea tinctoria Lour) thuộc họ Tiết dê (Menispermaceae) loài thực vật có chứa alkaloid đợc sử dụng rộng rÃi Theo "Dợc liệu" nhà xuất Y học - 1983 dợc phẩm từ Hoàng đằng. .. [1] Cây Hoàng đằng mọc hoang số vùng Nghệ An từ lâu đà đợc nhân dân địa phơng sử dụng làm thuốc làm nguyên liệu nhuộm Gần Khoá luận tốt nghiệp Trần Đức Lơng Nghệ An, tợng thu mua nguyên liệu Hoàng