Nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học và ứng dụng xử lý rác thải giàu cellulose

ĈҤI HӐ&Ĉ¬1 ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH ±0Ð,75Ѭ ӠNG ĈӚNHÂN TRӐ1*Ĉ ӬC NGHIÊN CӬU TҤO CHӂPHҬM SINH HӐC VÀ ӬNG DӨNG XӰ LÝ RÁC THҦI GIÀU CELLULOSE KHĨA LUҰN TӔT NGHIӊP Ĉj1 ̽ng ±1ăP 2016 ĈҤI HӐ&Ĉ¬1 ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH ±0Ð,75Ѭ ӠNG ĈӚNHÂN TRӐ1*Ĉ ӬC NGHIÊN CӬU TҤO CHӂPHҬM SINH HӐC VÀ ӬNG DӨNG XӰ LÝ RÁC THҦI GIÀU CELLULOSE Ngành: Công nghӋsinh hӑ c CÁN BӜ+ѬӞNG DҮN ThS NGUYӈN THӎ/$13+ѬѪ1* Ĉj1 ̽ng ±1ăP 2016 LӠ,&$0Ĉ2$1 7{L[LQFDPÿRDQÿk\OjF{ ng trình nghiên cͱu cͯ a riêng Các s͙li͏ u, k͇ t qu̫trong lu̵QYăQOjWUXQJWK ͹FYjFK˱DW ͳQJÿ˱ ͫc cơng b͙trong b̭t kǤcơng trình khác Tác giҧluұQYăQ ĈӚNHÂN TRӐ1*Ĉ ӬC LͤI C̪0ˮ1 Ĉ͋KRjQWKjQKÿ˱ ͫc khóa lu̵ QQj\WU˱ ͣc tiên ph̫ i k͋ÿ͇ n cơng sͱc cͯa F{JLiRK˱ ͣng d̳n ThS Nguy͍ n Th͓/DQ3K˱˯QJ(PF ̫P˯QF{ÿmW ̵ n tình K˱ ͣng d̳ n truy͉ Qÿ ̩ t ki͇ n thͱc, kinh nghi͏ m quý báu cho em q trình th͹c hi͏ n khóa lu̵n Em xin chân thành c̫ P˯Qÿ ͇ n th̯ y cô khoa Sinh ±0{LWU˱ ͥng ±Ĉ̩i h͕ F6˱3K ̩m ±Ĉ̩ i h͕FĈj1 ̽ QJÿmW ̵n tình gi̫ ng d̩y, truy͉ Qÿ ̩ t nhͷng ki͇ n thͱc cho em trình h͕c t̵ p t̩LWU˱ ͥng Cu͙i cùng, em xin g͵i lͥi c̫P˯Qÿ ͇ QJLDÿuQKE ̩ QEqÿmOX{Q ͩ, ÿ͡ ng viên em su͙ t thͥi gian làm khóa lu̵ n Xin chân thành c̫P˯Q Sinh viên Ĉ͟Nhân Tr͕QJĈ ͱc MӨC LӨC MӢĈҪU 1 TÍNH CҨP THIӂT CӪ$Ĉ ӄTÀI MӨC TIÊU CӪ$Ĉ ӄTÀI: é1*+Ƭ$& Ӫ$Ĉ ӄTÀI: éQJKƭDNKRDK ӑc: éQJKƭDWK ӵc tiӉ n: &+ѬѪ1*,7 ӘNG QUAN TÀI LIӊU 1.1 TӘNG QUAN VӄVSV 1.1.1 Tәng quan vӅvi khuҭn Bacillus 1.1.2 Tәng quan vӅvi nҩm Trichoderma 1.1.3 Tәng quan vӅxҥkhuҭn Streptomyces 1.2 TӘNG QUAN VӄCHҨT THҦI RҲ19¬3+ѬѪ1*3+È3; Ӱ LÝ CHҨT THҦI RҲN 1.2.1 Tәng quan vӅchҩt thҧi rҳn 3KѭѫQJSKiS[ ӱlý chҩt thҧ i rҳn 1.3 TӘNG QUAN VӄCHӂPHҬM SINH HӐC 11 1.3.1 Khái niӋ m chӃphҭm sinh hӑ c 11 &ѫV ӣkhoa hӑ c cӫa viӋ c sӱdөng vi khuҭn sҧn xuҩt chӃ phҭm sinh hӑc 11 1.3.3 Tình hình nghiên cӭu, ӭng dөng chӃphҭm sinh hӑc xӱlý rác thҧi mӝt sӕchӃphҭm sinh hӑFÿ һFWUѭQJ 12 1.3.3.1 Tình hình nghiên cͱu, ͱng dͭng ch͇pẖ m