Bài viết nghiên cứu việc ứng dụng các chỉ thị ITS xác định vùng gen nhân của loài C. reticulata là công cụ hữu ích, phục vụ cho công tác nhận dạng, lưu giữ bảo tồn nguồn gen và trong các chương trình chọn tạo giống quýt bản địa của Việt Nam. Mời các bạn tham khảo!
KHOA HỌC CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ GIỐNG QUÝT BẢN ĐỊA CỦA VIỆT NAM DỰA TRÊN TRÌNH TỰ ITS HỆ GEN NHÂN Nguyễn Thúy Điệp1, Lê Thị Thu Trang2, Kiều Thị Dung1, Đặng Thị Thanh Hà1, Trần Đăng Khánh1, Lã Tuấn Nghĩa2 , Khuất Hữu Trung1 TÓM TẮT Nguồn gen quýt (C reticulata) địa Việt Nam đa dạng phong phú, cần khai thác sử dụng, phục vụ cho phát triển kinh tế, xã hội cách hiệu bền vững Mười bốn mẫu/giống quýt thu thập 10 tỉnh/thành khác giải trình tự nhờ khuếch đại locus ITS hệ gen nhân Đoạn trình tự ITS 14 mẫu/giống quýt so sánh trình tự với gen tham chiếu cơng bố NCBI Kết so sánh cho thấy: độ tương đồng trình tự nucleotide mẫu/giống quýt nghiên cứu trình tự tham chiếu cơng bố NCBI dao động từ 94,0% đến 99,59% với độ bao phủ dao động từ 96-97% Hệ số tương đồng di truyền 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu dao động từ 93,59 - 99,73%, 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu phân thành nhóm Dựa vào khác biệt nucleotide số vị trí trình tự vùng ITS, nhận dạng xác sáu mẫu/giống qt qt Tích Giang (Q4), qt Hương Cần (Q5), quýt đỏ Ngọc Hội (Q9), quýt Hôi (Q11), quýt Hà Giang (Q12) quýt Bộp (Q13) Kết có ý nghĩa, phục vụ cho cơng tác bảo tồn, khai thác sử dụng có hiệu nguồn gen qt địa Việt Nam Từ khóa: Trình tự nucleotide, mẫu/giống quýt, ITS, đa dạng di truyền, PCR ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam trung tâm phát sinh nhiều giống ăn có múi, có nhiều nguồn gen quýt, cam bưởi địa q Đây nguồn tài ngun vơ quí cần khai thác sử dụng, phục vụ cho phát triển kinh tế, xã hội cách hiệu bền vững Ở nước ta, tập đoàn quýt địa thu thập, lưu giữ đánh giá sơ bộ, kết nghiên cứu, đánh giá, tư liệu hóa cách bản, sâu, rộng có hệ thống Những liệu, thơng tin phân tích sâu hơn, mức độ phân tử, mức độ gen, tiêu ADN (DNA barcoding).v.v nguồn gen quýt địa có ý nghĩa khoa học, thực tiễn cao giúp bảo tồn, khai thác, phân loại, xác định nguồn gốc chủ quyền nguồn gen nhu cầu có tính cấp thiết cần triển khai sớm để đáp ứng đòi hỏi thực tế Gần đây, liệu giải trình tự hệ (NGS) giúp nhà khoa học hiểu sâu q trình hóa có múi cấu trúc thực vật loài giống quýt đại (Wu et al., 2014; Wu et al., 2018) Giải trình tự tồn hệ gen (WGS) xác định kiểu gen cho thấy nhiều loài quýt đại có đoạn gen bưởi (C maxima) hệ gen loài C reticulata (Oueslati et al., 2017; Wu et al., 2018), cho thấy có đóng góp C maxima q trình hóa lồi C reticulata Sự pha trộn tự nhiên nguồn gen C maxima C reticulata tạo loài thứ cấp cam chua, cam bưởi chùm (Wu et al., 2014; Wu et al., 2018) Gần hơn, chương trình nhân giống hữu tính khai thác nguồn gen C maxima/C reticulata để phát triển nhóm trồng quýt lai cam đường (quýt x cam ngọt) bưởi lai quýt (quýt x bưởi) Việc xác định thị phân tử không giúp phân biệt C maxima với dạng đơn bội nguồn gen C reticulata mà cịn xác định đa hình C reticulata Vì vậy, việc ứng dụng thị ITS xác định vùng gen nhân loài C reticulata cơng cụ hữu ích, phục vụ cho cơng tác nhận dạng, lưu giữ bảo tồn nguồn gen chương trình chọn tạo giống quýt địa Việt Nam Viện Di truyền Nông nghiệp Trung tâm Tài ngun thực vật Email: khuathuutrung@yahoo.com N«ng nghiƯp phát triển nông thôn - K - THáNG 12/2020 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Hà Giang, Bắc Kạn, Yên Bái, Phú Thọ, Tuyên Quang, Sơn La, Lạng Sơn Hà Nội (Bảng 1) 2.1 Vật liệu - Vật liệu 14 mẫu/giống quýt thu thập 10 tỉnh/thành, là: Đồng Tháp, Thừa Thiên - Huế, Bảng Danh sách 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu STT Tên mẫu Địa điểm thu thập Quýt đường Lai Vung, Đồng Tháp Q1 Quýt Chiềng Cọ Chiềng Cọ, Sơn La Q2 Quýt hồng (Tiều Sơn) Lai Vung, Đồng Tháp Q3 Quýt Tích Giang Phúc Thọ, Hà Nội Q4 Quýt Hương Cần Hương Trà, Thừa Thiên - Huế Q5 Quýt Tràng Định Kim Đồng, Lạng Sơn Q6 Quýt lửa Văn Chấn, Yên Bái Q7 Quýt Đông Khê Đoan Hùng, Phú Thọ Q8 Quýt đỏ Ngọc Hội Chiêm Hóa, Tuyên Quang Q9 10 Quýt Chum Vĩnh Hảo, Hà Giang Q10 11 Quýt Hôi Vĩnh Hảo, Hà Giang Q11 12 Quýt Hà Giang Quang Bình, Hà Giang Q12 13 Quýt Bộp Vĩnh Hảo, Hà Giang Q13 14 Quýt Bắc Kạn Ba Bể, Bắc Kạn Q14 Cặp mồi ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG/TCCTCCGCTTATT GATATGC) (Vilgalys R et al., 1994) 2.2 Phương pháp nghiên cứu - Mẫu thu thập tách chiết ADN tổng số theo phương pháp CTAB Doyle JJ at el (1990) có cải tiến kiểm tra nồng độ phương pháp điện di gel agarose 1% - Phản ứng PCR tiến hành máy Veriti 96 well Thermal cycler Tổng thể tích phản ứng 15 µl, bao gồm: µl ADN; 0,15 µM mồi; 0,2 mM dNTPs; 1X Buffer PCR; 2,5 mM MgCl2 0,25 U Taq polymerase Chu trình nhiệt phản ứng PCR gồm: 94C (5 phút), 36 chu kỳ [94C (1 phút), 56C (45 giây), 72C (50 giây)] kết thúc 72C (7 phút), giữ 4C - Sản phẩm PCR điện di gel agarose 1,5% sử dụng đệm TAE Gel nhuộm ethidium bromide 0,5 mg/ml soi máy Alpha Imager 1220 (Alpha Innotech, CA, USA) - Sản phẩm PCR gel theo qui trình hướng dẫn kit Qiagen; Ký hiệu mẫu - Giải trình tự: Sản phẩm PCR sau tinh sạch, giải trình tự Cơng ty Apical Scientific (Malaysia) - Phương pháp xử lí số liệu: Kết giải trình tự so sánh với trình tự tham chiếu NCBI phân tích chương trình MEGA v6.06 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Kết giải trình tự vùng ITS bp o bp 1.000 bp 500 bp Hình Ảnh điện di sản phẩm PCR 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu với cặp mồi ITS1/ITS4 Q1-Q14: Các mẫu/giống quýt địa bảng 1; M: Marker generuler 100 bp plus DNA Các mẫu/giống quýt thu thập tỉnh/thành: Đồng Tháp, Thừa Thiên - Huế, Hà Giang, Bắc Kạn, Yên Bái, Phú Th, Tuyờn Quang, Nông nghiệp phát triển nông thôn - KỲ - TH¸NG 12/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Sơn La, Lạng Sơn Hà Nội tách chiết ADN đưa nồng độ 50 ng/µl để tiến hành thực phản ứng PCR với cặp mồi ITS1/ITS4 Kết điện di sản phẩm PCR cho thấy mẫu quýt nghiên cứu cho băng đơn hình với kích thước khoảng 750 bp (Hình 1) Bảng Đánh giá mức độ tương đồng độ bao phủ trình tự DNA vùng ITS mẫu/giống quýt