sinh h͕c x͵lý rác th̫i th͇giͣi 12 1.3.3.2 Tình hình nghiên cͱu, ͱng dͭng ch͇pẖ m sinh h͕c x͵lý rác th̫i t̩ i Vi͏ t Nam 13 1.3.3.3 M͡t s͙ch͇pẖ m sinh h͕c x͵lý rác th̫i 14 &+ѬѪ1*Ĉ Ӕ,7Ѭ ӦNG, NӜI DUNG VÀ 3+ѬѪ1*3+È31*+,Ç CӬU 16 Ĉ Ӕ,7Ѭ ӦNG NGHIÊN CӬU: 16 Ĉ ӕLWѭ ӧng: 16 Ĉ ӏ DÿL Ӈ m thӡi gian nghiên cӭu: 16 2.1.3 Nguyên liӋ u, hóa chҩt thiӃ t bӏ : 16 2.2 NӜI DUNG NGHIÊN CӬU: 17 3+ѬѪ1*3+È31*+,Ç1& ӬU: 17 3KѭѫQJSKiSSKkQO ұp giӳgiӕng VSV 17 2.3.2 PhѭѫQJSKiS[iFÿ ӏ nh khҧQăQJVLQKKR ҥt tính cellulose cӫa VSV 18 3KѭѫQJSKiSÿ ӏ QKOѭ ӧng VSV: 19 3KѭѫQJSKiSV ҧn xuҩt chӃphҭm vi sinh: 20 &+ѬѪ1* ӂT QUҦVÀ BIӊN LUҰN 22 3.1 KӂT QUҦPHÂN LҰP CÁC CHӪNG VSV 22 3.1.1 Vi khuҭn Bacillus 22 3.1.2 Xҥkhuҭn Streptomyces 25 3.1.3 Nҩm mӕc Trichoderma 26 3.2 KӂT QUҦ;È&Ĉ ӎ NH HӐAT TÍNH PHÂN GIҦI CELLULOSE 28 3.2.1 Hoҥt tính phân giҧi cellulose cӫa chӫng vi khuҭn Bacillus 28 3.2.2 Hoҥt tính phân giҧi cellulose cӫa chӫng xҥkhuҭn Streptomyces 30 3.2.3 Hoҥt tính phân giҧi cellulose cӫa chӫng nҩm mӕc Trichoderma 32 3.3 KӂT QUҦNGHIÊN CӬU SҦN XUҨT CHӂPHҬM SINH HӐC 33 3.4 KӂT QUҦXӰ LÝ RÁC THҦI HӲ8&Ѫ7 ҤI CÁC CHӦĈҪU MӔI BҴNG CHӂPHҬM 37 ;iFÿ ӏ nh mұWÿ ӝ969ÿѭDYjR[ ӱlý rác thҧi hӳXFѫ 37 3.4.2 KӃ t quҧxӱlý rác thҧi hӳXFѫE ҵng chӃphҭm thơnJTXDSKѭѫQ pháp ӫhiӃ u khí 37 +jPO˱ ͫng cellulose 38 +jPO˱ ͫQJ1LW˯W ͝ng 40 &+ѬѪ1* ӂT LUҰN VÀ KIӂN NGHӎ 44 4.1.KӂT LUҰN 44 4.2 KIӂN NGHӎ 44 TÀI LIӊU THAM KHҦO 46 DANH MӨC CHӲVIӂT TҲT CFU (Colony Forming Unit) ÿѫQY ӏhình thành khuҭ n lҥ c TP : Thành phӕ VSV : Vi sinh vұ t NST : NhiӉ m sҳ c thӇ CPSH : ChӃphҭ m sinh hӑc DANH MӨC BҦNG BIӆU TT Bҧ ng 3.1 Bҧ ng 3.2 Bҧ ng 3.3 Bҧ ng 3.4 Bҧ ng 3.5 Bҧ ng 3.6 Bҧ ng 3.7 Bҧ ng 3.8 Tên Bҧng Hình thái khuҭ n lҥ c cӫa chӫng vi khuҭ Qÿѭ ӧc phân lұ p tӯmү Xÿ ҩ t Hình thái khuҭ n lҥ c cӫa chӫng xҥkhuҭ Qÿѭ ӧc phân lұ p tӯmү Xÿ ҩ t Hình thái khuҭ n lҥ c cӫa chӫng nҩ m mӕFÿѭ ӧc phân lұ p tӯmү Xÿ ҩ t Vòng phân giҧ i cӫ a chӫng Bacillus có hoҥ t tính cellulase Vịng phân giҧ i cӫ a chӫng Streptomyces có hoҥ t tính cellulase Vịng phân giҧ i cӫ a chӫng Trichoderma có hoҥ t tính cellulase