nghiên cứu so với gen tham chiếu công bố NCBI Độ tương Độ bao phủ TT Tên giống Kí hiệu Trình tự tham chiếu đồng (%) (%) Quýt đường Q1 MH712728.1_Citrus_reticulata 97,10 97,00 Quýt Chiềng Cọ Q2 MH712728.1_Citrus_reticulata 96,96 97,00 Quýt hồng (Tiều Q3 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,59 97,00 Sơn) Quýt Tích Giang Q4 MH712728.1_Citrus_reticulata 95,03 97,00 Quýt Hương Cần Q5 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,45 97,00 Quýt Tràng Định Q6 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,59 97,00 Quýt lửa Q7 MH712728.1_Citrus_reticulata 96,55 97,00 Quýt Đông Khê Q8 MH712728.1_Citrus_reticulata 96,44 97,00 Quýt đỏ Ngọc Hội Q9 MH712728.1_Citrus_reticulata 94,00 96,00 10 Quýt Chum Q10 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,59 97,00 11 Quýt Hôi Q11 MH712728.1_Citrus_reticulata 97,41 97,00 12 Quýt Hà Giang Q12 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,31 97,00 13 Quýt Bộp Q13 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,45 97,00 14 Quýt Bắc Kạn Q14 MH712728.1_Citrus_reticulata 99,59 97,00 cao 99,73% mẫu/giống Q3 Q10, Các đoạn trình tự ITS 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu so sánh mức độ tương đồng với các mẫu/giống Q10 - Q13 - Q14 trình tự tham chiếu cơng bố NCBI sử dụng chương trình BLAST Kết phân tích cho thấy độ tương đồng trình tự mẫu/giống quýt so với gen tham chiếu dao động từ 94,00% đến 99,59% với độ bao phủ dao động từ 96 - 97% Trong mẫu/giống quýt đỏ Ngọc Hội có mức độ tương đồng trình tự so với gen tham chiếu thấp 94% Các mẫu/giống quýt hồng (Tiểu Sơn), quýt Tràng Định, quýt Chum quýt Bắc Kạn có mức độ tương đồng trình tự so với gen tham chiếu cao 99,59% Điều cho thấy trình tự vùng ITS khuếch đại số mẫu/giống quýt nghiên cứu có mức độ tương đồng cao so với trình tự công bố NCBI Dựa vào kết phân tích trình tự DNA vùng ITS cho thấy 14 mẫu/giống qt nghiên cứu phân thành nhóm (Hình 2, bảng 3) 3.2 Kết phân tích đa dạng di truyền mẫu/giống quýt nghiên cứu Kết phân tích trình tự thơng qua phần mềm MEGA v6.06 thu số liệu bảng cho thấy có hệ số tương đồng di truyền 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu dao động từ 93,59 - 99,73% Hệ số tương đồng di truyền thấp 93,59% mẫu/giống Q3 Q9 Hệ số tương đồng di truyền Hình Cây phát sinh chủng loại vùng gen ITS 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu gen tham chiếu N«ng nghiệp phát triển nông thôn - K - TH¸NG 12/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Bảng Hệ số tương đồng di truyền 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu gen tham chiếu Q1 Q2 Q3 Q4 Q5 Q6 Q7 Q8 Q9 Q10 Q11 Q12 Q13 Q14 Q1 Q2 Q3 Q4 Q5 Q6 Q7 Q8 Q9 Q10 Q11 Q12 Q13 Q14 MH7 99,18 96,86 97,26 97,13 96,59 99,04 95,08 94,79 96,86 96,72 96,72 96,59 96,59 95,09 96,86 97,26 97,13 96,86 98,77 95,35 95,07 97,14 96,99 96,99 96,86 96,86 94,95 95,09 99,45 99,32 96,59 96,73 93,59 99,73 99,32 99,45 99,59 99,59 97,68 95,08 94,82 97,67 93,97 96,02 95,09 94,95 94,95 94,82 94,82 93,04 99,05 96,58 96,99 93,85 99,45 99,32 99,18 99,32 99,32 97,54 96,45 96,58 93,72 99,45 99,05 99,32 99,45 99,45 97,68 95,21 95,61 96,45 96,31 96,58 96,45 96,45 94,67 Nhóm thứ (nhóm I) gồm mẫu giống quýt đỏ Ngọc Hội (Q9) Dựa vào trình tự nucleotide cho thấy mẫu/giống Q9 có đa hình nucleotide so với gen tham chiếu; mẫu/giống Q9 có hệ số tương đồng di truyền so với gen tham chiếu 91,80% Nhóm thứ hai (nhóm II) gồm mẫu/giống quýt Q3, Q5, Q6, Q10, Q11, Q12, Q13, Q14 gen tham chiếu MH721728.1 Citrus reticulata Các mẫu/giống nhóm I có hệ số tương đồng di truyền cao dao động từ 99,05% (mẫu/giống Q6 với Q5 Q11) đến 99,73% (mẫu/giống Q3 Q10, cặp mẫu/giống Q10 - Q13 - Q14) Hệ số tương đồng di truyền mẫu/giống quýt nhóm với mẫu tham chiếu MH712728.1_Citrusreticulata dao động từ 97,27 % (Q11) đến 97,81% (Q14) Nhóm thứ ba (nhóm III) có giống qt Đơng Khê (Q8), mẫu/giống có hệ số tương đồng di truyền so với mẫu/giống thuộc nhóm khác dao động từ 93,83% (Q8-Q9) đến 96,99% (Q8Q12, Q5-Q8) với gen tham chiếu 94,95%; Nhóm thứ tư (nhóm IV) gồm mẫu/giống Q1, Q2, Q4 Q7 Các mẫu/giống nhóm IV có hệ số tương đồng di truyền cao dao động từ 97,26% (Q1-Q4, Q2-Q4) đến 99,18% (Q1-Q2) với gen tham chiếu dao động từ 93,04% (Q4) đến 95,09% (Q1) 93,83 96,86 96,72 96,99 96,86 96,86 94,95 93,72 93,58 93,84 93,72 93,72 91,8 99,59 99,59 99,73 99,73 97,68 MH7 99,18 99,32 99,59 99,32 99,59 99,73 97,27 97,54 97,68 97,81 3.3 Kết nhận dạng số mẫu/giống quýt nghiên cứu Kết so sánh trình tự 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu với trình tự gen tham chiếu cơng bố NCBI thông qua phần mềm MEGA v6.06 thu hình cho thấy: có đoạn hay thêm đoạn số vị trí đoạn gen nên số lượng nucleotide tổng số đoạn trình tự khác 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu Chiều dài vùng ITS 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu dao động từ 719 nucleotide đến 734 nucleotide Vùng ITS có đa hình trình tự nucleotide cao với 74 vị trí sai khác mẫu/giống nghiên cứu gen tham chiếu Trong đó, sáu mẫu/giống qt Tích Giang (Q4), quýt Hương Cần (Q5), quýt đỏ Ngọc Hội (Q9), quýt Hôi (Q11), quýt Hà Giang (Q12) quýt Bộp (Q13) có biến đổi nucleotide khác biệt so với mẫu/giống lại gen tham chiếu MH721728.1 Citrus reticulata (Bảng 4) Mẫu/giống quýt Tích Giang (Q4) có thay nucleotide C, C, G thành A vị trí 635, 680 690 tương ứng Tuy nhiên vị trí 680 690, có mẫu/giống qt Tích Giang có thay nucleotide C, G thành A khác biệt so với gen tham chiếu mẫu/giống khác tập đồn nghiên cứu, mẫu qt nhận dạng xác nhờ khác biệt Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - TH¸NG 12/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ Bảng Một số vị trí sai khác trình tự nucleotide mẫu/giống quýt nghiên cứu so với gen tham chiếu cơng bố NCBI Hình Hình ảnh so sánh trình tự nucleotide vùng ITS sử dụng cặp mồi ITS1/ITS4 mẫu/giống quýt nghiên cứu so với gen tham chiếu Mẫu/giống quýt Hương Cần (Q5) có thay trí 119 khác so với gen tham chiếu 13 mẫu/giống nucleotide G thành A vị trí 99 giống gen tham nghiên cứu lại Mẫu/giống quýt Hương Cần có chiếu MH721728.1 Citrus reticulata C thành T vị thể nhận dạng xác nhờ s sai khỏc ny Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 