So sánh sӕOѭ ӧng bào tӱWKXÿѭ ӧc công thӭc lên men xӕp tҥ o chӃphҭ m SӵWKD\ÿ ә i cӫDKjPOѭ ӧng cellulose tәng qua 21 ngày xӱlý Bҧ ng 3.9 SӵWKD\ÿ ә i cӫDKjPOѭ ӧng QLWѫ qua 21 ngày xӱlý Trang 23 26 30 32 33 35 37 42 44 DANH MӨC HÌNH ҦNH Tên hình ҧnh TT Trang Hình 1.1 Hình ҧ nh nhuӝm Gram cӫa mӝt sӕchӫ ng Bacillus Hình 2.1 Quy trình sҧ n xuҩ t chӃphҭ m sinh hӑ c 24 Hình 3.1 Hình thái cӫa 24 chӫ ng vi khuҭ n Bacillus phân lұ Sÿѭ ӧc 28 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình thái chӫ ng xҥkhuҭ n Streptomyces phân lұ p ÿѭ ӧc Hình thái chӫ ng nҩ m mӕc Trichoderma phân lұ p ÿѭ ӧc Vòng phân giҧ i cellulose cӫa chӫ ng vi khuҭ n Bacillus có hoҥ t tính Vịng phân giҧ i cellulose cӫa chӫ ng Streptomyces có hoҥ t tính Vịng phân giҧ i cellulose cӫa chӫ ng Trichoderma có hoҥ t tính 29 31 33 34 36 ChӃphҭ m sҧ n xuҩ t bҵ QJSKѭѫQJSKiSOrQPHQ ӕ p theo 39 công thӭc Hình 3.8 Rác thҧ i hӳXFѫW ӯcác chӧÿҫ u mӕLÿmÿѭ ӧFEăPQK ӓ 41 Hình 3.9 BiӇ Xÿ ӗsӵWKD\ÿ ә LKjPOѭ ӧng cellulose tә ng 21 ngày BiӇ Xÿ ӗ BiӇ Xÿ ӗsӵWKD\ÿ ә LKjPOѭ ӧng QLWѫ 21 ngày 3.10 42 44 BiӇ uÿ ӗ Rác thҧ i hӳXFѫVDXQJj\ÿѭ ӧc xӱlý 46 3.11 18 * Phân lұ p mү u dӵDWUrQSKѭѫQJSKiSSKkQO ұ p cӫa Egorov [5] Cách tiӃ n hành: - Lҩ y 1ml dung dӏ ch mү u cho vào ӕ ng nghiӋ m có chӭa POQѭ ӟc cҩ t, lҳ c ÿӅ XWDFyÿ ӝpha loãng 10-1 Hút 1ml cho tiӃ p tөc vào ӕ ng nghiӋ m chӭa sҹ n POQѭ ӟc cҩ t, lҳ Fÿ Ӆ XWDFyÿ ӝpha loãng 10-2 TiӃ p tөc QKѭY ұ \FKRÿ Ӄ Qÿ ӝ pha lỗng cҫ n thiӃ t - Dùng pipet vơ trùng hút dӏ ch pha loãng ӣnӗQJÿ ӝtӯ10-2 - 10-6 khoҧ ng 0,1 ml nhӓvào hӝp lӗng chӭDP{LWUѭ ӡng phân lұ SÿmY{WUQJG que gҥ t WUDQJÿ Ӆ u mһ t thҥ FK6DXÿyEDRJyLF ҭ n thұ n nuôi cҩ y tӫҩ mӣ nhiӋ Wÿ ӝ35-39oC Sau ±7 ngày nuôi cҩ y, chӑn nhӳng khuҭ n lҥ c riêng lӁ , sinh WUѭ ӣng mҥ nh, cҩ y chuyӅ n sang ӕ ng thҥ ch nghiêng chӭDFQJP{LWUѭ ӡng phân lұ SFKRÿ Ӄ n thuҫ n chӫ ng - ĈӇbҧ o quҧ n chӫ ng giӕ ng VSV cho nhӳng nghiên cӭu tiӃ p theo tiӃ n hành cҩ y lҥ Lÿ ӏ nh kǤWUrQP{LWUѭ ӡng thҥ FKQJKLrQJFyFQ ӡng ÿӇӣtӫҩ m ӣ35oC ±39oC ±QJj\6DXÿyE ҧ o quҧ n tӫlҥ nh ӣ 4oC, cҩ y chuyӅ Qÿ ӏ nh kì ÿӇgiӳgiӕ ng 3KѭѫQJSKiS[iFÿ ӏ nh khҧQăQJVLQKKR ҥt tính cellulose cӫa VSV Ĉӕi vӟi hoҥ t tính cellulose, chúng tơi sӁsӱdө QJ P{L ӡng cóWUѭ thành phҫ n: + CMC 10g + (NH4)2SO4 1g + K2HPO4 1g + MgSO4.7H2O 0,5g + NaCl 0,001g + Agar 20g 1ѭ ӟc cҩ t ÿӫ1000ml 19 ĈӇ[iF ӏ nh ÿ hoҥ t tính phân giҧ i cellulose FK~QJ W{LG SKiSÿ ө c lӛ3KѭѫQJSKiSQj\WL Ӄ QKjQKQKѭVDX ĈәP{LWUѭ ӡQJUDÿƭDSHWULVDRFKRE Ӆdày lӟp thҥ FKNKLÿ{QJO mm 'QJNKRDQQ~WFKDLÿ ө c lӛvӟLÿѭ ӡng kính mm Nhӓvào lӛ0,1 ml dӏ ch nuôi cҩ \ÿmOLWkPU ӗLÿ Ӈtӫlҥ nh cho enzyme khuӃ ch tán vӟLFѫFK ҩ W6DXÿy cҩ y tӫҩ m nhiӋ Wÿ ӝ30oC giӡÿ Ӈenzyme tác dө ng vӟLFѫFK ҩ t Lҩ y FiFÿƭDSHWULUDW\YjR[iFÿ ӏ nh khҧQăQJVLQKKR ҥ t tính tơi dùng loҥ i thuӕc thӱNKiFQKDXWUiQJÿ Ӆ u bӅmһ t thҥ FKĈ Ӈ15 phút sau, gҥ n bӓQѭ ӟc rӗ LÿR vòng thӫy phân quanh lӛthҥ ch Dӵa vào hiӋ u sӕÿѭ ӡng kính thӫy phân ÿѭ ӡng kính lӛthҥ ch (D ±GPP PjWD[iFÿ ӏ QKÿѭ ӧc hoҥ t tính cӫa chӫ ng VSV 7URQJÿy'ÿѭ ӡng kính vịng phân giҧ LPP Gÿѭ ӡng kính khuҭ n lҥ c (mm) [12] 3KѭѫQJSKiSÿ ӏ QKOѭ ӧng VSV: Nhҵ m xác ÿ ӏ nh sӕOѭ ӧng VSV mӝWÿѫQY ӏthӇtích, chúng tơi sӱdөng SKѭѫQJSKiSÿ Ӄ m sӕOѭ ӧng khuҭ n lҥ FWUrQP{LWUѭ ӡQJÿ һ c [4] *Cách tiӃ n hành: - Chuҭ n bӏP{LWUѭ ӡng, phân phӕ LYjRÿƭDSHWULWѭѫQJ ӵQKѭSKѭѫQJS phân lұ p - Pha lỗng mү u dung dӏ ch ni cҩ y lӓ ng vӟi nӗ QJÿ ӝ10-2 ÿӃ n 10-10 - Nhӓ1ml dung dӏ ch ӣmӛLÿ ӝSKDORmQJYjRÿƭDSHW khӱ WUQJWUDQJÿ Ӆ u bӅmһ WÿƭD/ һ p lҥ LWKDRWiFÿƭD ӭng vӟi mӛi nӗ QJÿ ӝpha loãng - Ĉұ y nҳ SÿƭDSHWULYjQX{LF ҩ y tӫҩ m 30oC - 40oC - Sau 48 ±72h lҩ \ÿƭDSHWULUDYjFK ӑ n nhӳQJÿƭDSHWUL ӣnӗ QJÿ ӝpha loãng mà tҥ LÿyV ӕkhuҭ n lҥ FWUrQÿƭDSHWULGDRÿ ӝng tӯ20 ±200 - Tính sӕOѭ ӧng CFU 1ml mү u dung dӏ ch ӣmӛLÿ ӝpha lỗng theo cơng thӭc: 20 ‫ܯ‬௜ൌ ஺೔ Ǥ ஽೔  ௏ (CFU/ml) 7URQJÿy Mi: tәng sӕCFU 1ml dung dӏ ch ӣmӛLÿ ӝpha loãng Ai: sӕkhuҭ n lҥ FWUXQJEuQKÿƭD 'Lÿ ӝpha loãng mү u V: dung tích huyӅ n phù tӃbào cho vào mӛLÿƭDPO Mұ Wÿ ӝtӃbào trung bình M mү XEDQÿ ҫ u trung bình cӝ ng cӫ a Mi ӣcác nӗ QJÿ ӝpha loãng khác [18] 3KѭѫQJSKiSV ҧn xuҩt chӃphҭm vi sinh: Tӯӕng giӕ QJEDQÿ ҫ u, tiӃ n hành ni cҩ y giӕ ng cҩ p I bình