12/2020 KHOA HC CƠNG NGHỆ Mẫu/giống qt Đơng Khê (Q8) nhận dạng nhờ sai khác so với gen tham chiếu mẫu/giống nghiên cứu vị trí 628 714 Ở hai vị trí có thay nucleotide A thành T G thành C tương ứng Mẫu/giống quýt đỏ Ngọc Hội (Q9) có thay nucleotide T, G thành C A vị trí 638 714 tương ứng Vì nhận dạng xác mẫu/giống qt đỏ Ngọc Hội nhờ khác biệt so với mẫu/giống khác tập đồn nghiên cứu Mẫu/giống qt Hơi (Q11) có thay nucleotide A, C thành G vị trí 37 212, khác biệt so với mẫu/giống khác tập đoàn nghiên cứu, nhận dạng xác mẫu/giống quýt Hôi nhờ biến đổi nucleotide Mẫu/giống quýt Hà Giang (Q12) có thay nucleotide vị trí 419, từ C thành T so với gen tham chiếu công bố NCBI mẫu/giống cịn lại Do mẫu/giống qt Hà Giang nhận dạng xác nhờ sai khác Tương tự, mẫu/giống quýt Bộp (Q13) có thay nucleotide vị trí 530, từ C thành G, khác so với mẫu/giống lại gen tham chiếu công bố NCBI Vì nhờ sai khác nên mẫu/giống quýt Bộp nhận dạng xác tập đoàn nghiên cứu KẾT LUẬN Độ tương đồng trình tự nucleotide 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu trình tự tham chiếu cơng bố NCBI dao động từ 94,00% đến 99,59% với độ bao phủ dao động từ 96-97% Các mẫu/giống quýt hồng (Tiểu Sơn), quýt Tràng Định, quýt Chum quýt Bắc Kạn có mức độ tương đồng trình tự so với gen tham chiếu cao 99,59% Hệ số tương đồng di truyền 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu dao động từ 93,59 - 99,73%, 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu phân thành nhóm Dựa vào trình tự vùng ITS 14 mẫu/giống quýt nghiên cứu nhận dạng sáu mẫu/giống qt là: qt Tích Giang (Q4), qt Hương Cần (Q5), quýt đỏ Ngọc Hội (Q9), quýt Hôi (Q11), quýt Hà Giang (Q12) quýt Bộp (Q13), có thay nucleotide số vị trí, khác biệt so với mẫu/giống khác gen tham chiếu MH721728.1 Citrus reticulata Kết có ý nghĩa, phục vụ cho công tác bảo tồn, khai thác sử dụng có hiệu nguồn gen quýt địa Việt Nam LỜI CẢM ƠN Nghiên cứu thực với hỗ trợ kinh phí đề tài “Xây dựng sở liệu nguồn gen mã vạch ADN (DNA barcode) cho lồi có múi (bưởi, cam qt) địa/địa phương Việt Nam” thuộc Chương trình trọng điểm phát triển ứng dụng công nghệ sinh học lĩnh vực nông nghiệp phát triển nông thôn đến năm 2020, Bộ Nông nghiệp PTNT TÀI LIỆU THAM KHẢO Doyle, J J and Doyle J L (1990) Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus, v.12:13-15 Milena D A., Marcia F B P., Frederique O.t, Ronan R., Edson M A S., Abelmon S G., Franỗois L., Dominique G., Patrick O., and Fabienne M (2019) Phylogenetic Origin of Primary and Secondary Metabolic Pathway Genes Revealed by C maxima and C reticulata Diagnostic SNPs Front Plant Sci, 10: 1128 Oueslati A., Salhi-Hannachi A., Luro F., Vignes H., Mournet P., Ollitrault P (2017) Genotyping by sequencing reveals the interspecific C Maxima/C Reticulata admixture along the genomes of modern citrus varieties of Mandarins, Tangors, Tangelos, Orangelos and Grapefruits Plos One, 12 (10): 1371 Vilgalys R., Hopple J S., and Hibbett D S (1994) Phylogenetic implications of generic concepts in fungal taxonomy: the impact of molecular systematic studies Mycol