tam giác vӟLP{LWUѭ ӡng lӓng Sau ngày,cҩ y chuyӅ n giӕng cҩ S,YjRP{L ӡng nhân giӕ ng cҩ p II, tӹlӋtiӃ p giӕ ng 10% 0{LWUѭ ӡng giӕ ng cҩ p II có thành phҫ n nghèo chҩ WGLQKGѭ ӥQJKѫQ6DXQJj\ cҩ y giӕ ng cҩ p II vào chҩ t mang Rót giӕ ng vào ӕ QJÿRQJÿ ӏ QKOѭ ӧng giӕng 10% so vӟi khӕ LOѭ ӧng chҩ t mang khay TiӃ p giӕ ng vào chҩ t mang, dùng que cҩ \ÿ ҧ o trӝ n cho ÿӗ QJÿ Ӆ Xÿ ҧ m bҧ Rÿ ӝҭ m tӯ50 - Ĉ ұ y nҳ p khay chuyӇ n sang phịng lên men Trong q trình lên men, phҧ LWKѭ ӡng xuyên theo dõi sӵphát triӇ n cӫa VSV yӃ u tӕchính ҧ QKKѭ ӣQJÿ Ӄ QTXiWUuQKOrQ nhiӋ Wÿ ӝ, pH, oxyÿ ӝҭ m ÿӇcó biӋ n pháp khҳ c phөc kӏ p thӡi sӵcӕxҧ y Sau lên men khoҧ ng tháng, sinh khӕ i cӫa VSV tҥ RWKjQKGj\ һ c chҩ t mang, kӃ t thúc trình lên men thu nhұ n sҧ n phҭ m TiӃ n KjQKÿ ҧ o trӝn nhҵ Pҧ m ÿ bҧ Rÿ ӝÿ ӗQJÿ Ӆ u cӫ a sinh khӕi chӫng VSV chӃphҭ m, thao tác cҫ Qÿ ҧ m bҧ RY{WUQJĈ ӗ ng thӡi, tiӃ n hành kiӇ m WUDÿ ӝtinh khiӃ t cӫa chӃphҭ PFNJQJQKѭ[iFÿ ӏ nh sӕOѭ ӧng VK có chӃ phҭ PĈ Ӈthu nhұ Qÿѭ ӧc chӃphҭ m, tiӃ n hành sҩ y ӣnhiӋ Wÿ ӝ30oC cho ÿӃ QNKLÿ ӝҭ m cӫa chӃphҭ Pÿ ҥ t khoҧ ng 5-10%VDXÿyQJKL Ӆ n chӃphҭ m -> 21 ÿyQJJyLYjE ҧ o quҧ n chӃphҭ m Quy trình sҧ n xuҩ t chӃphҭ PÿѭѫFWyP ҳ t ӣVѫÿ ӗsau: Chuҭ n bӏchҩ t mang Phân lұ p chӫng VSV Nuôi cҩ y giӕ ng cҩ p1 Nuôi cҩ y giӕ ng cҩ p2 TiӃ p giӕ ng Lên men ChӃphҭ m thô NghiӅ n, sҩ y, ÿyQJ gói bҧ o quҧ n kiӇ m tra chҩ t Oѭ ӧng chӃphҭ m thô ÿӏ QKOѭ ӧng VSV chӃphҭ m Hình 2.1 Quy trình s̫n xṷt ch͇pẖm sinh h͕c 22 &+ѬѪ1* ӂT QUҦVÀ BIӊN LUҰN 3.1 KӂT QUҦPHÂN LҰP CÁC CHӪNG VSV Các chӫ ng VSV phân lұ p tӯcác mү Xÿ ҩ t thu tҥ i nhiӅ XQѫLWUrQÿ ӏ a bàn TP Ĉj1 ҹ ng ӣYѭ ӡn quӕ c gia Kon Ka Kinh Mү Xÿѭ ӧc lҩ y ӣFiFYQJÿ ҩ t canh tác, hoһ Fÿ ҩ t mùn, mөc phân hӫy Mү u lҩ y vӅÿѭ ӧc phân lұ p ngày hoһ c bҧ o quҧ n ӣnhiӋ Wÿ ӝthҩ p phân lұ p sau không 48 h môi WUѭ ӡQJ һ F ÿ WUѭQJ ӧc cácWKX chӫ ng vi ÿѭ khuҭ n Bacillus, xҥ khuҭ n Streptomyces, vi nҩ m Trichoderma 3.1.1 Vi khuҭn Bacillus Tӯcác mү Xÿ ҩ WÿmSKkQO ұ Sÿѭ ӧc 24 chӫ ng vi khuҭ Qÿѭ ӧc kí hiӋ u VK1, VK2, VK3, , VK'Rÿ һ FWUѭQJF ӫDP{LWUѭ ӡng nuôi cҩ \QrQEDQÿ ҫ u nhұ Qÿ ӏ nh chӫ ng VSV phân lұ Sÿѭ ӧc có xác suҩ t cao thuӝc chi Bacillus ĈӇ[iFÿ ӏ nh rõ chӫ ng thuӝc chi Bacillus, tiӃ n hành thí nghiӋ m kiӇ m nghiӋ m bao gӗm: test nhanh vӟL 2+ SKѭѫQJ nhuӝm Gram nhuӝ m bào tӱ, kӃ t hӧp vӟi khóa phân loҥ i cӫa Bergey KӃ t quҧ WKXÿѭ ӧFQKѭVDX - Test nhanh vӟi KOH: Thӱvӟi dung dӏ ch KOH 3% 30s không thu ÿѭ ӧc sӧi nhҫ y nhӟt ±nhӳQJ$'1ÿѭ ӧc giҧ i phóng, chӭng tӓ«FK ӫ ng vi khuҭ n không phҧ i vi khuҭ n Gram (-) - Nhuӝm Gram : Ӣ vұ t kính 100, chúng tơi thҩ y vi khuҭ n có dҥ ng trӵc khuҭ n, xӃ p thành chuӛi dài, bҳ WPjXWtPÿL Ӆ u chӭng tӓcác chӫ ng vi khuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧc thuӝc nhóm Gram (+) - Nhuӝm bào tӱ: Khi tiӃ n hành nhuӝm bào tӱYjTXDQViWGѭ ӟi kính hiӇ n vi ӣvұ WNtQK[iFÿ ӏ QKÿѭ ӧc nӝ i bào tӱcác vi khuҭ n bҳ WPjXÿ ӓ, tӃbào chҩ t bҳ t màu xanh nhҥ t 23 - Ĉӗng thӡi, q trình ni cҩ y, chúng tơi quan sát thҩ y chӫ ng vi khuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧc có khҧQăQJVLQKW Uѭ ӣng phát triӇ n tӕ WWURQJÿL Ӆ u kiӋ n hiӃ u khí Tӯcác kӃ t quҧnghiên cӭu trên, chúng tơi có thӇkӃ t luұ n chӫng phân lұ Sÿѭ ӧFÿ Ӆ u thuӝ c chi BacillusĈyOjQK ӳng trӵc khuҭ Q*UDPGѭѫQJ tӱvà hiӃ u khí [30] Ĉһ FÿL Ӈ m hình thái cӫa 24 chӫ QJÿѭ ӧc trình bày thơng qua bҧ ng sau: B̫ng 3.1 Hình thái khu̱ n l̩c cͯa chͯ ng vi khu̱ Qÿ˱ ͫc phân l̵p tͳ m̳Xÿ ̭ t STT Kí hiӋ u chӫng Hình thái khuҭ n lҥ c Trҳ ng, viӅ n trҳ QJÿ ө c, Trịn, hình dҥ ng núi lӱa, VK1 VK2 VK3 VK4 VK5 VK6 VK7 VK8 VK9 Màu trҳ QJWUѫQErQWURQJÿ ө FQJRjLKѫLW 10 VK10 Màu trҳ ng, bӅmһ WNK{QKăQP ӏ n 11 VK11 QKăQ Màu trҳ QJÿ ө c, khuҭ n lҥ c tròn, bӅmһ t mӏ n, mép khuҭ n lҥ c mӓng Khuҭ n lҥ FWUzQPjXYjQJWURQ ҹ n Màu trҳ QJÿ ө FQKăQFyQKL Ӆ u gân chҥ y tӯtrong tâm Khuҭ n lҥ c trҳ QJÿ өFWUѫQQJRjLUuD Màu trҳ ng trong, nhҹ n bóng Có sҳ c tӕmàu YjQJNtFKWKѭ ӟc nhӓWUzQÿ Ӆ u, bӅmһ t nhҹ n Khuҭ n lҥ c có màu hӗ QJWUѫQQK ҹ n, trịn Khuҭ n lҥ c nhӓ, có tiӃ t sҳ c tӕmàu vàng nâu vào môi WUѭ ӡng, WUzQWUѫQQK ҫ y nhӟt 24 12 VK12 13 VK13 14 VK14 15 VK15 16 VK16 17 VK17 18 VK18 19 VK19 