Helv 6:73-91 Wu G A., Prochnik S., Jenkins J., Salse J., Hellsten U., Murat F., et al (2014) Sequencing of diverse mandarin, pummelo and orange genomes reveals complex history of admixture during citrus domestication Nat.Biotechnol 32: 656-662 Wu G A., Terol J., Ibanez V., López-García A., Pérez-Román E., Borredá C., et al (2018) Genomics of the origin and evolution of citrus Nature, 554: 311316 7.https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PRO GRAM=blastn&PAGE_TYPE=BlastSearch&BLAST_ SPEC=&LINK_LOC=blasttab&LAST_PAGE=tblastn www.megasoftware.net Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - TH¸NG 12/2020 KHOA HỌC CƠNG NGHỆ STUDYING ON DIVERSITY AND IDENTIFICATION OF VIETNAMESE NATIVE Citrus reticulata SPECIES BASED ON RIBOSOMAL DNA INTENAL TRANSCRIBED SPACER SEQUENCE Nguyen Thuy Diep1 , Le Thi Thu Trang2, Kieu Thi Dung1, Dang Thi Thanh Ha1, Tran Dang Khanh1, La Tuan Nghia2, Khuat Huu Trung1 Agricultural Genetics Institue Plant Resources Center Summary The Vietnamese native of mandarin orange genetic sources (C reticulata) is very diversity and plentiful, which should be exploited and used, service for effectively and sustainably socio-economic development Fourteen mandarin orange landraces have been collected in 10 different provinces and sequenced by amplification of the ITS locus in the nuclear genome The ITS sequences of 14 mandarin orange accessions have been compared with reference gene which published in NCBI The results showed that: similarity of the nucleotide sequence of landraces and the published reference gene on NCBI ranged from 94.00% to 99.59% with coverage ranged from 96.00% to 97.00% Genetic similarity coefficients of 14 mandarin orange accessions were in range from 93.59 to 99.73%, 14 mandarin orange accessions were divided into main groups Based on nucleotide differences in several positions in the ITS region sequence, six landraces have been identified correctly, include: Tich Giang (Q4), Huong Can (Q5) and Do Ngoc Hoi (Q9), Quyt Hoi (Q11), Ha Giang sweet tangerine (Q12) and Quyt Bop (Q13) This result is very useful for the conservation, exploitation and effective use of this precious genetic resources in Vietnam Keywords: Nucleotide sequences, mandarin orange accessions, ITS, genetic diversity, PCR Người phản biện: GS.TS Ngô Xuân Bình Ngày nhận bài: 16/10/2020 Ngày thơng qua phản biện: 16/11/2020 Ngy duyt ng: 23/11/2020 Nông nghiệp phát triển nông thôn - K - THáNG 12/2020 ... phân tích đa dạng di truyền mẫu /giống quýt nghiên cứu Kết phân tích trình tự thơng qua phần mềm MEGA v6.06 thu số liệu bảng cho thấy có hệ số tương đồng di truyền 14 mẫu /giống quýt nghiên cứu dao... mẫu /giống quýt nghiên cứu phân thành nhóm Dựa vào trình tự vùng ITS 14 mẫu /giống quýt nghiên cứu nhận dạng sáu mẫu /giống qt là: qt Tích Giang (Q4), qt Hương Cần (Q5), quýt đỏ Ngọc Hội (Q9), quýt. .. CÔNG NGHỆ Bảng Một số vị trí sai khác trình tự nucleotide mẫu /giống quýt nghiên cứu so với gen tham chiếu công bố NCBI Hình Hình ảnh so sánh trình tự nucleotide vùng ITS sử dụng cặp mồi ITS1 /ITS4