20 VK20 21 VK21 22 VK22 23 VK23 24 VK24 Màu trҳ QJÿ ө c, tròn, bӅmһ t nhҹ n, mép mӓng phҷ ng Màu trҳ QJNtFKWKѭ ӟc lӟn, dҥ QJWUzQWUѫQ Ӆmһ WKѫL nhҫ y nhӟt, mép dày Màu trҳ ng sӳa, dҥ QJKuQKWUzQWUѫQE Ӆmһ t nhҫ y nhӟt Màu trҳ ng, bӅmһ WNK{QKăQP ӏ n Màu trҳ ng, bӅmһ WQKăQQKHRSKkQW ҽӣmép 0jXYjQJÿ ө FKѫLQKăQWURQJWk Màu trҳ ng, khuҭ n lҥ FWUzQNtFKWKѭ ӟc lӟn, phát triӇ n mҥ nh, bӅmһ t gӧn sóng, nhơ cao 0jXKѫLQkX dҥ ng trịn, phân thùy nhҽ , ӣtâm khuҭ n lҥ c nә i gӡlên rõ Màu trҳ ng trong, nhҹ n bóng Màu trҳ QJÿ ө FQJRjLKѫLQKăQW Khuҭ n lҥ FWUzQÿ Ӆ u, có tiӃ t sҳ c tӕmàu nâu vào môi WUѭ ӡQJWUzQÿ Ӆ u, bӅmһ t khô, mép dày 0jXQkXNtFKWKѭ ӟc nhӓ, bӅmһ t nhҹ QWUѫQKѫL ҫ y nhӟt Màu trҳ ng sӳa, khuҭ n lҥ FWUzQÿ Ӆ u, bӅmһ t gӧn sóng, lӗ i nhҽӣgiӳa 25 Hình 3.1 ͘ng nghi͏ m chͱa 24 chͯ ng vi khu̱ n Bacillus phân l̵Sÿ˱ ͫc 3.1.2 Xҥkhuҭn Streptomyces Mү u thu vӅÿѭ ӧc tiӃ n hành phân lұ SWUrQP{LWUѭ ӡng Gause II, [iFÿ ӏ QKÿѭ ӧc chӫ ng VSV, kí hiӋ u XK1, XK2, XK3, , XK9 Dӵa sӵsai khác vӅÿһ FÿL Ӈ m hình thái, màu sҳ c cӫDP{LWUѭ ӡng ni cҩ \FySURWHLQTXDQViWGѭ ӟi kính hiӇ n vi hình dҥ ng cuӕ ng bào tӱ, khuҭ n ty kí sinh Áp dө ng khóa phân loҥ i cӫ a Krassilnikov Waksman [13@ÿm[i ÿӏ nh cҧ9 xҥkhuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧFÿ Ӆ u thuӝc chi Streptomyces 26 B̫ng 3.2 Hình thái khu̱ n l̩c cͯa chͯ ng x̩khu̱ Qÿ˱ ͫc phân l̵ p tͳ m̳Xÿ ̭ t STT Kí hiӋ u chӫng Hình thái khuҭ n lҥ c XK 01 Màu trҳ ng, khuҭ n lҥ FWUzQQKăQWUrQE Ӆmһ t có gӧn sóng XK 02 Màu trҳ ng sӳa, tròn nhӓQJRjLPpSFyKuQK XK 03 Khuҭ n lҥ c màu trҳ QJWURQJWUѫQQK ҹ n XK 04 Màu trҳ ng, bӅmһ t có chҩ m nhӓli ti XK 05 0jXKѫLQ kXFyKuQKWLDKѭ ӟng tӯtâm XK 06 Màu trҳ ng, trịn, bӅmһ t có nhӳQJYkQQKѭPDL XK 07 Khuҭ n lҥ c màu trҳ ng, mép dày XK 08 Khuҭ n lҥ c màu trҳ QJWUѫQ XK 09 Màu trҳ QJWURQJWUѫQQJRjLQKăQ Hình 3.2 ͘ng nghi͏ m chͱa chͯng x̩khu̱ n x̩khu̱ n phân l̵Sÿ˱ ͫc 3.1.3 Nҩm mӕc Trichoderma 27 Tӯcác mү Xÿ ҩ Wÿѭ ӧc thu tӯnhiӅ XQѫLWUrQÿ ӏ a bàn TP Ĉj1 ҹ QJYjYѭ ӡn quӕc gia Kon Ka Kinh, tiӃ n hành phân lұ SWUrQP{LWUѭ ӡQJ3'$WDWKX ӧc chӫng nҩ m Trichoderma Dӵa vào nhӳQJVDLNKiFNKLTXDQViWÿ һ FÿL Ӈ m vӅhình thái, màu sҳ c cӫa khuҭ n lҥ FWUrQP{LWUѭ ӡng ni cҩ \TXDQViWGѭ ӟi kính hiӇ n vi hình dҥ ng cuӕng sinh bào tӱ, bào tӱvà sӧi nҩ m Áp dө ng khóa phân loҥ i cӫa M.A Rifai (1969) [28] Kubbick Harman (1998) [31], [32], Gary J.Samuel (2003) [26@ÿm[iFÿ ӏ QKÿѭ ӧc chӫ ng nҩ m phân lұ Sÿѭ ӧFÿ Ӆ u thuӝc chi Trichoderma, ÿѭ ӧc kí hiӋ XOj7U7U«7U B̫ng 3.3 Hình thái khu̱ n l̩c cͯa chͯ ng ṋm m͙ c Trichoderma ÿ˱ ͫc phân l̵p tͳm̳ Xÿ ̭t STT Kí hiӋ u chӫng Tr 01 Tr 02 Tr 03 Tr 04 Hình thái khuҭ n lҥ c Khuҭ n lҥ c có màu lөc nhҥ t, hӋsӧi nҩ PVLQKWUѭ ӣng mҥ nh Thӡi gian mӑc ( ngày) 2-4 Khuҭ n lҥ c có màu lөc nhҥ WKѫLQkX 2-4 Khuҭ n lҥ c màu lөFÿ ұ m, hӋsӧi nҩ PVLQKWUѭ ӣng rҩ t mҥ nh Khuҭ n lҥ c có màu lөc, hӋsӧphát triӇ n trung bình 2-3 2-5 28 Hình 3.3 Hình thái chͯ ng ṋm m͙c Trichoderma phân l̵ Sÿ˱ ͫc 3.2 KӂT QUҦ;È&Ĉ ӎ NH HӐAT TÍNH PHÂN GIҦI CELLULOSE 3.2.1 Hoҥt tính phân giҧi cellulose cӫa chӫng vi khuҭn Bacillus TiӃ QKjQKÿiQKJLiKR ҥ t tính cellulase dӏ ch nuôi cҩ y cӫa 24 chӫ ng vi khuҭ n Bacillus[iFÿ ӏ QKÿѭ ӧc Trong 24 chӫ ng vi khuҭ n phân lұ Sÿѭ ӧc chӍ có chӫ ng có khҧQăQJSKkQJL ҧ i cellulose, thӇhiӋ QWUrQÿѭ ӡng kính vịng phân giҧ i CMC xuҩ t hiӋ n bӅmһ WÿƭDWK ҥ ch KӃ t quҧÿѭ ӧc tóm tҳ t ӣbҧ ng 3.3 KuQKQKѭVDX : 29 B̫ng 3.4 Vòng phân gi̫i cͯ a chͯ ng Bacillus có ho̩ t tính cellulase STT Kí hiӋ u chӫng Ĉѭ ӡng kính vịng phân giҧ i (D-d, mm) VK11 24±0.5 VK13 23±0.5 VK15 20±0.5 VK17 25±0.5 VK21 22±0.5 ... hình nghiên cӭu, ӭng dөng chӃphҭm sinh hӑc x? ?lý rác thҧi mӝt sӕchӃphҭm sinh hӑFÿ һFWUѭQJ 1.3.3.1 Tình hình nghiên cͱu, ͱng dͭng ch͇pẖ m sinh h͕c x͵ lý rác th̫ i th͇giͣi HiӋ n rác thҧ i sinh. .. sinh h͕c x? ?lý rác th̫i th͇giͣi 12 1.3.3.2 Tình hình nghiên cͱu, ͱng dͭng ch͇pẖ m sinh h͕c x? ?lý rác th̫i t̩ i Vi͏ t Nam 13 1.3.3.3 M͡t s͙ch͇pẖ m sinh h͕c x? ?lý rác th̫i ... ҸNG 75Ѭ Ӡ1*Ĉ ҤI HӐ&6Ѭ3+ ҤM KHOA SINH ±0Ð,75Ѭ ӠNG ĈӚNHÂN TRӐ1*Ĉ ӬC NGHIÊN CӬU TҤO CHӂPHҬM SINH HӐC VÀ ӬNG DӨNG XӰ LÝ RÁC THҦI GIÀU CELLULOSE Ngành: Công ngh? ?sinh hӑ c CÁN BӜ+ѬӞNG DҮN ThS NGUYӈN